大鼠心肌缺血-再灌注损伤模型的改良及实验观察

中国医科大学研究生学位论文独创性声明

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取得的研究成果．据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论

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究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意．

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腺苷对大鼠心肌缺血再灌注损伤保护

作用的实验研究

前言

持续性心肌缺血可使细胞发生缺血性损伤，恢复血液再灌注，可使可逆性缺血损伤加重，或使其转化为不可逆性损伤，这种现象称为心肌缺血再灌

注损伤（ＭＩＲＩ）。目前，ＭＩＲＩ已成为阻碍缺血心肌从再灌注疗法中获得最佳疗效的主要难题。故探索具有良好保护作用的药物尤为重要。

本实验欲通过大鼠的心肌缺血／再灌注（Ｉ／Ｒ）损伤模型，观察腺苷对在体大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用，探讨其可能的作用机制。

材料和方法

选健康Ｗｉｓｔｅｒ大鼠４２只，体重２５０９±３０９，雌雄各半，按随机化原则分

成３组。Ｉ组１４只为假手术组，Ⅱ组１４只为对照组，Ⅲ组１４只为腺苷组。制作心肌缺血／再灌注（ｔ／Ｒ）模型。假手术组：完成模型操作，只穿线不结

扎冠状动脉。腺苷组：完成模型操作，穿线结扎冠状动脉３０分钟，再灌注

第6卷　第4期解剖科学进展Vol16　No14

2000年PROGRESSOFANATOMICALSCIENCES2000

大鼠心肌缺血󰃗再灌注损伤模型的改进与评价

王淑侠　兰小莉1　王吉文2　裴著果

(中国医科大学第二临床学院核医学科　沈阳110003)

摘要　大鼠心肌缺血󰃗再灌注损伤是模拟人类心梗及溶栓再通治疗,研究缺血预适应机制,评价抗心律失

常药物疗效常用的动物模型。本文在传统造模方法的基础上进行了一定的改进,采用在压管下加一小垫片的

方法,减少了传统推管法对心表面的机械损伤,方法简便,冠脉阻断确实。结果:大鼠左冠状动脉主干缺血

30′,再灌120′,危险区󰃗左室重量比为55%±5%,坏死区󰃗危险区为58%±6%(N=10)。心肌酶谱结果:

CK4301±251u󰃗l,CK2MB2288±328u󰃗l,LDH2329±216u󰃗l,AST371±57u󰃗l(N=5)。

关键词　心肌再灌注损伤;大鼠;模型,TTC染色法

阻断冠状动脉造成急性心肌梗塞并在预定时间

内恢复血供予以再灌注是模拟人类心梗及溶栓再通

治疗常用的实验研究方法。大鼠以其冠脉侧支循环

缺乏、心肌坏死出现早、心律失常发生率高、重复性、

稳定性好、费用低廉而成为制作该疾病模型[1],特别

是硕、博士研究生进行课题实验首选的实验动物。笔

者在进行心肌缺血预适应机制的研究中,参照以往

文献记载的方法[2～4],并根据本实验室条件,对该模

型的制作方法进行了一定的改进,现报告如下:

1　材料与方法

111　材料

健康雄性Wistar大鼠,体重240～350g(由中

国医科大学实验动物部提供);NiHonKonden型心

电图机(上海KONDEN医用电子仪器厂);小动物

呼吸机(浙江医科大学医学仪器实验厂);自制简易

血压计(由24号套管针、三通开关、U形管内装水

银,管旁边附有直尺做刻度组成);红四氮唑(TTC)

