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类胡萝卜素的提取动力学研究试验报告.docx应用化学系本科化学实验报告课程名称综合化学实验成绩评定实验项目名称设计实验指导教师实验项目类型综合化学实验实验地点食工楼_楼_室班级一实验者学号实验时间2023年月日上午4月18日下午温度湿度2023年月日上午4月25日下午温度湿度一、实验目的掌握类胡萝卜素的定性（薄层层析法）；定量测定方法（紫外可见分光光度法）；二、实验原理.类胡萝卜素是自然界广泛存在的天然色素，包括一类碳氢化合物及它们的氧化衍生物,它们由个类异戊二烯单位组成。
对天然类胡萝卜素进行分离纯化和结构鉴定是十分重要的基础研究工作之一。
紫外可见吸收光谱主要产生于分子价电子在电子能级间的跃迁，它是研究分子吸收波长范围内的吸收光谱，它不仅在有机化合物的结构鉴定中发挥重要作用，而且依此原理建立的紫外可见分光光度法是应用最广泛的定量分析方法之一。
.实验室常用的薄层色谱，其原理是利用混和物中各组分在不相混溶的两相即流动相（展开剂）和固定相（吸附剂）中吸附和解吸的能力的不同，也可以说在两相中的分配不同，当混合物随流动相（展开剂）流过固定相（吸附剂）时，发生了反复多次的吸附和解吸的过程，从而使混合物分离成两种或多种单一的纯组分。
利用萜类化合物的溶解度差异进行分离，含羟基、氧环则溶于醇，不含羟基、氧环（多烯）则溶于石油醚。
三、试剂及器材.原料，试剂胡萝卜干粉或新鲜胡萝卜；a和B胡萝卜素标准品、（和无水）乙醇、石油醚（沸程CC、CC）、丙酮、乙酸乙酯、苯、甲苯、乙醚、氯仿、正已烷、环己烷、抗坏血酸、盐酸、氢氧化钠、硅胶层析板、氧化铝层析板和纯水。
.仪器数显恒温水浴锅（XX公司）；电子分析天平（北京XX公司）；8000A紫外可见分光光度计（上海XX公司）；旋转蒸发器（上海XX厂）；四、操作步骤.试剂的配制B胡萝卜素标准溶液：准确称B胡萝卜素标准物质于小烧杯中，加入抗坏血酸于小烧杯中，再先加入少量氯仿溶解后，再用石油醚定容至摇匀，即配成浓度为卩胡萝卜素标准溶液的使用溶液，转移至棕色试剂瓶中贮存备用。
实验十胡萝卜素的提取背景知识1.从胡萝卜等蔬菜和水果中提取出的橘黄色物质包括多种结构类似物，统称胡萝卜素。
胡萝卜素的化学分子式中包含多个碳碳双键，根据双键的数目可以将胡萝卜素划分为α、β、γ三类，β—胡萝卜素是其中最主要的组成成分。
2.β-胡萝卜素摄入人体消化器官后，可以转化成维生素A。
它可以治疗和预防某些疾病：如维持眼睛和皮肤的健康，改善夜盲症、皮肤粗糙的状况，有助于身体免受自由基的伤害等。
胡萝卜素还是常用的食品色素，广泛地用作食品、饮料、饲料的添加剂。
最近发现的天然胡萝卜素还有使癌变细胞恢复成正常细胞的作用。
因此胡萝卜素的提取和鉴定引起人们很大的兴趣。
活动目标1．基本目标（1）说出有关胡萝卜素的基础知识，简述提取胡萝卜素的基本原理。
（2）尝试用萃取法提取胡萝卜素，用蒸馏法浓缩胡萝卜素，用纸层析法鉴定胡萝卜素。
2．发展目标（1）在实验探究中体验知识的形成过程。
（2）养成良好的实验习惯和实事求是的科学态度。
（3）体验生物技术在生产、生活中的应用价值。
实验准备1．实验原理（1）胡萝卜素是橘黄色结晶，化学性质比较稳定，不溶于水，微溶于乙醇，易溶于石油醚等有机溶剂。
（2）石油醚沸点高，加热时不易挥发，能充分溶解胡萝卜素，用石油醚萃取胡萝卜素不会发生石油醚与水混合的现象。
（3）萃取的胡萝卜素提取液，可以通过蒸馏法蒸去过多的石油醚而浓缩胡萝卜素。
