糖尿病对大鼠脑内葡萄糖转运蛋白表达的影响

高同型半胱氨酸血症对大鼠脑内NMDA受体亚单位蛋白表达的影响

目的 分析高同型半胱氨酸血症对大鼠脑内NMDA受体亚单位蛋白表达的影响。方法 研究時间2015年7月—2016年4月，将36只SD大鼠随机分为模型组（皮下注射用生理盐水配成的蛋氨酸溶液）和对照组（相应体积的生理盐水），检测不同时间点大鼠血浆同型半胱氨酸含量及脑内NMDA受体亚单位（NR1、NR2A、NR2B）的蛋白含量。结果 模型组中第3小组大鼠的Hcy、脑内NMDA受体NR1、NR2A、NR2B分别为（21.46±1.37）、（0.99±0.13）、（0.95±0.18）、（1.47±0.25），均高于第2小组和第1小组（P＜0.05），第1小组大鼠上述指标含量均为最低，分别为（10.14±1.13）、（0.74±0.11）、（0.70±0.23）、（0.68±0.13）。模型组3个小组大鼠的脑内NMDA受体NR1、NR2A、NR2B含量均高于对照组中对应小组大鼠，差异有统计学意义（P＜0.05）。 结论 高同型半胱氨酸血症会导致大鼠脑内NMDA受体亚单位的蛋白表达上升，加重大鼠脑神经损伤。

[Abstract] Objective To investigate the effect of hyperhomocysteinemia on the

expression of NMDA receptor subunit in rat brain. Methods Study time From July

2015 to April 2016，36 SD rats were randomly divided into a model group （the

normal saline solution for subcutaneous injection）and a control group（the

corresponding volume of saline），and the rats were sacrificed at different time points

