基因治疗原发性肝癌的研究进展(1)

・２６－Ｍｏ，ＩＤｉａｇｎ’ｔｒｅａｔ现代诊断‘ｊ治疗２０１０Ｊａｎ２ｌ（Ｉ）・综述・基因治疗原发性肝癌的研究进展邓娟综述，税青林审校（泸州Ｉ廷学院ｑｉ物学ｔ．ｊ遗传学教研窀．Ｉ几Ｉ川泸，－Ｉ＇１６４６０００）ＲｅｓｅａｒｃｈＰｒｏｇｒｅｓｓｉｎＧｅｎｅＴｈｅｒａｐｙｆｏｒＰｒｉｍａｒｙＨｅｐａｔｉｃＣａｒｃｉｎｏｍａＤＥＮ（；Ｊｕａｎ（Ｂｉｏｌｏｇｙａｎｄ（南ｎｅｔｉｃｓＳｔ够’Ｒｏｏｍ，ＬｕｚｈＯｌｔＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ，Ｌｕｚｈｏｕ６４６０００，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａｔｐｒｅｓｅｎｔ，ｔｈｅｓｔｕｄｉｅｓｉｎｄｉｃａｔｅｔｈａｔｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｍｏｓｔｏｔ’ｍａｌｉｇｎａｎｔｔｕｍｏｒｓｉｓｃｌｏｓｅｌｙｃｏｒｒｅｌａｔｅｄｗｉｔｈｔｈｅｃｈａｎｇｅｏｆｓｏｍｅｄｅｆｉｎｉｌｅｇｅｎｅ．Ｔｈｅｒｅｆｏｒｅ，ｔｕｍｏｒｉｓａｌｓｏｃｏｇｎｉｚｅｄａｓａｋｉｎｄｏｆｇｅｎｏｐａｔｈｙ．ＡＩｏｎｇｗｉｔｈｔｈｅａｆｆｉｒｍａｔｉｏｎｏｆｍｏｒｅａｎｄｍｏｒｅｔｕｍｏｒ—ｒｅｌａｔｅｄｇｅｎｅ，ｇｅｎｅｔｈｅｒａｐｙｏｆｆｅｒｓａｎｅｗｃｈａｎｎｅｌｆｏｒｔｕｍｏｒｔｈｅｒａｐｙ，ａｎｄＯＣ—ｃｕｐｉｅｓａｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｐｏｓｉｔｉｏｎ，ｍｏｒｅｏｖｅｒ，ｉｔｈａｓｂｅｃｏｍｅａｋｉｎｄｏｆｃｏｍｍｏｎｍｅａｎｓＩｏｏｖｅｒｃｏｍｅｔｈｅｔｕｍｏｒ．Ｐｒｉｍａｌ‘Ｙｈｅｐａｔｉｃｃａｒｃｉｎｏｍａ（ＰＨＣ）ｉｓｏｎｅｏｆｍａｌｉｇｎａｎｔｔｕｍｏｒｓｗｉｔｈｔｈｅｈｉｇｈｅｓｔｍｏｒｔａｌｉｔｙｉｔ，ｔｈｅｗｏｒｌｄ．‘ｔｈｅｐｒｏｇｎｏｓｉｓｏｆｍｏｓｔＰＨＣｉｓｖｅｒｙｈａｄ，ＳｏＰＨＣｉｓｃｏｎｓｔａｎｔｌｙａｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｒｅｃｔｉｏｎｏｆｇｅｎｅｔｈｅｒａｐｙｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ．Ｉｎｔｈｉｓｐａｐｅｒ，ｔｈｅｇｅｎｅｔｈｅｒａｐｙｏｆｔｈｅＰＨＣｉｓｒｅｖｉｅｗｅｄ，ｉｎｏｒｄｅｒｔｏｐｒｏｖｉｄｅａｒｅｆｅｒｅｎｃｅｆｏｒｉｔｓｆｕｒｔｈｅｒａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｐｒｉｍａｒｙｈｅｐａｔｉｃｃａｒｃｉｎｏｍａ；Ｇｅｎｅｔｈｅｒａｐｙ摘要：Ｈ前研究表明，人多数恶性肿瘤的发生与某些特定基因的改变密切相关。

