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分子诊断学--绪论、感染性疾病的分子诊断 ppt课件

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感染性疾病分子诊断讲课文档

感染性疾病分子诊断讲课文档

第二页，共100页。
分子诊断技术主要包括
核酸杂交
聚合酶链式反应（PCR）
基因芯片技术
第三页，共100页。
感染性疾病即由病原微生物引起的疾病的统称 。
外源性感染：指由外界致病病原体侵人人体后导致的
感染，如伤寒、病毒性肝炎等多为外源性感染。
内源性感染：指由人体自身的正常菌群，在人体免疫
功能下降时引起的感染，因为这些细菌必须在一定条
• 乙型肝炎病毒DNA 等温扩增技术
HBV 的病毒载量与感染状态密切相关, 寻求快
速、简便、灵敏、特异的定量手段是对HBV
早期诊断、病程监控及流行病学调查的需求。
第二十二页，共100页。
（三）临床意义
1．HBV感染的早期诊断
2. 监测治疗效果
3. 判断病情，指导制订合理的治疗方案 HBV DNA
该法利用错配PCR 的原理扩增HBV 前C 区
长194 bp,C 启动子区长184 bp 的基因片段,
扩增产物分别经限制性内切酶Bsu 361, Bc1I
酶切, 琼脂糖凝胶电泳, 根据酶切图谱多态性,
建立检测HBV 前CA1896, BCPT1762/
A1764双变异的方法,
第二十一页，共100页。
HBV DNA 浓度通常较低。当HBV 基因组前
C 区发生突变时, 则可出现HBeAg 阴性而
HBV DNA 仍保持在较高的浓度。单独抗
HBc 阳性的血液HBVDNA 浓度通常很低。
第二十七页，共100页。
关于血液中HBV DNA 浓度与患者传染性之间的关系, 如
血清中HBV DNA 浓度大于109 拷贝/ ml, 则在日常生活
循环中HBV DNA 浓度与HBsAg 和HBeAg 有一定的相关,

感染性疾病的分子诊断ppt课件

感染性疾病的分子诊断ppt课件
• 用于感染性疾病治疗的监控和预测、病 情发展过程的危险性评价及疾病预后等。 • 耐药性的检测 • 细菌的分型 • 流行病调查
17
第一节 病毒的基因检测
人类许多感染疾病由病毒引起，如病毒性肝
炎、脑炎、流行性感冒等等，占人类传染疾
病的75%左右。400多种不同病毒。
病毒结构：大 小：20-300nm
15
3. 定性检测结果 有时不能提供病原体活力相 关信息 临床治疗病情缓解后一定时间内，在患者样 本中仍可以检测出相应的病原体。 有些病原体潜伏在进体内，没有临床症状。 4. 疾病状况的判断 检测出病原体的存在并不 能说此病原体就是引起疾病的直接原因。 该病原体可能是一种正常菌群
16
五、感染性疾病分子诊断 的临床应用及评价
5' 3'
引物B
图8-3
NASBA原理示意图
11
nucleic acid sequence-based amplification (NASBA)
12
• NASBA的特点为操作简便，不需特殊仪器， 不需温度循环。整个反应过程由三种 酶控制， 循环次数少，忠实性高,其扩增效率高于PCR， 特异性好。
19
Dane颗粒（完整的病毒）形态
HBsAg
（外膜蛋白）
HBcAg
（核衣壳蛋白）
HBV DNA
DNAPol
完整的乙肝病毒颗粒直径42纳米 20 由双层外壳和一个核心组成的，核心直径为27纳米， 内含DNA双链和DNA多聚酶
（一）病毒基因组结构
• 3.2kb双链DNA病毒 • 不完全双连环状DNA 长链L为负链：有4个开放阅读框S、C、P、X S区编码外膜蛋白（HBsAg） C区编码HBeAg 、HBcAg p区编码DNA聚合酶 X区位编码X蛋白，可能与病毒蛋白表 达有关。 21 短链S为正链：长短不一

