当前位置：文档之家 › 干细胞鉴定ppt课件

干细胞鉴定ppt课件

  • 格式：ppt
  • 大小：29.52 MB
  • 文档页数：55

下载文档原格式

  / 55

合集下载

干细胞ppt课件

干细胞ppt课件
15
一.造血干细胞
是指存于造血组织内的一类能分化生成各种血细胞的原始细 胞，又称多功能干细胞。 是第一种被认识的组织特异性干细胞，主要通过表面标志来 分离纯化造血干细胞。 造血干细胞的调控
(1)维持造血干细胞的数目恒定：干细胞因子 (2)影响干细胞的移行、数目维持、分化：成纤维细胞生长因 子(FGF-1，FGF-1)、SDF-1、细胞外基质
3
一、干细胞的形态和生化特征
1.干细胞的形态特征
①干细胞形态共性：细胞呈圆形或卵圆形，体积小，核质比 大，增殖力强。
②干细胞的固定组织位置：有的干细胞有固定存在部位与方 式。如表皮干细胞与其周围的子细胞形成增殖结构单元。但许多组 织的干细胞没有这种分布特点
2.干细胞的生化特点
①端粒酶活性高：如造血干细胞具癌细胞的端粒酶活性，增 殖能力强。随着增殖与分化，端粒酶活性下降。
1.可在体外无限增殖并保持未分化状态。 2 .具有分化为完整个体的潜能。 3.具有分化为所有种类的细胞、器官的潜能
10
一.人胚胎干细胞的获得与胚胎干细胞系的建立
要研究胚胎干细胞，首先要获得胚胎干细胞。 (一)获得途径：主要有： 1.从早期胚胎获得： 2. 从原始生殖细胞获得 3. 从移植细胞(克隆细胞)获得
7
四、干细胞增殖与分化的微环境
干细胞巢(stem cell nich)：干细胞在组织中的居所。 干细胞生存的微环境：指干细胞巢中控制干细胞增殖与分化的 外部信号
一.分泌因子
分泌因子是由细胞自分泌或旁分泌的生长因子，有的分泌因子对 维持干细胞的增殖，分化和存活具有调节作用。 如转化生长因子-β和Wnt家族的成员，在不同组织甚至不同种属 中都发挥重要作用。
干细胞具有多向分化潜能，能分化为各种不同类型的组 织细胞。根据潜能大小，可分为全能干细胞，多能干细胞， 专能干细胞

干细胞-幻灯

干细胞-幻灯

1999年12月 1999年12月，美国 科学》 《科学》杂志公布了 当年世界科学进展的 评定结果， 评定结果，干细胞的 研究成果列在举世瞩 目耗资巨大的人类基 因组工程之前， 因组工程之前，名列 十大科学进展首位。 十大科学进展首位。
六、ES细胞研究面临的问题 ES细胞研究面临的问题
1. 用于干细胞研究的胚胎来源困难 2. 如何保持胚胎干细胞的全能性 3. 干细胞在体外发育成完整的器官尚难以做到 4. 分化细胞移植仍有可能发生免疫排斥 5. 安全性问题 分化后的细胞是否有致瘤性？ (1) 分化后的细胞是否有致瘤性？ (2) 动物细胞携带的病毒感染人类 6. 法律和伦理问题
人体早期发生过程： 人体早期胎干细胞的定义: 人胚胎干细胞的定义:
受精后72 72h 受精后5 卵裂 受精后72h 受精后5-7天 胚泡（囊胚） 合子 卵裂球 桑椹胚 胚泡（囊胚）
胚泡
滋养层— 滋养层—>胎儿附属结构 囊胚腔 内细胞群— 胚盘— 内细胞群—>胚盘—>胚体
红色细胞：神经元 红色细胞： 绿色细胞： 绿色细胞：胶质细胞
胚胎干细胞脑内移植后分化为神经前体 细胞（ 图中红色细胞） 细胞（A图中红色细胞）和卫星细胞 图中红色细胞） （B图中红色细胞）
诱导成胰岛素分泌细胞
（1）5阶段诱导法： 阶段诱导法： 巢蛋白（nestin)分泌细胞 ES 类胚体 巢蛋白（nestin)分泌细胞 胰岛素 分泌细胞 3-磷酸肌醇-激酶抑制剂为重要的诱导剂 磷酸肌醇（2）基因转染：胰岛β细胞分化相关基因Pax 1和 基因转染：胰岛β细胞分化相关基因Pax 1和 Pax 4
治疗性克隆（ 治疗性克隆（therapeutic cloning ）：
去核卵细胞 + 受者体细胞核 分离内细胞群 分化 移植治疗 克隆 囊胚 ES细胞建系 ES细胞的诱导 ES细胞建系 ES细胞的诱导