（4）在石油醚中胡萝卜素等组分的溶解度不同，纸层析法使其在滤纸上分离、展层和显色，通过与胡萝卜素标准样品层析带的颜色、位置、宽度的比较分析，能够鉴定胡萝卜素的存在，并大体估计它的含量。
2．材料、试剂、器具（1）材料：新鲜胡萝卜（2）试剂：胡萝卜标准溶液样品、石油醚（3）器具：（果蔬）打磨机、电热烘箱、萃取回流装置、水蒸气蒸馏浓缩装置、铁架台、酒精灯、研钵、滤纸、毛细玻管、250ml量筒、2000ml烧杯、50ml烧杯、玻璃棒、200ml锥形瓶、漏斗、大培养皿实验过程1．实验步骤实验装置图：2.预测与结果图6-7 提取胡萝卜素的装置图6-2 水蒸气蒸馏装置2. 在石油醚、醋酸乙酯、乙醚、苯和四氯化碳等有机溶剂中，哪种最适合用于提取胡萝卜素？3.在胡萝卜颗粒加热、干燥过程中，应将温度和时间控制在一定的范围内，请说明原因？实验评价（评价量表）拓展延伸1.探究萃取胡萝卜素的最佳条件（最适温度和最佳时间）。
土壤中类胡萝卜素提取及生理作用研究
近年来，随着人们对健康的重视，越来越多的人开始关注到食物中的营养素。
类胡萝卜素作为一种重要的营养素，被人们广泛关注。
而土壤中也被发现存在着大量的类胡萝卜素，这为其提取及在人体中的生理作用研究提供了广阔的空间。
一、土壤中类胡萝卜素的提取方法
1. 化学提取法
类胡萝卜素是一种脂溶性的营养素，在油脂、醇等有机溶剂中易于溶解。
因此，通过化学方法提取类胡萝卜素的效果较好。
具体操作可以采用醇提法、微波法等。
2. 生物提取法
生物提取法是指利用微生物生产能力提取类胡萝卜素的方法。
比如采用葫芦素
合成酶切除酸、醛、酮等物质，从而提取出类胡萝卜。
以上两种提取方式各有优劣，结合实际情况选择不同的提取方式可以更好地提
高提取效率。
二、土壤中类胡萝卜素的生理作用研究
1. 抗氧化作用
类胡萝卜素具有良好的抗氧化作用，可以中和自由基，减少氧化反应，保护人
体细胞免受氧化损伤。
2. 免疫增强作用
类胡萝卜素还具有增强人体免疫力的作用。
它们可以通过增强机体的吞噬细胞
功能、促进细胞因子合成等途径，提高身体抵抗力，预防疾病的发生。
3. 保护视力
类胡萝卜素中的β-胡萝卜素、α-胡萝卜素等具有保护视力的作用。
实验证明，这些物质可以减少白内障的发生率，并对预防眼疾有一定的功效。
总的来说，土壤中的类胡萝卜素具有非常优秀的营养价值和生物学活性，通过提取并应用于人体当中，可以为人们的健康保驾护航。
但需要注意的是，提取过程中需要注意提取方式对土壤的影响，以确保土壤资源的可持续利用。
应用化学系本科化学实验报告课程名称综合化学实验成绩评定实验项目名称设计实验指导教师实验项目类型综合化学实验实验地点食工楼楼室班级实验者学号实验时间2012年4月18日上午～4月18日下午温度℃湿度2012年4月25日上午～4月25日下午温度℃湿度一、实验目的.掌握类胡萝卜素的定性(薄层层析法)；.定量测定方法(紫外可见分光光度法)；二、实验原理. 类胡萝卜素()是自然界广泛存在的天然色素,包括一类碳氢化合物()及它们的氧化衍生物()，它们由个类异戊二烯单位组成。
对天然类胡萝卜素进行分离纯化和结构鉴定是十分重要的基础研究工作之一。
紫外可见吸收光谱()主要产生于分子价电子在电子能级间的跃迁，它是研究分子吸收波长范围内的吸收光谱，它不仅在有机化合物的结构鉴定中发挥重要作用，而且依此原理建立的紫外可见分光光度法是应用最广泛的定量分析方法之一。
