探讨结核感染T细胞斑点试验在结核病中的诊断价值

结核感染T细胞检测在结核病诊断中的应用价值

目的 探讨结核感染T细胞检测，体外释放酶联免疫法Diagnostic Kit for T

cell infected with Mycobacterium tuberculosis在结核病诊断中的应用价值。方法

选取我院2014年7月～2015年1月78例患者作为研究对象，采用体外释放酶联免疫法原理衡量特异性抗原介导的细胞免疫反应强度。通过结核分枝杆菌特异性重组抗原刺激结核分枝杆菌感染者特异性T淋巴细胞并使其增殖，释放IFN-γ。微孔条上预包被德IFN-γ抗体可与样品中的IFN-γ结合，再加入酶标试剂进行二次温育。当样品中存在IFN-γ时，将形成”包被抗体-IFN-γ-酶标抗体”复合物、复合物上连接的HRP催化显色剂反应，生成蓝色产物，终止反应成变成黄色。若样品中无INF-γ时，不显色。通过酶标仪检测吸光度（A值），用校准品浓度值与A值拟合乘幂曲线，计算样品中IFN-γ含量，从而判断是否感染结核分枝杆菌。结果 本组78例患者中有36例患者的IFN-γ为阳性，占总数的46.2%。因为，一个合理正规的治疗方案必然有明确的诊断、合理科学的用药剂量、足够的疗程，还要规律、早期用药，才能治愈结核病。其中早期明确诊断则是关键。结论 要想彻底治疗结核必须遵循以上五个原则、早期、联合、适量、规律、全程、才能确保查出必治、治必彻底。因此，提高结核病的早期诊断显得更为重要。

标签：结核病早期诊断；结核感染T细胞；体外释放酶联免疫法

结核病是结核分枝杆菌感染引起的一种传染性疾病，结核分枝杆菌属于放线菌目分枝杆菌属，主要通过空气传播，可侵犯全身各器官，但以肺结核为多见，结核病患常见发热、盗汗、疲倦乏力、精神萎靡、体重减轻、食欲不振以及咳嗽、咳痰咯血等临床症状。结核感染T细胞检测培养管含致病性结核分枝杆菌特有而卡介苗，其他分枝杆菌没有的缺失区域1（RD1）中两种基因的重组抗原，经体外全血培养，刺激全血标本中结核抗原特异性T细胞产生免疫应答。用于定量检测人全血标本经结核分枝杆菌特异性抗原体外刺激后产生的γ-干扰素（IFN-γ）的浓度，从而判断其是否具有针对结核分枝杆菌特异性的T细胞免疫反应，即结核感染T细胞检测。该方法可用于结核感染（潜伏感染或活动感染）的辅助诊断，其结果虽不能代替痰涂片、培养或影像学等其他较为经典的结核分枝杆菌感染的诊断方法，但可明显提高结核病的早期诊断。

结核感染T细胞斑点试验在肺结核中的诊断价值

抗结核治疗的基本原则是早期、联合、适量、规律、全程，如何早期诊断结核病是结核病防控工作中的一个难题，我国结核感染率和卡介苗接种率均高，结核菌素试验对于活动性结核的诊断价值低，同时不能排除非结核分枝杆菌感染。近年来，有一种用于诊断结核分枝杆菌感染的新方法，即结核感染T细胞斑点试验，用于诊断潜伏性结核分枝杆菌感染及结核病。本研究采用结核感染T细胞斑点试验和结核菌素试验两种检测方法在疑似肺结核病人中进行对比研究，探讨两者在结核诊断中的敏感性。现将结果报告如下。

1.资料与方法

1.1一般资料：选择2014年9月-2016年12月在我科住院胸片或者胸部CT疑似肺结核的患者53例，其中男45例，女8例，年龄19-86〔平均（46.94±18.77）〕岁，在其他详细检查基础上，同时作结核感染T细胞斑点试验、结核菌素试验、结核抗体、痰找抗酸杆菌检测，根据临床表现、影像学检查、病原学检查、组织病理学以及抗结核试验治疗追踪随访。最后确诊14例，排除肺结核4例，临床诊断35例。临床诊断+确诊肺结核患者共49例，其中男42例，女7例，年龄19-86〔平均（46.53±18.46）〕岁。

1.2方法：结核感染T细胞斑点试验检测方法 根据试剂盒说明书步骤进行操作。首先抽取所有患者外周静脉血液5ml，分离出外周血单个核细胞（PBMC）。在已包被抗IFN-γ抗体微量板的4个孔中，分别加入不同的阳性对照物：植物血凝素，阴性对照细胞营养液，A抗原早期分泌性靶抗原6（ESAT-6）以及B抗原滤液培养蛋白10（CRP-10）.然后依次向每孔加入2ⅹ105浓度PBMC，放置在37.0℃条件下CO2培养箱内孵育处理20小时。PBS溶液洗脱处理后再加入碱性磷酸酶标记的抗γ干扰素抗体，在室温条件下孵育处理2小时，PBS溶液洗脱处理后显色，采用PBS溶液终止反应。最后仔细计数斑点数。结果判断：空白对照孔斑点数为0-5个时且（抗原A或抗原B孔的斑点数）-（空白对照孔斑点数）≥6，判断为阳性；空白对照孔斑点数为6-10个时且（抗原A或抗原B孔的斑点数）≥2ⅹ（空白对照孔斑点数），判断为阳性；上述标准不符合且阳性质控对照孔正常时检测结果为 “无反应性”。 结核菌素试验：取0.1ml体积的PPD（含5单位结核菌素）对患者行前臂尺侧皮内试验，24小时、48小时、72小时观察检测结果。结核菌素试验阳性结果为硬结直径≥10mm。