干细胞精品PPT课件

干细胞精品PPT课件
退行性病变 自体免疫性疾病
21
多能干细胞的来源：
直接从处于胚泡阶段的人类胚胎
人胚
的内细胞团分离出来
从终止妊娠胎儿组织中分离出来
体细胞核转移（SCNT）技术重组获取
22
23
重要突破：皮肤细胞能被诱导成为多能干细胞 (2006,Cell)
2007年11月20 日，日美科学 家同天宣布：
Sox2 Klf4
Oct4
c-Myc
小鼠成纤维细胞
（即干细胞的可塑性）（后述）
8
（四）干细胞增殖与分化的微环境 1、分泌因子 2、受体介导的细胞间相互作用 3、胞间基质和整合素
9
三、干细胞的分类及相关知识 （一）按发育进程进行分类
胚胎干细胞 （embryonic stem cell, ESC)
胚胎生殖细胞（胚胎生殖干细胞） （embryonic germ cell, EGC)
成纤维细胞中转入关键基因，得到iPS 细胞
iPS Cells(诱导性多能干细胞）
24
诱导性多能干细胞被诱导分化成运动神经元：
25
3、（成体）多能干细胞 （multipotent stem cell）
指multipotent”描述 的“多潜能”与胚胎干细胞用的 “pluripotent ”描述的“多潜能”有质的差 异。成体多能干细胞具有分化出多种组织 细胞的潜能，但却失去了发育成完整个体 的能力。
成体干细胞（成人干细胞） （adult stem cell)
10
1、胚胎干细胞（ESC） 指来自胚泡（blastocyst）（胚胎早
期4~5天）内细胞团（inner cell mars）的 一组二倍体细胞，分化具多能性。
从胚泡分离后可培养成ESC。

干细胞ppt课件

干细胞ppt课件

11
三，干细胞的分类
根据发育阶段：
胚胎干细胞(embryonic stem cell) ：具有分化 为机体任何一种组织器官潜能的细胞。 成体干细胞(somatic stem cell)：由胚胎干细 胞分化形成的，只能分化为相应组织器官内 的功能细胞。
12
一，胚胎干细胞定义
胚胎干细胞（embryonic stem cell，简称ES细胞）是 从着床前胚胎内细胞团或原始生殖细胞经体外分化抑 制培养分离的一种全能性细胞系，可以分化成任何一 种组织类型的细胞。
13
胚胎干细胞具有全能性，能够分化成全身200多种细 胞类型，进一步形成机体的任何组织和器官。
14
二，胚胎干细胞的特征
形态特征 体积小、核大，有一个或多个核仁；胚胎干细胞 克隆紧密堆积，无明显的界限，形似鸟巢。 生化特征 碱性磷酸酶呈强阳性； 端粒酶活性高，具有长的端粒； 表达早期胚胎细胞的阶段特异性抗原。 遗传学特征 染色体数目和核型与来源细胞保持一致。 胚胎干细胞在体外不断增殖且维持遗传的稳定性（正 常的核型及端粒的长度）
15
三、人胚胎干细胞建系
建系步骤：
1. 获取早期发育的胚胎 2. 分离囊胚的内细胞群 3. ES细胞体外培养，细胞非 分化增殖 4. ES细胞的鉴定 5. ES的传代和冻存
16
着床前胚胎发育
17
1998年， Dr. Thomson从体外受精的人类胚胎的囊胚期内细胞 群中直接分离多能干细胞进行培养，分离到五个细胞系。这些 细胞系被继续培养了五至六个月，传了32代仍可继续生长。 同年，Dr. Gearheart从终止妊娠的胎儿组织中得到原始的生 殖细胞，在体外培养九个月，这些细胞具有与Thomson分离的 人ES细胞同样的生物学特性。