. 实验室常用的薄层色谱，其原理是利用混和物中各组分在不相混溶的两相即流动相(展开剂)和固定相(吸附剂)中吸附和解吸的能力的不同，也可以说在两相中的分配不同，当混合物随流动相(展开剂)流过固定相(吸附剂)时，发生了反复多次的吸附和解吸的过程，从而使混合物分离成两种或多种单一的纯组分。
利用萜类化合物的溶解度差异进行分离，含羟基、氧环则溶于醇，不含羟基、氧环(多烯)则溶于石油醚。
三、试剂及器材. 原料，试剂胡萝卜干粉或新鲜胡萝卜；α和β胡萝卜素标准品、(和无水)乙醇、石油醚(沸程℃℃、℃℃)、丙酮、乙酸乙酯、苯、甲苯、乙醚、氯仿、正已烷、环己烷、抗坏血酸、、盐酸、氢氧化钠、硅胶层析板、氧化铝层析板和纯水。
. 仪器数显恒温水浴锅(国华电器有限公司)；电子分析天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)；8000A紫外可见分光光度计(上海元析仪器有限公司)；旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂)；四、操作步骤. 试剂的配制β胡萝卜素标准溶液：准确称β胡萝卜素标准物质于小烧杯中，加入抗坏血酸于小烧杯中，再先加入少量氯仿溶解后，再用石油醚定容至摇匀，即配成浓度为μ β胡萝卜素标准溶液的使用溶液，转移至棕色试剂瓶中贮存备用。
实验五类胡萝卜素的提取和薄层色谱实验五：类胡萝卜素的提取和薄层色谱一、实验目的1.学习和掌握类胡萝卜素的基本性质和提取方法。
2.了解和掌握薄层色谱的基本原理和操作方法。
3.通过实验，亲手操作提取类胡萝卜素，并利用薄层色谱对其进行分析。
二、实验原理类胡萝卜素是一类重要的天然色素，呈红色或黄色，主要存在于植物中，如胡萝卜、番茄、菠菜等。
其结构包含多个共轭双键，具有较高的稳定性，因此适用于提取和分析。
类胡萝卜素的提取主要采用有机溶剂萃取法。
通过使用具有极性的有机溶剂，如乙醇、丙酮等，将类胡萝卜素从植物材料中溶解出来，再利用类胡萝卜素在极性溶剂中的溶解度随着温度的升高而增大的性质，加热以提高其溶解度，从而得到类胡萝卜素。
薄层色谱是一种常用的分离和分析方法，其基本原理是利用不同物质在固定相和移动相之间的分配比的不同，从而实现物质的分离。
通过将待测样品点在薄层板上，固定相为硅胶或纤维素等，移动相为有机溶剂或混合溶剂等，当移动相在固定相上移动时，不同物质会以不同的速度移动，从而实现分离。
三、实验步骤1.准备试剂和器材：乙醇、丙酮、石油醚、硅胶G、玻璃板、点样器、展开剂、显色剂等。
2.样品处理：选取新鲜的胡萝卜或菠菜，洗净后烘干，磨成粉末。
称取适量粉末，加入适量的乙醇和丙酮混合液（体积比1:1），搅拌均匀后，静置10分钟。
3.装柱：将硅胶G研碎成粉末，加入适量石油醚溶解，制成硅胶G薄层。
将硅胶G薄层倒入玻璃板中，用玻璃棒轻轻搅拌，使硅胶G均匀分布在玻璃板上。
4.点样：用点样器取少量待测样品，轻轻点在薄层板上，避免样品重叠。
5.展开：将薄层板置于展开剂中（通常为石油醚和乙酸乙酯的混合液），展开剂会向上移动，带动样品向上移动。
当展开剂移动至薄层板末端时，取出薄层板。
6.显色：将展开后的薄层板置于浓氨水蒸气中熏蒸数分钟，取出后用乙醇-乙酸乙酯溶液进行喷雾显色。
7.观察和记录：观察显色后的薄层板上各色带的颜色和位置，根据各色带的Rf值（比移值）进行定性和定量分析。
土鸡蛋中类胡萝卜素的提取、分离鉴定及其稳定性研究的开题报告一、研究背景与意义类胡萝卜素是一类具有生理活性的脂溶性营养素，存在于许多植物和动物组织中。
其中，β-胡萝卜素、α-胡萝卜素、角鲨烯等是较为常见的类胡萝卜素成分。