Ｌ１ＳＨＩＺＨＥＮ　ＭＥＤＩＣＩＮＥ　ＡＮＤ　ＭＡＴＥＲＩＡ　ＭＥＤＩＣＡ　ＲＥＳＥＡＲＣＨ　２０１３　ＶＯＬ．２４　ＮＯ．６　时珍国医国药２０１３年第２４卷第６期　三七总皂苷对脑出血大鼠脑内ＸＩＡＰ蛋白表达的影响　郭华英，蒙丽恒，覃丽燕，夏春波　，蒋常文，刘源劫　（桂林医学院，广西桂林５４１００４）　摘要：目的探讨三七总皂苷对脑出血大鼠脑内ＸＩＡＰ蛋白表达的影响。方法建立大鼠脑出血模型，腹腔注射三七总皂　苷，免疫组织化学法检测ＸＩＡＰ蛋白表达，比较神经行为学评分。结果治疗组在４，７，１４ｄ时的神经行为学评分分别为　０．８５±０．４４，０．５６±０．２２，０．３６±０．５５，明显低于对照组（Ｐ＜０．０５）；治疗组在１，４，７，１４　ｄ时的ＸＩＡＰ阳性细胞数分别为　４８．８７±４．９０，３７．０２±３．３５，３５．４０±２．９８，３４．７９±２．８６，明显高于对照组（Ｐ＜０．０５），ＸＩＡＰ阳性细胞数随三七总皂苷剂量　增大而增多（Ｐ＜０．０５）。结论三七总皂苷可通过上调ＸＩＡＰ表达而促进大鼠脑出血后神经功能恢复。　关键词：三七总皂苷；脑出血；ｘ一连锁凋亡抑制蛋白　ＤＯＩ标识：ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００８－０８０５．２０１３．Ｏ６．０４６　中图分类号：Ｒ２８５．５　文献标识码：Ａ　文章编号：１００８－０８０５（２０１３）０６．１３９５－０２　脑出血（ｉｎｔｒａｃｅｒｅｂｒａｌ　ｈｅｍｏｒｒｈａｇｅ，ＩＣＨ）是常见的急危重症疾　病，发病率及死亡率高，致残程度重。探索脑出血的发病机制和　新的治疗方法具有重要现实意义，一直是医学研究热点之　一　’　。研究表明，细胞凋亡机制参与了脑出血的继发性损伤，　阐明这一机制有可能为减轻脑出血引起的继发性损伤提供新的　思路　。ｘ一连锁凋亡抑制蛋白（Ｘ—ｌｉｎｋｅｄ　ｉｎｈｉｂｏｔｏｒ　ｏｆ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｐｒｏｔｅｉｎ，ＸＩＡＰ）是ＩＡＰ家族中最有效力的ｃａｓｐａｓｅ抑制物，通过结　合与抑制ｃａｓｐａｓｅ９、ｃａｓｐａｓｅ３、ｃａｓｐａｓｅ７、及减少细胞色素养Ｃ的释　放而阻止细胞凋亡　ｊ。三七为五加科多年生草本植物三七Ｐａ—　ｎａｘ　ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ（Ｂｕｒｋ）Ｆ．Ｈ．Ｃｈｅｎ的根，主产于云南、广西等地，　其性味甘、微苦、温，归肝、胃经，具有化瘀止血、活血定痛之效，主　要活性成分为三七总皂苷（Ｐａｎａｘ　ｎｏｔｏｇｉｎｏｓｉｄｅ，ＰＮＳ）　Ｊ。三七总　皂苷对脑缺血及脑出血后遗症有确切疗效，可减轻脑出血后继发　性神经元损害　Ｊ，但其与ＸＩＡＰ的关系尚未见文献报道。本课题　通过建立大鼠脑出血模型，免疫组织化学法检测脑组织ＸＩＡＰ蛋　白表达，探讨三七总皂苷在脑出血中的作用机制，为中药三七的　深入研究和进一步开发利用提供实验依据。　１材料　三七总皂苷注射液（４００　ｍｇ／支，昆明制药集团，批号：　２００７１１２５），ＸＩＡＰ　ｒａｂｂｉｔ　ｐｏｌｙｃｌｏｎａｌ　ＩｇＧ、ＡＰＥＳ、柠檬酸盐缓冲液、兔　ｓＰ检测试剂盒（ＳＰ一９００１）及ＤＡＢ显色试剂盒（ＺＬＩ一９０３２）均购　自北京中衫金桥生物技术有限公司，Ｔｒｉｔｏｎ　Ｘ一１００购自Ｇｅｎｅｒａｙ　公司。　ＳＤ大鼠８０只，雌雄不分，体质量２００～２５０　ｇ，由桂林医学院　实验动物中心提供，合格证号：ＳＣＸＫ桂２００７—０００１。　２方法　２．１大鼠脑出血模型的制作及评价大鼠腹腔注射１０％水合氯　醛（４　ｍｌ・　）麻醉，备皮后固定于脑立体定向仪。