干细胞概述ppt课件

干细胞概述ppt课件
8
9
干细胞是目前人类组织器官功能再生的唯一希望
10
Part 1 干细胞
干 细 胞 （ Stem-cell ） 即 为 起
源细胞，是指尚未发育成熟的细胞， 它具有多分化潜能和自我复制的功能 ，在特定条件下，可以分化成不同的 功能细胞，形成多种组织和器官。
干细胞形态
干细胞分类
✓ 按分化能力可分为全能干细胞 (totipotent stem cells)、多能干细 胞 (pluripotent stem cells)以及单能干细胞 (unipotent stem cells) ；
以往认为，中枢神经系统的神经元在出生前或出生后不久，就失去再生能力。但近年的一些研究表明，成年哺乳动 物的脑组织仍可不断产生新的神经元，成人脑组织中同样存在NSC,主要是在侧脑室下层(SVZ)和海马齿状回两处。
目前多使用基因转移的方法，建立神经干细胞系，即诱导NSC的细胞周期不断循环往复，从而阻止其分化过程。永 生化的NSC具有较好的生物学特性，它们能自我复制并在体外大量增殖，在移植人体内后仍具有多向分化潜能，同 时可被转染并稳定地表达外源基因。
25
神经干细胞
根据部位分类神经嵴干细胞(neural crest stemcell，NCSC)和中枢神经干细胞(CNS-SC)。
外周神经干细胞(PNS-SC)，既可发育为外周神经细胞、神经内分泌细胞和Schwann氏细胞，也能分化为色素细胞 (pigmented cell)和平滑肌细胞等。NSC一般是指存在于脑部的中枢神经干细胞(CNS-SC)，其子代细胞能分化成为 神经系统的大部分细胞。
两位科学家山中伸弥和汤姆斯共同获得诺贝尔医学奖
2
不能神话也不能妖魔化干细胞
心脑血管疾病、恶性肿瘤、病毒性疾病、遗传病仍是医学领域4大生 命科学难题，目前全球治疗效果有限，干细胞也不例外。

干细胞ppt课件

干细胞ppt课件

究代表着科技事业
未来发展的重要方
向。”
4
干细胞研究
奥巴马2009年签署 行政命令，宣布联邦
政府资金可用于支持
胚胎干细胞的研究。
5
干细胞研究
医药界的诺贝尔奖——美国盖伦奖包括三个奖项：最佳药 品，最佳生物制品和最佳医疗器械。 Hemacord——美国纽约血液中心的首个脐带血干细胞产 品获得2014年美国盖伦奖的最佳生物技术产品奖。
（或定向）分化为逐步成熟的次级子代细胞，最终形成 功能特异的组织细胞，在组织修复和新陈代谢中起重要 作用；
11
干细胞的四大特性
自动归巢：
干细胞在体内定向迁移至特定的组织部位，在不同环境的诱导下，依赖性 地分化为特定的组织细胞。
免疫原性低：
脐带、胎盘来源的干细胞表面抗原不明显，免疫原性低，不存在免疫排斥 的特性。
肓成完整个体的能力（间充质干细胞）
4、专能干细胞：由多能干细胞分化而来，只能向一种类 型的细胞分化（肝脏干细胞等）
10
干细胞的四大特性
自我更新：
干细胞可以通过自我复制，产生与亲本完全相同的子代 细胞，以保持干细胞数量的恒定可通过分裂维持自身细 胞的特性和大小；
多向分化：
干细胞在一定条件下可以进入分化程序，可进一步多向
6
干细胞基础知识ຫໍສະໝຸດ 7什么是干细胞干细胞(stem Cell)是指一群在胚胎发育早期未分 化的细胞，具有自我更新能力(self-renew)和多向
分化潜能(multipotential) 。干细胞就是在生命的
成长和发育中起“主干”作用的细胞，它对于生命 成长发育的重要性就如同建筑中的钢筋水泥等基本
材料。干细胞是人类的原始细胞，能够发育成人体

