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基因工程的研究现状与应用摘要：基因工程自上个世纪出现之后，一直处于蓬勃发展之中并被广泛关注。
进入新世纪以来，更是得到了长足的进步。
目前，在生物领域各相关行业内，均已受到一定的重视，并开展了一系列的研究并且在选修3中基因工程的操作和应用是要求学生掌握的重点内容。
本文主要介绍基因工程在农业、医学等方面的应用研究，探讨基因工程对于这些行业的巨大推动作用，用以扩大学生的生物学相关知识含量，提高学生对于基因工程的学习兴趣。
关键词：基因工程；医学；农业；应用基因工程是在分子水平上，对基因进行剪切、拼接、重组等操作，再将改造后的基因导入活细胞内，通过基因在活细胞内的转录翻译等操作，改变生物体的性状与遗传特性，达到提高生产和对生物体进行改造的目的。
由于可以改造生物，故而在生物相关行业内，均得到了广泛的发展和应用。
一、基因工程的主要步骤（1）目的基因的分离：从含有所需性状的生物体的基因组中，通过酶切等手段，找到并分离出所需dna片段。
（2）体外重组dna：在体外，将所需dna 片段连接到可自我复制并有一定标记的载体上，达到重组dna 分子的目的。
（3）导入目的基因：将重组后的dna转移到受体细胞内，并与之一起增殖。
而后从细胞群落中，筛选出获得了重组dna 分子的受体细胞。
（4）对目的基因进行检测和表达二、基因工程的发展与应用（一）医学上的应用1.在制药业的发展与应用传统医学的发展一直有一个棘手的问题，这个问题阻碍着医学的进步，某些时候也在人们的生命延续上造成了很大的困难。
这个问题就是，有些人体所必须的物质，在现存的生物体内很少产生。
如淋巴因子、凝血因子、胰岛素等。
针对于此，目前科研人员已经将目的基因通过基因工程技术，导入了某些细菌细胞内，使得这些基因得以转录翻译，并产生人体所需的这些物质和药物，为医学的发展做出了很大的贡献。
2.植物基因工程疫苗生物体的免疫过程，是生物体在抗原的刺激下，免疫系统产生抗体，并防御机体免受更大伤害的过程。
基因工程技术在医学领域中的应用基因工程技术的发展已经取得了很多的成果，而在医学领域中应用的情况越来越多。
因为这些技术可以改变人类基因的组成，从而可以通过调整人类的基因来治疗一些疾病。
基因工程技术的应用是一个庞大的体系，它包含了很多不同的技术和方法，下面我们就来详细了解一下：1. 基因诊断技术基因诊断是一种非常有效、准确的疾病诊断方法。
它可以通过检测人类基因的异常变化来判断是否患有某种疾病。
这种技术主要应用在乳腺癌、胃癌、肺癌、结直肠癌等疾病的筛查和早期诊断上。
2. 基因治疗技术基因治疗是指通过人类基因的调整来治疗一些疾病的方法。
它可以通过修改人体细胞中的基因，使人体产生新的蛋白质，从而达到治疗疾病的效果。
这种技术主要应用在遗传性疾病和某些癌症的治疗上。
3. 基因药物技术基因药物是一种利用人类基因的特性来研制新药物的技术。
这种技术是一种新型的治疗方法，可以对疾病的预防和治疗都产生非常大的作用。
基因药物主要应用在血液、免疫系统和癌症治疗等领域。
4. 基因工程技术对糖尿病的治疗基因工程技术在糖尿病治疗方面取得了很大的成果。
通过基因工程技术，制造出了可以分泌胰岛素的细胞，这种细胞可以植入到糖尿病患者的身体中，从而帮助患者合成胰岛素，达到治疗疾病的目的。