土鸡蛋作为一种重要的畜产品，其蛋黄中含有丰富的营养成分，其中也包括类胡萝卜素。
然而，由于土鸡蛋中类胡萝卜素含量较低且不稳定，在提取、分离鉴定和保持其稳定性方面仍然存在许多问题，因此有必要对土鸡蛋中类胡萝卜素进行深入的研究。
本研究旨在通过提取、分离鉴定土鸡蛋中的类胡萝卜素，并对其稳定性进行研究，为开发土鸡蛋中类胡萝卜素产品提供理论基础和实际应用价值。
二、研究内容与方法1. 提取土鸡蛋中的类胡萝卜素，并优化提取工艺条件。
2. 利用高效液相色谱和质谱等分析技术，对提取得到的样品进行分离鉴定。
3. 研究土鸡蛋中类胡萝卜素的稳定性，并探索保持其稳定性的方法。
4. 对土鸡蛋中类胡萝卜素的应用前景进行分析和展望。
本研究采用官方文献和已有研究成果的基础上，对土鸡蛋中类胡萝卜素的提取、分离鉴定和稳定性进行研究。
具体方法如下：1. 土鸡蛋中类胡萝卜素的提取将土鸡蛋分别分离出蛋清和蛋黄，将蛋黄中的类胡萝卜素提取出来。
提取方法采用有机溶剂法和超声波法相结合，优化提取条件，包括提取时间、提取温度、溶剂种类和比例等因素。
2. 土鸡蛋中类胡萝卜素的分离鉴定采用高效液相色谱和质谱分析技术对提取得到的类胡萝卜素样品进行分离鉴定，确定其化学组成和含量。
3. 类胡萝卜素的稳定性研究对土鸡蛋中类胡萝卜素的稳定性进行研究，包括不同条件下的保藏、加热和光照等处理，探索稳定性影响因素和保持其稳定性的方法。
4. 应用前景分析和展望对土鸡蛋中类胡萝卜素的潜在应用价值进行分析和展望，包括作为营养保健品、食品添加剂和医用药物等方面的应用。
三、预期成果通过本研究，预期获得以下成果：1. 土鸡蛋中类胡萝卜素的提取工艺条件优化，提高类胡萝卜素的提取率。
柑橘中类胡萝卜素的提取、分离、鉴定及其稳定性研究的开题报告一、研究背景及意义类胡萝卜素是一类重要的植物营养素，被广泛应用于食品、医药、化妆品等领域。
而柑橘中含有丰富的类胡萝卜素，是重要的类胡萝卜素来源之一。
近年来，随着人们对健康食品的需求不断增加，柑橘类胡萝卜素的相关研究也逐渐得到关注。
本课题旨在对柑橘中类胡萝卜素的提取、分离、鉴定及其稳定性进行研究，为发掘柑橘中类胡萝卜素的潜在价值提供理论基础和实验依据。
二、研究内容及方法1. 柑橘中类胡萝卜素的提取和分离。
采用超声波辅助提取的方法，结合分离技术，从柑橘中提取和分离出类胡萝卜素。
2. 类胡萝卜素的鉴定。
利用高效液相色谱-质谱联用技术（HPLC-MS）对提取的类胡萝卜素进行分析和鉴定。
3. 类胡萝卜素的稳定性研究。
考察不同因素对类胡萝卜素稳定性的影响，探究其稳定性机理，并开展优化研究。
三、研究成果与预期目标1. 先进技术的应用：通过超声波辅助提取和HPLC-MS技术的应用，提高类胡萝卜素的提取和鉴定效率，建立起可重复性较好的实验流程。
2. 类胡萝卜素的提取：成功提取出柑橘中的类胡萝卜素，提供了开发柑橘类胡萝卜素制剂的基础。
3. 类胡萝卜素的稳定性研究：探究类胡萝卜素稳定性机理，在此基础上，开展稳定性的优化研究，提高类胡萝卜素的保存和应用效果。
4. 预期目标：全面分析柑橘中类胡萝卜素的成分及其稳定性，为柑橘类胡萝卜素在食品、医药、化妆品等领域的应用提供科学依据。
四、研究意义柑橘类胡萝卜素具有广泛的应用前景，但相关研究尚未充分展开。
本课题旨在通过对柑橘类胡萝卜素的研究，为其应用开发提供科学依据和技术支持，同时也有助于推动柑橘资源的综合利用，促进柑橘产业的可持续发展。
一、实验目的1. 学习从胡萝卜中提取胡萝卜素的原理和方法。
