氧化苦参碱的提取分离及对小鼠的毒性研究

DOI :10.15906/11-2975/s.20202309基金项目:河南省高等学校重点科研项目(17A23002506);信阳农林学院青年教师基金项目(2018LG011)*通讯作者[摘要]本试验通过测定苦参碱小鼠的半数致死量(LD 50)及小鼠血液生理学、血液生化学指标,对苦参碱的安全性进行评价。

结果显示:小鼠灌胃苦参碱LD 50为245.0191mg/kg ,其95%置信区间为201.5580~297.9202mg/kg 。

血液生理生化指标结果表明,苦参碱能提高血液中红细胞、粒细胞的数量,减少血小板数量。

给药7d 后,中剂量组和高剂量组中碱性磷酸酶(ALKP )、尿素(UREA )、总蛋白(TP )含量显著提高,丙氨酸转移酶(ALT )和血糖(GLU )含量呈下降趋势,而给药14d 后,各试验组中ALKP 和GLU 含量下降,ALT 、UREA 、肌酐(CREA )、TP 的含量升高,且与药物剂量、给药时间呈正相关。

综上,苦参碱对小鼠肝脏、肾脏及神经系统具有一定的毒性。

[关键词]苦参碱;急性毒性;半数致死量;血液生理;血液生化[中图分类号]S816[文献标识码]A[文章编号]1004-3314(2020)23-0040-04苦参碱急性毒性试验及对小鼠血液生理生化指标影响吴海港1,2,张梦瑶1,胡玉妍1,陈潇钦1,刘佳1,刘锦妮1袁2*(1.信阳农林学院牧医工程学院,河南信阳464000;2.信阳市兽药新制剂研发与创制工程技术研究中心,河南信阳464000)苦参碱是从豆科的槐属、野决明属及山豆根属等植物提取的生物碱。

苦参碱具有多种生物活性,对机体多种器官具有调节作用,同时具有抗寄生虫、抗细菌、抗真菌及抗病毒等药理作用(吴富鑫等,2019;张明发等,2018),在畜牧生产中具有广泛的推广应用价值。

冷晓红(2013)、韩欢胜等(2017)采用苦参碱治疗奶牛乳房炎取得了较好的临床效果。

胡安君等(2016)报道苦参碱对PRRSV 有显著抑制作用,可用于猪繁殖与呼吸障碍综合征的治疗。

氧化苦参碱对小鼠树突状细胞成熟和功能的影响的开题报
告
题目：氧化苦参碱对小鼠树突状细胞成熟和功能的影响
研究目的：本研究旨在探究氧化苦参碱对小鼠树突状细胞成熟和功能的影响，为深入了解其免疫调节机制提供理论依据。

