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响应面法优化链霉菌HD-010发酵产抗辣椒根腐病菌活性物质条件张海秀;杜春梅【期刊名称】《食品科学》【年(卷),期】2010(031)017【摘要】用Plackett-Burman和中心复合(central composite design)试验设计对影响拈抗链霉菌HD-010菌株发酵生产抗辣椒根腐病菌活性物质的9个因素进行筛选优化.结果表明:葡萄糖、蔗糖、玉米粉是发酵培养基中影响抗菌活性物质产量的主要因素.以发酵液效价值为响应值,对3个因素进行中心复合设计,并经响应面法优化分析得到影响抗菌活性物质效价值的二阶模型,确定最优发酵培养基3个关键因素的水平为:葡萄糖质量浓度10g/L,蔗糖质量浓度10.2g/L,玉米粉质量浓度25.8g/L,采用此优化配方,发酵液效价值比原始发酵培养基发酵液提高了55.28%,为进一步生产提供参考.【总页数】5页(P340-344)【作者】张海秀;杜春梅【作者单位】哈尔滨学院理学院,黑龙江,哈尔滨,150086;黑龙江大学生命科学学院,黑龙江,哈尔滨,150080【正文语种】中文【中图分类】Q815【相关文献】1.响应面法优化褐黄孢链霉菌ZM701产纳他霉素发酵培养基 [J], 张艳敏;董学前;张永刚;王伟;刘元涛;刘建军2.响应面法优化链霉菌LG-9发酵条件及对棉花黄萎病菌的抑菌作用 [J], 陈明;穆凯热姆•阿卜来提;刘政;王晓东3.响应面法优化紫色链霉菌发酵液的发酵工艺及其抑菌活性研究 [J], 孙建瑞;赵君峰;古绍彬;张君利;王大红4.响应面法优化链霉菌S10A09发酵产纤维素酶条件 [J], 霍光明;张李阳;朱枳穆;俞丽娜5.响应面法优化链霉菌HY6-S36产星孢菌素的发酵条件 [J], 项仁鑫;杨小虎;方佳双;应灵萍;姜南;张灵坚因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
响应面法优化产丙酸杆菌素菌株的培养条件王海晶;王玉华;齐斌【期刊名称】《中国乳品工业》【年(卷),期】2011(039)002【摘要】响应面法已成功运用于发酵过程的优化,可以对发酵培养基及培养条件等诸多因素进行考察和评价,从而有效地确定重要因子的最优水平,取得更好的发酵效果,因此本文主要采用响应面法对丙酸杆菌素产生菌株的发酵培养基进行优化,以提高丙酸杆菌素抑菌能力.首先采用Plackett-Burman(PB)试验设计法筛选出3个主要因素为葡萄糖、Tween80和pH值,然后通过最陡爬坡法和响应面分析方法确定主要因素的最佳质量浓度分别为:葡萄糖2.32g/L,Tween80 0.1 g/L,pH值为7.0.在优化条件下丙酸杆菌素押菌能力增强,形成的抑菌圈直径是24.76 mm,是优化前的1.25倍.【总页数】4页(P13-16)【作者】王海晶;王玉华;齐斌【作者单位】吉林农业大学食品科学与工程学院,长春,130118;吉林农业大学食品科学与工程学院,长春,130118;常熟理工学院发酵工程技术研究中心,江苏,常熟,215500;苏州市食品生物技术重点实验室,江苏,常熟,215500【正文语种】中文【中图分类】Q93.335【相关文献】1.响应面法优化绿僵菌产绿僵菌素A的培养条件 [J], 张功营;杨华;董丽红;万树青2.响应面法优化高产海藻糖菌株的培养条件 [J], 郑辉杰;张洪起;邸进申;刘伟3.响应面法优化 S2菌株的培养条件∗ [J], 刘江红;任静薇;贾云鹏;杨林峰;于博;李航4.响应面法优化菌株产淀粉酶培养条件的研究 [J], 文萱;朱丽云5.响应面法优化植物乳杆菌LPL-1产细菌素发酵条件及细菌素理化性质分析 [J], 王瑶;李琪;李平兰因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