感染性疾病的分子诊断课件

感染性疾病的分子诊断课件
包膜（envelope） 刺突（spike）
核酸（nucleic acid）
DNA or RNA
衣壳（capsid）
衣壳粒
蛋白质衣壳 核酸
17
第一节 病毒的基因检测
检测病毒的方法
血清学检测 病毒分离鉴定（诊断的金标准） PCR技术（检出率最高）
18
第一节 病毒的基因检测
乙型肝炎病毒（hepatitis B virus, HBV
10
感染的慨念
感染是病原体和人体之间的相互作用过程 病原体：衣原体、螺旋体、病毒、细菌、真菌、原虫、寄生虫 病原微生物：致病菌（条件致病菌）
共
生
微 生
状
物
态
人
体
微
生
物
不
人
同
体
的
感
染
状
态
在正常情况下，人体的一些腔道和体表均有微生物寄生
11
感染后果（转归）
病原体被清除 ------ 通过非特异性或特异性免疫 隐性感染 ------ 是感染过程中最常见的类型 显性感染（临床感染） ------ 感染致病，慢性感染引起炎症 潜伏性感染
基因病的分子诊断
Molecular diagnosis for genic diseases
1
基因病概念
1975年，Dulbecco 提出：人类的DNA序列 是人类的真谛，包括癌症在内的人类疾病的 发生都与基因直接或间接有关
1978年，Susumu Tinegawa：从人类所有的 疾病都与基因受损有关的角度出发，提出了 人类疾病新概念——基因病（genic disease）
复杂性（多因素）疾病，诸如：肿瘤、心脑血管 疾病、代谢病、神经系统疾病、自身免疫性疾病 等等

感染性疾病的分子生物学检验 医学课件

感染性疾病的分子生物学检验 医学课件
33
分子生物学检验 ∙
HIV基因组
基因组为RNA双分子，与其它逆转录病毒基本相同 其正链RNA分子大小为
HIV-1 9.3 kb 有3 组共8个基因 HIV-2 9.7 kb 有3 组共9个基因
5’端有帽子结构，3’端有poly(A)结构
34
分子生物学检验 ∙
HIV基因组
第一组：逆转录病毒共同的结构基因和侧翼末端重复顺序 （long terminal repeats）
潜伏感染期间，病原体一般不排出体外 病原携带状态 ------ 可以没有临床症状，而能排出病原体
带病原体的种类不同：带病毒者、带菌者与带虫者 不同携带状态 潜伏期携带者、健康携带者、急性与慢性
携带者 是很多传染病的重要传染源
3
分子生物学检验 ∙
感染性疾病的分子生物学检验策略
一般性检出策略（检出病原体）：
第三组：负调控病毒的感染性，成熟或释放的基因
vif（viral infectivity factor） vpu（viral protein U） vpr（viral protein R）
gag（group of antigen)基因：编码核心蛋白 pol （polymerase）基因：编码逆转录酶，DNA聚合酶 env（envelop）基因：编码包膜蛋白 LTRs：不编码任何蛋白，可起始其它病毒基因的表达，无种属特异性
第二组：参与基因表达的调节基因
tat（trans-acting transcriptional gene） rev（regulator of expression of viral protein） nef（negative regulator factor）
1 样本处理（样本处理区） 2 扩增试剂准备（PCR前准备区） 3 加样（样本处理区） 4 RT-PCR反应（检测区）

感染性疾病实验诊断ppt课件

感染性疾病实验诊断ppt课件

组织病理学诊断
组织病理学诊断是通过采集病变组织样 本，进行病理学检查，观察组织结构和 细胞形态的变化，从而确定感染性疾病
的一种实验诊断方法。
组织病理学诊断可以用于确诊各种感染 性疾病，如肝炎、肺炎、肿瘤等。
组织病理学诊断的优点是能够直接观察 病变组织和细胞形态的变化，有助于明 确诊断。缺点是需要采集病变组织样本
感染性疾病的传播途径多样，包括空 气传播、接触传播、血液传播等。
感染性疾病是全球范围内的主要疾病 负担，对人类健康构成严重威胁。
实验诊断的重要性
实验诊断是感染性疾病诊断的 重要手段，通过实验室检测可 以快速、准确地确定病原体的 种类和感染程度。
实验诊断有助于指导临床治疗 ，为制定合理的治疗方案提供 科学依据。
微生物培养的优点是能够直接观察病原体的生长和繁殖情况，有助于明确诊断。缺 点是培养时间较长，需要一定的实验室设备和经验。
免疫学检测
免疫学检测是通过检测人体内的抗原或抗体，间接推断是否存在感染的一种实验诊断方法。
常见的免疫学检测方法包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、胶体金免疫层析试验、间接免疫 荧光试验等。
THANKS
感谢观看
优化检测流程
对检测流程进行优化，减 少操作环节和时间，降低 误差率，提高检测效率。
标准化试剂和仪器
推动试剂和仪器的标准化 ，确保不同实验室之间的 检测结果具有可比性。
加强实验室质量控制
建立质控体系
制定严格的质量控制标准 和质量管理体系，确保实 验室操作的规范性和数据 的可靠性。
定期质控检查
对实验室的仪器、试剂、 操作过程等进行定期检查 和校准，及时发现并纠正 问题。
多重检测与高通量检测
多重检测

