肉毒梭菌ppt课件

2、培养特性
5.在含有肉渣的液体或者半流动培养基中，肉毒梭菌生 长旺w盛el且co产me生t大o u量se气th体e，seAP、owBe、rPFo三in型t t表em面pl浑at浊es，, N底ew部 有粉C状on和te颗nt粒de状si沉gn淀, 1，0 并ye能ar消s e化xp肉er块ie，nc变e 黑有臭味；而 C、D、E三型表明清亮，絮片状生长，粘贴于管壁。 6.在葡萄糖鲜血琼脂平板上，菌落较小，扁平，颗粒状 。中央低落，边缘不规则，有的菌落还有大的溶血环。 7.在卵黄琼脂平板上生长，菌落及其培养基周围表面覆 盖着特有的彩虹样薄层，但G型没有
抵抗力：
A型毒素经60℃2分钟加热，差不多能被完全破坏，而B 、E二型毒素要经70℃2分钟才能被破坏；C、D二型毒 素对热的抵抗更大些；C型毒素要经过90℃2分钟加热 才能完全破坏，不论如何，只要煮沸1分钟或75℃加热 5~10分钟，毒素都能被完全破坏。肉毒毒素对酸性反 应比较稳定，对碱性反应比较敏感。某些型的肉毒毒 素在适宜条件下，毒性能被胰酶激活和加强。
二． 致病机理
肉毒毒素是一种神经麻痹毒素，主要抑制神经末 梢释放乙酰胆碱，引起肌肉松弛麻痹，特别是呼 吸肌麻痹导致死亡。
肉毒毒素的毒性极强，是目前已知在天然毒素和 合成毒剂中毒性最强的生物毒素，据称，精制毒 素1克能杀死400万吨小白鼠，一个人的致死量大 概1微克左右。
三、检验方法
培养基：庖肉培养基、卵黄琼脂培养基、明胶磷 酸盐缓冲液。
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4.2.7 肉毒梭菌
本节主要内容：
肉毒梭菌的主要特征 肉毒梭菌致病机理 肉毒梭菌的检验
一、生物学特性：
1.形态及染色
肉毒梭菌属于厌氧性梭状芽胞杆菌属，革兰氏染色阳性(老龄菌 是阴性），约为4×1μm的大杆菌， 多单在，偶见成双或短链， 两侧平行，两端钝园，直杆状或稍弯曲，芽胞为卵圆形，大于 菌体宽度，位于次极端，使菌体呈匙形或网球拍状，偶有位于 中央，常见很多游离芽胞。 有4~8根周生鞭毛，运动迟缓，无荚 膜。
确证试验 毒力测定 定型试验
分离培养
选取证实含有肉毒毒素的增菌产毒培养物（必要时可重复一次适宜 的加热处理）接种卵黄琼脂平板，35℃厌氧培养48 h。肉毒梭菌在卵黄 琼脂平板上生长时，菌落及周围培养基表面覆盖着特有的虹彩样(或珍珠 层样)薄层，但G型菌无此现象。
根据菌落形态及菌体形态挑取可疑菌落，接种庖肉培养基，于30℃ 培养5d，进行毒素检测及培养特性检查确证试验。
2、培养特性
1.最严格的厌氧菌
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2.生长最适温度：28 ℃ ～37 ℃ ：pH为6.8~7.6，产毒的最适
pH为C7o.8nt~e8n.2t。design, 10 years experience
3.产毒培养温度：不同菌型产毒的最适培养温度不完全相同。 C、D型温度高些为宜，35℃ 培养3d即可，而E型菌低温度长 时间培养效果较好。 4.对营养要求不高 ：在普通培养基上都能生长。
（1）毒素检测：试验方法同上。 （2）培养特性检查：接种卵黄琼脂平板，分成两份 ，分别在35℃的需氧和厌氧条件下培养48 h，观察生 长情况及菌落形态。肉毒梭菌只在厌氧条件下生长而 在需氧条件下不生长。
肉毒梭菌的检出（增菌产毒培养试验）
取庖肉培养基三支，煮沸10min～15min，做如下处理： 第一支：急速冷却，接种检样均质液1 mL～2 mL；
第二支：冷却至60℃，接种检样，继续于60℃ 保温10 min，急速冷却； 第三支：接种检样，继续煮沸加热10 min，急速冷却。
以上3支试管于30℃厌氧培养5d，若无生长，可再培 养10d。培养到期，若有生长，取培养液离心，以其 上清液进行毒素检测试验，方法同上，阳性结果证 明检样中有肉毒梭菌存在。
毒素检测 报告
（一）
毒素检测
增菌、产毒培养 30℃，5 d毒素检测 报告（二）来自观察生长性状， 染色镜检
分离培养
增菌产毒培养 30℃，5 d
观察菌落性状 染色镜检
培养检查
报告（三）
肉毒毒素检测
液态或固体（明胶磷酸盐缓冲液）样品经过适当处理后离心，取上清液实验 上清液及其胰酶激活处理液
分别进行小白鼠腹腔注射，各3只，每只0.5 mL，观察4 d 注射液中若有肉毒毒素存在，小白鼠一般多在注射后24 h内发病、死亡。
试剂：肉毒分型抗毒诊断血清、胰酶（活力 1:250）、革兰氏染色液。
实验动物：小白鼠
检验程序
检样
①报告(一)：检样中有无肉毒毒素以 及有何型肉毒毒素。(如仅为了肉毒中 毒诊断，即可结束检验) ②报告(二)：对增菌产毒培养物，一 方面做生长特性观察，同时检测肉毒 毒素。报告检样中有无肉毒梭菌以及 有何型肉毒梭菌。（有些样品如土壤、 泥沙等基本上不可能含有毒素，则应 从培养着手） ③报告(三)：欲获纯菌株，可用增菌 产毒培养物进行分离培养，对所得纯 菌株进行形态、培养特性等观察及毒 素检测，其结果可证明所得纯菌为何 型肉毒梭菌。（一般情况下，没有必 要从检样中分离纯的菌株，但研究或 特殊需要例外）
葡萄糖鲜血琼脂（A型）
（C型）
3．生化特性
肉毒梭菌能分解葡萄糖，麦芽糖及果糖，产酸产气， 能液化明胶，缓慢液化凝固血清，使牛乳消化，产生 H2S，但不能使硝酸盐还原为亚硝酸盐。肉毒梭菌的生 化性状很不规律，即使同型，也常见到株间的差异。
分类：
4.抵抗力
肉毒梭菌能产生外毒素即肉毒毒素（大分子蛋白），根据毒 素的抗原特异性将其分为A、B、C （1、2） 、D、E、F、G 七个型别。