响应面法优化厌氧细菌产纤维素酶发酵培养基张海健;刘占英;黄恒猛;魏爱花【期刊名称】《中国酿造》【年(卷),期】2012(031)006【摘要】通过单因素试验确定了厌氧纤维素降解细菌—溶纤维丁酸弧菌WHQ产纤维素酶的最佳培养条件,结果表明,最适产酶条件为培养时间48h,接种量10％,初始pH值8.5,温度37℃.在此基础上,应用响应面法优化该菌株产纤维素酶培养基.在初期研究中,葡萄糖和尿素确定为最佳的碳氮源,利用Plackett-Burman设计从10种培养基成分中筛选出对WHQ产内切纤维素酶有重要性的因素,结果表明葡萄糖、NaHCO,和MgSO4·7H2O对WHQ产内切纤维素酶有重要影响,利用Box-Behnken设计研究这3种因素对WHQ产内切纤维素酶的综合效应,结果表明3种因素的最佳值为MgSO4·7H2O 0.14g/L、葡萄糖14.3g/L、NaHCO3 6.92g/L,此时的内切酶酶活力最大值为206.548μg/(mL.min),与实验值相接近199.324μg/(mL·min),比未优化前的内切纤维素酶活力71.254μg/(mL·min)提高179％.【总页数】5页(P110-114)【作者】张海健;刘占英;黄恒猛;魏爱花【作者单位】内蒙古工业大学化工学院,内蒙古呼和浩特010051;内蒙古工业大学化工学院,内蒙古呼和浩特010051;内蒙古工业大学化工学院,内蒙古呼和浩特010051;内蒙古工业大学化工学院,内蒙古呼和浩特010051【正文语种】中文【中图分类】TQ920.6【相关文献】1.响应面法优化康宁木霉产纤维素酶固态发酵培养基 [J], 陈晓萍;孙付保;陈晓旭;张建华;张宏建;毛忠贵2.响应面法优化产细菌素屎肠球菌BC-3发酵培养基 [J], 韩曦;朱昆;闵钟熳3.产纤维素酶的枯草芽孢杆菌C－11发酵培养基的响应面法优化 [J], 胡斌4.响应面法优化康宁木霉产纤维素酶的发酵培养基 [J], 陈浩;谭忠元;冯昆达;谢模意;汪兆成;龚大春5.响应面法优化芽孢杆菌BY-3产纤维素酶发酵培养基 [J], 孟凡旭;马丽;杨伟平;姬生跃;辛海云;曹斌云因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
响应面法优化微波辅助提取发酵虫草菌丝体多糖工艺谢建华;单斌;张卫国【期刊名称】《生物加工过程》【年(卷),期】2009(7)3【摘要】为优化发酵虫草菌粉多糖的微波辅助提取工艺,在单因素实验基础上,以液固比、微波功率以及提取时间为自变量,多糖提取率为响应值,采用中心组合设计的方法,研究各自变量及其交互作用对多糖提取率的影响.利用SAS软件和响应面分析相结合的方法对发酵虫草菌粉多糖的微波辅助提取工艺进行优化,确定了微波辅助提取多糖的最佳条件:液固比值12.2,微波功率650.5 W,提取时间11.8 min,在此条件下,多糖提取率达到6.41%.采用此法提取的虫草菌丝体多糖,当质量浓度为1 mg/mL时,对二苯代苦味肼基自由基(DPPH)清除率达到76%.【总页数】5页(P34-38)【作者】谢建华;单斌;张卫国【作者单位】南昌大学,食品科学与技术国家重点实验室,南昌,330047;南昌大学,食品科学与技术国家重点实验室,南昌,330047;韶关学院,英东生物学院食品科学系,韶关,512005;韶关学院,英东生物学院食品科学系,韶关,512005【正文语种】中文【中图分类】TS255.36【相关文献】1.响应面法优化蛹虫草固态发酵产物虫草素与腺苷综合提取工艺 [J], 于戈;王丽;胡欣蕾;孙亚男;张欣;李铭;李文香2.发酵虫草菌丝体多糖提取条件优化及其结构分析 [J], 张丽丽;范琳琳;聂启兴;黄延盛;张全才;殷军艺;张爽;聂少平3.蛹虫草液体种制备及发酵生产菌丝体和虫草菌素工艺优化 [J], 文庭池;李光荣;康冀川;康超;雷帮星4.响应面法优化高雄山虫草菌丝体中腺苷的超声提取工艺 [J], 葛飞;石贝杰;龚倩;张慧敏;桂琳5.响应面法优化蛹虫草菌丝体多糖超声波提取工艺的研究 [J], 董媛;朱靖宇;王虎义;左陶;马东宵;滕利荣因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
