免疫学技术及其应用PPT课件

医学免疫学全套完整版PPT 课件
2024/1/30
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目录
2024/1/30
• 免疫学概述 • 抗原与抗体 • 固有免疫系统 • 适应性免疫系统 • 免疫应答调节与异常 • 免疫学应用与展望
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免疫学概述
2024/1/30
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免疫学定义与研究对象
2024/1/30
免疫学定义
研究生物体对抗原的识别、应答 及排除的科学。
细胞因子在适应性免疫中作用
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参与免疫细胞活化、增殖、分化及效应功能的调节，对固有免
疫和适应性免疫应答均有重要作用。
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免疫应答调节与异常
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免疫应答调节机制
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固有免疫应答的调节
通过模式识别受体（PRR）识别病原体相关分子模式（PAMP），启动固有免疫应答，并 通过正反馈机制放大应答。
旁路途径
又称替代途径，由微生物或外援异物直接激活， 不依赖于抗体。
凝集素途径
通过识别病原体表面的甘露糖等糖类分子而激活 ，参与固有免疫应答的早期阶段。
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补体系统激活途径和效应
溶解作用
直接溶解某些细菌和病毒感染的 细胞。
免疫调节作用
参与适应性免疫应答的调节和激 活。
01
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调理作用
促进吞噬细胞对病原体的吞噬和 清除。
03
04
炎症介质作用
参与炎症反应，吸引和激活炎症 细胞。
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04
适应性免疫系统
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ห้องสมุดไป่ตู้
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T淋巴细胞活化、增殖与分化

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抗原抗体反应类型
反应类型
中和反应
实验技术
病毒中和试验
结果判断
检测病毒感染性
毒素中和试验
标记免疫反应 荧光免疫技术 放射免疫技术 酶免疫技术 发光免疫技术 金免疫技术
检测外毒素毒性
检测荧光现象 检测放射性强度 检测酶底物显色 检测发光强度 检测金颗粒沉淀
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抗原抗体反应类型
标记免疫技术：用荧光物质、放射性核素、酶或化学发光 物质等标记抗原或抗体，进行抗原抗体反应后，通过检测 标记物对抗原或抗体进行定性、定位或定量分析
标准品抗原浓度测定
抗原浓度 (4)测定沉淀环直径 (5)在标准曲线上查找相应 抗原浓度
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沉淀反应
双向琼脂扩散
(1)抗原抗体双向自由扩散 (2)24小时出结果 (3)呈现沉淀线或弧
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免疫酶技术
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免疫荧光技术
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金免疫标记技术
手持端 兔抗鼠IgG 鼠抗HCG单抗
金标鼠抗HCG单抗
尿液浸湿标志线
斑点金免疫层析试验检测HCG
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金免疫标记技术
阳性
弱阳性
阴性
无效
质控线 测试线
尿样
斑点金免疫层析试验检测HCG
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免疫细胞检测
非特异性免疫细胞检测 中性粒细胞运动、吞噬和杀菌功能检测 巨噬细胞检测 NK细胞检测 特异性免疫细胞检测 T细胞亚群、数量、功能检测 B细胞功能检测
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抗原、抗体诊断技术
凝集反应：直接、间接（正向、反向、抑制）、协同
体 外 抗 原 － 抗 体 诊 断 技 术
血清学试验
沉淀反应：液相（比浊技术）、凝胶（扩散、电泳） 补体参与的反应：溶血试验、补体结合试验

半抗原与载体间接联接
2019-7-2
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O-（羟甲基）羟胺法
半抗原-C=O +H2 N-O- CH2 - COOH
半抗原-C=N-O- CH2 - COOH
半抗原与载体间接联接
2019-7-2
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一氯醋酸钠法
半抗原-
- OH + Cl- CH2 - COONa
半抗原-
- CH2 - COOH
免疫反应性 ——选择结合性 （和免疫应答产物特异性结合的特性）
2019-7-2
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免疫细胞的概念与分类
免疫细胞（Immune cells） 泛指所有参与免疫应答及与免疫应答活动相关
的细胞。
免疫活性细胞（Immune competent cell，ICC） 能够接受抗原刺激、产生特异性的活化、增殖、
OO 半抗原-C-O-C-O-CH2CH（CH3）2 + 蛋白质- NH2
半抗原-CO- NH -蛋白质 + HO-CH2CH（CH3）2
半抗原与载体直接联接
2019-7-2
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琥珀酸酐法
OO 半抗原-CH2 –OH + C-O-C
CH3 CH3
O 半抗原-CH2 –O-C-(CH2 ) 2-COOH
2019-7-2
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1
2019-7-2
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2
第一节 免疫学技术的范畴与应用
一、免疫学技术的范畴 二、免疫学技术的应用特点
2019-7-2
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3
免疫学技术的范畴
1、对具有免疫活性物质的定性、 定量测定