干细胞PPT演示文稿

干细胞PPT演示文稿
3、多能干细胞：具有分化多种组织的潜能，但失去了发 肓成完整个体的能力（间充质干细胞）
4、专能干细胞：由多能干细胞分化而来，只能向一种类 型的细胞分化（肝脏干细胞等）
干细胞的四大特性
➢ 自我更新：
干细胞可以通过自我复制，产生与亲本完全相同的子代 细胞，以保持干细胞数量的恒定可通过分裂维持自身细 胞的特性和大小；
根据其发育阶段可分为： 1、胚胎干细胞（Embryonic stem cells） 2、成体干细胞（Adult stem cells）。
根据其分化潜能可分为：
1、全能干细胞：可分化成人体的各种细胞，从而组成各 种组织和器官，最终发肓成为一个完整的生物体（受精 卵）
2、亚全能干细胞：是人体发育过程中存留于多种组织中 的其分化能力接近于全能的成体干细胞。
➢ 多向分化：
干细胞在一定条件下可以进入分化程序，可进一步多向 （或定向）分化为逐步成熟的次级子代细胞，最终形成 功能特异的组织细胞，在组织修复和新陈代谢中起重要 作用；
干细胞的四大特性
➢ 自动归巢：
干细胞在体内定向迁移至特定的组织部位，在不同环境的诱导下，依赖性 地分化为特定的组织细胞。
➢ 免疫原性低：
2010年11月15日 温家宝总理考察中 国科学院广州生物 医药与健康研究院 时强调“干细胞研 究代表着科技事业 未来发展的重要方 向。”
干细胞研究
奥巴马2009年签署 行政命令，宣布联邦 政府资金可用于支持 胚胎干细胞的研究。
干细胞研究
医药界的诺贝尔奖——美国盖伦奖包括三个奖项：最佳药 品，最佳生物制品和最佳医疗器械。 Hemacord——美国纽约血液中心的首个脐带血干细胞产 品获得2014年美国盖伦奖的最佳生物技术产品奖。
干细胞基础知识

干细胞示踪技术进展ppt课件

干细胞示踪技术进展ppt课件

示踪方法
体外示踪（病理学示踪） 体内示踪：MR、核素显像、光学成像
病理学示踪
移植前体外预先标记培养的干细胞，包括 荧光染料标记 （标记细胞核或细胞膜） 核素标记方法 Y染色体标记 报告基因转染
细胞核标记物
5-溴-2-脱氧尿嘧啶核苷 （BrdU） 标记 DAPI标记 Hoechst 染色
钆-荧光双标记及MRI体外示踪
钆-荧光双标记及MRI体外示踪
沈君，周翠屏，成丽娜，等. 大鼠骨髓间充质干细胞的钆-荧光双标记及MRI体 外示踪的研究[J]. 中华放射学杂志,2008,42(4):426-431.
磁标记细胞MR成像原理
具有超顺铁磁性的Fe3O4晶体低浓度即能显著地造成局 部磁场的不均匀， 使邻近氢质子在弛豫中很快产生相 散， 加速了质子去相位过程， 缩短了组织的T2值， 在梯度回波和自旋回波序列MRI中， 使组织信号降低 从而产生较强的T2 负性对比效应， 常规1.5T MR成像 就能显示被标记的干细胞， 但SPIO对 T1 弛豫的加快 作用较弱。
SPIO在体内可生物降解被细胞代谢， 示踪细胞至少可 达 3个月， 假阳性低。因此，MRI示踪磁标记细胞是 活体内最理想的细胞示踪方法。
磁共振示踪突出的优势
极佳的空间分辨力,扫描能明确部位，实时显像并连续 跟踪标记的细胞。
能用于导向治疗和跟踪。 检测细胞阈值远低于有效治疗剂量。 磁共振细胞示踪时间不仅与细胞转归相关， 还与细胞
MRI活体示踪磁标记细胞
MRI活体示踪移植干细胞前提是需用MR对比剂磁化标记细 胞， 以使能与宿主细胞相区分。
MR对比剂 1.主要产生T1正性对比效应的Gd3+，检测阀值过高，实用价
值不大。 2. T2 负性对比效应，但对 T1 弛豫的加快作用较弱：通过

