大鼠脑缺血再灌注损伤模型评价与分析

一２４一　湖北中医杂志２０１３年１月第３５卷第１期　

滋阴填髓益脑法对局灶性脑缺血一再灌注慢性损伤大鼠　

Ｂｃｌ一２和Ｂａｘ表达的影响　

丁念’，邹亮　，周晶　，指导：张觉人。　

（１．武汉市中医医院，湖北武汉４３００１４；２．武汉市第一医院，湖北武汉４３００２２）　

摘要：目的观察滋阴填髓益脑法对脑缺血再灌注损伤大鼠Ｂｄ一２和Ｂａｘ表达的影响。方法采用线栓法建立大鼠大脑中动脉阻　

塞（ＭＣＡＯ）模型，采用链酶亲和素一生物素复合物（ＳＡＢＣ）免疫组化染色方法检测Ｂｅｌ一２和Ｂａｘ的表达。结果　滋阴填髓益脑法对　

缺血性大鼠Ｂｅｌ一２表达显著增加，而Ｂａｘ表达却相对减少，上调Ｂｃｌ一２／Ｂａｘ的比值。结论　滋阴填髓益脑法在大鼠脑缺血再灌注实　

验中可以减少再灌注损伤后出现的细胞凋亡。　

关键词：局灶性脑缺血；大鼠；滋阴填髓益脑法；Ｂｅ１—２；Ｂａｘ；实验研究　

中图分类号：Ｒ７４３　文献标识码：Ａ　文章编号：１０００一ｏ７０４（２０１３）叭一００２４—０３　

滋阴填髓益脑法及滋阴填髓益脑方系我省知名中医张觉人　

教授在多年临床经验上，结合中医辨证论治理论研制而成的纯　

中药制剂。是通过滋阴填髓益脑以髓海得充、亢阳得制的一种　

治法，临床运用于髓海不足的缺血性卒中特别是头颅ＣＴ、ＭＲＩ提　

示的腔隙性脑梗死已取得很好的疗效　。　

本课题前期研究发现，滋阴填髓益脑法治疗缺血性中风的　

机制，可能是通过提高缺血再灌注慢性损伤大鼠的血清Ｔ—　

ＳＯＤ、Ｃｕ—Ｚｎ—ＳＯＤ活性，降低血清ＭＤＡ浓度，有抗脑缺血再灌　

注损伤时脂质化过程，从而发挥脑保护的作用　。本实验采用　

大鼠局灶性脑缺血再灌注模型，观察术后大鼠神经行为学、组织　

病理学改变、免疫组化染色方法检测Ｂｅｌ一２和Ｂａｘ蛋白，进一步　

加深我们对腔隙性脑梗死损伤机制的理解，为滋阴填髓益脑法　

治疗腔隙性脑梗死进一步提供可靠的理论依据。　

１材料与方法　

１．１　实验动物　

雄性ｓＤ大鼠，ＳＰＦ级，体重２５％一２８０ｇ，华中科技大学同济　

脑缺血模型分为全脑缺血和局灶性缺血模型两种。全脑缺血对于慢性脑缺血及一些特殊领域研究具有较高的价值，但因其对全身影响较大，梗死不稳定等缺点，并且，临床上的脑缺血患者通常为局灶性缺血，因此临床应用价值相对较低，目前应用相对较少。局灶性缺血与全脑缺血相比， 可形成特定部位的脑梗死并进行再灌注，对全身影响较少，与人发病情况更相似，目前应用更为广泛。

全脑缺血模型

1 两血管阻断法：Ekloef 等（Ginsberget al.,1989）首先提出这种模型, 即关闭大鼠双侧颈总动脉(CCA), 同时降低血压。制造低血压有两种方法: 通过尾动脉放血降低血压, 使用降压药三甲噻方或酚妥拉明把血压降到50 mmHg (7.5 mmHg

=1kPa)。其优点是操作简单方便;缺点是存在侧支循环, 缺血不完全, 血压的轻微波动会影响实验结果,低血压会严重干扰其他器官和组织的供血（李月玲et

al.,1989）。该模型还不能再清醒动物进行, 无法进行神经行为的观察。可用来进行脑缺血后脑血流、神经递质的变化以及低温神经保护等，适合慢性期研究（张拥波et al.,2007）。在该法基础上改进可制作血管性痴呆模型，如高脂饲养加两血管阻断法（Tayebatis et al.,2004），两血管阻断加尾端放血降压法，两血管阻断加硝普钠降压法（Willams et al.,2007）。

2 三血管阻断法: 最初由Kameyama 等（Kameyama et al.,1985）建立，方法为电凝切断基底动脉，并通过阻断与开放双侧颈总动脉，实现全脑－缺血再灌流。该法稳定性好，可通过阻断CCA 的时间长短来控制缺血程度，再灌注血流恢复迅速，模型成功率高，适合用于急性全脑缺血性损伤的研究。其缺点是手术难度稍大，且对周围组织牵拉严重，操作不当易造成动物死亡。被认为是迄今为止最理想的全脑缺血－再灌注动物模型。Yanamoto 等（Yanamoto et al.,2003）采用改良的三支动脉阻断法制作正常血压大鼠大脑皮层脑梗死模型， 通过比较术后动物的生理参数， 梗死灶体积等指标确定缺血性中风程度。

