消毒和灭菌效果的评价方法和标准
- 格式:doc
- 大小:42.00 KB
- 文档页数:16
消毒灭菌效果监测一、应对消毒、灭菌效果定期进行监测。
灭菌合格率必须达100%,不合格物品不得进入临床使用部门。
l、使用中的消毒剂、灭菌剂应进行生物和化学监测。
生物监测:消毒剂每季度一次,使用中皮肤黏膜消毒液染菌量≤10CFU/ml,其他使用中消毒液染菌量≤l00CFU/ml;灭菌剂每月监测一次,必须无菌生长。
化学监测:应根据消毒剂、灭菌剂的性能定期监测,如含氯消毒剂、过氧乙酸等应每日监测,'对戊二醛的监测应每周不少于一次,消毒内镜时戊二醛浓度必须每日定时监测,并做好记录。
2、对消毒物品进行消毒效果监测。
消毒后直接使用的物品应每季度进行监测,每次检查3-5件有代表性的物品。
3、对灭菌质量进行物理监测、化学监测和生物监测。
物理监测不合格的灭菌物品不得发放;包外化学监测不合格的灭菌物品不得发放,包内化学监测不合格的灭菌物品不得使用;生物监测不合格时,应尽快召回上次生物监测合格以来所有尚未使用的灭菌物品重新处理;灭菌植入型器械每批次进行生物监测,生物监测合格后方可发放。
4、压力蒸汽灭菌必须进行物理监测、化学监测和生物监测。
物理监测应每锅进行,并详细记录。
化学监测应每包进行。
生物监测应每周进行,紧急情况灭菌植入型器械时,可在生物PCD中加用5类化学指示物,5类化学指示物合格可作为提前放行的标志,生物监测的结果应及时通报使用部门。
预真空(包括脉动真空)压力蒸汽灭菌器每天灭菌前进行B-D 试验。
5、环氧乙烷气体灭菌必须每锅进行物理监测,每包进行化学监测,每灭菌批次进行生物监测。
6、过氧化氢等离子灭菌器必须每锅进行物理监测,每包进行化学监测,每天至少进行一次生物监测。
7、紫外线消毒。
应进行日常监测、紫外灯管照射强度监测和生物监测。
日常监测包括灯管应用时间、累计照射时问和使用人签名。
对新的和使用中的紫外灯管应进行照射强度监测,每年一次。
8、各种消毒后的内镜(如胃镜、肠镜、喉镜、气管镜等)应每季度进行生物监测,细菌总数< 20cfu/件'不得检出致病菌;各种灭菌后的内镜(如腹腔镜、关节镜、胆道镜、膀胱镜、胸腔镜等)必须每月进行生物监测,无菌检浏合格。
内镜消毒效果评价方法
内镜消毒效果评价方法可以根据具体的需求和实际情况选择,以下是一些常见的评价方法:
1. 生物监测:使用生物指示器(如孢子)来评估内镜消毒的有效性。
这种方法通过将生物指示器置于预定的难以消毒的区域或设备上,然后进行消毒过程,最后检查生物指示器是否失活,以评估消毒的效果。
2. 化学指示剂:使用化学指示剂来评估内镜消毒的效果。
常见的化学指示剂是在灭菌或消毒过程中会产生颜色变化的剂剂,通过观察颜色变化来判断消毒的效果。
3. 平板计数法:在内镜消毒前后分别在培养平板上取样,进行细菌计数和培养。
比较两次计数的结果,可以评估内镜消毒的效果。
4. 蛋白质残留检测:使用蛋白质残留检测试剂,比如二硫化双胍(DTNB)试剂,将其涂抹在内镜表面或其他可能残留蛋白质的区域,然后使用光谱分析仪或比色计测量吸光度,以评估内镜表面的蛋白质残留。
5. 内镜表面检查:通过使用显微镜、照相机或其他成像技术来观察内镜表面,评估是否存在可见的残留物或沉积物。
无论使用哪种评价方法,请确保在实际操作中遵循相应的操作规程和标准,以保证准确性和可靠性。
此外,建议与专业的感染控制专家或相关部门合作,以确保评估方法的正确性和可靠性。
卫生处理效果评价卫生处理进行效果评价旨在检验除害处理工作质量是否达到预定目标,并借此总结经验,查找问题,使卫生处理工作不断改进和创新。