干细胞ppt-PPT幻灯片

干细胞ppt-PPT幻灯片
The selling point of products concept orientation
国际 干细胞 复原
品牌设计理念
Brand design philosophy
设计理念：高雅从容、真纯精致、奢华尊享 品牌定位：高端路线； 细胞无尽的生命愈合能量，与先端科学相融合。击退皮 肤 老化，逆时，恒美容颜。
品牌品项
Brand items
本源真纯紧致面膜：深层补水、修护再生
蕴含多种干细胞活性因子，能迅速为老化、干燥缺水的肌肤补充大量水 分并深层保湿，令肌肤触感润泽、细滑。细胞因子能修复受损的老化细胞， 有效再生，彻底解决肌肤老化问题，重焕年轻光彩。
品牌品项
Brand items
本源真纯紧致眼膜：紧致提拉、再现柔韧弹性
品牌品项
Brand items
本源真纯细胞活化水：激活细胞、深度修复
细胞活化液源自拓华干细胞实验室的顶级再生医学技术，丰富的细胞活性因子 可促进皮肤细胞再生，对抗衰老，让美丽持久，让肌肤永葆青春成为可能。
细胞活化液可激活皮肤基底干细胞，深度启动细胞自我更新，有效修复受损 细胞及组织，维持肌肤胶原蛋白与弹力纤维的活性，保持皮肤的弹性及细腻程度； 增强细胞内端粒酶活性，提高新细胞在皮肤中的比例，调节细胞的免疫状态，改 善皮肤微循环。恢复细胞年轻态，让皮肤重新焕发活力。
品牌系列
Brand series
本源真纯系列产品，蕴含丰富的干细胞生长因子，在最短的时间内
将功效发挥到极致，为肌肤带来深层的细胞修复，促进细胞内部框架重建， 强化成纤维细胞的内部结构，恢复细胞年轻态，重新激活细胞新陈代谢，有 效再生。为您抚平皱纹，让肌肤柔嫩、紧实和光滑，令时光印记再难觅影踪， 凝时逆龄，从容淡然。

各类干细胞应用特点研究比较PPT课件

各类干细胞应用特点研究比较PPT课件

成体干细胞
总结词
存在于成体组织中，具有有限的分化能力。
总结词
来源广泛，易于获取。
详细描述
成体干细胞是存在于成年动物组织中的干细胞，具有一定 的自我更新和分化能力，能够修复和替换受损的组织，用 于治疗心肌梗死、脑卒中等疾病。
详细描述
成体干细胞的来源广泛，可以从骨髓、脂肪、皮肤等组织 中获取，相对容易获取，且伦理和法律限制较少。
干细胞治疗
干细胞治疗是一种具有巨大潜力的治疗方法，能够修复受损组织、治疗多种疾病。目前， 干细胞治疗已在许多临床试验中取得显著成果，但仍需进一步研究以提高疗效和安全性。
干细胞药物研发
随着干细胞技术的不断发展，越来越多的干细胞药物进入临床试验阶段。这些药物在抗击 癌症、神经退行性疾病等方面展现出巨大潜力，但仍需解决药物制备、储存和运输等问题 。
随着科技的不断进步， 需要不断探索新的干细 胞分离、培养和分化技 术，以提高干细胞的产 量和质量，降低成本， 为临床应用提供更好的 支持。
目前，干细胞技术主要 应用于治疗某些特定疾 病，但其在美容、保健 等领域也有广阔的应用 前景。未来，可以进一 步拓展干细胞技术的应 用领域，满足更多人群 的需求。
干细胞再生医学
干细胞再生医学是利用干细胞的分化能力来修复或替换受损组织的治疗方法。目前，该领 域在心脏、肝脏和肾脏等器官修复方面取得了一定的进展，但仍需进一步研究以提高治疗 效果和降低副作用。
对未来研究的建议与展望
加强基础研究
创新技术发展
拓展应用领域
加强法规监管
为了更好地利用干细胞 技术，需要加强干细胞 生物学、分子机制等方 面的研究，深入了解干 细胞的生长、分化和调 控机制。
干细胞是具有自我复制和多向分化能力的原始细胞，可以在一定条件下分化成为不同类型的细胞。根据其发育阶 段和分化潜能，干细胞可以分为胚胎干细胞和成体干细胞两类。胚胎干细胞具有全能性，可以分化成为任何类型 的细胞；而成体干细胞则具有多能性，可以分化成为特定类型的细胞。