研究背景：氧化苦参碱是从苦参中提取的生物碱，具有多种生物活性，如抗菌、抗病毒、免疫调节等。

近年来，氧化苦参碱被广泛用于治疗自身免疫性疾病、肺部感染等方面，并具有较好的疗效。

而树突状细胞作为一种免疫调节细胞，对免疫系统的功能具有重要的调节作用。

目前研究发现，氧化苦参碱对树突状细胞的成熟和功能具有一定的调节作用，但其具体机制还需进一步探究。

研究方法：本实验将小鼠的骨髓细胞分化为树突状细胞，并在不同浓度的氧化苦参碱作用下研究树突状细胞的成熟和功能变化。

具体包括以下步骤：
1. 骨髓细胞分离：从小鼠骨髓中提取细胞，以DMEM培养液将其洗涤干净。

2. 树突状细胞分离：利用CD11c抗体磁珠将骨髓中的树突状细胞分离。

3. 氧化苦参碱处理：将分离得到的树突状细胞分为对照组和不同浓度的氧化苦参碱处理组。

4. 树突状细胞活化：利用LPS刺激树突状细胞活化。

5. 检测树突状细胞的成熟和功能变化：通过流式细胞术检测树突状细胞表面标志物的表达以及吞噬抗原和分泌细胞因子的能力等。

研究意义：通过本研究，可深入探究氧化苦参碱对树突状细胞的免疫调节机制，有助于其在临床的应用和进一步研究。

氧化苦参碱对局灶性脑缺血小鼠脑保护机制的研究李俐涛;孟笑梅;尹昱;李哲;杨蕊;王建华【摘要】目的观察氧化苦参碱对局灶性脑缺血(focal cerebral ischemic,FCI)小鼠脑保护作用及核转录因子Nrf2的表达变化.方法参照线栓法制备C57小鼠局灶性大脑中动脉缺血(MCAO)模型,将36只C57雄性小鼠随机分为假手术组、局灶性大脑中动脉缺血/再灌注模型组、氧化苦参碱组,分别采用行为学评分、TTC染色法观察氧化苦参碱的脑保护作用,采用激光共聚焦显微镜(Confocal)及Western blot 方法探讨Nrf2在氧化苦参碱脑保护作用中的重要地位.结果与模型组相比氧化苦参碱组神经功能缺失明显减轻(P＜0.05),梗死体积明显缩小(P＜0.05);与模型组相比,氧化苦参组在形态学上Nrf2核转位明显增加,Nrf2的核蛋白表达上调(P＜0.05).结论模型组小鼠局灶性脑缺血后,神经功能缺失严重,脑梗死体积较大,Nrf2的核转位相对增加,而氧化苦参碱治疗组可降低局灶性脑缺血后小鼠的神经功能缺失程度,减小梗死体积,促进Nrf2的核转位,这可能是氧化苦参碱脑保护机制之一.【期刊名称】《中国全科医学》【年(卷),期】2012(015)018【总页数】4页(P2059-2062)【关键词】氧化苦参碱;脑缺血;脑梗死;小鼠;Nrf2【作者】李俐涛;孟笑梅;尹昱;李哲;杨蕊;王建华【作者单位】050051,河北省石家庄市,河北省人民医院神经内科;050051,河北省石家庄市,河北省人民医院图书馆;050051,河北省石家庄市,河北省人民医院神经内科;050051,河北省石家庄市,河北省人民医院神经内科;050051,河北省石家庄市,河北省人民医院神经内科;050051,河北省石家庄市,河北省人民医院神经内科【正文语种】中文【中图分类】R743.3缺血性脑血管病是临床常见病、多发病之一，根据国际卫生组织统计，在全球范围内平均每400人中就有一个缺血性脑血管病患者，缺血性脑血管病造成的死亡率仅次于心脏疾病，在所有的缺血性脑血管病患者中大约有30%的患者由于溶栓治疗或栓子自发向远端推移而出现血管再通，发生缺血再灌注损伤。

苦参碱对小鼠的毒性研究王晓燕;梁磊;常建兰;杨敏慧;李祖国【期刊名称】《南方医科大学学报》【年(卷),期】2010(030)009【摘要】目的观察苦参碱对昆明小鼠的急性毒性作用,并测定苦参碱对小鼠的致死中量(LD50).方法通过向昆明小鼠腹腔注射不同浓度的苦参碱溶液.观察并记录苦参碱对小鼠的毒性反应.检测苦参碱对小鼠的致死中量(LD50).结果昆明小鼠对苦参碱的耐受剂量大于80mg/kg.苦参碱的半数致死剂量(即Prob=0.50时)为157.13mg/kg,其95%可信区间为(88.08～280.31)mg/kg.光镜下见脑组织内神经细胞退变现象.结论苦参碱的主要毒性靶器官为神经系统.【总页数】2页(P2154-2155)【作者】王晓燕;梁磊;常建兰;杨敏慧;李祖国【作者单位】南方医科大学南方医院病理科,南方医科大学基础医学院病理学系,广东,广州510515;广州陆军总医院药剂科,广东,广州510010;南方医科大学南方医院病理科,南方医科大学基础医学院病理学系,广东,广州510515;南方医科大学南方医院病理科,南方医科大学基础医学院病理学系,广东,广州510515;南方医科大学南方医院病理科,南方医科大学基础医学院病理学系,广东,广州510515【正文语种】中文【中图分类】R285.5【相关文献】1.苦参碱、氧化苦参碱对小鼠的毒性研究 [J], 戴五好;钱利武;王丽丽;杨士友;周国勤2.苦参碱与氧化苦参碱影响荷瘤小鼠肿瘤生长及其免疫调节作用的研究 [J], 李军;司维柯;赵宸;李招权;潘静3.苦参碱和氧化苦参碱致小鼠肝毒性比较 [J], 郭秋平;金若敏4.氧化苦参碱的提取分离及对小鼠的毒性研究 [J], 张宏利;贺春玲;杨清娥;杨学军;韩崇选5.苦参碱的提取分离及对小鼠的毒性研究 [J], 张宏利;杨清娥;杨学军;王明春;卜书海;韩崇选因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