新型抗真菌代谢产物发酵条件的响应面优化陈正杰;朱婉萍;张书衍;吴绵斌;贺娟;陈华;孟强【期刊名称】《浙江大学学报（工学版）》【年(卷),期】2011(045)010【摘要】从浙江东海土壤中筛选获得1株菌株(ZS09-33)能产生抑制白色念珠菌的代谢产物,经16S rRNA序列测定和Genbank数据库搜索,确定其属于Bacillus amylolique aciens.Plackett-Burman实验发现,影响抗真菌效价的主要因素为:黄豆饼粉、可溶性淀粉以及(NH4)2SO4.最陡爬坡实验和Box-Behnken实验得到响应面(RSM)优化的最佳培养基质量浓度为:黄豆饼粉2.72 g/L,可溶性淀粉26.67 g/L,(NH4)2SO4 3.95 g/L,K2 HPO4 1.8 g/L,NaCl2 g/L,MgSO4 0.5 g/L,CaCO3 0.72 g/L,CuSO4 0.02 g/L,FeSO4 0.02 g/L,MnSO40.02 g/L,初始pH 6.5.在此条件下发酵液抗真菌效价达16806.48 U/mL,与模型值相符.与单因素优化结果相比,效价提高了239％.产物经ESI/MS、1H-NMR及13C-NMR确定为相对分子质量为402的大环内脂类物质.【总页数】9页(P1868-1876)【作者】陈正杰;朱婉萍;张书衍;吴绵斌;贺娟;陈华;孟强【作者单位】浙江大学化学工程与生物工程学系,浙江杭州310027;浙江省抗真菌药物研究重点实验室,浙江台州318000;浙江大学化学工程与生物工程学系,浙江杭州310027;浙江省抗真菌药物研究重点实验室,浙江台州318000;浙江省抗真菌药物研究重点实验室,浙江台州318000;浙江大学化学工程与生物工程学系,浙江杭州310027;浙江大学化学工程与生物工程学系,浙江杭州310027;浙江省抗真菌药物研究重点实验室,浙江台州318000;浙江省抗真菌药物研究重点实验室,浙江台州318000【正文语种】中文【中图分类】Q814.2【相关文献】1.利用响应面法优化北冬虫夏草发酵米固态发酵条件 [J], 王永显;刘岩;姜鹏;江健健;朱一明;马丽琨2.响应面法优化发酵蓝莓果醋发酵工艺条件 [J], 陈曦;李国林;陈梦玉;黄道梅;孟繁博;郑秀艳;林茂3.响应面法优化乳酸菌产抗真菌物质的培养条件 [J], 代超凡;李兰兰;旭日花;郝加丽;卢文婷;王岩;郑李缘4.微白黄链霉菌G-1发酵液抗真菌特性研究和发酵条件优化 [J], 高振峰;赵佳5.响应面优化混菌固态发酵豆粕制备多肽饲料的发酵条件 [J], 王哲奇;齐景伟;安晓萍;陈大勇;仝宝生因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
响应面法优化产纤维素酶菌株深层液体发酵的条件
藏金萍;韩志校;姜军坡
【期刊名称】《江苏农业科学》
【年(卷),期】2016(044)002
【摘要】为提高解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）Tu－115菌株产纤维素酶的能力，以滤纸酶活力为指标，根据Box－Benhnken中心组合试验的设计原理，设计4因素3水平试验，建立以滤纸酶活力为响应值的二次回归方程模型，并利用响应面法分析得到深层液体发酵的最优条件是：葡萄糖含量为4．4％，豆饼粉含量为0．7％，接种量为3．0％，装瓶量为67．6 mL，此时供试菌株相应的滤纸酶活力达到12．32 U／mL，菌株产纤维素酶活力提高了27．4倍。
【总页数】4页(P368-370,374)
【作者】藏金萍;韩志校;姜军坡
【作者单位】河北农业大学生命科学学院，河北保定071001;河北农业大学国资处，河北保定071000;河北农业大学生命科学学院，河北保定071001
【正文语种】中文
【中图分类】TQ920.1
【相关文献】
1.黑曲霉2277菌株产纤维素酶最佳液体发酵条件的研究 [J], 武谮;卜可华;李平;杜先锋
2.响应面法优化小刺青霉16-7产纤维素酶液体发酵工艺 [J], 李悦;薛桥丽;李世俊;王晶;胡永金
3.响应面法优化产纤维素酶菌株的产酶条件研究 [J], 刘延娟;刘守成;李娟
4.响应面法优化西藏黄牛源产纤维素酶菌株发酵条件 [J], 张庆芳;王泽坤;姜南;于爽;迟乃玉
5.以滤纸酶活力为指标优化解淀粉芽孢杆菌Tu-115菌株产纤维素酶液体发酵条件[J], 姜军坡;朱宝成;王世英
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粗壮脉纹孢菌液体发酵产纤维素酶的条件优化
吴丹;邓泽元;范亚苇;余玮
【期刊名称】《食品与机械》