干细胞生物学 PPT课件

干细胞生物学 PPT课件
生重要的影响。
第三节 干细胞的应用前景及与 医学的关系
一、临床治疗
• 干细胞的最大用途是用于临床细胞移 植治疗各种疾病和构建人工组织或器 官．
干细胞能治疗几乎所有的疾病
• 从理论上讲干细胞可以治疗几乎所有 的疾病。因此，以后如果个人的某种脏 器生了病，只要把相关的干细胞注入这 个脏器就会自动“补”好。美国生物学 家、诺贝尔奖获得者吉尔伯特认为： “用不了50年，人类将能够培育人体的 所有器官。”
• 根据胚胎干细胞来源不同，分为：
• ES细胞（embryonic stem cells）,来自囊 胚期的内细胞团。
• EC细胞(embryonic carcinoma cells)，由 畸胎癌（teratocarcinorma)中分离、筛 选出的具增殖，自我更新能力的细胞。
• EG细胞（embryonic germ cells)，由原 始生殖细胞（primordial germ cells)中分 离获得。
干细胞的概念及分类
• 干细胞（Stem cell） : • 指存在于胚胎直至成体的具有增殖、
自我更新（self-renewal）以及分化潜能 的原始细胞。
• 所有的干细胞都具有两个最为显著的特 征：
• 一是不断增殖、自我更新;
• 二是在适宜的环境条件下可分化并产生 不同类型的细胞。
分类(按分化潜能分类）
somatic stem cells），也称为组织干 细胞（tissue stem cells）。
• 胚胎干细胞，是存在于早期胚胎 组织中，具有高度增殖能力和多向 分化潜能，能分化为三个胚层所有 细胞类型的原始细胞。
• 成体干细胞指存在于各组织器官 的未分化细胞。在体内，它们具有 终生自我更新（self-renewal）能力 和分化潜能。

MSC干细胞PPT课件

MSC干细胞PPT课件

多潜能性、增殖能力有限 研究最早、了解最深 自体来源、无免疫排斥 MSC产率低,1-10MSC/106MNC 有病毒感染风险 有限临床应用
y
11
y
12
体外培养扩增获取人UCMSC
原代贴壁
原代培养
传代扩增
对于原代细胞中混杂的其它异质细胞，利用MSC的贴壁和高增 殖潜能，通过连续传代，筛除那些不能贴壁生长和虽能贴壁生 长但增殖能力差的细胞，最后通过流式细胞术鉴定。
07年6月7日王恩庆的妻子药守清反映患者尿频和尿 急已恢复正常；皮肤表面黑斑明显变浅；右眼干涩和畏 光已改善；透视显示，肺结核引起的空洞好转80%；精 神状态和饮食情况趋于常人，体重由细胞疗法前的125 斤，增长为145斤，饮食恢复正常，每天不需他人陪同 可独立外出散步。
y
34
患者，女性，26岁，类风湿病史10年。
第二天，当我醒来的时候，突然发现自己的手指明显消肿了，不仅是双手 ，其它肿胀的关节也不酸胀了，全身症状明显减轻，无数的早晨我都是在浑身 僵痛，四肢乏力、情绪低落中度过的，然而今天早晨却让我感受到了一个精神 焕发，充满力量，心情舒畅的我，整个人都很轻松，这对于一个类风湿病人来 说真的是太难得了，当时我非常激动，因为我真的没有想到效果会如此明显和 迅速，通过这次治疗让我再次树立了信心，重新点燃了生活的希望。
我是一名类风湿病的患者，今年26岁，类风湿病史10年，患病以来，长 期服药，并尝试过各种治疗方法，效果均不明显。8月5日，我进行了脐带间充 质干细胞移植治疗，治疗方法比我刚开始想象的简单的多，只是通过静脉输入 的方法将干细胞输入到我的血管，不到半个小时就做完了，没有任何的不适感 ，干细胞移植后就可以回家了。
Biology of Blood and Marrow Transplantation 13:1477-1486, 2007

MSC干细胞ppt演示课件

MSC干细胞ppt演示课件

.
13
A
B


A： CD31 、 CD34、CD45和HLA-DR阴性<2% B： CD90 、 CD73 、 CD105 、 CD29和CD44阳性>95%
.
14
Day 7
Day 14
UC-MSC •形态相似 •梭形细胞 •平行排列或漩涡状生长
Day 7
Day 14
BM-MSC
(100X)
.
15