氧化苦参碱对小鼠的中枢抑制作用彭建中;蒋袁絮;余建强【期刊名称】《西北药学杂志》【年(卷),期】2000()z1【摘要】氧化苦参碱(oxymartrine, OMT)系从豆科槐属植物苦豆子(Sophora alopecuroides, L)中提取的生物碱.为探讨OMT对小鼠中枢神经系统的影响.ip OMT 15～20min后,分别ip催眠阈剂量(40mg/kg)和阈下剂量(30mg/kg)戊巴比妥钠,观察OMT对戊巴比妥钠催眠作用的影响.应用GJ-1型光电计数仪观察ip OMT对小鼠外观行为活动及对小鼠自由活动的影响,观察OMT对戊四氮(100mg/kg,sc)惊厥及对最大电惊厥(2Hz,40V,10ms)的影响.结果表明,ip OMT 50,100,200mg/kg(LD50为800mg/kg,ip),对小鼠自由活动均有显著抑制作用.对戊巴比妥钠睡眠的影响为缩短入睡时间,显著延长睡眠时间,并能显著加强阈下剂量戊巴比妥钠的催眠作用.OMT 200,400mg/kg ip均不能对抗戊四氮惊厥和最大电惊厥.试验提示氧化苦参碱具有镇静、催眠等中枢抑制作用.【总页数】1页(P94)【作者】彭建中;蒋袁絮;余建强【作者单位】【正文语种】中文【中图分类】R9【相关文献】1.氧化苦参碱对小鼠的中枢抑制作用 [J], 蒋袁絮;余建强;彭建中2.氧化苦参碱下调小鼠Colon26肿瘤细胞免疫抑制作用的体外实验 [J], 崔澂;王润田;佟慧;王智华;邓郁青3.氧化槐定碱和氧化苦参碱对小鼠中枢的抑制作用 [J], 余建强;蒋袁絮;王丽韫;彭建中4.氧化苦参碱对帕金森小鼠中枢神经系统氧化应激的影响 [J], 孙冰;徐玉英5.氧化苦参碱增强环磷酰胺对小鼠Lewis肺癌生长的抑制作用 [J], 王锐;姜小军;郑婕;杨彩艳;王小萍;戴贵东因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

氧化苦参碱对偏头痛模型小鼠行为学和血清NO含量的研究摘要】目的：以氧化苦参碱作为镇痛药物研究其对偏头痛模型小鼠的镇痛效果，观察其前后行为学变化和血清NO的含量。

方法：将30只健康KM小鼠随机分为假模型组、模型对照组、氟桂利嗪组、高剂量氧化苦参碱组、中剂量氧化苦参碱组、低剂量氧化苦参碱组。

在30min内观察研究中小鼠的行为学变化，以硝酸还原酶法测量血清NO含量。

结果：低剂量氧化苦参碱组的平均挠头次数和血清NO 含量与模型对照组比较，差异不显著(P＞0.05)，然而在平均爬笼次数水平上与之比较，差异有统计学意义(P＜0.05)。

其余各组在血清NO含量，挠头次数和爬笼次数与模型对照组的比较中差异显著，有统计学意义(P＜0.05)。

结论：氧化苦参碱对偏头痛模型小鼠的镇痛效果显著。

【关键词】氧化苦参碱；偏头痛；行为学；1前言偏头痛是一种主要以患者单侧或双侧搏动性头痛为特征的原发性头痛，临床上主要使用选择性5-HT受体激动剂曲坦类药物，但是该药物依赖进口，价格较贵，且对存在心血管问题的病人需谨慎使用。

氧化苦参碱主要是从我国传统药物苦参的干燥根及其他植物提取的生物碱，药理作用广泛，本实验主要探究氧化苦参碱的镇痛作用。

氧化苦参碱在治疗剂量下对中枢神经系统产生抑制作用和保护功能，临床上有使用氧化苦参碱注射液或者配合西药来治疗癌痛的病例[1]。

因此本实验通过观察使用氧化苦参碱前后行为学变化和测定血清NO含量来评价氧化苦参碱的镇痛效果。

2材料与方法2.1?实验动物及分组将健康的30只KM小鼠(SPF级，湖南斯莱克景达实验动物有限公司，合格证号：SCXK湘2019-0004)随机平均分为六组，每组5只，分别为假模型组、模型对照组、低剂量氧化苦参碱组、中剂量氧化苦参碱组、高剂量氧化苦参碱组和氟桂利嗪（阳性对照组）组。