因此，肿瘤又被认定是・种基因病。

随着越来越多的肿瘤相关基凶的确认，基因治疗为肿瘤的治疗提供ｒ一条新的途径，且其将在人类攻克肿瘤这一・顽症的过程中，占据重要地位并将成为一种常用手段。

原发性肝癌是ｔｆ｝界范围内死亡率最高的恶性肿瘤之一，且绝大部分原发性肝癌的预后极差，所以原发性肝癌・直是基因治疗研究的・个霞要领域。

本文就基因治疗原发性肝癌的研究进展作一简要综述，旨在为其进一步应用提供参考依据。

关键词：原发性肝癌；基因治疗中圈分类号：Ｒ７３５．７文献标识码：Ａ文章编号：１００１．８１７４（２０１０）０１．．００２６－０４原发性肝癌（Ｐｒｉｍａｒｙｈｅｐａｔｉｃｃａｒｃｉｎｏｍａ，ＰＨＣ）是世界范围内死亡率最高的恶性肿瘤之～，也是我国常见的恶性肿瘤之～，绝大部分肝癌由于无法手术切除，也容易及早侵袭与转移，所以其预后极差，因此原发性肝癌一直是基因治疗研究的一个重要领域。

基因治疗是指通过一定方式将有治疗作用的ＤＮＡ序列导人人体靶细胞去纠正基因的缺陷或者发挥治疗作用。

近年来，随着分子生物学技术的飞速发展，肝癌的基因治疗技术得到了极大的发展。

本文就原发性肝癌基因治疗的现况进行综述。

ｌ肝癌基因治疗的方法１．１抑癌基因的治疗抑癌基因也称为抗癌基因。

抑癌基因的产物是抑制细胞增殖、促进细胞分化、抑制细胞迁移，因此起负调控作用，已发现的抑癌基因有ｐ５３、ｐ１６、Ｒｂ、ＮＦ等，通常认为抑癌基因的突变是隐性的，目前在大多数肿瘤中发现ｐ５３突变，包括』』嗍ｆ胞癌在内的人类恶性肿瘤中至少有５０％发生了ｐ５３琏㈧改变，失去ｒ有功能的ｐ５３蛋白…，因此，ｐ５３基因成为肝癌基因治疗的最佳靶点之一。

已有大量实验初步证明了野生型ｐ５３基因在某些肿瘤治疗方面的潜力∞’３ｊ。

Ｒｅｉｓｅｒ等４。

将腺病毒介导的野生型ｐ５３基冈导入肿瘤中，高表达的外源性ｐ５３蛋白定位于核内，Ｈ伴有ｐ２１及ｂａｘ基因的诱导激活，ｐ５３基因的表达抑制了肿瘤细胞的增殖，同时可诱导肿瘤细胞的凋亡。

ｐ５３ＡＩＰｌ（ｐ５３一ｒｅｇｕｌａｔｅｄａｐｏｐｔｏｓｉｓ—ｉｎｄｕｃｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ１）基因是近年来新发现的ｐ５３基因下游的促凋亡靶基因，其能够抑制肿瘤生长，促进肿瘤细胞的凋亡。

姜云波等。

”构建携带ｐ５３一ＡＩＰｌ基因的重组复制缺陷型腺病毒Ａｄ．ｐ５３ＡＩＰｌ感染人肝癌细胞ＨｅｐＧ２，结果显示，感染Ａｄ．ｐ５３ＡＩＰｌ的ＨｅｐＧ２细胞能够高效表达ｐ５３ＡＩＰｌ蛋白，人肝癌细胞ＨｅｐＧ２的生长抑制率达５０％以～｝：，ｐ５３ＡＩＰＩ使肿瘤细胞周期阻滞于Ｇ，／Ｍ期，ｊ手能涛导肿瘤细胞发生明显凋匕、１．２免疫基因的治疗免疫基因治疗也称为细胞凶Ｍ．ｄＩ）ｉａｇｎｎｍＩｌ脱代诊断‘０ｆ御，２０１０．ｈｍ２１（Ｉ）・２７・子毖凶治疗，址应川分子生物学＾法将－Ｊ免疫钉火的细胞因子摹闲转导入肿瘤或其他免疫效应细胞，使其存机体表达分泌细胞因子或利川其鉴闲增强肿瘤细胞的免疫原性和（或）免疫系统的功能。