5. 基因工程技术在神经系统疾病治疗中的应用基因工程技术在治疗神经系统疾病方面也有着非常重要的应用。
神经系统疾病主要表现为中风、阿尔茨海默病、帕金森综合征等。
通过基因工程技术，可以通过修改人体神经细胞的基因组，达到治疗神经系统疾病的目的。
6. 基因工程技术在心脏病治疗中的应用基因工程技术在心脏病治疗中也有非常明显的应用。
心脏病主要表现为心肌梗塞、心律失常等疾病。
通过基因工程技术，可以调整人体心脏中异常基因的组成，从而达到治疗心脏疾病的目的。
总之，基因工程技术在医学领域中的应用越来越广泛。
它的出现和应用，使得医学领域的发展变得更加迅速，也提高了医学领域的诊断和治疗水平。
《基因工程大肠杆菌发酵生产重组人胰岛素的研究》一、引言基因工程技术的发展为生物医药领域带来了革命性的变革，其中重组DNA 技术作为一种能够改变生物体基因组的技术，为生产重组蛋白素（包括重组人胰岛素）提供了可行性。
本文将从深度和广度两个方面来探讨基因工程大肠杆菌发酵生产重组人胰岛素的研究。
二、基因工程大肠杆菌发酵生产重组人胰岛素的原理在基因工程大肠杆菌发酵生产重组人胰岛素的研究中，首先需要获取重组人胰岛素的基因序列，然后以质粒或病毒为载体将其转染至大肠杆菌的体内，经过培养和发酵，大肠杆菌体内合成重组人胰岛素，并通过纯化后得到最终的产品。
三、基因工程大肠杆菌发酵生产重组人胰岛素的研究进展1. 基因克隆技术的应用基因克隆技术的应用是基因工程大肠杆菌发酵生产重组人胰岛素的关键技术之一。
利用限制酶切剪切 DNA，然后重组连接，将重组的DNA 导入质粒内，再将质粒导入大肠杆菌细胞内，实现外源基因的表达。
2. 基因工程大肠杆菌的选择为了高效地生产重组人胰岛素，研究者需要筛选高产重组蛋白素的大肠杆菌菌株，并进行相关的改造以提高其产量。
3. 发酵工艺的优化发酵工艺的优化对于提高重组人胰岛素的产量至关重要。
包括对培养基成分、厌氧发酵条件、发酵时间等因素的优化。
四、基因工程大肠杆菌发酵生产重组人胰岛素的意义基因工程大肠杆菌发酵生产重组人胰岛素具有重要的生物医药意义。
大肠杆菌是一种广泛存在于自然界中的细菌，其发酵生产成本低、抗污染能力强，适用于大规模工业化生产。
另重组人胰岛素与天然胰岛素具有相同的生物活性，可以作为治疗糖尿病的药物，在临床上有着重要的应用前景。
五、个人观点和理解基因工程大肠杆菌发酵生产重组人胰岛素的研究是基因工程技术的一个重要应用方向，其有着较高的生产效率和较低的成本，为生物医药领域带来了巨大的潜力和机遇。
但是，需要注意的是，基因工程技术在应用过程中也存在一些伦理和社会问题，例如生物安全性、环境影响等方面，需要引起足够的重视。
糖尿病治疗基因检测技术的发展现状随着年龄的增长，人们的健康问题越来越引起关注。
其中，糖尿病是一种慢性疾病，已经成为全球人口健康问题之一。
据统计，全球约有 4.63亿人患有糖尿病，而中国就有约 1.14亿人患有此病。
由于其病因复杂，很多人难以顺利控制其病情，这使得糖尿病治疗更加复杂化。
目前，糖尿病基因治疗检测技术的发展，成为人们关注的热点之一。
一、糖尿病基因治疗检测技术的原理糖尿病基因检测原理是通过检测人体中与糖尿病相关的基因，确定患者是否存在该疾病的遗传倾向性。
随着科技的发展，糖尿病基因检测技术目前已经可以检测出100多种相关基因，并提供了全面的遗传咨询、个性化治疗和术后康复指导等服务。