【年(卷),期】2007(023)003
【摘要】研究了粗壮脉纹孢菌发酵稻草粉生产纤维素酶的影响因素及稻草秸杆浓度、培养温度、初始pH值对内切葡聚糖酶活、滤纸酶活和菌体生长的影响.初始pH 4.8,培养温度30℃,稻草浓度5%,发酵时间为6 d时,内切酶酶活和滤纸酶活均最高.而菌体生长的最适条件为:初始pH 5.5,前3 d用25℃培养,后期改用30℃培养,稻草浓度为2%.
【总页数】3页(P25-27)
【作者】吴丹;邓泽元;范亚苇;余玮
【作者单位】南昌大学食品科学教育部重点实验室,江西,南昌,330047;南昌大学食品科学与工程系,江西,南昌,330047;南昌大学食品科学与工程系,江西,南昌,330047;南昌大学食品科学与工程系,江西,南昌,330047
【正文语种】中文
【中图分类】TS2
【相关文献】
1.粗壮脉纹孢菌降解豆皮粗纤维产可发酵糖培养基优化及单糖分析 [J], 张玮;杨建远;范亚苇;邓泽元
2.粗壮脉纹胞菌复合多菌种发酵茶粕产纤维素酶的研究 [J], 刘沛毅;邓泽元;杨建远;
李静
3.粗壮脉纹孢菌所产纤维素酶的性质研究 [J], 余玮;邓泽元;范亚苇;余永红;吴丹
4.产纤维素酶粗糙脉孢菌1602产酶条件优化 [J], 冯炘;王丹;辛丽霞;钟霞;杨阳
5.粗壮脉纹孢菌固态发酵豆渣产抗氧化多肽研究 [J], 魏长浩;邓泽元;范亚苇;邹新华;李静;李红艳
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响应面法优化植物乳杆菌代谢产细菌素的发酵条件陈琳;孟祥晨【期刊名称】《食品科学》【年(卷),期】2011(032)003【摘要】为提高一株分离自内蒙古传统发酵稀奶油"焦克"中的植物乳杆菌KLDS1.0391代谢产细菌素量,以中性蛋白酶水解脱脂乳为培养基,以枯草芽孢杆菌为指示菌,以抑菌圈直径为考察指标,在单因素试验的基础上,采用响应面法优化发酵pH值、温度以及接种量.结果表明:对该菌代谢产细菌素的活性影响大小依次为:发酵pH值>接种量>发酵温度;最优发酵条件为:pH5.1、发酵温度33℃、接种量1%.在此条件下,发酵液的抑菌圈直径为15.00mm,细菌素的效价为601.32IU/mL,较优化前提高了43.08%.在最优发酵条件下获得的实验结果与模型预测值吻合,说明所建立的模型是切实可行的.【总页数】5页(P176-180)【作者】陈琳;孟祥晨【作者单位】东北农业大学,乳品科学教育部重点实验室,黑龙江,哈尔滨,150030;东北农业大学,乳品科学教育部重点实验室,黑龙江,哈尔滨,150030【正文语种】中文【中图分类】TQ920.6【相关文献】1.植物乳杆菌fmb10产细菌素发酵条件的优化 [J], 陈芸芸;陆兆新;卢静;杨杰;魏照辉2.响应面法优化双歧杆菌B04代谢产细菌素的发酵条件 [J], 刘国荣;张郡莹;王成涛;李平兰;任丽3.响应面法优化甲基营养型芽孢杆菌J2B-74代谢产细菌素的发酵条件 [J], 王松;游玲;陈杰;邓小娅;王涛4.响应面法优化鼠李糖乳杆菌HC9产细菌素发酵条件的研究 [J], 岳喜庆;朱光泽;闵钟熳5.响应面法优化植物乳杆菌LPL-1产细菌素发酵条件及细菌素理化性质分析 [J], 王瑶;李琪;李平兰因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
响应面法优化终极腐霉生产EPA的发酵工艺卢美欢;李利军;马英辉;王银存;王小娟【摘要】In order to increase the EPA yield produced by Pythium ultimum, the fermentation process of Pythium ultimum for EPA production was optimized by Plackett-Burman design combined with Box-Behnken design on the basis of preliminary optimal fermentation conditions. The results showed that the optimal fermentation conditions were obtained as follows: sucrose 8%, KNO3 0. 