根据大鼠　脑立体定位图谱，头部正中切开约１０　ｍｍ的纵形切口，切开骨　收稿日期：２０１２—１０－２５；　修订日期：２０１３－０３－１８　基金项目：广西桂林市科学研究与技术开发计划课题（Ｎｏ．２０１１０１１９—３）；　桂林医学院青年教师科研启动基金项目（Ｎｏ．ＫＹ２００８００１）；　桂林医学院“项目驱动教学法”专项课题（Ｎｏ．ＪＧ２０１１０７０）；　桂林医学院国家级大学生创新创业训练计划项目（Ｎｏ．　２０１２１０６０１００２）；　桂林医学院自治区级大学生创新创业训练计划项目（Ｎｏ．５８２）　作者简介：郭华英（１９８８一），女（汉族），江西吉安人，现为桂林医学院２００９　级临床医学本科学生，学士学位，主要从事神经生物学研究工作．　通讯作者简介：夏春波（１９７７－），男（汉族），广西容县人，现任桂林医学　院副教授，硕士研究生导师，硕士学位，主要从事神经生物学研究工作．　膜，暴露前囟和冠状缝。在冠状缝前０．２　ｍｍ，中线旁开３　ｍｍ处　用直径ｌ　ｍｍ的牙科钻钻开颅骨。取大鼠尾部上１／３段，刮除角　质磷片后消毒。用微量注射仪抽取大鼠尾动脉血５０　ｌ，迅速将　微量注射仪装入立体定位仪上，并沿所钻小孔进针５．５　ｍｍ（于大　鼠尾壳核部位），自体血按２０　ｌ・ｍｉｎ　的速度缓慢匀速注入尾　壳核。动物苏醒后立即依照Ｂｅｄｅ￣ｏｎ法进行神经行为学评　分　Ｊ：０分，无任何症状；１分，提尾时对侧肢体屈曲内收；２分，　对抗侧方推力降低，并有１分症状；３分，爬行时向对侧划圈，并　有２分症状；４分，意识丧失，不能行走。评分≥１分为造模成功，　剔除不合格者，重新补充人组。所有大鼠分别在２，６　ｈ和１，４，７，　１４　ｄ共６个时间点进行神经行为学评分１次。　２．２动物分组及给药方案６０只ｓＤ大鼠随机分为对照组和　ＰＮＳ治疗组，每组３０只，组内按照时间点分组，每个时间点５只。　对照组大鼠在造模成功后正常饲养，自由饮水。ＰＮＳ治疗组大鼠　造模成功后，２，６　ｈ组立即腹腔注射ＰＮＳ（５　ｍｇ・ｋｇ　）１次，１，４，　７，１４　ｄ组则于造模后上、下午各治疗１次。另外２０只脑出血大　鼠用于量效关系实验，ＰＮＳ浓度分别为０，５，１０，２０　ｍｇ・ｋｇ一，每　个浓度设５只大鼠，作用时间３　ｄ。　２．３脑组织标本处理ＳＤ大鼠固定并麻醉后进行心脏灌注。剪　开胸廓暴露心脏，经心尖部进针插入主动脉，同时剪开右心耳。　先灌注生理盐水，待右心耳流出液变清亮时灌注４％多聚甲醛。　灌注一定时间后发现鼠尾及四肢抽搐，身体变僵硬即结束灌注，　去除颅骨取脑，３０％蔗糖溶液浸泡，待组织沉底后，恒冷切片机行　连续冠状切片，片厚３０　ｍ，裱于明胶处理后的载玻片上，一８０℃　保存备用。　２．４免疫组织化学（ＳＰ）法检测ＸＩＡＰ蛋白表达切片用５０　ｌ　３％Ｈ　０：处理１０　ｍｉｎ以阻断内源性过氧化物酶活性，ＰＢＳ冲洗，　加１％Ｔｒｉｔｏｎ　Ｘ一１００处理１０　ｍｉｎ，ＰＢＳ冲洗，加入正常山羊血清工　作液封闭２０　ｍｉｎ，倾去血清，滴加ＸＩＡＰ一抗（１：１００）５０　Ｉｘ１，４℃　过夜，ＰＢＳ冲洗，加入生物素标记二抗工作液５０　ｔｘｌ，３７℃孵育４０　ｍｉｎ，ＰＢＳ冲洗，加辣根酶标记链霉卵白素工作液５０　Ｉ，３７℃孵育　４０　ｍｉｎ，ＰＢＳ冲洗，加新鲜配置的ＤＡＢ工作液１００　ｌ显色，以镜　下观察为准，自来水冲洗２　ｍｉｎ终止反应，依次进行复染，分色，　返蓝，脱水，透明，中性树胶封片，镜下观察和照相。每批标本均　用０．Ｏ１　ｍｏｌ・Ｌ　ＰＢＳ代替一抗为阴性对照。以胞质出现棕黄色　颗粒者为阳性细胞，在每张切片的阳性细胞区域取ｌ０个不同的　高倍镜视野，计算每个视野的阳性细胞数目。　２．５统计学分析所有数据均以　±Ｓ表示，采用ＳＰＳＳ１５．０统计　软件处理，数据比较采用方差分析，Ｐ＜０．０５为差异有统计学意　义。　・１３９５・