2. 掌握使用色谱柱和纸色谱的实验操作。
3. 了解胡萝卜素的性质和应用。
二、实验原理胡萝卜中含有丰富的天然色素，其中胡萝卜素是橘黄色结晶，化学性质比较稳定，不溶于水，微溶于乙醇，易溶于石油醚等有机溶剂。
胡萝卜素具有多种异构体，其中β-胡萝卜素在胡萝卜素中分布最广，含量最多。
胡萝卜素的提取方法主要有溶剂浸提法和柱色谱法。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜胡萝卜、石油醚、蒸馏水、无水硫酸钠、硅胶、滤纸、层析缸、烧杯、玻璃棒、烘箱、电子天平、色谱柱、滴管、试管等。
2. 实验仪器：烘箱、电子天平、色谱柱、滴管、试管、烧杯、玻璃棒、层析缸、滤纸等。
四、实验步骤1. 胡萝卜预处理：选取500g新鲜胡萝卜，用清水洗净，沥干、切碎，然后在40℃的烘箱中烘干，时间约需2h。
将干燥后的胡萝卜进一步粉碎过筛。
2. 溶剂浸提：将样品放入500mL圆底烧瓶中，加入200mL石油醚混匀，按教科书中图6-7所示安装萃取回流装置，萃取30min，然后过滤萃取液，除去固体物质。
3. 萃取液浓缩：按教科书中图6-2所示安装蒸馏装置，对萃取的样品进行浓缩。
4. 样品鉴定：收集接受器中的样品，观察样品的颜色和气味。
通过纸层析进行鉴定。
层析时注意选择干净的滤纸，为了防止操作时对滤纸的污染，应尽量避免用手直接接触滤纸，可以带手套进行操作。
点样时应注意点样斑点不能太大（直径应小于0.5cm），如果用吹风机吹干，温度不宜过高，否则斑点会变黄。
将点好样的滤纸卷成筒状，卷纸时注意滤纸的两边不能相互接触，以免因毛细管现象导致溶剂沿滤纸两边的移动加快，溶剂前沿不齐，影响结果。
五、实验结果与分析1. 萃取液颜色：萃取液呈橙黄色，说明胡萝卜素已从胡萝卜中提取出来。
2. 纸层析结果：在纸层析图谱上，胡萝卜素呈现出明显的橙黄色斑点，与标准样品的Rf值一致，证明提取的胡萝卜素纯度较高。
3. 萃取效率：通过实验可知，使用石油醚作为萃取剂，萃取效率较高，能够有效提取胡萝卜素。
胡萝卜素的提取实验报告胡萝卜素的提取实验报告背景介绍：胡萝卜素是一种重要的营养成分，具有丰富的抗氧化性质和对人体健康的多种益处。
为了充分利用胡萝卜素的营养价值，本实验旨在探索一种高效的提取胡萝卜素的方法。
实验材料：1. 新鲜胡萝卜2. 无水乙醇3. 水4. 氯仿5. 石油醚6. 丙酮7. 玻璃棒8. 漏斗9. 蒸馏瓶10. 离心机实验步骤：1. 准备工作：将新鲜胡萝卜洗净，去皮，切成细丁状。
2. 提取胡萝卜素：将胡萝卜丁放入蒸馏瓶中，加入适量的无水乙醇和水，使胡萝卜丁完全浸泡。
用玻璃棒搅拌均匀，封好瓶口，放置于室温下静置24小时。
3. 过滤提取液：将提取液倒入漏斗中，用滤纸覆盖漏斗，过滤掉胡萝卜渣。
收集过滤液。
4. 萃取胡萝卜素：将过滤液倒入离心管中，加入等体积的氯仿，并摇匀。
离心管放入离心机中，离心10分钟。
5. 分离上层液和下层液：离心后，离心管中的液体分为两层，上层为氯仿层，下层为水层。
将上层液转移到干净的离心管中。
6. 蒸发溶剂：将氯仿层液倒入蒸发皿中，用低温加热蒸发溶剂，直至残留物完全干燥。
7. 溶解干燥物：将干燥物溶解于适量的丙酮中，得到胡萝卜素提取物。
实验结果：经过以上步骤，我们成功地提取到了胡萝卜素。
通过目测和比色法，我们发现提取物呈现橙黄色，与胡萝卜素的特征颜色一致。
这表明我们的提取方法是有效的。
实验讨论：1. 提取液的选择：我们选择了无水乙醇和水作为提取液，这是因为胡萝卜素是脂溶性物质，而无水乙醇能够有效地溶解脂溶性物质。