小鼠体重在18～22g。

2.2实验试剂及器材苦参素胶囊(正大天晴药业集团公司，主要成分氧化苦参碱，每粒0.1g)，盐酸氟桂利嗪胶囊（西安杨森制药公司，主要成分氟桂利嗪，每粒5mg），硝酸甘油注射液（河南润弘制药公司，1ml：5mg），一氧化氮（NO）测定试剂盒（南京建成生物工程研究所），分光光度计（上海菁华科技仪器有限公司），TGL-16台式高速冷冻离心机（湖南湘仪仪器开发有限公司）。

《氧化苦参碱对Con A诱导小鼠肝损伤的保护作用及机制初探》篇一一、引言肝脏是机体重要的代谢器官，容易受到各种内外因素的损伤。

氧化苦参碱（Oxymatrine，OM）是一种从中药材苦参中提取的生物活性成分，具有广泛的药理作用，包括抗炎、抗氧化、保肝等。

近年来，关于氧化苦参碱对肝脏保护作用的研究逐渐增多。

本文旨在探讨氧化苦参碱对Con A（伴刀豆球蛋白A）诱导小鼠肝损伤的保护作用及潜在机制。

二、材料与方法1. 材料（1）实验动物：选用健康小鼠，体重约20-25g。

（2）试剂与药物：Con A、氧化苦参碱、相关生化试剂等。

（3）仪器设备：离心机、酶标仪、显微镜等。

2. 方法（1）建立Con A诱导小鼠肝损伤模型：将小鼠随机分为对照组、模型组和氧化苦参碱治疗组。

模型组和治疗组通过注射Con A建立肝损伤模型，治疗组在造模前及造模后给予氧化苦参碱处理。

（2）检测指标：检测各组小鼠的肝功能指标（如ALT、AST等）、氧化应激指标（如MDA、SOD等），并观察肝脏组织形态学变化。

（3）统计分析：采用SPSS软件进行数据分析，P<0.05为差异有统计学意义。

三、结果1. 氧化苦参碱对Con A诱导肝损伤小鼠的肝功能保护作用实验结果显示，与模型组相比，氧化苦参碱治疗组小鼠的肝功能指标（ALT、AST）明显降低，表明氧化苦参碱对Con A诱导的肝损伤具有明显的保护作用。

2. 氧化苦参碱对Con A诱导肝损伤小鼠的抗氧化作用氧化苦参碱治疗组小鼠的氧化应激指标（MDA）降低，而抗氧化指标（SOD）升高，说明氧化苦参碱具有抗氧化作用，有助于减轻肝脏氧化应激损伤。

3. 肝脏组织形态学观察镜下观察发现，氧化苦参碱治疗组小鼠的肝脏组织结构较模型组更为清晰，肝细胞损伤程度减轻，表明氧化苦参碱对肝脏组织具有保护作用。

四、讨论本研究结果表明，氧化苦参碱对Con A诱导的小鼠肝损伤具有明显的保护作用。

其机制可能包括以下几个方面：1. 抗炎作用：氧化苦参碱能够抑制炎症反应，减轻肝脏炎症损伤。

实验一 氧化苦参碱的提取分离和鉴定一．实验目的与要求1. 掌握渗漉法的原理、操作与影响因素，了解离子交换树脂的结构、性质及使用方法。

2. 掌握连续回流提取法的原理、特点及仪器的使用方法。

3. 学习粗提物的纯化方法，学会分析纯化过程中所应用的原理。

4. 进一步理解对粗品进行检识的意义及方法。

5. 学习制备性薄层色谱及闪柱色谱的操作，了解色谱条件的选择方法及影响分离度的因素。

二．实验方法（一）概述中药苦参是豆科植物苦参(Sophora flavescens Ait)的干燥根，有清热燥湿、杀虫、利尿之功效。

苦参在临床上用于杀虫、治疗痢疾、肝炎、荨麻疹、湿疹、气管炎等。

药理实验证明苦参总生物碱有抗心律失常及抗癌活性等。

苦参中主要含生物碱和黄酮类成分。

苦参中主要生物碱有：苦参碱(1)、氧化苦参碱(2)、槐定(3)、槐果碱(4)，结构如图1。

氧化苦参碱有抗癌、抗衰老等作用。

氧化苦参碱13C-NMR 数据：68.7(C-2), 17.0(C-3), 25.9(C-4), 34.3(C-5), 66.6(C-6), 42.4(C-7), 24.4(C-8), 17.0(C-9), 69.1(C-10), 52.8(C-11), 28.3(C-12), 18.5(C-13), 32.7(C-14), 169.8(C-15),41.6(C-17)。