由上海第三试剂厂生产;批号970924用前以

011M1PH714的磷酸缓冲液配成1%溶液;伊文斯

“瓜蒌—薤白”药对对大鼠心肌缺血再灌注损伤保护作用的研究

“瓜蒌—薤白”药对大鼠心肌缺血再灌注损伤保护作用的研究

摘要：本实验旨在探究“瓜蒌—薤白”药对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用。通过建立大鼠心肌缺血再灌注损伤模型，应用“瓜蒌—薤白”药进行干预，并研究其在心肌缺血再灌注损伤中的生物学效应。结果显示，“瓜蒌—薤白”药可以显著改善大鼠心肌缺血再灌注损伤，减轻心肌损伤程度，降低心肌标志物的含量，并通过一系列的机制调节心肌细胞凋亡、炎症反应和氧化应激反应等，具有潜在的临床应用价值。

关键词：瓜蒌—薤白药；心肌缺血再灌注损伤；心肌损伤；生物学效应；机制调节

引言

心肌缺血再灌注损伤是冠心病等心血管疾病中的常见并发症，其严重程度和发病率直接影响患者的生活质量和预后。目前，虽然冠状动脉再灌注治疗可以缓解心肌缺血，但再灌注本身也可导致一系列的心肌损伤反应，进一步加重心肌细胞损伤。因此，寻找一种有效的药物干预手段，保护心肌细胞免受再灌注损伤的影响，对于心肌缺血再灌注损伤的治疗具有重要的意义。

方法

动物模型与药物介入

将60只雄性SD大鼠，随机分为对照组、模型组和干预组，每组20只。对照组仅进行手术操作而不处理，模型组大鼠在缺血再灌注损伤前给予等体积的生理盐水腹腔注射，干预组则给予相同体积的“瓜蒌—薤白”药溶液。缺血再灌注损伤模型在麻醉后分别通过结扎左前降支和再灌注的方式建立。然后记录大鼠在缺血再灌注过程中的相关指标，并收集心脏组织进行病理学分析。

指标的测定

观察大鼠在缺血再灌注过程中的血流动力学指标，包括收缩压、舒张压和心率的变化情况。同时，采用心肌标志物如肌酸激酶同工酶（CK-MB）、乳酸脱氢酶（LDH）以及肌钙蛋白I（cTnI）的测定来评价心肌损伤的程度。

病理学分析

取出大鼠心脏组织，进行HE染色和免疫组化染色，观察心肌组织的病理学变化，同时测定肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和血管内皮生长因子（VEGF）的表达情况。

缺血再灌注损伤模型的建立及药物处理对损伤保护机制探讨

讨论时间：2011年11月30日星期三

讨论地点：逸夫楼417

讨论人员：09基础医学专业

小组成员：90905113 刘亮（主讲）

90905106 于震维

90905107 何博

90905115 王小杰

90905116 朱枫

讨论内容：如下

讨论形式：PPT展示，同学提问

1. 背景：

1) introduction：

良好的血液循环是组织细胞获得充足的氧和营养物质并排出代谢产物的基本保证，任何原因造成的组织血液灌流量减少均可使细胞发生缺血性损伤。因此，尽早恢复缺血器官的血液再灌注是减少器官缺血性损伤的根本措施，近年来广泛开展的药物溶栓、经皮腔内冠脉成形术、冠脉搭桥术等治疗手段的目的均在于恢复对缺血器官的再灌注。人们发现，当心肌较长时间缺血后再灌注非但没有减轻缺血损伤，反而扩大了缺血性损伤的范围，或者使缺血组织器官由可逆性损伤转化为不可逆性损伤，出现明显的功能障碍。这种缺血器官在恢复血液灌注后缺血性损伤的进一步加重的现象，称为缺血—再灌注损伤（ischemia-reperfusion

injury）。

2) Influence factors of ischemia-reperfusion injury:

a) Duration

of ischemia:阻断狗冠脉左旋支15-20min后再灌注，室颤率高达25%~50%。一般15min~40min效果较好。

b) Conditions of reperfusion fluid:钙反常、氧反常、PH反常

c) Functional state of organs before ischemia:再灌注前组织器官的能量储备及血液循环侧支代偿情况。严重的心肌肥厚、广泛性冠脉病变等，因心肌ATP严重贮备不足或Ca2+的转运障碍，较易发生ischemia-reperfusion injury。