4%, yeast powder 0. 65%, Na2 HPO4 0. 175%, MgSO4 0. 065%, soybean oil 1. 0%, initial pH 6. 0, liquid volume in flask 50 mL/250 mL. Under the optimal conditions, EPA yield reached 541. 61 mg/L, which increased by 85. 22 mg/L compared with that of preliminary optimization (456. 39 mg/L) .%为进一步提高终极腐霉EPA产量,在初步优化发酵条件的基础上,通过Plackett-Burman和Box-Behnken实验设计优化终极腐霉生产 EPA 发酵工艺. 获得的最优发酵工艺条件为:蔗糖8%,硝酸钾0. 4%,酵母粉0. 65%,磷酸氢二钠0. 175%,硫酸镁0. 065%,大豆油1. 0%,起始pH 6. 0,装液量50 mL/250 mL. 在最优发酵工艺条件下,EPA产量达到541. 61 mg/L,比初步优化产量(456. 39 mg/L)提高了85. 22 mg/L.【期刊名称】《中国油脂》【年(卷),期】2015(040)009【总页数】4页(P66-69)【关键词】响应面法;终极腐霉;EPA;发酵工艺【作者】卢美欢;李利军;马英辉;王银存;王小娟【作者单位】陕西省微生物研究所,西安710043;陕西省微生物研究所,西安710043;陕西省微生物研究所,西安710043;陕西省微生物研究所,西安710043;西北大学生命学院,西安710069;陕西省微生物研究所,西安710043;西北大学生命学院,西安710069【正文语种】中文【中图分类】TS222;Q819二十碳五烯酸(EPA)是ω-3系列多不饱和脂肪酸的一种，大量研究表明，EPA具有抑制血小板凝集、减少血栓素形成、预防心肌梗塞和脑梗塞、降血脂、防动脉硬化、抗癌及抗炎等作用[1]。
响应面法优化粗壮脉纹孢菌CGMCC 3088固态发酵产纤维素酶培养基张玮范亚苇 邓泽元李红艳李静（南昌大学食品科学与技术国家重点实验室，江西南昌330047）摘要：采用Plackett-Burman 设计和响应面法对粗壮脉纹孢菌固态发酵产纤维素酶的培养基组成进行优化。
结果表明：豆皮和酒糟是粗壮脉纹孢菌发酵产纤维素酶的最优碳源。
通过PB试验筛选出豆皮、酒糟和硫酸铵的添加量是影响产酶的主要因子，最后通过最陡爬坡试验和中心组合试验优化得出产纤维素酶的最优培养基组合为：豆皮64%，酒糟34%，硫酸铵2%，在此培养基下粗壮脉纹孢菌发酵产纤维素酶的酶活为2.83IU/g，较优化前的1.17IU/g提高了141.88%。
关键词：粗壮脉纹孢菌；纤维素酶；Plackett-Burman 设计；响应面；培养基Optimization of solid state fermentation medium of Neurospora crassa CGMCC 3088 forcellulases by response surface analysisAbstract: Plackett-Burman design and response surface methodology were applied to optimize the components in solid state fermentation medium for cellulases production of Neurospora crassa CGMCC 3088. The result shows that bean hull and distillers’grains are the best carbon source on solid state fermentation medium. Plackett-Burman design was applied to determine the specific medium components affecting cellulases