苦参碱 氧化苦参碱 槐定 槐果碱表11-1 主要苦参生物碱的理化性质N N O中英名称分子式性状mp(℃) 旋光溶解度苦参碱(matrine) C15H24N2O白色针状结晶76 +39.11°易溶于醇、氯仿，溶于乙醚、苯，难溶于水氧化苦参碱(oxymatrine) C15H24N2O2白色方晶207-208 +47.7°易溶于水、乙醇、甲醇、氯仿，不溶于乙醚、苯槐定(sophoridine)C15H24N2O 白色棱晶106-108槐果碱(sophocarpine)C15H22N2O 白色棱晶80-81 -29.44°同上从苦参中提取生物碱一般用水、酸水或醇提法，粗提物用树脂法或酸碱法纯化，分离方法多用氧化铝或硅胶柱层色谱。

苦参生物碱的提取与分离张婷婷制药2班101310402290 引言苦参又名苦骨、川参、凤凰爪、牛参、地槐、野槐等，为豆科多年生落叶亚灌木植物舌参根，采挖后去芦头及须根晒干切片入药，全国各地均产，功能主要为清热、燥湿、杀虫等，主治热毒血痢、肠风下血、黄疸、赤白带下、小儿肺炎、急性扁桃体炎等多种炎症和痔漏、疥癞恶疮、皮肤瘙痒、阴疮湿痒等疾病研究得知，苦参的根含有多种生物碱，如氧化苦参碱、羟基苦参碱、甲基野靛碱、臭豆碱、赝靛叶碱、脱氢苦参碱（槐果碱）等多种生物碱及黄酮类化合物因为苦参碱具有多方面的药理作用，如抗肿瘤作用、抗癌作用、抗病毒作用，所以对苦参总碱的提取与分离具有重要的意义苦参总碱的提取方法相对较多，本文中主要侧重论述苦参提取水煎法。

1 苦参碱以及其化学结构1.1 苦参碱的基本性质苦参碱系指从豆科植物苦参、苦豆子、山豆根中分离出来的生物碱，是上述3种传统中草的主要活性成分之一，是苦参类生物碱的代表.《中国药典》2010年版一部中，是以苦参碱的含量作为苦参药材的质量控制指标［1］；2005年版一部中，苦参碱的含量也是苦参药材的质量控制指标之一.1.2 苦参碱的化学结构苦参碱是白金雀儿碱的异构体，属于喹喏里西啶类衍生物，由2个喹喏里西啶环骈合而成，有2个氮原子，一个是叔胺氮，一个是酰胺氮，其分子式为C15H24N2O,分子量为245.37.苦参碱有4种形态：α-苦参碱为针状或柱状结晶，熔点为760C;β-苦参碱为斜方晶状，熔点为870 C; γ-苦参碱为液体，沸点为2230Cδ-苦参碱是柱状结晶，熔点为840 常用的是α-苦参碱,其结构见图1.苦参碱能溶于水、苯、氯仿、甲醇、乙醇，微溶于石油醚。