.
23
脊髓损伤动物模型
.
24
干细胞注射液
间充质干细胞治疗肝病技术，为传统医学难以解决的病毒性
肝炎导致肝硬化、肝功能衰竭提供新的治疗途径。该技术
2009年得到总后卫生部批准，在临床进行科研性质的使用 间充质干细胞修复脑中风后中枢神经损伤科研项目，2009年 在北京市科委立项，并得到专项科研经费资助； 获得“人脐带间充质干细胞抗肝纤维化注射液及其制备方法” 专利技术（ZL201010551722.8），并于2010年12月10日在 药监局注册；

.
22

脐带 MSC 具有与骨髓来源 MSC 相似的免疫特性，即 HLA-ABC呈阳性表达，HLA-DR呈阴性表达。 有研究显示， HLA-ABC 的表达率在脐带和骨髓 MSC 分别为50％～75％和＞75％，脐带MSC的HLA-ABC 的表达低于骨髓。 提示 UC-MSC 可能具有与 BM-MSC 相似或更低的免 疫原性。
脐带组织含有的细胞种类较少、MSC 含量大约为1个MSC/1600有核细胞。
.
21
来源丰富、采集简便，对供者无不良影响 数量丰富，增殖能力强，可多次使用 基因稳定、不易突变、使用安全可靠 免疫原性低，具有免疫调节功能，使用时不 引起免疫排斥反应，还可抑制该反应 具有很强的促进造血恢复功能，广泛的临床 应用范围，可治疗多种疾病
  1. 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
  2. 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
  3. 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。

15
成骨诱导检测方法
茜素红染色
成骨诱导过程中钙离子以 钙盐的方式沉淀下来，形成 “钙结节” ，茜素红和钙发生 显色反应，产生一种深红色 的带色化合物，这样成骨诱 导的细胞外沉积的钙结节也 就被染成深红色。
碱性磷酸酶染色
碱性磷酸酶活性是成骨细胞 分化成熟的重要标志。BCIP/NBT 是碱性磷酸酯酶的常用底物。 在其催化下， BCIP会被水解产生 强反应性的产物，该产物会和NBT 发生反应，形成不溶性的深蓝色 至蓝紫色的NBT-formazan。
3.
名称 检验标准 结论
CD34 ≤5 % 阴性
CD45 ≤5 % 阴性
CD11b ≤5 % 阴性
CD44 ≥70 % 阳性
CD29 ≥70 % 阳性
CD90 ≥70 % 阳性
名称 检验标准 结论
CD34 ≤5 % 阴性
CD45 ≤5 % 阴性
CD11b ≤5 % 阴性
CD106 ≤5 % 阴性
CD44 ≥70 % 阳性
干细胞鉴定
Oricell TM 检测项目

常规检测：细菌、真菌检测；支原体检测； 内毒素检测；

鉴定检测：生长形态、增殖能力、诱导分 化能力、特异性抗原表达、核型分析等
2
常规检测
项目 细菌、真菌检测 支原体检测 检测方法 直接接种培养法 直接接种培养法 PCR法 内毒素检测 凝胶法 检测对象 培养上清液 培养上清液 细胞 培养上清液 检测标准 阴性 阴性 阴性 ≤50EU
≥70 % ≥10 % ≥50 %
按1:6分种率，2～3天可 传代 按1:6分种率，5～7天可 传代 按1:6分种率，3～4天可 传代
7
间质干细胞



定义：来源于中胚层的早期细胞，主要存 在于结缔组织和器官间质中，能够分化为 多种中胚层和神经外胚层来源的细胞。 来源组织：骨髓、骨膜、脂肪组织、脐血 等。 来源物种：人、大鼠、小鼠、猴子、犬、 兔子、猪等。
3
鉴定检测共通项目

复苏存活率：台盼蓝拒染法--如果细胞膜不 完整、破裂，台盼蓝染料进入细胞，细胞变 蓝，即为坏死。如果细胞膜完整，细胞不为 台盼蓝染色，则为正常细胞或凋亡细胞。
4

细胞倍增时间：生长曲线测定（计数法或MTT法）
Growth Curve 60
（1X104 ） Cell quantity
CD29 ≥70 % 阳性
CD90 ≥70 % 阳性
12
13
诱导分化能力