免疫学应用
免疫预防：利用各 种生物或非生物制 剂来建立机体的免 疫应答，以达到预 防疾病的目的。
用免疫学原理， 防病、治病所 采取的措施
免疫治疗：应用免 疫学原理，针对疾 病的发生机制，增 强机体的免疫功能， 以达到治疗目的所 采取的措施。
特
自然
自然主动免疫：自然感染
异
免疫
自然被动免疫： IgG通过胎盘、初乳SIgA
较好，维持3-5年甚至更长时间
较小,但有毒力回复突变
3.人工被动免疫生物制品
✓抗毒素：外/类毒素→马→Ab ✓人丙种球蛋白：血浆和胎盘丙种球蛋白 ✓细胞因子
✓单抗/基因工程抗体
人工被动免疫注意事项
提示
✓注意防止超敏反应 ✓早期和足量 ✓不滥用丙球
被动免疫不能激活免疫系 统，故不能产生记忆反应， 其保护作用是短暂的。
6个月 乙肝疫苗（第3针）
1个月 2个月
3个月
乙肝疫苗（第2针）
三价脊灰疫苗（初服） 三价脊灰疫苗（复服），百白破（第 1针）
8个月 1.5岁
4岁
麻疹疫苗（初种）
三价脊灰疫苗（加服），百白破 （加强）
三价脊灰疫苗（加服），麻疹疫苗 （复种）
4个月
三价脊灰疫苗（复服），百白破（第 2针）
7岁
BCG（复种），麻疹疫苗（复种）， 百白破（加强）
4 ．新型疫苗
1）亚单位疫苗：提取有效免疫原成分。如HA、NA，HBSAg 2）合成肽疫苗：人工合成抗原肽。 3）基因工程疫苗
编码免疫原基因→载体→体内 ↓
酵母菌、大肠杆菌（体外培养）
如：重组抗原疫苗、重组载体疫苗、DNA疫苗、转基因植物疫苗
5.计划免疫 我国儿童计划免疫程序
年龄

接种次数 免疫力出现时间 免疫力维持时间
用途
多用于预防
二、免 疫 治 疗
•概念：指针对机体低下或亢进的免疫状态，人为地增强 或抑制机体的免疫功能达到治疗疾病的治疗方法。
•用于免疫治疗的制剂：抗体、细胞因子及其拮抗剂、免 疫细胞、免疫增强剂和免疫抑制剂。
•分类（作用机制）： 1、被动免疫治疗 被动增强：抗体、免疫效应细胞、小分子免疫肽
免疫重建
定义：将免疫功能正常个体的造血干细胞或 淋巴干细胞，移植给免疫缺陷个体，使后 者的造血能力、免疫功能全部或部分得 到恢复。 方法：骨髓移植、脐血干细胞移植
作用：治疗免疫缺陷病、白血病、再障
（五）采用免疫增强剂进行的免疫治疗
免疫因子：有转移因子和免疫核糖核酸 化学合成药物：左旋咪唑→T↑NK↑，西咪替丁→Ts↓ 微生物制剂：有卡介苗和短小棒状杆菌→Mφ↑→CK↑
•
人工被动免疫生物制品
抗毒素：外/类毒素→马→Ab 人丙种球蛋白：人血浆丙种球蛋白和胎盘球蛋白
细胞因子
单抗/基因工程抗体
•

人工被动免疫注意事项 注意防止超敏反应 早期和足量 被动免疫不能激活 不滥用丙球 免疫系统，所以， 不能产生记忆反应， 其保护作用是短暂 的。
马血清抗毒素的两重性：
检测抗原和抗体的体外实验
1．抗原抗体检测原理 抗原抗体特异性结合 检测。 2．血清学反应(血清学实验)：体外的抗原抗体反应。 3．抗原抗体反应的特点
特异性：抗原-抗体的结合。 可逆性：抗原抗体结合是分子表面的非 共价键结合。 比例性：抗原和抗体结合是否呈现可见的反应现象，于两者的分子比例 密切相关。 阶段性：抗原抗体反应可分为两个阶段
免疫学应用
应用免疫学理论阐明有关疾病的发病机制和发展规律