《分子诊断技术》课件

《分子诊断技术》课件
2010年代至今
随着生物信息学和人工智能技 术的发展，分子诊断技术不断 优化和升级，应用领域也不断
拓展。
02
分子诊断技术的基本原理
核酸的提取与纯化
核酸提取
核酸提取与纯化的重要性
是指从生物样本中分离和纯化核酸的 过程，是分子诊断技术中的基础步骤 。
是确保后续分子诊断实验结果准确性 和可靠性的关键。
案例三
总结词
SNP分型技术有助于个体化医疗的实现，为 患者提供更加精准的治疗方案。
详细描述
SNP分型技术可以对个体的基因变异进行精 细分析，预测个体对不同药物的反应和代谢 情况，为医生制定个体化的治疗方案提供科
学依据，提高治疗效果并减少副作用。
THANKS
感谢观看
特点
高灵敏度、高特异性、早期诊断、个性化治疗指导等。
分子诊断技术的应用领域
遗传性疾病诊断
通过对基因突变进行检测，对遗传性 疾病进行早期发现和干预。
肿瘤诊断与监测
通过对肿瘤相关基因和蛋白质的检测 ，对肿瘤进行早期发现、诊断、分期 、预后评估和复发监测。
感染性疾病诊断
通过对病原体基因和蛋白质的检测， 对感染性疾病进行快速诊断和用药指 导。
01
02
03
个性化医疗
结合基因组学、蛋白质组 学等技术，实现个体化、 精准化的诊断和治疗。
无创检测
研究无创或微创的分子诊 断技术，减少对患者的创 伤和痛苦。
实时监测
实现实时、动态的分子诊 断监测，及时发现病情变 化，为治疗提供及时反馈 。
05
案例分析
案例一：基因突变检测在肺癌诊断中的应用
总结词
基因突变检测在肺癌诊断中具有重要意义，有助于早期发现和个性化治疗。

临床分子诊断学绪论护理课件

伦理问题
随着临床分子诊断学的发展，涉及的伦理问题也日益突出。例如，基因检测可能 导致基因歧视，侵犯个人隐私等问题。因此，需要建立完善的伦理规范和法律法 规，保障患者的权益。
未来发展方向与技术革新
未来发展方向
未来临床分子诊断学的发展方向主要包括提高检测灵敏度和特异性、降低检测成本、开发新型检测技 术等。同时，还需要加强临床研究，探索临床分子诊断学在疾病预防、诊断、治疗和预后评估等方面 的应用价值。
临床分子诊断学绪论护理课件
• 临床分子诊断学概述 • 临床分子诊断学基础知识 • 临床分子诊断学在护理中的应用
• 临床分子诊断学面临的挑战与展 望
• 案例分析与实践经验分享
01 临床分子诊断学概述
定义与分类
定义
临床分子诊断学是一门应用分子 生物学技术，对疾病进行诊断、 预测和治疗的学科。
分类
基因检测在产前诊断和胚胎植 入前诊断中发挥重要作用，降
低遗传性疾病的风险。
基因检测还可以用于药物反应 预测，帮助患者选择更有效的
药物治疗方案。
03 临床分子诊断学在护理中的应用
遗传性疾病的筛查与预防
遗传性疾病的筛查
通过临床分子诊断技术，对具有遗传 倾向的疾病进行早期筛查，有助于早 期发现和干预，降低疾病的发突变是遗传性疾病的主要原因， 可导致蛋白质表达异常或功能缺陷。
遗传性疾病的基因检测有助于早期诊 断、预防和治疗。
基因突变可以发生在胚胎发育过程中 或出生后，影响个体的生理功能和健 康状况。
基因检测技术原理
基因检测技术是利用分子生物学方法检测个体的基因序列，以发现异常或突变。
根据检测方法和技术，临床分子 诊断学可分为基因诊断、蛋白质 诊断、细胞诊断等。
临床分子诊断学的应用领域