同时，加入适量的水可以帮助提高胡萝卜素的溶解度。
2. 萃取剂的选择：我们选择了氯仿作为萃取剂，因为氯仿是一种常用的有机溶剂，对胡萝卜素有良好的溶解力。
同时，氯仿与水不相溶，可以方便地与水层分离。
3. 蒸发溶剂的选择：我们选择了氯仿作为蒸发溶剂，因为氯仿具有较低的沸点和较好的挥发性，可以迅速蒸发，留下胡萝卜素。
4. 提取物的保存：胡萝卜素是一种易氧化的物质，容易受到光、热和氧气的影响而降解。
第1篇一、实验目的1. 了解胡萝卜素的提取原理和方法。
2. 掌握胡萝卜素的提取过程和操作技能。
3. 分析提取过程中可能影响胡萝卜素提取的因素。
二、实验原理胡萝卜素是一种脂溶性色素，广泛存在于胡萝卜、辣椒、玉米等植物中。
本实验采用溶剂萃取法，利用胡萝卜素在有机溶剂中的溶解度高于在水中的溶解度，通过萃取、浓缩、结晶等步骤提取胡萝卜素。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜胡萝卜、无水乙醇、丙酮、蒸馏水、活性炭、滤纸、漏斗、烧杯、酒精灯、加热器、显微镜等。
2. 实验仪器：天平、剪刀、研钵、漏斗、蒸发皿、蒸馏装置、温度计等。
四、实验步骤1. 胡萝卜处理：将新鲜胡萝卜洗净，去皮，切成小块，放入研钵中，加入适量的蒸馏水，用研杵研磨成浆状。
2. 萃取：将研磨好的胡萝卜浆倒入烧杯中，加入无水乙醇，充分搅拌，使胡萝卜素充分溶解。
3. 过滤：将混合液通过漏斗和滤纸过滤，收集滤液。
4. 结晶：将滤液加热至50-60℃，加入适量的活性炭，搅拌30分钟，使色素充分吸附。
5. 沉淀：静置过夜，使活性炭与胡萝卜素沉淀分离。
6. 收集胡萝卜素：用滤纸过滤沉淀，收集胡萝卜素。
7. 干燥：将收集到的胡萝卜素放入蒸发皿中，用酒精灯加热，使溶剂蒸发，得到胡萝卜素晶体。
8. 纯化：将胡萝卜素晶体用无水乙醇洗涤，去除杂质，干燥后称重。
五、实验结果与分析1. 实验结果：通过上述步骤，成功提取出胡萝卜素晶体，颜色为橙色。
2. 分析：（1）胡萝卜素在无水乙醇中的溶解度较高，有利于胡萝卜素的提取。
（2）活性炭对胡萝卜素具有良好的吸附作用，有利于提高胡萝卜素的纯度。
（3）加热过程中，溶剂蒸发速度过快可能导致胡萝卜素损失，因此需控制加热温度和时间。
（4）在提取过程中，注意避免氧化，影响胡萝卜素的稳定性。
六、实验总结1. 本实验成功提取出胡萝卜素，掌握了胡萝卜素的提取原理和方法。
2. 通过实验，了解了胡萝卜素在有机溶剂中的溶解度特性，为胡萝卜素提取提供了理论依据。
应用化学系本科化学实验报告
课程名称综合化学实验成绩评定
实验项目名称设计实验指导教师
实验项目类型综合化学实验实验地点食工楼6楼633室
班级实验者学号
实验时间2012年4月18日上午～4月18日下午温度13~26 ℃湿度65~80 %
2012年4月25日上午～4月25日下午温度16~23 ℃湿度65~80 %
一、实验目的
1.掌握类胡萝卜素的定性(薄层层析法)；
2.定量测定方法(紫外可见分光光度法)；
二、实验原理
1. 类胡萝卜素(carotenoids)是自然界广泛存在的天然色素,包括一类碳氢化合物(Carotenes)及它们的氧化衍生物(Xanthophylls)，它们由8个类异戊二烯单位组成。
对天然类胡萝卜素进行分离纯化和结构鉴定是十分重要的基础研究工作之一。