（1）鉴定病原菌：诊断疾病 （2）检测肿瘤相关抗原：检测甲胎蛋白以诊断肝癌 （3）检测血型抗原、HLA抗原：鉴定血型，亲子鉴定 （4）检测药物半抗原： 确认运动员是否服用兴奋剂
（二） 抗原或抗体的检测方法
凝集反应 沉淀反应 补体参与的抗原抗体反应 免疫标记技术
颗粒性抗原（红细胞、细菌、 乳胶颗粒等 ）与抗体特异性结合，形成肉眼可见的凝集块。
副作用：明显 ，主要是骨髓抑制、肝肾毒性等
其抑制作用是非特异性的，长期应用可导致：继 发性免疫缺陷 、 严重感染、 肿瘤
抗体为基础的免疫治疗
一、免疫血清
抗毒素血清、胎盘（丙种）球蛋白、抗菌免疫血清、抗病毒免疫血清、抗 淋巴细胞丙种球蛋白等
二、单克隆抗体（mAb）：用于靶向治疗等。 三、基因工程抗体：降低抗体的免疫原性
化学制剂 1、烷化剂：环磷酰胺 2、抗代谢药：激素：糖皮质激素 真菌代谢产物 1、 环孢素A：对T，尤其是TH有较好的选择性抑制作用 2、FK-506：其作用强于环孢素A10-100倍，且与环孢素A
有明显的协同作用。 中药及其有效成分 雷公藤多甙
适应症：免疫功能过高引起机体损害的患者
1、抗移植排斥 2、超敏反应性疾病：激素 3、自身免疫病：激素、雷公藤多甙 4、感染性炎症：激素
3、细胞因子检测
可用于鉴定分离的淋巴细胞亚群，监测某些疾病状态的细胞免疫功 能。IL-2、IL-2R、rIFN 、TNF等检测。 ①免疫学方法：ELISA、RIA等。 ②细胞生物学方法
③分子生物学方法，如聚合酶链反应（PCR）法等
4、体内免疫细胞功能测定：皮肤试验
（1）迟发型超敏反应：旧结核菌素试验（ OT试验 ） 皮试（+）——有一定的细胞免疫能力 皮试（—）——细胞免疫功能缺损

2019-10-13
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抗原抗体结合物析出的原因
+++ ——+— —
+++———
———+++
——— ++—+ +
电解质
析出
2019-10-13
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抗原抗体反应的特点
1、特异性
2、可逆性
3、适合比例性
2019-10-13
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特异性
特异性反应
交叉反应
无反应
抗原A
2019-10-13
抗原B
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抗原C
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可逆性
K（亲和常数）=
Ag+Ab Ag Ab
2019-10-13
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适合比例性
抗体含量
抗原含量
前带
2019-10-13
等价带
谢谢关注
后带
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抗体过剩
抗体抗体比例合适
抗原过剩
网格学说（lattice 2019-10-13
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theory）
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抗原抗体反应的影响因素
OO 半抗原-C-O-C-O-CH2CH（CH3）2 + 蛋白质- NH2
半抗原-CO- NH -蛋白质 + HO-CH2CH（CH3）2
半抗原与载体直接联接
2019-10-13
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琥珀酸酐法
OO 半抗原-CH2 –OH + C-O-C
CH3 CH3
O 半抗原-CH2 –O-C-(CH2 ) 2-COOH

将PHA注射于受试者前臂屈侧皮内， 6-12小时后局部出现红斑硬结，24-48 小时达高峰，即为阳性反应，常用于检 测细胞免疫水平。
祝愿 同学 们前 程似 锦！
免疫标记技术：——免疫荧光技术
免疫荧光直接法
免疫荧光间接法
免疫标记技术：——免疫酶技术
1、包被抗体 洗
1、包被抗原 洗
2、加抗原 洗
2、加抗体 洗
3、加酶标抗体 洗
3、加酶标抗球 蛋白
洗
4、加底物显色 ELISA双抗体夹心法
4、加底物显色 ELISA间接法
免疫标记技术：—放射免疫测定法（RIA）
细胞免疫检测——T细胞亚群测定
用间接荧光法 检测CD4和CD8 T细胞
CD4/CD8正常 比值为1.7-2.0左 右。
细胞免疫检测——淋巴细胞转化试验
---细胞介导的细胞毒试验
B细胞的检测
B细胞数量的检测 (1)膜表面免疫球蛋白(SmIg)的检测：SmIg是 B细胞特有的表面标志，因此是鉴定B细胞的可 靠指标。用抗SmIg抗体，借助直接免疫荧光法 或免疫组织化学法进行检测。
(2)间接免疫荧光法：应用针对B细胞表面抗 原(CDl9、CD20、CD21、CD22等)的特异性 单克隆抗体，以间接免疫荧光法对B细胞进 行鉴定和计数。
B细胞功能测定
B细胞增生试验 原理与T细胞增生试验相同； 但刺激物主要为美洲商陆(PWM)、富
含SPA的金葡菌、细菌脂多糖等。
体内免疫学检测
放射免疫测定法（RIA）是将放射性核 素分析的灵敏性和抗原抗体反应的特异性结 合的测定技术。具有灵敏、精确、特异性高、 易规范化及自动化等优点的一种先进的免疫 标记技术。
免疫标记技术：—金免疫技术（金标法）