中国中医急症２００８年３月第１７卷第３期　ＪＥＴＣＭ．Ｍａｒ．２００８，Ｖｏ１．１７，Ｎｏ．３　

急性心肌缺血再灌注损伤大鼠模型制备方法　

的改进与评价术　

陈业农　周逸平１　汪克明　蔡荣林　王月兰　李晓民　

中图分类号：Ｒ２８５．５　文献标识码：Ａ　文章编号：１００４—７４５Ｘ（２００８）０３—０３５９—０３　

【摘要】　目的改进和完善大鼠急性心肌缺血再灌注损伤动物模型的制备，简化手术操作步骤，提高模型成　

功率和动物成活率。方法选用成年健康ｓＤ大鼠，于第３～４肋间开胸０．５～ｌｃｍ，迅速暴露心脏，冠状动脉下　穿线后，即刻复位关胸，提线时以标Ⅱ导联心电图ｓＴ段和Ｔ波的改变作为阻断血流评定指标，连续缺血　

１５ｍｉｎ，松线，缝合切口。结果改进后的造模成功率达到９０％以上，高于传统方法的成功率（６Ｏ％）。结论改进　

后的方法能大大降低手术难度，提高模型成功率和动物成活率，准确地复制心肌缺血再灌注损伤的实验模　型，简化实验操作步骤。　【关键词】　大鼠心肌缺血再灌注动物实验模型　

Ｉｍｐｒｏｖｉｎｇ　ａｎｄ　Ｅｖａｌｕａｔｉｎｇ　ｔｈｅ　Ｍｅｔｈｏｄ　ｏｆ　Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｉｎｇ　Ｒａｔ　Ｍｏｄｅｌｓ　ｏｆ　Ａｃｕｔｅ　Ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ　Ｅｓｃｈｅｍｉａ　Ｒｅｐｅｒ－　

ｆｕｓｉｏｎ　

ＣＨＥＮ　Ｙｅ—ｎｏｒｔｇ，ＺＨＯＵ　Ｙｉ－ｐｉｎｇ，ＷＡＮＧＫｅ—ｍｉｎｇ，ｅｔ　ａｌ　Ａｎｈｕｉ　Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　ＴＣＭ【Ｈｅｆｅｉ　２３００３８）　

【Ａｂｓｔｒａｃｔ】　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ　ｉｍｐｒｏｖｅ　ａｎｄ　ｅｖａｌｕａｔｅ　ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｏｆ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｉｎｇ　ｒａｔ　ｍｏｄｅｌｓ　ｏｆ　ａｃｕｔｅ　ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ　ｉｓｃｈｅｍｉａ　

ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ，ｗｈｉｃｈ　ｈａｄ　ｈｉｇｈ　ｒａｔｅ　ｏｆ　Ｓｕｃｃｅｓｓ　ａｎｄ　ｓｕｒｖｉｖｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：ＳＤ　ｒａｔｓ　ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ　ｔｈｅ　ｌｅｆｔ—ｓｉｄｅｄ　ｔｈｏｒａｃｏｔｏｍｙ　ｆｏｒｍ　

‘４‘生垦塞旦壁丝壅堑盘查生！旦箜！！鲞箜！！塑竺！！竺塑』￡！！笪！！！堕！！望！！！塑！兰！￡：：！！！：！ｉ堕！：！！

ＰｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓｉｎＡｔｒｉａｌＦｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ［Ｊ］．ＰＬＯＳ

０ＮＥ，２００７．２：ｅ４９５．［７３ｋ６１１ｉｎｇＫ，ＮｄｒｅｐｅｐａＧ，ＫｏｃｈＷ。ｅｔａ１．Ｍｅｔｈｙｌｅｎｅｔｅｔｒａｄｒｏｆｏ—ｌａｔｅｒｅｄｕｃｔａｓｅｇｅｎｅＣ６７７ＴａｎｄＡ１２９８Ｃｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓｐｌａｓｍａｈｏｍｏｃｙｓｔｅｉｎｅ，ｆｏｌａｔｅ。ａｎｄｖｉｔａｍｉｎＢ１２ｌｅｖｅｌｓａｎｄｔｈｅｏｆ

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ａｎｄｒｉｓｋｏｆｂｌａｄｄｅｒｉｎＴｕｎｉｓｉａｎｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ

ＧｅｎｅｔｉｃｓａｎｄＣｙｔｏｇｅｎｅｔｉｃｓ，２００７，１７６：４８—５３．［１０３ＳａｂｂａｇｈＡＳ，Ｍａｈｆｏｕｄｚ．ＴａｈｅｒＡ。ｅｔａ１．Ｈｉｇｈｐｒｅｖａｌｅｎｃｅｏｆ

ＭＴＨＦＲｇｅｎｅＡ１２９８ＣｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｉｎＬｅｂａｎｏｎ［Ｊ］．Ｇｅｎｅｔ

Ｔｅｓｔ，２００８，１２：７５－８０．（收稿２０１０－０５—２６）

线栓法大鼠脑缺血再灌注模型改良与评价