可Ｊｔ！于这方面的细胞因子有白细胞介索－２（ＩＬ一２）、白细胞介素一１２（１Ｌ．１２）、ＴＮＦ—Ｏｔ等。

ＩＬ．２对肝癌有商接抗癌作用，可明显抑制肝癌细胞的侵袭力和转移力，其已成为肝癌免疫治疗领域的一种主要细胞因子，已有深入的基础研究和动物实验研究，并已在临床上对中、晚期不可手术切除的原发性肝癌、原发性肝癌部分切除术后及转移性肝癌进行ｒ探讨性治疗，取得了’较为满意的疗效。

Ｙａｎｇ等∞１使用ｍＧＭ－ＣＳＦ／ｈＩＬ－２融合基因转染进入小鼠的Ｈ２２肝癌细胞系，能在此肝癌细胞系中高效表达ｍＧＭ．ＣＳＦ／ｈＩＬ－２融合基因，并能较好的杀死小鼠的Ｈ２２肝癌细胞以及延长小鼠的生存期。

白介素．１２（ＩＬ—１２）具有强大的抗肿瘤活性及抗转移作用。

Ｃｈａｎｇ等ｏ¨通过动物实验证明，瘤内注射腺病毒载体介导的ＩＬ．１２基因对体表肝移植瘤具有明姓的治疗效果，且经由肝动脉注射腺病毒载体介导的ＩＬ－１２基因，刈‘二乙基亚硝胺诱导产生的原发性多病灶肝癌同样具有强大的抗肿瘤作用。

ＴＮＦ一仪因其能在体内和体外特异地杀伤肿瘤细胞而不损伤正常细胞等优点，被认为是很有潜力的抗癌药物之一。

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（ＴＲＡＩＬ）是近年来发现的极具潜力的抗肿’瘤药物，不仅诱导被病毒感染的细胞、转化细胞和肿瘤细胞凋亡，而对正常组织及细胞几乎没有毒性作用旧’９１。

’Ｉ．３反义基因的治疗？反义基因治疗（Ａｎｔｉｓｅｎｓｅｇｅｎｅｔｈｅｒａｐｙ）即利用反义核酸与其靶基因或基因产物互补形成一种特殊的“基因封条”结构，在转录或翻泽水平阻断靶基因的异常表达，促进细胞正常分化或诱导细胞凋亡，以达到治疗肿瘤的目的。

反义核酸所针对的靶点应该是在肿瘤发生中起关键作用的一种或几种癌基因、抗癌基因、自分泌生长因子及其受体基凶。

主要包括反义ＤＮＡ、反义ＲＮＡ和核酶三类。

ｓｕ等…ｌ用人端粒酶反转录酶的反义寡核苷酸（Ａｓ—ｈＴＥＲＴ）处理ＨｅｐＧ２．２．１５细胞后发现肿瘤细胞的端粒酶活性被抑制、致癌作用降低，提示Ａｓ—ｈＴＥＲＴ具有抗肿瘤作用。

Ｓｕｒｖｉｖｉｎ对细胞凋亡的抑制及其在肿瘤细胞中表达的特异性，使得以Ｓｕｒｖｉｖｉｎ为靶点治疗恶性肿瘤的设想成为近年来研究新热点。

将人工合成的Ｓｕｒｖｉｖｉｎ反义寡核苷酸、反义ＲＮＡ和负显性突变体导入肿瘤细胞均能抑制Ｓｕｒｖｉｖｉｎ基因表达，促进肿瘤细胞凋亡。

戴德坚等…１研究证实反义Ｓｕｒｖｉｖｉｎ脂质体复合物对肝癌细胞有较强的生长抑制效应，其机制与阻断细胞周期及绣导细胞捌亡仃火。

１．４自杀基因的治疗肿瘤ｌ｜＿１杀慕凶（ＳｕＭｄｅｇｅｎｅ）疗法义称为病毒导向的酶解药物前体疗法（Ｖｉｎｅｓ—ｄｉ－ｒｅｃｔｅｄｅｎｚｙｍｅｐｒｏ—ｄｒｕｇｔｈｅｒａｐｙ，ＶＤＥＰＴ）。