二、糖尿病基因治疗检测技术的发展现状目前，糖尿病基因治疗检测技术已经成为了当前医疗技术的热点之一。
一方面，糖尿病基因检测技术已经发展出多种专业的品牌化产品，以满足市场需求。
另一方面，还出现了多个国际性的研究团队，针对此领域展开了严密研究，并取得了长足的进展。
在这种积极趋势下，糖尿病基因治疗检测技术未来的发展趋势更加值得期待。
三、糖尿病基因治疗检测技术的应用前景糖尿病基因治疗检测技术的应用前景非常广泛。
从预防层面上看，糖尿病基因治疗检测技术可以帮助人们及早发现患有糖尿病的风险，从而采取更为有效的治疗措施。
在治疗阶段，糖尿病基因治疗检测技术还可以通过对患者的病因进行针对性分析，提供个性化的治疗方案。
从无创层面上看，糖尿病基因治疗检测技术未来也有望为人体基因组医学研究提供支持。
总之，糖尿病基因治疗检测技术的发展现状与应用前景均非常值得期待。
但是，我们在使用糖尿病基因检测技术时也需要注意，防止过度曲解其应用价值，或者防止不当使用其检测结果带来的负面影响。
更好的健康管理，需要我们在权衡风险的同时充分利用科学技术的优势，设计和执行切实可行的治疗方案，从而达到更理想的治疗效果。
基因工程的研究和应用是当今科技领域的一个热门话题。
随着人们对基因的理解越来越深入，科学家们也在不断探索基因技术的应用前景。
本文将从以下几个方面介绍基因工程的概念、技术、研究进展和应用前景。
一、基因工程的概念基因工程是指利用分子生物学、细胞生物学等现代生物学技术，对生物体遗传物质进行修改、重组、编辑和传递等操作，以达到改变其遗传基因组的目的。
也就是说，基因工程是通过改变生物体本身的基因信息来实现人类需求的技术手段。
基因工程技术主要包括基因突变、DNA重组、基因克隆、基因敲除、基因编辑等，这些技术可以用于植物、动物、微生物等不同的生物体中。
二、基因工程技术基因突变是指通过人为诱发突变来改变生物体基因组中的某些基因序列，进而影响生物体的性状和表型。
其中最为常见的是X射线辐射或化学物质诱发的突变。
DNA重组则是指将不同物种或同一物种不同个体的基因组进行交换，从而加强或减弱某种性状的表达。
基因克隆是指将基因片段插入到不同的质粒或者受体细胞中，将基因的复制、表达等功能进行研究。
而基因敲除则是指通过改变细胞分裂过程中某些特定基因的表达，从而实现特定功能的研究。
最后，基因编辑则是指通过高科技生物工程技术，在生物体的某个位点上添加、剪切或替换一个基因，从而改变其性状和表型。
三、基因工程研究进展自20世纪70年代起，基因工程技术已经被广泛用于生物学、医学、农业、能源和环境等领域的研究和应用。
在医学领域，基因工程技术可以帮助我们治疗一些常见或罕见的遗传性疾病，例如糖尿病、血友病、囊性纤维化等；在农业领域，基因工程技术可以改良作物，提高其产量和抗病性，同时也大大降低了对化学农药的依赖；在环境领域，基因工程技术可以用于污水处理、土壤改良以及生物除草等领域。
近年来，随着基因测序、基因编辑和基因治疗等核心技术的快速发展，基因工程研究的深度和广度也得到了空前的发展。
例如，人类基因组计划、CRISPR基因编辑技术、RNA干扰技术等都是目前最为热门的研究课题。
基因工程开展现状与进展概况【摘要】：如果说过去20年是信息时代的话, 那么21世纪将成为生物技术时代。
