酶活计算
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比活:每毫克酶蛋白所具有的酶活力。
单位是u/mg。
比活越高则酶越纯。
酶活单位一般都是自己定义的,或是根据行业标准、国家标准定义,一般定义成在适宜的温度PH下,每分钟(或每小时)催化生成1克(或1毫克,或1毫摩尔,等等)产物的酶量。
酶的比活力
1、在特定条件下,单位重量(mg)蛋白质或RNA所具有的酶活力单位数。
2、比活力(性)(Specific Activity)是酶纯度的量度,即指:单位重量的蛋白质中所具有酶的活力单位数,一般用IU/mg蛋白质来表示.一般来说,酶的比活力越高,酶越纯.。
3、比活力为每毫克蛋白质所具有的酶活力单位数,一般用酶活力单位/mg蛋白质表示。
酶的比活力在酶学研究中用来衡量酶的纯度,对于同一种酶来说,比活力越大,酶的纯度越高。
利用比活力的大小可以用来比较酶制剂中单位质量蛋白质的催化能力,是表示酶的纯度高低的一个重要指标。
酶活力(酶活性),就是指:酶催化底物化学反应的能力。
因此,测定酶活力,实际上就是测定酶促反应进行的速度,酶促反应速度越快,酶活力就越大;反之,速
度越慢,酶活力就越小。
二、酶活力单位
酶活力单位是衡量酶活力大小的计量单位。
历史上,对于酶活力单位的规定,没有统一的标准。
对于不同的酶或者同一种酶,由于测定方法的不同,对酶活力的
单位,常常有不同的规定。
例如:蛋白酶的活力单位,规定为:1min 内,将酪蛋白
水解,产生1μg 酪氨酸所需要的酶量,定为一个单位(1U=1μg 酪氨酸/min);淀粉酶
的活力单位,规定为:每小时催化1g 可溶性淀粉液化所需要的酶量,定为一个单位
(1U=1g 淀粉/h);或者,每小时催化1ml 2%可溶性淀粉液化所需要的酶量,定为一
个单位(1U=1×2%淀粉/1h)。
为了统一酶活力单位的计算标准,1961 年,国际生物化学协会酶学委员会对酶活力单位作了下列规定:在指定的反应条件下,1min 内,将1 微摩尔( /4m01)的底物
转化为产物所需要的酶量,定为一个国际单位(1U=1 mol/min)。
如果底物分子有一个
以上可被作用的化学键,则一个酶活力单位,便是1min 使1μmol 有关基团转化,所
需要的酶量。
上述反应条件是:25℃,最适pH,饱和底物浓度。
由于种种原因,上述国际单位未被广泛采用,目前,在许多场合下,仍然采用上述习惯算法。
为了使酶活力单位与国际单位制中的反应速度(mol/s)相一致,1972 年,国际酶学委员会正式推荐用Kat(Katal)作为酶活力单位。
规定为:在最适条件下,每秒钟内,
能使1mol 底物转化成产物所需要的酶量,定为一个Kat 单位(1Kat=1mol/s)。
Kat 与
国际单位(u)的互算关系如下:
1Kat=6×107U
1U=16.7nKat
三、比活力
比活力(比活性)是指:每毫克蛋白质中所具有的酶活力(活力单位数)。
比活力=酶活力(活力单位数)/蛋白质含量(mg)
有时,亦用每克酶制剂含有的活力单位数来表示。
酶制剂的酶含量及纯度常用比活力的大小表示。
比活力较大的酶制剂,其酶含量及纯度较高。
在酶分离提纯过程中,每完成一个关键的实验步骤,都需要测定酶的总活力和比活力,以监视酶的去向。
判断分离提纯方法的优劣和提纯效果,一要看纯化倍数
高不高,二要看总活力的回收率大不大.利用比活力,可以计算分离提纯过程中每
一步骤所得到的酶的纯化倍数:
纯化倍数=酶制剂的比活力/抽提液的比活力
利用总活力可以计算分离提纯过程中每一步骤所得到的酶的回收率:
回收率=(酶制剂的比活力/抽提液的比活力)×100%。