成骨：茜素红染色 成脂：油红O染色 成软骨：阿利辛蓝/甲苯胺蓝染色
14
成骨诱导

诱导原理：
地塞米松：通过促进Cbfal mRNA（核心结合因子-1） 和 Osterix mRNA（成骨分化必需转录因子）的表达而促进骨 髓基质细胞向成骨细胞分化。 β-甘油磷酸钠：提供磷离子作为ALP 作用的底物，诱导和 激活ALP，促进有机磷向无机磷转化，为钙盐矿化沉积提 供条件。 Vc：一种重要的营养素和氧化还原剂，在骨盐代谢及骨形 成中具有重要作用。在体外，它能增加钙盐的沉积，促进 矿化结节的形成。
CD44 ≥70 % 阳性
CD29 ≥70 % 阳性
CD105 ≥70 % 阳性
名称 检验标准 结论
CD117 ≤5 % 阴性
CD34 ≥70 % 阳性
CD44 ≥70 % 阳性
CD29 ≥70 % 阳性
Sca-1 ≥70 % 阳性
11
胞 细 干 间 肪 脂 鼠 质 大
4.
胞 细 干 质 间 髓 骨 鼠 大
6Leabharlann 生长增殖要求细胞类别 复苏存活率 ≥80 % 增殖速度 按1:3分种率，2～3天可 传代 细胞密度(个/cm2） 人：1.5~2.5X104 大鼠：6x103 小鼠：8x103 兔：2~3x104 狗：1.5~2.5X104 5~10X104 1~5X104 1.5X105
间质干细胞
小鼠胚胎干细胞 人胚胎干细胞 大、小鼠神经干细 胞
8
鉴定方法

形态学：梭型、纤维样贴壁细胞 表面抗原：MSCs属混杂细胞群，其表面抗原也具有非专一性, 它表达了 间质细胞、内皮细胞和表皮细胞的表面标志。主要包括: ①黏附分子, 如 CD166、CD54、CD102、CD44、CD106 等。②生长因子和细胞因子受体, 如白介素21 受体( IL-1R )、IL-3R、IL-4R、IL-6R、IL-7R、C干扰素受体 ( IFN-CR)、肿瘤坏死因子(TNF) -A等。③整合素家族成员, 包括CD49a、 CD49b、CD49c、CD29、CD104 等。④其他如CD90、CD105 等。不表达 造血细胞的表面标志, 如CD34、CD45、CD14、CD3、CD4、CD8 等, 也不 表达与人白细胞抗原(HLA ) 识别有关的共刺激分子及主要组织相容性复合 物类分子如HLA-DR 抗原等。 多向分化能力：如可分化为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、肌腱细胞、 平滑肌细胞、骨髓基质细胞、成纤维细胞及多种血管内皮细胞，甚至神经 系统的神经元和神经胶质细胞
16
Von Kossa染色
确定细胞外基质矿化的方 法，只有成骨细胞在体外 培养时能形成矿化的细胞 外基质，一般培养至 6~8 周即可出现。原理是将矿 化基质中的磷酸盐(钙)、 碳酸盐(钙)转变为磷酸银、 碳酸银，然后用日光、紫 外线或强还原剂使其还原 为黑色的金属银。


9
形态学
梭形、纤维样细胞 原代：克隆样生长 传代后：均质、旋涡状排列
Human
Rat
Mouse
Dog
Monkey
Rabbit
10
定鉴式流（原抗面表 ）
干 间 骨 小 胞 细 质 髓 鼠 细 质 髓 人 胞 干 间 骨 1. 2.
名称 检验标准 结论
CD14 ≤5 % 阴性
CD45 ≤5 % 阴性
50 40 30 20 10 0 1 2 3 4 5 6 7
Day 细胞倍增的时间区间即细胞对数生长期，细胞传代、实验等多应在此区间进行。可在 细胞生长曲线的对数生长期找出细胞增加一倍所需的时间，即倍增时间。
5

细胞周期测定： 碘化丙锭(PI)染色流式检测法
由于细胞周期各时相的DNA 含量不同，通常正常细胞的G1/ G0 期具有二倍体细胞的 DNA 含量(2N) ，而G2/ M 期具有四倍体细胞的DNA 含量(4N) ，而S 期的DNA含量介 于二倍体和四倍体之间。因此，可通过流式细胞术PI染色法对细胞内DNA 含量进行 检测，由此可知细胞周期的分布情况并确知细胞的倍体是否正常。