感染性疾病的分子诊断 ppt课件

感染性疾病的分子诊断
Molecular diagnosis for infectious diseases
感染的慨念
感染是病原体和宿主之间的相互作用过程 病原体：病毒、细菌、真菌、衣原体、支原体、螺旋体、寄生虫 病原微生物：致病菌（条件致病菌）
共
生
微 生
状
物
态
人
体
微
生
物
不
人
同
体
的
感
染
状
态
精品资料
扩增片段大小(bp) 278
477
Ｃ基因特异 5’-GCTTTGGGGCATGGACATTGACCCCTATAA-3’
258
片段
5’-ATGGGATCCCTGGATGCTGGGTCTTCCAAA-3’
HBV DNA FQ-PCR（real time PCR）
1．样本处理（样本处理区） 2．核酸扩增
UNG
用量
17.8ul
0.2ul
0.03ul
计算好各试剂的用量，加入一适当体积试管中，充分混合均匀，向 设定的n个Roche毛细管中分别加入18ul，转移至样本处理区
HBV DNA FQ-PCR（real time PCR）
2. 2 加样（样本处理区）
• 你怎么称呼老师？
• 如果老师最后没有总结一节课的重点的难点，你 是否会认为老师的教学方法需要改进？
• 你所经历的课堂，是讲座式还是讨论式？ • 教师的教鞭
• “不怕太阳晒，也不怕那风雨狂，只怕先生骂我 笨，没有学问无颜见爹娘 ……”
• “太阳当空照，花儿对我笑，小鸟说早早早……”
感染后果（转归）
方向、尽可能吸弃上清且不碰沉淀] 再加入25ul DNA提取液2，振荡10sec [沉淀需打散、混匀] 2,000rpm离心10 sec，100℃干浴或沸水浴10min 13,000rpm离心10min，保留上清备用. （如果样本裂解产物当天不使用，则要保存在-20℃）