现代生物技术包括基因工程、细胞工程、酶工程、发酵工程与蛋白质工程等新技术, 其中以基因工程为核心的现代生物技术是12 世纪初期全球开展最快的高新技术产业之一。
基因工程, 又称转基因工程或重组DNA技术,就是人类按照自身的需要和旨意,用类似工程设计的方式, 人为地、有目的地、有方案地通过基因克隆、转移与表达等方式形成人们所需要的新生物种或类型，由于基因工程打破了不同物种之间的界限, 定向地创造出生物新品种或新物种, 因此近年来基因工程正以空前的速度开展和膨胀, 显著地推动农业、工业、医药与能源等方面向更加高效和环保的方向开展。
【关键词】：基因工程、开展、成果、前景【正文】：一、开展历程回忆：由于分子生物学和分子遗传学开展的影响，基因分子生物学的研究也取得了前所未有的进步。
为基因工程的诞生奠定了坚实的理论根底，这些成就主要包括了3个方面：第一，在40年代确定了遗传信息的携带者，即基因的分子载体是DNA而不是蛋白质，从而明确了遗传的物质根底问题；第二，是在50年代提醒了DNA分子的双螺旋构造模型和半保存复制机制，解决了基因的自我复制和传递的问题；第三，是在50年代末期和60年初，相继提出了中心法那么和操纵子学说，并成功的破译了遗传密码，从而说明了遗传信息的流向和表达问题。
使人们期待已久的，应用类似于工程技术的程序，主动的改造生物的遗传特性，创造具有优良性状的生物新类型的美好愿望，从理论上讲已有可能变为现实。
但在60年代的科学技术开展水平下，真正实施基因工程，还有一些问题：要详细了解DNA编码蛋白质的情况，以与DNA与基因的关系等，就必须首先弄清DNA核苷酸序列的整体构造，怎样才能别离出单基因，以便能够在体外对它的构造与功能等一系列的有关问题作深入的研究，对于基因操作来说是十分重要的环节。
在70年代两项关键技术：DNA分子的切割与连接技术，DNA的核苷酸序列分析技术从根本上解决了DNA的构造分析问题。
基因工程技术在医学上的应用近年来，科学技术得到了空前的发展，其中基因工程技术作为科技革命的重要一环，取得了重大的突破和进展，成为医学领域中一个备受瞩目的热门话题。
基因工程技术在医学上的应用，可以有效地缓解当前医学领域中很多难以治疗的难点疾病，成为世界上医学领域的一项重要技术。
一、基因工程技术的概述和应用基因工程技术广泛应用于生物医学领域，这是因为它可以帮助我们更好地理解疾病的机制，设计和制造新的治疗方法，最终实现精细的个体化治疗。
基因工程技术主要是指将人类基因进行人工改造，以达到预期的治疗效果，其主要应用有以下几方面：1. 基因治疗：基因治疗是将人工制造的基因导入体内，通过对疾病基因的修复和替换，达到治疗疾病的效果。
这种方法可以治疗例如糖尿病、艾滋病及乳腺癌等疾病。
2. 基因筛查：通过对患者基因进行筛查，可以得出该基因对于疾病的关系。
应用基因筛查的初期目的是通过找出疾病基因的位置，了解疾病基因如何发生变化以及疾病基因的特征，从而为将来治疗提供各种方法探索。
3. 基因药物研究：通过基因工程技术，可以研究药物对特定基因的影响。
这种方法可以帮助我们更好地了解药物的效果，从而为制造更加有效的药物提供思路。
二、基因治疗应用现状目前，基因治疗已经在一些疾病上得到了广泛应用。
比如血友病，这是一种常见的遗传病，一旦患了这种疾病就需要输血进行治疗，但基因治疗可以将正常的基因导入体内，从源头上治疗病患人群。