activity and found that bean hull，distillers’ grains and ammonia sulfate were the key factors. Based on these results, steepest ascent experiments and central composite design were used for further optimization. Finally, the optimal medium was: 64% bean hull, 34% distillers’ grains and 2% ammonia sulfate. Under these conditions, the activity of cellulases significantly improved 141.88%, from 1.17IU/g to 2.83IU/g.Key words: Neurospora crassa; cellulases; Plackett-Burman design; RSM; medium纤维素酶是一组能降解木质纤维素的复杂酶系，纤维素酶的来源广泛，利用微生物发酵产纤维素酶是目前纤维素酶生产的主流。
本实验使用的粗壮脉纹孢菌，是由实验室自行筛选并诱变育种的一株高产纤维素酶的菌株[1]。
它不仅具有健全的纤维素酶系，而且在高纤维含量的培养基上生长旺盛。
由于纤维素酶的调节因ace2只受纤维素的影响[2]，所以不同纤维原料的纤维组成和结构不同诱导生产纤维素酶的活性差异较大[3-5]。
本实验选取豆皮、豆渣、米糠、啤酒糟、酒糟5种不同农副产品为纤维底物，对比不同纤维对真菌发酵产纤维素酶的影响，寻找最适合粗壮脉纹孢菌发酵产纤维素酶的培养基配方。
本实验拟通过Plackett-Burman 设计筛选出对粗壮脉纹孢菌产纤维素酶具有显著影响作用的因子，然后用响应面法优化各主要影响因子以确定其最佳值。
从而得到产纤维素酶的最适培养基配方，为今后的研究奠定基础。
1.材料与方法1.1试验材料基金项目：江西省科技支撑计划20133BBF6002；食品科学与技术国家重点实验室重点项目（SKLF-QN-201105）作者简介：张玮：（1989—），女，硕士研究生，营养与食品卫生学专业E-mail:permanent_wei@*通讯作者：范亚苇：副教授，博士，E-mail:fanyw6601 @1.1.1 菌种粗壮脉纹孢菌(Neurospora crassa) CGMCC 3088，本实验室自行筛选并保存。
1.1.2 培养基斜面培养基：PDA培养基活化培养基：沙氏培养基1.2仪器与设备LDZX-50KBS立式压力蒸汽灭菌锅上海申安医疗器械厂；HD-650超净工作台苏州苏杰净化设备有限公司；HWS-150恒温恒湿培养箱上海精宏实验设备有限公司；AR323CN 电子天平奥豪斯仪器（上海）有限公司；HH-SII恒温水浴锅巩义市英峡华仪器厂；15R型高速冷冻离心机江西省立康科技公司；DFT-200粉碎机温岭市大德中药器械有限公司；722紫外可见分光光度计上海光谱仪器有限公司1.3试验方法1.3.1孢子悬浮液的制备在超净工作台上称取1g活化好的孢子加入装有无菌水和玻璃珠的锥形瓶中（100ml/250ml），在摇床上充分震荡30min，用血球计数板计数并调整浓度为108个/ml1.3.2培养条件将1ml孢子悬浮液接种在已灭菌的固体培养基中，30℃恒温，70%恒湿培养3d测定其纤维素酶活。
1.3.3粗酶液的制备将发酵后的培养基用玻璃研钵粉碎均匀后，称取1g固体发酵物，加入0.1mol/L柠檬酸-柠檬酸钠（PH5.2）缓冲液10ml，180rpm震荡30min。
4℃离心10min，取上清液即为粗酶提取液。
1.3.4酶活测定方法：（1）滤纸酶（FPA）活力[6]以Whatman 1号定性滤纸为底物。
取4支试管，编号后分别加入0.5ml适当稀释后的酶液和1ml柠檬酸缓冲液，在50℃水浴中预热5min。
向1号试管中加入1.5mlDNS溶液以钝化酶活性，做空白对照。
然后向各试管中加入1cm*6cm的滤纸条，50℃水浴30min。
取出后立刻向2，3,4号试管中各加1.5mlDNS试剂，终止反应。