结核感染T细胞斑点试验在疑似结核病患者诊断中的价值研究

摘要】 目的：讨论研究结核感染T细胞斑点实验应用于疑似结核患者诊断中的价值与意义。方法：回顾分析我院接收病诊断的疑似结核病患者100例并根据其检查结果及抗结核试验治疗的随访分为非结核组组与结核组。对所有患者均进行核感染T细胞斑点实验及结核菌素试验。比较不同检测方式得出结果对结合诊断的灵敏性、特异性、假阴性率、假阳性率变化。结果：两组患者行结核感染T细胞斑点实验后结核组结果特异度、敏感度均显著高于TST实验（P＜0.05）。结论：结核感染T细胞斑点实验用于诊断结核病具有良好的应用价值，其灵敏度与特异度更高且不受先前卡介苗接种的影响。该实验具有操作简便的优势，检测结果得出快，能够帮助患者尽早获得诊断结果并制定治疗方案，对促进疾病治疗，改善患者生活质量具有重要意义。

【关键词】结核感染T细胞；结核菌素试验；疑似结核患者；价值与意义

【中图分类号】R52 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2017）27-0230-02

结核病主要是由结核杆菌感染所引起的慢性传染病，从古至今一直对人类的健康造成严重威胁[1]。尽早发现病变，明确诊断并制定针对性的治疗方案是防治结核病情进一步发展的关键。既往临床多通过结核菌素试验（TST）进行结核分歧杆菌感染的初步筛查，但该方法受到接种卡介苗或环境中非结核分歧杆菌感染的影响易出现假阳性结果；也可由于患者自身体质较弱，营养状态不佳或使用免疫抑制剂等情况出现假阴性的结果，该检验方法特异性较低。目前临床对结核患者进行确诊除过患者临床症状及影像学检测结果外，还可应用结核菌涂片或培养结果方式进行确诊。但这种方法阳性率偏低且培养时间较长，因此由于敏感性较低而无法及时发现结核菌感染[2]。选用何种检验方式对结核杆菌感染早期进行确诊是目前临床医学人员关注的热点话题。结核感染T细胞实验主要通过可通过单细胞水平对具有分泌抗体或细胞因子功能的细胞进行检测目前已被广泛应用至对疫苗、癌症、各类感染性疾病的诊断当中。本研究为探讨结核感染T细胞实验对疑似结核患者疾病诊断的临床意义与影响，特选取100例本病患者资料进行回顾性分析。现报道如下。

・１１０・　中华肺部疾病杂志（电Ｙ－Ｍ）２０１５年６月第８卷第３期Ｃｈｉｎ　Ｊ　Ｌｕｎｇ　Ｄｉｓ（Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ　Ｅｄｉｔｉｏｎ），Ｊｕｎｅ　２０１５，Ｖｏｌ　８，Ｎｏ．３　

结核感染Ｔ细胞斑点试验的临床应用价值　

刘　丽刘晓民　

【关键词】结核感染Ｔ细胞斑点试验；结核；敏感性；特异性　

中图法分类号：Ｒ５２　文献标识码：Ａ　

在世界范围内结核病是一种高发病率、高病死率的疾　

病，因此研究出一种新的检查手段已迫在眉睫。结核感染Ｔ　

细胞斑点试验（Ｔ　ｃｅｌｌｓ　ｓｐｏｔ　ｔｅｓｔ　ｏｆ　ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ　ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ，Ｔ—　ＳＰＯＴ．ＴＢ），是利用酶联免疫斑点法检测结核感染者体内的　

特异性Ｔ淋巴细胞来诊断结核的一种新方法，具有较高的敏　感性及特异性，目前已在临床上广泛应用…。　

一、Ｔ—Ｓ０　．ＴＢ方法诊断结核感染的优点　根据２０１３年世界卫生组织发布的（２０１３年全球结核病　报告执行摘要》显示：２０１２年，据估算，全世界共有８６０万人　

罹患结核病，１３０万人死于结核病（其中包括３２万艾滋病毒　

阳性者），因此结核病的诊断与治疗是人类健康问题的焦点。　

传统的结核检查方法有胸部ｘ线或肺纵隔ＣＴ，结核菌素皮　

肤试验（ｔｕｂｅｒｃｕｌｉｎ　ｓｋｉｎ　ｔｅｓｔ，ＴＳＴ）、痰抗酸杆菌涂片。胸部ｘ　

线或肺纵隔ＣＴ实验方法缺乏特异性，且绝大多数患者胸部　ｘ线表现不典型，故只能作为结核病诊断的参考。ＴＳＴ操作　

简单、价格低廉，常用于临床，但易受免疫状况、交叉反应及　接种卡介苗的影响，故敏感性及特异性较低。痰抗酸杆菌涂　

片临床上常用于肺结核的诊断，其受制于痰液中分枝杆菌数　量，故敏感性较低，且无法对肺外结核及不咯痰的肺结核作　

出诊断，也使其应用受到一定的制约　。Ｔ—ＳＰＯＴ．ＴＢ试剂盒　

是由Ｏｘｆｏｒｄ　Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃ公司研制，用酶联免疫斑点技术检测　

对早期分泌抗原靶６ＫＤ（ｅａｄｙ　ｓｅｃｒｅｔｏｒｙ　ａｎｔｉｇｅｎｉｃ　ｔａｒｇｅｔ－６，