图一α-苦参生物碱的结构图[2]2. 苦参类生物碱的药理作用近年来发现苦参碱类生物碱在保护中枢神经系统和心血统、抗病毒、抗炎、免疫抑制及抗肿瘤等方面有重要的药理活性和应用前途［4］.2.1 苦参碱的抗肿瘤作用苦参碱类药物对于多种实验性肿瘤均有抑制作用，且多为移植性实体瘤. 苦参碱和氧化苦参碱同是苦参中抗癌有效成分，对癌细胞有直接杀伤作用. 电镜观察可见肿瘤细胞分裂呈中等抑制，瘤细胞膜和细胞质有明显改变. 此外，苦参碱类药物具有毒性低、无抑制骨髓和机体免疫功能的优点. 动物实验表明，氧化苦参碱对S -180有显著抑制作用. 日本报道它对 S -180 的治疗指数比丝霉素的治疗指数大7至8倍，临床效果类似于苦参碱. 另有发现：苦参碱对P815肿瘤细胞亦有直接毒性作用，能降低P815细胞的3H- Td R 掺入值，这从机制上可能说明苦参碱是一种直接细胞代谢抑制剂.2.1.1 对肝癌细胞的作用一定浓度的苦参碱对HepG2细胞的增生有抑制作用[5]，主要为直接杀伤作用，从而影响了HepG2细胞的代谢，使AFP 和PCN 分裂指数降低，恶性表型消失，肿瘤细胞恶性程度和侵袭力减弱，这说明苦参碱可能成为很好的抗癌药物2.1.2 对胃癌细胞的作用苦参碱在体外对胃癌细胞具有杀伤作用，且在一定剂量和时间范围内呈明显的量效和时效关系, 低分化的胃癌细胞 AGT 对苦参碱更为敏感, 苦参碱对胃癌细胞株的外杀伤作用与其诱导胃癌细胞凋亡有关, 将苦参碱作用于胃腺癌细胞SGC-7901 48h后，胃癌细胞Bcl-2表达量显著下降,可以推断出苦参碱对胃癌细胞凋亡的诱导作用可能与其影响Bcl-2的表达有关.2.1.3 对肺癌细胞的作用实验表明，三参冲剂（主要成分为苦参碱和川芎嗪）对肿瘤细胞与内皮细胞的粘附因子有明显抑制作用，并可明显抑制CD44和CD49粘附因子的表达，从而抑制肿瘤细胞与内皮细胞的粘附，还可减轻内皮细胞的通透性，保护内皮细胞的完整性，阻断了肿瘤细胞与基质的粘附，从而减少了肿瘤转移的形成. 这主要是因为三参冲剂对Tiam-l 基因具有一定调控作用.2.2 对中枢神经系统的作用研究发现氧化苦参碱、苦参碱等具有解热镇痛等中枢抑制性作用. 氧化苦参碱能明显抑制小鼠的自主活动，与水合氯醛等中枢抑制剂有协同作用，而对苯丙胺等中枢兴奋剂则有拮抗作用.苦参碱、氧化苦参碱对化学刺激和热刺激所致小鼠的疼痛反应均有明显抑制作用. 苦参碱腹腔注射或口服均能抑制酵母菌致小鼠直肠升温作用，而此作用不能被阿托品和羟甲丙基麦角酰胺所拮抗，但可被多巴胺受体拮抗剂氟哌啶醇完全拮抗. 观察并推测苦参碱的解热功能除了对产热过程的直接作用外，还具有多巴胺能样活性.2.3 对心血管系统的作用大量研究表明，苦参碱在强心和抗心率失常方面有显著的作用. 苦参碱和氧化苦参碱均能对抗乌头碱、哇巴因、氯仿- 肾上腺素、氯化钡及冠脉结扎等诱发的动物实验性心率失常，且多为室性心率失常，并且均呈剂量依赖性的正性肌力作用. 实验证明，这几种生物碱都可显著增强离体豚鼠右心室乳头状肌收缩力. 苦参碱作为潜在的强心药，一般同时具有增强心肌收缩力、减慢心率和拮抗心率失常的有益作用. 目前临床试用苦参碱和氧化苦参碱，发现对室性期前收缩、频发性期前收缩及阵发性心动过速效果较佳，这说明苦参碱类生物碱在强心和抗心率失常方面有着广阔的前景.2.4 抗病毒、抗炎作用2.4.1 在治疗乙型肝炎中的应用中药苦参碱治疗肝炎在《本草纲目》中已有记载. 中医认为，苦参碱性寒味苦，具有清热利湿、退黄利尿、消炎解毒等作用，可治疗多种疾病. 基础实验和临床研究表明，苦参碱具有多方面的药理作用及临床功能：①抑制胶原纤维增生而具有抗纤维化作用，这可能与其阻断PDGF（血小板源生长因子）和TGF-β1（转化生长因子β1）的作用，抑制储脂细胞增生和胶原合成有关［6］，苦参碱能够保护肝细胞，尤其是膜性结构，降低丙氨酸氨基转移酶、透明质酸、层黏蛋白水平，还可增加胆汁回流，消退黄疸；②抑制网状内皮系统吞噬功能，具有免疫调控作用. 