其原理是某些病毒、细菌中特有的前药转换酶摹闪即自杀基因，用基因二ｌ：程技术构建在一定的表达载体Ｌ，并导人肿瘤细胞中。

自杀基因的特异性酶类能将无毒药物前体在肿瘤细胞中代谢成毒性药物，达到杀死肿瘤的目的。

目前，针对肝癌基冈治疗研究有：单纯疱疹病毒Ｉ型胸腺嘧啶激酶／无环呜苷（ＨＳＶ—ＴＫ／ＧＣＶ）系统、胞嘧啶脱氨酶／５一氟胞嘧啶（ＣＤ／５．ＦＣ）系统等‘。

自杀基因治疗恶性肿瘤时存在的“旁观者”效应（Ｂｙｓｔａｎｄｅｒｅｆｆｅｃｔ）也越来越受到重视，它是指携带Ｊ；｛＿１杀基因的细胞被敏感性药物杀伤的同时，其周围无自杀基因的肿瘤细胞也被累及的现象。

单纯疱疹病毒胸腺嘧啶激酶丙氧鸟苷（ＨＳＶ－ＴＫ—ＧＣＶ）系统小仪可以杀死转染ｊ，ＨＳＶ—ＴＫ基因的肝癌细胞，还ｉ叮通过旁观者效应杀死周围未转染的肘：癌细胞，目前匕进入３期临床试验【１２Ｉ。

向肝脏肿瘤注射ＣＤ．５．Ｆｃ除ＩＩ“［接杀死转染ｒＣＤ基因的肝癌细胞外，旁观者效臆也存在，另外还町诱导及增啦宿主的免疫系统功能，活化淋巴细胞¨３｜。

１．５ＲＮＡｔ：扰技术ＲＮＡ１：扰（ＲＮＡｉｎｔｅｒｆｅｒｅｌ＇ｌ（＇，｜ｅ，ＲＮＡｉ）是一种在真核！Ｅ物体・｝ＩＪ’‘泛存在的通过双链ＲＮＡ分子在ｍＲＮＡ水平上诱导特异性序列基因表达部分或完全抑制的过程，具有高靶向性、高稳定性、高效率性、小分子性、高特异性及高穿透性等特点，其抗肿瘤治疗的应用前景广阔。

Ｌｉ等¨４１用腺病毒载体转运ｓｉＲＮＡ抑制肝癌细胞株中癌基因Ｐ２８ＧＡＮＫ，导致８０％的细胞株中Ｐ２８ＧＡＮＫ活。

陀受抑制。

黄秋林等¨５成功构建ＶＥＧＦｓｉＲＮＡ表达载体，将其转染ＨｅｐＧ２细胞，并能有效抑制ＨｅｐＧ２细胞ＶＥＧＦ基因表达。

１．６抗ｍ管生成基凶治疗肿瘤细胞的生长依赖于能提供肿瘤营养的新生血管。

凶此，抑制肿瘤血管形成町以导致肝癌细胞衰退。

抗血管生成基因治疗的因子包括内皮抑索、血管抑素和干扰素－仅。

本疗法的机理是基于肿瘤和正常内皮细胞之间基因表达的差异，因而选择性抑制肿瘤内皮细胞中异常基因的表达，抑制肿瘤血管的生成，从而达到治疗肿瘤的目的。

将编码血管他丁的真核表达载体ｐＳｅｃＴａ９２Ｂ－ＡＮＧ转染人ＨＣＣ细胞，然后和未转染的ＨＣＣ细胞按一定比例混合，分别接种裸鼠皮下，发现肿瘤的抑制效果和接种ｐＳｅｃＴａ９２Ｂ—ＡＮＧ转染的ＨＣＣ细胞数量成正比，而且还发现肿瘤的抑制效果和血管的抑制效果明显相关¨６｜。

Ｇｕ等¨叫用已插入反义ＶＥＧＦ（１６５）ｃＤＮＡ的ｐｃＤＮＡ３ＭｏｄＤｉａｇｎＴｒｅａｔ现代诊断与治疗２０１０Ｊａｎ２１（１）质粒转染ＳＭＭＣ－７７２１肝癌细胞，发现可以诱导ＳＭＭＣ－７７２１细胞的凋亡。