分子诊断学--绪论、感染性疾病的分子诊断 ppt课件

ppt课件 39
ppt课件
40
2003年4月，德国汉堡Bernhard-Nocht热带医学 研究所学者Drosten等用随机扩增技术，获得一段 长度为300bp的核苷酸序列。 根据这段序列，建立了检测新冠状病毒的常规 和实时定量PCR技术。
( on April 10, 2003）
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2. There are two main kinds of molecular
techniques which are used to molecular
diagnosis of infection disease, amplifying DNA probe signals and amplifying target DNA fragment. amplify：放大；probe：探针
ppt课件
19
3. Associated with conventional diagnosis
methods, molecular diagnosis can be used
to diagnose infection disease induced by virus, bacteria, leptospira螺旋体, chlamydia 衣原体, mycoplasma支原体 and rickettsia立 克次体, etc.
ppt课件
8
分子诊断学的任务
阐明疾病发生、发展的分子机制； 分子诊断指标； 建立检测方法
ppt课件
9
分子诊断学的特点
属于病因学诊断，特异性高； 对某些基因变异做出判断； 有更好的发展前景
ppt课件
10
Section 2 分子诊断学的历史、现状和未来
ppt课件
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supplying reliable evidence for clinical
diagnosis and treatment.
ppt课件 21
感染性疾病的分子诊断主要是针对侵 入人体内的病原体基因进行检测。
不同的病原体有各自的种属特异的基
因。 前人铺路，后人受益
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Section 1 总论 一、感染性疾病分子诊断的策略
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2. 靶分子扩增技术检测方法 即方法中包含靶分子（DNA、RNA或探针）的 扩增过程的技术。如PCR及衍生的扩增技术、连 接酶链反应（LCR）、替代的扩增方法 （TAS/SDA/NASBA等） 特点
我国所售的商业试剂盒 简便、快速、灵敏度高 存在扩增所带来的污染问题
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三、感染性疾病分子诊断的标本处理
1. 信号放大检测技术方法 不涉及靶分子扩增，采用多酶、多探针或二者结 合等方式增加探针标记物的浓度从而使信号得 到放大，提高检测的灵敏度。如：液相杂交、 杂交捕获及支链DNA（bDNA）等
特点 美国FDA批准的商业试剂盒 感染因素少，无扩增所产生的污染 稳定性、重复性和特异性都较高，结果准确 放大倍数少，灵敏度较低
Chapter 5 蛋白质组学 Proteomics
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技术篇内容
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16
Chapter 14 感染性疾病的分子诊断
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17
Key Points
1.Molecular diagnosis of infection disease means to estimate a disease through detecting the existence of gene of pathogenies directly, which is a relatively simple, rapid, specific and sensitive strategy of diagnosis. pathogeny：病原，发病机理
标本的选择 标本量及抗凝剂
标本的传送、保存 标本的预处理
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标本的选择 与传统一样，标本的选择要符合疾病的发病机制， 能反映病程的状态。 由于检测方法的高灵敏性，可适当考虑标本采集 的便利性和通用性。 由于核酸样本的稳定性，可选用福尔马林及石蜡 包埋固定的组织标本。 核酸的选择对疾病的判断也很重要。什么时候用 DNA？什么时候用mRNA?
疾病基因突变谱，尤其是单核苷酸多态
性 (single nucleotide polymorphism,
SNP)图谱的建立，为分子诊断提供了强 有力的工具。
ppt课件 14
基础篇内容 Chapter 1 基因组 Genome Chapter 2 原核生物基因组Prokaryotic
Chapter 3 真核生物基因组Eukaryotic Chapter 4 病毒基因组 Virus
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2. There are two main kinds of molecular
techniques which are used to molecular
diagnosis of infection disease, amplifying DNA probe signals and amplifying target DNA fragment. amplify：放大；probe：探针
1. 一般性检出策略：只需要提供是否有某种病原 体的感染 通过探针或扩增技术直接检出病原微生物的 DNA/RNA，判断有无感染或何种感染
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24
2. 完整检出策略：不仅对病原体做出判断，还要 进行分型（包括亚型）和耐药性方面的检测。 思路：诊断—分型—亚型—耐药性检测
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二、感染性疾病分子诊断的常用方法
Chapter 11 生物芯片技术
Chapter 12 基因变异检测技术、脉冲电 场凝胶电泳、分子影像
Chapter 13 生物信息学在分子诊断中的
应用
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Section 1 分子诊断学的性质、任务和特点
分子诊断学(molecular diagnostics)，利用分 子生物学技术研究机体外源和内源性生物大分子 和大分子体系的存在、结构或表达调控的改变， 从而为疾病的防治提供分子水平信息。
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4. Compared with other conventional diagnosis methods, molecular diagnosis has many advantages in early diagnosing infection disease, identifying the genotype of pathogenies, detecting drug resistance gene, epidemiologic investigating and
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19
3. Associated with conventional diagnosis
methods, molecular diagnosis can be used
to diagnose infection disease induced by virus, bacteria, leptospira螺旋体, chlamydia 衣原体, mycoplasma支原体 and rickettsia立 克次体, etc.
ppt课件
8
分子诊断学的任务
阐明疾病发生、发展的分子机制； 分子诊断指标； 建立检测方法
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9
分子诊断学的特点
属于病因学诊断，特异性高； 对某些基因变异做出判断； 有更好的发展前景
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10
Section 2 分子诊断学的历史、现状和未来
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11
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12
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13
绪论 Introduction
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1
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2
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3
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4
整体水平
细胞水平
分子水平
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Chapter 6 核酸的分离与纯化 Chapter 7 重组DNA技术
Chapter 8 临床基因扩增检验技术 Chapter 9Hale Waihona Puke 核酸分子杂交技术ppt课件
6
Chapter 10 核酸测序技术