苦参碱有免疫抑制活性，可抑制巨噬细胞胞浆、胞膜的PKC（蛋白激酶c）的活性，有可能成为一种有效的PKC 抑制剂. 实验证明苦参碱体内外均可抑制TNF 和IL-6的分泌，这可能与其抑制PKC 活性有关. 由于TNF 是肝脏炎症损伤中的重要介质，而对于LPS （细菌脂多糖）诱导的小鼠血清及培养的大鼠库普弗细胞的TNF 和IL-6升高，苦参碱都有抑制作用，这有可能是其消除肝脏炎症的机制之一. 苦参碱不仅有抗炎、抗肝损伤、改善肝脏微循环、促进肝细胞再生的作用，还有助于胆红素的摄取结合与排泄，起到降酶、退黄作用，并有抑制乙肝病毒复制和免疫抑制作用20世纪80年代以来干扰素被公认为有效的抗病毒药物，但其病毒学指标中HbeAG 率约40％, 且停药后易复发. 干扰素主要通过与靶细胞膜上特异受体结合诱导靶细胞产生抗病毒蛋白，从而破坏病毒的mRNA ，抑制病毒复制，但其免疫调节作用弱. 而慢性乙型肝炎患者普遍存在免疫紊乱的情况，不利于乙型肝炎病毒的最终清除. 苦参碱注射液能提高机体免疫力，有清热利湿、利尿退黄、解毒功能，能改善病理性肝炎症状与体征. 干扰素加苦参碱注射液治疗慢性乙型肝炎能起到互补协同作用，能明显提高干扰素的治疗效果，临床无不良反应，值得推广应用. 2.4.2 在治疗病毒型心肌炎中的应用陈曙霞等发现苦参碱具有独特的抗柯萨基B 组病毒（CVB）的显著作用，体内外实验均证实病毒性心肌炎模型小鼠经苦参碱治疗后存活期明显延长，有的完全治愈，心、肝组织无病变发生，脾脏T 淋巴细胞亚群及NK 细胞活性亦改变.提示苦参碱能抑制LWB 繁殖，而且尚有免疫调节功能［8］. 实验和临床证明苦参碱类生物碱还有多种抗炎作用，其机制不详. 已有临床应用苦参碱静脉滴注治疗病毒性心肌炎的报道.3 苦参碱的提取与分离3.1 传统煎煮法对苦参的提取在苦参中苦参总碱或苦参碱及氧化苦参碱的提取方法中较为常用的有溶剂提取法和离子交换法. 笔者在实验中首先采用了传统的煎煮法：将中药苦参粗粉置适宜煎煮器中，加适量水浸没原料，充分浸泡后加热至沸，保持微沸浸出一定时间. 此法较简便，而且经煎煮后，药中的大部分成分可被不同程度地提出，因此是提取有效成分特别是药物制剂的基本方法.3.1.1 实验仪器包括电子天平、旋转蒸发器、电炉、磁力搅拌器、超声波振荡器等.3.1.2 材料苦参（购于中药市场，批号：20050715）、乙醇（AR）、乙酸乙酯（AR）、HCL（AR）、氯仿（AR）、NaOH 、大孔吸附树脂、硅胶G 、纤维素钠、氧化苦参碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号：0402-200506）3.1.3 苦参提取水煎法首先用植物粉碎机粉碎苦参，并称取苦参粉100g加水1000ml 用电炉煮沸，煎煮1.5h，过滤收集药液. 再加水800ml电炉煮沸煎煮1h，过滤收集药液. 第3次加水600ml电炉煮沸，煎煮30min,过滤收集药液. 弃药渣合并三次药液，用纱布过滤冷却，并于3 000r/ min 离心5min，得上清液，于40C 冰箱冷藏备用. 旋转蒸发仪浓缩药液至50ml左右, 并过大孔吸附树脂（5ml/min）洗脱分离，得流出液，用80%的乙醇对大孔吸附树脂进行洗（2ml/min）再将流出液与洗脱液分别用氯仿、乙酸乙酯溶液萃取3次（8h次），用硅胶薄层层析，经显色鉴定表明流出液含有黄酮、洗脱液含有生物碱. 然后再用荧光显色鉴定，并与标准品对照，发现洗脱液中得到的生物碱至少含有3种.3.1.4 苦参碱的分离方法(1)准备吸附柱. ①取20AB-8树脂用清水浸泡15min;②取中小型柱子，洗净干燥，填入玻璃纤维；③将浸泡好的树脂与水一起转入柱子内，打开阀门排出多余水分；④用80%乙醇、5%盐酸溶液浸泡树脂过夜，再排出. 