第十一章动物细胞融合和杂交瘤技术 演示文稿
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《动物细胞融合技术》讲义一、动物细胞融合技术的概念动物细胞融合技术,简单来说,就是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。
这一技术在生物学和医学领域具有重要的意义和广泛的应用。
二、动物细胞融合技术的原理细胞融合的基本原理是细胞膜具有一定的流动性。
当两个或多个细胞靠近时,细胞膜会发生变形和融合,从而使细胞质和细胞核相互融合,形成一个新的杂种细胞。
在细胞融合过程中,通常需要使用一些诱导剂来促进融合的发生。
常见的诱导剂包括病毒(如仙台病毒)、化学物质(如聚乙二醇,PEG)和电刺激等。
这些诱导剂能够改变细胞膜的性质,增加细胞膜的通透性和流动性,从而促使细胞融合。
三、动物细胞融合技术的方法1、病毒诱导法仙台病毒是最早用于诱导动物细胞融合的病毒之一。
病毒的包膜上含有能够促进细胞融合的融合蛋白。
当病毒与细胞接触时,融合蛋白能够介导细胞膜的融合。
然而,由于病毒具有致病性和潜在的生物安全风险,目前这种方法的使用相对较少。
2、化学诱导法聚乙二醇(PEG)是目前应用最为广泛的化学诱导剂之一。
PEG 能够使细胞膜的磷脂双分子层结构发生紊乱,导致细胞膜的通透性增加,从而促进细胞融合。
具体操作时,将待融合的细胞混合在含有 PEG 的溶液中,经过一段时间的处理后,细胞就能够发生融合。
3、电融合法电融合法是通过在两个细胞之间施加短暂的高强度电场,使细胞膜发生穿孔和融合。
这种方法具有融合效率高、对细胞损伤小等优点,但设备要求较高。
四、动物细胞融合技术的应用1、单克隆抗体的制备单克隆抗体是由单个 B 淋巴细胞克隆形成的细胞群所产生的抗体。
通过动物细胞融合技术,将能够产生特定抗体的 B 淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合,形成杂交瘤细胞。
杂交瘤细胞既能无限增殖,又能产生特异性抗体,从而实现了大规模生产单克隆抗体。
单克隆抗体在疾病的诊断、治疗和预防等方面发挥着重要作用,如肿瘤的靶向治疗、自身免疫性疾病的治疗等。
2、细胞工程药物的生产利用动物细胞融合技术,可以将具有特定功能的细胞融合在一起,构建能够高效生产药物的工程细胞。
山东大学细胞生物学实验报告聚乙二醇(PEG )法诱导的动物细胞融合实验2012/9/11实验目的:了解细胞融合技术的发展过程和主要方法的基本原理,用聚乙二醇(PEG)化学诱导法进行鸡血红细胞的融合实验,掌握实验的基本操作,观察鸡血红细胞融合的不同时期。
实验原理:1. 细胞融合的概念两个或两个以上的细胞或原生质体在自然或人为诱导的情况下细胞质膜相互融合,细胞质相互混合成为一个整体杂合细胞的现象被称为细胞融合。
细胞融合可以发生在同种细胞之间也可以在不同物种间实现。
2. 细胞人工融合的主要方法及基本原理细胞体外融合的主要方法分为病毒诱导,化学诱导和物理诱导。
1953年,M. Kuroya 在临床中第一次分离到仙台病毒(HVJ )[1]。
1958年,日本学者Okada 发现仙台病毒(HVJ )能诱导动物细胞融合[2],其基本原理是仙台病毒的衣壳上有细胞表面受体的结合位点,可以诱导不同细胞凝集,最终使不同细胞的细胞膜相互融合。
1974年,加拿大学者高国楠发明了细胞的聚乙二醇(Polyethyleneglycol ,PEG )化学融合法,由于该方法对实验条件要求极低,试剂易得,操作简单,成为应用最广泛的细胞融合方法。
化学诱导细胞融合的基本原理是PEG 等化学物质能够诱导细胞膜磷脂分子的极性基团发生结构重排,相互接触的细胞在细胞膜恢复过程中借助磷脂分子的亲和作用和表面张力实现融合。
比之于仙台病毒诱导法,PEG 诱导法的效率提高了几百倍。
80年代,科学家发明了细胞电融合法[4, 5],电融合法将细胞融合的产率提高到了50%-80%。
电融合法的建立是基于细胞膜表面带电荷的性质。
当在细胞悬液周围加入特定方向的电场时,细胞表面会发生极化现象,相邻的细胞将吸附在一起。
这时突然提高电场强度,细胞间彼此接触的细胞膜会被击穿,细胞膜修复时受到磷脂分子间的亲和作用和细胞膜表面张力的作用将会发生融合。
图2. 以电融合方法得到的3T3-C2融合细胞 (引自J. Teissie 等,1982 )。
课时4动物细胞工程课标要求核心考点五年考情核心素养对接1.阐明动物细胞培养是从动物体获得相关组织,分散成单个细胞后,在适宜的培养条件下让细胞生长和增殖的过程。
动物细胞培养是动物细胞工程的基础;2.阐明动物细胞核移植一般是将体细胞核移入一个去核的卵母细胞中,并使重组细胞发育成新胚胎,继而发育成动物个体的过程;3.阐明动物细胞融合是指通过物理、化学或生物学等手段,使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程;4.概述细胞融合技术是单克隆抗体制备的重要技术;5.简述干细胞在生物医学工程中有广泛的应用价值动物细胞培养和干细胞的应用2023:辽宁T7、海南T7、湖南T21(4);2022:海南T20(1)(3)(4)、湖北T7、江苏T14;2021:湖南T22(2)、重庆T5、浙江1月T18;2020:江苏T231.生命观念——深入理解动物细胞核移植和克隆技术,理解生命的发生、发展过程。
2.科学思维——分析动物细胞培养的条件、细胞融合和单克隆抗体制备的原理,形成科学思维的习惯。
3.科学探究——通过动物细胞培养操作,培养科学探究能力。
4.社会责任——了解生物工程技术在生产上的应用,认同生物技术对社会发展的影响,承担应有的社会责任动物细胞融合技术和单克隆抗体2023:北京T12、湖北T22(1)(2)(3);2022:浙江1月T29(二)(3)、辽宁T24Ⅱ、江苏T19、山东T15;2021:山东T15;2020:江苏T28(4)、全国ⅠT38;2019:江苏T23动物体细胞核移植技术和克隆动物2023:天津T7;2021:辽宁T13、湖南T22(3);2020:天津T1命题分析预测1.高考对本部分的考查常以生产或科研实践为情境,也可以图为载体,主要考查动物细胞培养、动植物细胞融合的异同、单克隆抗体的制备等,既有选择题,也有非选择题。
2.预计2025年高考仍可能延续往年的考查形式及特点,与基因工程、胚胎工程等其他知识相结合进行命题考点1动物细胞培养和干细胞的应用学生用书P3331.动物细胞培养(1)动物细胞培养的原理、条件和过程辨析细胞贴壁和接触抑制(1)细胞贴壁是指体外培养的细胞贴附在培养瓶的瓶壁上生长的现象;接触抑制是指当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时,细胞通常会停止分裂增殖的现象。
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