再比如，肺癌也已经有了基因治疗的应用，阻止基因突变的现象，可以有效地治疗肺癌。
基因治疗技术还有一些问题需要解决，例如难以精准到达治疗部位。
一些新型技术也在快速发展中，例如纳米技术和制备基因材料技术，可以帮助研究人员更好地处理解决目前的一些难题。
基因治疗技术未来还有很大的发展潜力，相信在未来会有更多疾病可以得到基因治疗的应用和成功示范。
三、未来可能的应用基因工程技术在医学中的应用前景非常广阔。
随着我们对基因工程和基因功能的认识提高，基因技术也会在很多方面提供更加有效的治疗方法。
糖尿病的研究现状及进展摘要：随着国民经济的迅速发展，生态环境的变化，人们生活节奏日趋加快，糖尿病已日益成为威胁人类健康的公共卫生问题，越来越高的糖尿病发病率及其导致的并发症，严重地影响着患者的身体健康和生活质量。
目前糖尿病已成为继恶性肿瘤和心脑血管疾病之后，危害人们健康的第三大非传染性疾病。
在此紧迫形势下，人类和疾病的斗争并未停顿，糖尿病的研究不断取得进展，不断有新的防治策略和方法应用于临床，人类最终根治糖尿病并非遥不可及。
关键词：糖尿病，胰岛素，药物治疗，细胞糖尿病(diabetes mellitus)是一种常见、多发的内分泌代谢性疾病，系由多种不同的病因造成胰岛素分泌绝对或相对不足以及靶细胞对胰岛素敏感性降低，导致糖、蛋白质、脂肪代谢紊乱，发生持续性高血糖。
病后倘若得不到有效控制，随病程延长可出现广泛微血管、大血管病变引起系统性损害累及眼、肾、神经、心血管等组织，最终出现这些脏器功能缺陷和衰竭。
病情严重或应激状态时可发生酮症酸中毒、非酮症高渗性昏迷等急性代谢紊乱。
糖尿病分1型糖尿病和2型糖尿病。
1型糖尿病是因为胰岛β细胞破坏导致胰岛素绝对缺乏，由自身免疫损伤引起，多数年龄较轻。
2型糖尿病是由于胰岛素阻抗作用和分泌缺乏所引起，还有特异型糖尿病和妊娠糖尿病。
1.糖尿病的发病机制1.1 1型糖尿病1型糖尿病是一种特异性针对胰岛B细胞的自身免疫性疾病，对其亚型成人隐匿性自身免疫糖尿病(LADA)的研究进展很快，LADA与经典的1型糖尿病的自身免疫发病机制相同，不同之处在于其胰岛细胞所受免疫损害呈缓慢性。
LADA 主要具有成年起病、病程进展缓慢且有胰岛自身免疫破坏的证据(如一种或多种胰岛自身抗体阳性)3个特征。
文献报道多倾向把有谷氨酸脱羧酶抗体(GAD—Ab)或血胰岛细胞抗体(ICA) 等胰岛自身抗体阳性的成人起病的 2型糖尿病称为LADA。
LADA患者临床异质性明显，根据 GAD—Ab的滴度不同，LADA又可以分成不同的亚型，有研究发现以GAD—Ab滴度 O．5或 O．1分界均体现明显不同的临床特点，表明LADA甚至糖尿病是一个连续的疾病谱，在 1型和 2型糖尿病之间可有 1．2型、1．5型、1．7型及 1．8型等过渡类型，LADA总体上可称为 1．5型。
基因工程在治疗1型糖尿病方面的研究进展与发展【摘要】近年来, 随着人们对糖尿病本质的深层次揭示和现代分子生物学手段的发展, 糖尿病,尤其是1型糖尿病基因治疗的内容不断增加。
本文总结了利用合适的启动子载送胰岛素原的cDNA, 刺激新的B细胞生成以达到恢复胰岛素的生理性分泌及改善或避免破坏B细胞免疫应答的1型糖尿病基因治疗进展，并展望其未来发展方向。
【关键词】 1型糖尿病；基因治疗；病毒载体；B细胞工程自上个世纪以来, 胰岛素的发现和其类似物的不断发展挽救了无数1型糖尿病患者的生命。