再第二次将上诉溶液加入柱子，浸泡4h. ⑤用清水洗净，直到洗后溶液PH 值为5为止；⑥用蒸馏水浸泡待用.2）薄层层析. ①将5g羧甲基纤维素钠加入100ml水溶解煮沸. ②将上诉溶液与硅胶G 以3：1的体积比调匀，并于1050C 下干燥40min. ③取一个载玻片，将干燥后的稠状液体均匀涂抹于上面, 干燥待用. ④在制备好的薄层上画一条基线，于中心点样药品原液数次. ⑤生物碱的展开剂为三氯甲烷、甲醇、氨水混合液，其中三氯甲烷：甲醇：氨水=5滴：0.6滴：6滴；对黄酮的展开剂为三氯甲烷和甲醇混合液，三氯甲烷：甲醇=8.5滴：1.5滴. ⑥用碘化铋钾对生物碱显色，发现有3个有色斑点. ⑦用5%三氯化铁对黄酮显色，发现没有有色斑点.3）让原药液流过吸附柱（速度为5ml/min），再用80%乙醇洗脱（速度为5ml/min），得到2部分溶液（流出液、洗脱液）. 分别对这2部分进行薄层层析，发现都有生物碱的存在. 说明生物碱在树脂上的吸附效果不好，准备调整PH 值及树脂进行再次吸附.4）用旋转蒸发仪对洗脱液进行浓缩，再用氯仿、乙酸乙酯分别进行萃取，得2部分溶液. 再对2部分溶液进行薄层层析，发现氯仿萃取的部分有生物碱的存在，而乙酸乙酯萃取的部分其中虽然有物质的存在，但是既不是黄酮也不是生物碱，需要进一步鉴定分析.3.2 酸水回流法提取苦参碱酸水回流法也是常用于苦参中苦参碱的提取方法，本次实验中采用了HCL 无机酸作为提取剂，用于对比传统煎煮法实验. 3.2.1 仪器包括METTL ERAE 240电子天平、RICA 旋转蒸发器、EYELA COOLACE CCA-1100冷凝水循环装置、Waters 2695高效液相色谱仪3.2.2 材料苦参（购于重庆中药饮片厂）、乙醇（AR）、甲醇（HPLC）、乙腈（HPLC）、氯仿（AR）、HCL（AR）、NaOH 、苦参碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号：0413-200506）、氧化苦参碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号：0402-200506）3.2.3 标准曲线的制作精密称取苦参碱对照品，以无水乙醇溶解，配制成含苦参碱0.492mg/ml 的溶液作为对照品溶液% 分别取1，5，9，13，15u以HPLC 测定峰面积［9］，每样进2针取平均值，色谱条件为：Xterra RP185um4.6x150mm柱，柱温200C，0.8ml/min,220nm,甲醇:水:三乙胺=480:520:0.4以峰面积为纵坐标，苦参碱量（)=）为横坐标，得回归方程：y=-34970.14999+1277796.646x；r=0.9999即苦参碱量在0.492到7.380ug范围内呈现良好的线性关系.3.2.4 酸水回流法提取苦参总碱选用L934,设计实验. 取苦参粉10g,按表1正交试验安排进行提取，以苦参碱得率为指标衡量提取效果. 试验流程如下：工艺液回流提取→ HCL 水溶合并回流溶液→过滤→滤液用10%NaOH调节，使PH 值为10到11 →过滤→滤液浓缩至小体积→以氯仿进行4段萃取（氯仿用量分别为用量体积的1倍、1/2倍、1/2倍、1/2倍）→合并氯仿层→蒸干→无水乙醇定容至25ml→测定苦参碱得率.4 未来展望近年来有关苦参类生物碱的药理研究工作已取得了很大进展，而临床上主要用于治疗肝炎的居多，对其他方面疾病的应用基本上还处于试验阶段. 在药物来源方面，我国以提取或提取后还原转化制备的工艺最为成熟，而合成方面虽然也有研究，但合成成本较高. 出于资源保护和经济效益考虑，由于中草药提取液苦参碱含量低，分离提纯麻烦，通过人工化学合成这类生物碱及其衍生物是非常必要的.参考文献：[1] 中华人民共和国国家药典委员会. 中国药典（Ι部）[M]北京：化学工业出版社，2000.[2] 刘文雅，刘汉清. 苦参碱的药理研究进展［J］. 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