充分摇匀后沸水浴5min，冷却至室温，用蒸馏水定容，在540nm波长下测吸光度。
（2）内切-β-葡聚糖酶（Cx酶）活力[7]取4支试管，编号后分别加入0.5ml适当稀释后的酶液，在50℃水浴中预热5min。
向1号试管中加入1.5mlDNS溶液以钝化酶活性，做空白对照。
然后向各试管中加入1ml柠檬酸缓冲液（PH5.2）配置的1%羧甲基纤维素，50℃水浴30min。
取出后立刻向2，3，4号试管中各加1.5mlDNS试剂，终止反应。
充分摇匀后沸水浴5min，冷却至室温，用蒸馏水定容，在540nm 波长下测吸光度。
（3）外切-β-葡聚糖酶（C1酶）活力[8]取4支试管，编号后分别加入0.5ml适当稀释后的酶液，在50℃水浴中预热5min。
向1号试管中加入1.5mlDNS溶液以钝化酶活性，做空白对照。
然后向各试管中加入1ml柠檬酸缓冲液（PH5.2）配置的1%微晶纤维素，50℃水浴30min。
取出后立刻向2，3，4号试管中各加1.5mlDNS试剂，终止反应。
充分摇匀后沸水浴5min，冷却至室温，用蒸馏水定容，在540nm 波长下测吸光度。
（4）β-葡萄糖苷酶（βG）活力[9]取4支试管，编号后分别加入0.5ml适当稀释后的酶液，在50℃水浴中预热5min。
向1号试管中加入1.5mlDNS溶液以钝化酶活性，做空白对照。
然后向各试管中加入1ml柠檬酸缓冲液（PH5.2）配置的1%水杨苷，50℃水浴30min。
取出后立刻向2，3，4号试管中各加1.5mlDNS试剂，终止反应。
充分摇匀后沸水浴5min，冷却至室温，用蒸馏水定容，在540nm波长下测吸光度。
（5）酶活换算：50℃，PH5.2条件下，1ml粗酶提取液每分钟水解底物产生1μmol产物的酶量定义为1个酶活单位，用IU/ml表示，换算成每克湿物料含有的酶活，用IU/g表示。
1.3.5PB试验设计Plackett-Burman设计（PB设计）是用尽可能少的试验次数使主效应得到精确的估计，节省大量人力、物力和时间等。
本实验选用试验次数N=12的Plackett-Burman试验设计，以豆皮，豆渣和酒糟为主要原料，选择酒糟、豆渣、（NH4)2SO4、KH2PO4、CaCl2、MgSO4六个因素为研究对象，另外选择3个虚拟项用于估计误差，以能代表纤维素总酶活的滤纸酶活为响应值，从中筛选出影响酶活的主要影响因素。
PB设计各因子水平见表1。
表1 Placket-Burman 实验设计因素水平Table 1 Level of variables chosen for the Plackett-Burman trials因素符号编码水平(code level)factors symbols -1 1酒糟 A 20% 40%豆渣 B 10% 20%虚拟项 C / /硫酸铵 D 0.50% 1.50%磷酸二氢钾 E 0.20% 0.40%虚拟项 F / /氯化钙G 0.05% 0.15%虚拟项H / /硫酸镁I 0.05% 0.15%1.3.6最陡爬坡试验设计响应面的考察必须在接近的领域里拟合方程才能更接近真实情况[10]。
最陡爬坡实验将响应值的变化和梯度方向作为爬坡方向，根据各因子的变化大小来判断变化步长，快速、高效的逼近最佳值区域。
根据Plackett-Burman试验数据分析可知，酒糟和硫酸铵对纤维素酶的活力有显著影响。
最陡爬坡试验设计见表2。
RUN 酒糟（%）硫酸铵（%）豆皮（%）FPA(IU/g)1 20 0.5 79.5 1.442 25 1.0 74 2.013 30 1.5 68.5 2.344 35 2 63 1.985 40 2.5 57.5 1.641.3.7中心组合试验设计筛选出影响粗壮脉纹孢菌发酵产纤维素酶的主要影响因子，并确定其最大响应区域后，图1粗壮脉纹孢菌固态发酵不同农副产品产纤维素酶能力Fig.1 Effect of different substrate on enzyme activity yield of Neurosporacrassa in solid fermentation采用两因素五水平的中心组合试验（central composition design ，CCD ）对酒糟和硫酸铵的添加量进一步优化，以获得该菌产纤维素酶的最佳培养基。