但外源性胰岛素及其类似物的补充治疗存在需要多次注射、严密监视血糖及无法按生理需求分泌等缺陷。
随着新病毒载体的成熟运用, 载送方式的不断改进以及治疗思路的不断扩展, 科学家们开始尝试用基因治疗技术来治疗1 型糖尿病。
1型糖尿病( Type 1 diabetesme llitus, T1DM )的主要病因与自身免疫对于机体胰岛B细胞的破坏有关。
目前研究人员尝试通过以下三种策略来平稳控制血糖。
首先是直接载送具有合适启动子的胰岛素原cDNA 到胰腺以外的部位(通常是肝), 通过异位分泌胰岛素来维持正常血糖水平。
其次是通过刺激新的B细胞的生成来促使胰腺恢复原来的功能。
第3种思路则是改善胰岛B细胞的自身免疫反应。
下面就1 型糖尿病胰岛素基因治疗研究现状分别从上述3 个方面作一综述。
1.利用合适的启动子载送胰岛素原的cDNA1型糖尿病最简单直接的基因治疗法是通过载送胰岛素原的cDNA来替代死亡B细胞的功能。
通常选择肝细胞为基因送载的目的部位, 这是由于肝脏具有合成糖代谢相关酶及运载蛋白的功能。
目前已用于此基因转移的载体有: ( 1) 逆转录病毒载体。
( 2) 脂质体载体。
( 3) 腺相关病毒载体等。
逆转录病毒载体由于构建简单, 宿主范围广, 可整合入宿主细胞基因组中获得稳定表达等优点, 而成为目前各种基因治疗实验中应用最广泛的载体。
有研究显示, 将含有人胰岛素原基因的重组逆转录病毒载体注入大鼠门静脉后, 可在肝脏获得5% ~15% 的基因转移效率, 并可使其表达持续6 个月, 阻止大剂量STZ 诱导的糖尿病鼠高血糖、体重下降、酮症酸中毒以至死亡［1］。
然而逆转录病毒载体也有其缺点, 它只能感染分裂期的细胞, 在体内直接基因转移时需要采取部分肝切除等方法促进细胞分裂增殖, 这使其在活体动物以及人的直接应用受到限制, 另外, 它缺乏靶向性, 随机整合, 不可避免的产生安全性问题。
传统的中性脂质体载体是将磷脂、胆固醇或其它脂类的乙醚溶液加入DNA 溶液中, 通过处理得到带DNA 的脂质体小泡, DNA 被包裹在脂质体膜内部, 可与细胞膜融合被细胞内吞而实施基因转移。
这种方法在胰岛素基因活体直接基因转移研究中应用较早。
八十年代已有学者将含有胰岛素基因的质粒与中性脂质体作用后注入大鼠体内, 发现在肝组织中可检测到转入基因的存在, 并获得一过性血糖下降和血浆胰岛素水平升高。
1987 年起出现了一系列阳离子脂质体转染试剂, DNA 通过与阳离子之间的相互作用形成DNA－脂质体复合物再被细胞捕获并最后表达, 这大大提高了脂质体的基因转染效率。
目前认为, 影响脂质体活体直接基因转移效率的因素有: ( 1) 启动子因素。
有研究比较了巨细胞病毒( CMV) 启动子、SV40 启动子、腺病毒启动子及胸苷激酶( TK) 启动子引导氯霉素乙酰基转移酶基因在大鼠体内转移表达效率, 发现CMV 启动子最高, 而TK 启动子效率最低。
还有研究发现, 在各种启动子引导荧光酶( luc) 基因表达的实验中, CMV启动子可在肌肉中获得最高表达效率。
( 2) 脂质体的组成因素。
研究发现在活体直接基因转移时,含有胆固醇的脂质体可获得最高转移效率。
( 3) DNA 与脂质体的比例。