ELISA法
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案例 疫苗接种（供PBL用）
• 钱浣纱，女，27岁，一年前结婚，早已腹部高耸，现 已进入临产期。常言道：“十月怀胎，一朝分娩”， 虽然孕期千般辛苦，万般不易，总算要做妈妈了，一 想到这里，只有甜蜜和一丝紧张。早晨起床，浣纱感 到腹部阵痛，丈夫将她送入妇婴医院。医生检查后告 诉她的丈夫，孕妇已进入临产潜伏期，收住院，各项 检查正常。
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二、免疫治疗
免疫增强疗法： 感染、肿瘤、免疫缺陷 免疫抑制疗法： 超敏反应、自身免疫病、
移植排斥
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自学内容如下：
1、免疫诊断的原理：由于抗原与抗体在体外能特异性 结合，用已知的抗原来检测未知的抗体，或用已知的 抗体来检测未知的抗原。
抗原与抗体在体外结合的反应又称血清学反应或 血清学实验。（临床多用血清标本，因抗体在此） 2、抗原抗体反应的特点 3、抗原抗体反应的影响因素 4、常用的抗原抗体检测方法
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• 医护人员忙着为新生儿进行常规处置和检查。
• 1、处置 结扎剪断脐带，消毒；擦净手足胎脂，在病例上 留下自己特有的足纹和指纹。
• 2、查体 母亲姓名，钱浣纱；性别，男；体重4.12 Kg；出 生时间，1996年4月6日22时。发育正常，四肢活动良好， 皮肤红润，巩膜无黄染；心率120次/min，呼吸42次/min， 血压9.4/6.8Kpa，偶有咳嗽。
• （2）人工免疫有几种类型？
一是人工自动（主动）免疫，就是应用抗原进行人工接种， 使机体自己建立免疫力，达到预防传染性疾病的目的，免疫 力维持时间较长；
二是人工被动免疫，主要应用抗体注入机体中，以快速发挥
紧急预防和治疗作用，免疫力维持时间较短，仅是抗体IgG
的半衰期。由于目前所用的大部分抗体为动物血清，与人类

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第一节 抗原与抗体
二、抗 体 2、抗体的基本结构
两条重链(H链) 440个氨基酸残基组成，分子量约50～70kD 二硫键(-S·S-)
两条轻链(H链) 220个氨基酸组成，分子量约22.5kD。
根据重链的氨基酸顺序同源程度的差异，可将Ig分为类和亚 类。人的免疫球蛋白共5类：IgG 、IgA 、Ig M、IgD和IgE
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第一节 抗原与抗体
一、抗 原
2、抗原的种类 按抗原性的完整与否及其在机体内刺激抗体产生的特点， 可分为完全抗原和不完全抗原。
（1）完全抗原与不完全抗原 ①完全抗原 既有免疫原性又有反应原性。即能刺激机体产生抗体，并 与产生的抗体在体内或体外(试管内)发生反应的抗原。 如细菌、病毒、外毒素、血清白蛋白、花粉蛋白、 ②不完全抗原（半抗原） 只有反应原性而没有免疫原性。即不能单独刺激机体产生 抗体，若与蛋白质或胶体颗粒结合，形成大分子复合物成 为完全抗原，则可刺激机体产生抗体。 如各种低分子量的药物、脂类和多糖等都属于不完全抗原。
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第一节 抗原与抗体
二、抗 体 4、人工制备抗体
（3）基因工程抗体（重组抗体）
在基因水平上对Ig分子进行切割、拼接或修饰，重新组装成的 新型抗体分子。。
特点：保留天然抗体的特异性和主要生物学活性，去除或减少 了无关结构，并可赋予抗体分子以新的生物学活性。
迄今已成功构建多种基因工程抗体，如人-鼠嵌合抗体、人源化 抗体、单链抗体(ScFv)、双特异性抗体(BsAb)及噬菌体抗体等。
2.免疫系统
免疫系统：具有自身的运行机制并可与其他系统相互 配合、相互制约，共同维持机体在生命过程中总的生 理平衡。
免疫系统的任务是消灭“异己”
“异己”来自两个方面: (1)外来的入侵者：