紫外可见吸收光谱(Uv-Vis)主要产生于分子价电子在电子能级间的跃迁，它是研究分子吸收190~750 nm波长范围内的吸收光谱，它不仅在有机化合物的结构鉴定中发挥重要作用，而且依此原理建立的紫外可见分光光度法是应用最广泛的定量分析方法之一。
2. 实验室常用的薄层色谱，其原理是利用混和物中各组分在不相混溶的两相即流动相(展开剂)和固定相(吸附剂)中吸附和解吸的能力的不同，也可以说在两相中的分配不同，当混合物随流动相(展开剂)流过固定相(吸附剂)时，发生了
反复多次的吸附和解吸的过程，从而使混合物分离成两种或多种单一的纯组分。
利用萜类化合物的溶解度差异进行分离，含羟基、氧环则溶于醇，不含羟基、氧环(多烯)则溶于石油醚。
三、试剂及器材
1. 原料，试剂
胡萝卜干粉或新鲜胡萝卜；α-和β-胡萝卜素标准品、(95%和无水)乙醇、石油醚(沸程30℃~60℃、60℃~90℃)、丙酮、乙酸乙酯、苯、甲苯、乙醚、氯仿、正已烷、环己烷、抗坏血酸、BHT、盐酸、氢氧化钠、硅胶层析板、氧化铝层析板和纯水。
2. 仪器
HH-4数显恒温水浴锅(国华电器有限公司)；
BS224S电子分析天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)；
UV8000A紫外可见分光光度计(上海元析仪器有限公司)；
RE52CS旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂)；
四、操作步骤
1. 1试剂的配制
β-胡萝卜素标准溶液：准确称β-胡萝卜素标准物质25.0 mg于小烧杯中，加入10 mg抗坏血酸+ 10 mg BHT于小烧杯中，再先加入少量氯仿溶解后，再用石油醚定容至50ml摇匀，即配成浓度为500 μg/mlβ-胡萝卜素标准溶液的使用溶液，转移至棕色试剂瓶中贮存备用。
1.2 吸收曲线和标准曲线的测绘
按表1的比例要求移取不同体积的500 μg/mlβ-胡萝卜素使用液，用石油醚(沸程要与提取胡萝卜素用的石油醚相同)稀释配制成体积为5.00ml(或10.00ml)的一
系列不同浓度的标准溶液。
取中间浓度的标准溶液，以含有相同浓度抗坏血酸+BHT的石油醚(沸程要与提取胡萝卜素用的石油醚相同)溶液为参比溶液，用1 cm比色杯，于紫外可见分光光度计在200~800 nm波段进行波长扫描，根据扫描结果从而可绘得β-胡萝卜素的吸收曲线。
也可以用同样的方法绘制从胡萝卜中提取得到的胡萝卜的吸收曲线，并比较和分析两吸收曲线的异同。
根据测得的吸收曲线可以找到β-胡萝卜素的最大吸收波长λmax ，并以此波长为工作波长λw。
用1 cm比色杯，在λmax下，以含有相同浓度的抗坏血酸+BHT的石油醚(沸程要与提取胡萝卜素用的石油醚相同)溶液为参比溶液，测定按表1配制好的一系列标准溶液的吸光度值∆Aλmax，然后用Excel软件绘制出该标准工作曲线。
表1 β-胡萝卜素标准曲线数据
编号0123456789 Vβ-胡萝卜素使
用液(ml)
00.100.200.400.80 1.20 2.00 3.00 4.00 5.00
V石油醚(ml) 5.00 4.90 4.80 4.60 4.20 3.80 3.00 2.00 1.000 cβ-胡萝卜素
(ug/ml)
010.020.040.080.0120200300400500
2.1 类胡萝卜素提取物的薄层层析
(1) 取一块活化好的层析板，用毛细管点样管(或微量注射器)将提取样品液与标
准溶液同时点在层析板上。
(2) 用铅笔在层析板上距末端1 cm处轻轻画一横线，然后用毛细管吸取样液在
横线上轻轻点样。