Thierry 等认为经静脉基因转移时DNA 与脂质体的最佳比例为0. 08(wt/wt) , 而Egilmez 等认为这个比例应在1 1~ 1 4( u g/nmol) 之间( 4)DNA 的用量。
Thierry 等在研究luc 基因经静脉注入小鼠体内后的表达情况时发现, 组织中luc水平随DNA 用量增加而逐渐增高, 当DNA 用量增至100u g 以上时, 组织中luc水平不再继续增高甚至开始下降。
当前在基因治疗领域, 脂质体尤其是阳离子脂质体介导基因转移已成为一种最具创新性的、高效的转染技术。
然而大量研究表明, 脂质体介导的活体直接转移的基因表达是一过性的, 如何充分利用它的高效性和安全性, 使其介导转移的基因长期稳定表达成为学者们今后需要研究的重要课题。
腺相关病毒( AAV) 载体由于其位点特异性整合而在近年倍受重视。
与其它病毒性载体相比, AAV载体具有以下优点: AAV 无致病性, 人类为自然宿主, 安全性较高; AAV 基因组可克隆入质粒, 载体构建简单; AAV 载体可将外源基因定点整合于人类19号染色体长臂,基因表达稳定;AAV 颗粒稳定, 可通过离心浓缩提高病毒滴度达1012 cfu/ml。
最近的研究表明,腺病毒是最好的有效载体系统。
它可以选择性的将基因转移到胰岛, 但是要经受免疫应答反应和载体的细胞毒作用。
完全删除病毒成分的腺病毒载体可以避免这一问题, 它没有毒副作用, 可以选择性地将基因转移到胰岛上, 且胰岛素的表达具有长效性和高效性, 基因突变率低, 对体内重要基因的表达几乎不产生影响。
通过探索不同的基因转染路径(腹膜内注射, 导管内注射, 静脉内注射) 和研究不同血清型的AAV 载体( ssAAV, dsAAV ) , 以研发广泛、高效和稳定的转基因表达体系。
研究证明, 几乎整个胰岛都可以表现出基因转移, 但使用不同的转移方法和载体表现出不同的效率和模式。
经腹腔和静脉内的AAV8注射可有效的转染外分泌细胞, 使之像内分泌细胞一样分泌胰岛素, 且AAV8在腹腔注射后可以广泛的分布于肝、心、肌肉等。
而AAV 6的胰腺导管内传递则表现出很高的效率, 选择性更强。
与腹膜内和静脉内注射相比，导管内注射AAV 6是基因转染的最佳方法。
其最大优点在于病毒的需求量少, 病毒也较少侵及非胰腺器官和组织, 更适用于大型动物和人类。
dsAAV比ssAAV 更适合于基因转染, 因为ssAAV 产生的胰岛的基因转染相当有限。
故导管内注射dsAAV6是较为理想、广泛、高效和稳定的转基因表达体系。
目前，人们还在持续不断地寻找和改进能提高基因表达效率的分子生物学手段, 如以低压脉冲电流介导的体内转染方法——电穿孔法( e lectroporation) 能显著提高基因表达效率, 也被用于胰岛素基因的体内转染, 其安全、高效的特点正受到人们越来越多的关注, 成为一种很有前途的体内转染方法。
2. 刺激新的B细胞生成以达到恢复胰岛素的生理性分泌该方法的主要思路是将胰岛素合成或调控基因导入靶细胞，使其转化为胰岛B细胞。
依转移基因的靶细胞不同可分为生殖细胞基因治疗和体细胞基因治疗两种途径。
因转基因在受体细胞的随机整合性和可传代性, 以及其对人类长期影响的不能完全预知, 并涉及伦理学问题, 因此目前尚不考虑生殖细胞基因治疗途径。
迄今临床采用的均属体细胞基因治疗. 这种基因治疗方法有两种治疗方案可供选择: 一是将病人的体细胞取出作原代培养, 将目的基因转入后再移植回该病人体内, 这样就避免了组织排异反应带来的问题; 二是采用转入胰岛素基因后培养的传代非B细胞系。