・８４・　Ｙｏｕｊｉａｎｇ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ　２００７。Ｖｏ１．３５　Ｎｏ．１　

葡萄糖转运蛋白与糖尿病慢性并发症的关系及研究进展　

尚海峰（综述），刘学政（审校）　

（辽宁医学院解剖学教研室，辽宁锦州　１２１００１）　

【关键词】糖尿病；葡萄糖转运蛋白；并发症　

文章编号：１００３—１３８３（２００８）０１—００８４一Ｏ３　中图分类号：Ｒ　５８７．２　文献标识码：Ａ　

随着糖尿病患者的日趋增多，其慢性并发症已严重危害　

病人的健康。研究证实，糖尿病患者常见的慢性并发症，如　

视网膜病变、神经病变、心肌病变等都与这些组织的供氧不　

足有一定的关系＿＿１］。组织氧供是由血液中的红细胞来完成　

的，糖尿病患者的红细胞由于糖代谢的异常，如山梨醇通路　

的活化和细胞内糖化血红蛋白的增多，而影响红细胞的形态　

以及胞内血红蛋白与氧的亲和力，从而引起红细胞供氧功能　

的改变，造成组织缺氧口］；此外，细胞的糖代谢取决于细胞对　

葡萄糖的摄取，葡萄糖无法自由通过细胞膜脂质双层结构进　

入细胞，细胞对葡萄糖的摄入需要借助细胞膜上的葡萄糖转　

运蛋白（ｇｌｕｃｏｓｅ　ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ，ＧＬＵＴ）来完成口］。由此看出　

ＧＬＵＴ与糖尿病的慢性并发症关系密切，ＧＬＵＴ的功能状态　

及其调控机制也越来越得到重视。　

葡萄糖转运蛋白的概述　

１．葡萄糖转运蛋白的分类及其结构　

葡萄糖转运蛋白是一类镶嵌在细胞膜上转运葡萄糖的　

载体蛋白质，它广泛分布于体内各种组织。根据转运葡萄糖　

的方式分为两类：一类是钠依赖的葡萄糖转运蛋白（ＳＧＬＴ），　

以主动方式逆浓度梯度转运葡萄糖；另一类为易化扩散的葡　

萄糖转运蛋白（ＧＬＵＴ），以易化扩散的方式顺浓度梯度转运　

葡萄糖，其转运过程不消耗能量。到目前为止，ＧＬＵＴ家族　

共确认有１３个成员，包括ＧＬＵＴ１～１２和ＨＭＩＴ，其中　

ＧＬＵＴ６是假基因产物［４］。　

ＧＬＵＴ结构具有以下共同特点：①具有１２个跨膜螺旋　

环；②螺旋环上存在７个保守氨基酸残基；③胞膜内面存在　

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健脾活血方对2型糖尿病胰岛素抵抗大鼠骨骼肌葡萄糖转运蛋白-4 基因表达的影响

（作者:___________单位: ___________邮编: ___________）

【摘要】 目的探讨健脾活血方对2型糖尿病胰岛素抵抗(Insulin Resistance,IR)大鼠葡萄糖转运蛋白-4(Glucose

Transporter-4,GLUT-4)mRNA表达的的改善作用及机理。方法取Wistar大鼠60只，采用链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)加高脂饮食造成2型糖尿病IR大鼠模型，设空白组、模型组、健脾活血方低剂量组、健脾活血方高剂量组和罗格列酮组，以RT-PCR法检测大鼠骨骼肌GLUT-4 mRNA的表达。结果健脾活血方高剂量组大鼠骨骼肌GLUT-4 mRNA的表达与罗格列酮组相当，与模型组比较有显著性差异(P0.01)。结论健脾活血方能够上调大鼠骨骼肌GLUT-4 mRNA的表达，改善IR。

【关键词】 健脾活血方; 2型糖尿病大鼠; 葡萄糖转运蛋白

Abstract：ObjectiveTo explore the effect and mechanisms of DOC格式论文，方便您的复制修改删减

Trengthening Spleen and Activating Blood Prescription on

expressions of GLUT-4 gene in the skeletal muscle tissue of Type 2

Diabetes Mellitus rats.Methods60 Wistar rats were randomized into

five groups:normal control group,model group, Strengthening

Spleen and Activating Blood Prescription low-dose group and