若颜色浅，可重复点样，需前次样点挥发干后进行。
样点直径不应超过2 mm，否则易拖尾影响测定。
样点间距在1~1.5 cm为宜, 太
近易重叠。
(3) 展开缸内壁贴一片环绕周长的滤纸，倒入石油醚∶丙酮=50∶4作为展开剂进行
点样展开，液面高度约5mm 。
滤纸下面浸入展开剂中，以使层析缸被展开剂饱和。
待样点干燥后，将层析板点样一段放入层析缸中，样点不得浸泡在展开剂中，盖好瓶盖。
待展开剂上升至前沿约10 mm 处取出，迅速在展开剂最前沿处画一横线。
晾干，量出展开剂和样点移动的距离。
也可以晾干后喷雾浓H 2SO 4显色后再量出展开剂和样点移动的距离。
(4) 计算比移值R f
R f =
)
()(mm mm 剂剂剂剂剂剂剂剂
剂剂剂剂剂剂剂对于一种化合物，当展开条件相同时R f 值是一个常数。
R f 可用作定性分析的依据。
五、数据记录及处理
1.β-胡萝卜素标准曲线石油醚
nm
图1 β-胡萝卜素的吸收曲线
有此表可知：β-胡萝卜素最大吸收波长在447.0nm。
序号样品名称447.0nm均值
15ug/ml标准胡萝卜素0.3335，0.3313,0.3335,0.32780.331525
210ug/ml标准胡萝卜素0.6573 ,0.6585,0.6542,0.63190.650475
315ug/ml标准胡萝卜素0.9681 ，0.9661,0.9661，0.93590.95905
420ug/ml标准胡萝卜素 1.3882 ，1.3882,1.3892,1.3464 1.37785
525ug/ml标准胡萝卜素 1.7189 ，1.7212,1.7235,1.6925 1.714025
618ug/ml标准胡萝卜素 1.1249 ，1.1272,1.1191,1.1266 1.12445
`722ug/ml标准胡萝卜素 1.3575 ,1.3645,1.3645,1.3615 1.362
由上表可得：447nm 下5--25ug/ml 的胡萝卜素浓度与A 的关系
2．薄层层析
根据实验方法测定，提取液经展开后只有一个斑点，说明该提取液在此展开体系中只能分开一个组分；且实验测得其比移值R f 为：
R f =
==0.88)()(mm mm 剂剂剂剂剂剂剂剂
剂剂剂剂剂剂剂
cm
cm 5.85.7六、结论与小结
β-胡萝卜素最大吸收波长在450.0nm ，然后再次波长下进行不同浓度吸光度的测定得出了浓度—吸光度曲线，根据此曲线可以求得不同吸光度下多对应的浓度。
七、注意事项
1.取样要迅速，否则会使液体从移液枪中溢出。
2.取挥发性溶剂时要在通风橱中进行。
3.使用薄层法时，注意样点不要浸泡在展开液中。
八、小组成员分工
本小组有组员3名，其中一名同学负责收集提取液，一名同学负责稀释提取液并定容，一名同学负责使用紫外可见分光光度计测量吸光度。
九、参考文献
[1] 王海滨,彭光华,等.菹草类胡萝卜素的研究.食品科学,2003,24(11):41-45.
[2] 王业勤,李勤生.天然类胡萝卜素研究进展、生产、应用。
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[3]张其骏.胡萝卜类胡萝卜素及其品质的研究[D].浙江大学,硕士学位论文,2002
[4]彭光华,李忠,张声华.薄层色谱法分离鉴定枸杞籽中的类胡萝卜素[J].营养学报,1998,20(1): 76-78
[5] 施跃峰．天然β—胡萝卜素研究开发动态食品研究与开发,2000,21(2):13-16。