这两种治疗方案采用的技术方法大致相同, 然而, 将目的基因导入原代培养的细胞较导入传代培养的细胞系困难许多, 技术要求也更高, 目前用于糖尿病基因治疗研究的主要有三类靶细胞: :一类为胸昔激酶缺乏(Lt k 一) 的成纤维细胞; 一类为肝细胞; 第三类为来自垂体前叶的A C T H 瘤细胞(A t T 一2 0) 。
L tk 一细胞为稳定传代细胞系, 具有易于培养、增殖、传代、转染和移植并表达分泌蛋白质的特点。
肝脏为体内大器官, 是葡萄糖代谢和蛋白质合成的重要场所, 进食后糖和其它营养成分首先通过门静脉进入肝脏并形成肝一胰联系; 肝细胞具有与B 细胞类似的一些组织细胞特点, 除参与葡萄糖代谢和蛋白质合成外, 还表达B 细胞分泌胰岛素所需的特异性葡萄糖转运蛋白(G L U T Z ) 和葡萄糖激酶(G K ); 其特殊的解剖部位和血循环特点,静脉或腹腔途径移植转导的细胞较易进入肝、脾等内脏, 而且可以通过这两条途径直接进行基因转移, 因此肝细胞是糖尿病基因治疗非常有前途的靶细胞。
另外A t T 一20 细胞为神经内分泌细胞,具有一般内分泌细胞分泌激素的特有结构和功能。
研究发现上述三类细胞经转导人前胰岛素。
D N A 后均能合成分泌胰岛素, 转染的阳性克隆细胞, 注射于糖尿病鼠腹腔后, 糖尿病鼠高血糖状态明显改善, 体重恢复。
这些实验显示利用胰外组织进行糖尿病体细胞基因治疗是可能的。
但前两者表达产物为人前胰岛素, 而后者又称A tT 一2 0 ins 细胞则分泌成熟胰岛素。
晚近证实A t T 一2 0i n s 细胞分泌颗粒中含有B 细胞分泌颗粒的肤酶PC Z和P C 3, 因而可以加工前胰岛素为成熟胰岛素, 显示神经内分泌细胞作为糖尿病基因治疗的靶细胞具有特殊意义。
Ⅰ型糖尿病基因治疗中最为关键和复杂问题是胰岛素的表达调控问题，分泌水平过高则造成低血糖死亡, 分泌水平过低又不能满足治疗要求。
目前认为, 有效的生理性调控序列分别为: 磷酸烯醇式丙酮酸激酶( phosphoeno lpyruvate carboxyk inase, PEPCK )、肝丙酮酸激酶( liver-pyruvate k inase, L-PK ) 和葡萄糖-6-磷酸酶( g lucose-6-phosphatase,G6Pase) 的启动子。
PEPCK 启动子可同时受血糖和血浆胰岛素的反馈调控, 但在血糖明显升高时其作用将受到抑制而使胰岛素的产量减少, 目前已不多用。
L-PK和G6Pase是相对理想的启动子, 但作用不够强大,基因表达效率不高, 影响了降糖的效果。
近年, 人们又发现了一种新的调节因子) ) ) Foxa l ( 肝核因子) , 它是属于Foxa家族的, 来源于内胚层器官,可以对血糖的稳态进行调节。
Foxal可以直接调节胰高血糖素, 因为其与胰高血糖素的启动子是绑定在一起的。
Foxal对胰岛素的分泌有间接影响,UCP2 (线粒体解耦联蛋白) 的启动子是Foxa l负性依赖性的。
而UCP2可以通过氧化磷酸化来抑制胰岛素分泌。
故Foxal 可以用来维持血糖的稳态。
但有许多问题仍需要进一步进行验证。
2000年，Cheung 等发现位于胃、十二指肠、空肠的K 细胞具有较高的GK 表达能力。