一、消毒效果评价(一)评价指标对不同的消毒对象,其消毒效果评价指标不同。
有的必须以国家制定的标准为指标,如《生活饮用水水质标准》(GB5749-85)要求消毒效果应达到无异臭、异味;消毒后30min游离余氯不低于0.3mg/L,管网末梢水不低于0.05mg/L;微生物检验细菌总数<100个/mL,大肠菌群(MPN)<3个/mL,无致病菌。
对无国家标准的消毒对象,一般以细菌杀灭率即消毒前后杀灭微生物的百分率来作为评价指标。
消毒前平均菌落数-消毒后平均菌落数细菌杀灭率=×100%消毒前平均菌落数如:传染病消毒的细菌杀灭率合格指标为99.99%;一般预防性消毒的细菌杀灭率指标为:80%以上为良好,70%~80%为较好,60%~70%为合格,60%以下为不合格。
(二)评价方法常用的物品表面消毒效果评价方法有:自然菌采样检测法、染菌片检测法。
空气消毒效果评价方法有:自然沉降采样检测法、空气采样检测法。
二、杀虫效果评价(一)评价指标1.密度指数传染病疫点杀虫后病媒昆虫应降低99%。
措施前密度指数-措施后密度指数密度指数下降比=×100%措施前密度指数2.相关密度指数(RPI)预防性杀虫其相关密度指数应小于20,大于20为效果不佳。
对照区处理前平均密度值×实验区处理后某时密度值RPI=×100%对照区处理后某时密度值×实验区处理前平均密度值3.对动植物危险性害虫的除害效果评价,一般以虫样全部死亡、除害对象未见到活虫或达到规定的熏蒸浓度做为标准。
(二)评价方法1.人工小时法人工方法捕捉昆虫以小时计数(虫数/人.小时)。
2.笼捕法检测蚊蝇指数时以笼捕获,以日计算笼捕昆虫平均数(虫数/笼.日)。
3.诱捕法以灯光、诱饵等方法诱捕昆虫,以日或小时计算捕获率。
小型压力蒸汽灭菌器灭菌效果监测方法和评价要求
小型压力蒸汽灭菌器是一种常见的灭菌设备,用于消毒医疗器械、药品以及实验室材料等。
为确保其灭菌效果符合标准,需要对其进行监测和评价。
监测方法:
1. 生物指示剂法:将生物指示剂放置于灭菌器中,进行灭菌操
作后进行培养以检测其生长情况,以验证灭菌器的灭菌效果。
2. 物理指标法:测量灭菌器内部的温度、压力、湿度等物理指标,以判断其是否符合灭菌要求。
评价要求:
1. 灭菌效果符合国家标准,达到无菌状态。
2. 灭菌器的温度、压力、湿度等物理指标符合国家标准。
3. 灭菌操作符合操作规程,并有相应的记录。
4. 生物指示剂法检测结果合格,并有相应的记录。
5. 完善的质量管理体系,确保灭菌器的持续稳定性能。
以上评价要求应定期检测和验证,以确保小型压力蒸汽灭菌器的灭菌效果和安全性。
- 1 -。
医院消毒监督与消毒效果评价安徽省疾病预防控制中心安徽省卫生监督所胡庆生本次讲课内容:医院消毒的基本概念医院消毒监督的法律依据医院消毒监督要点医院消毒效果的评价方法医院消毒的基本概念一、消毒(Disinfection):医院消毒是指用物理或化学的方法杀灭或清除传播媒介上的病原微生物,使之达到消除传播作用的处理。
所包含意义:(1)处理的重点目标是病原微生物;(2)达到的目的是使处理后的物品不再具有传播感染的危险,保护暴露人群免受感染;(3)处理过的物品可能仍存在微生物。
二、灭菌(Sterilization):是指用物理或化学的方法杀灭或清除传播媒介上所有微生物,使之达到无菌水平。
所包含的意义:(1)灭菌是一个绝对概念,灭菌处理后的物品上不存在任何活的微生物。
(2)灭菌保证水平指标为10-6。
(3)灭菌处理后的物品可以直接进入人体无菌组织。
三、抗菌(Antibacterial):采用化学或物理方法杀灭细菌或妨碍细菌生长繁殖及其活性的过程。
四、抑菌(Bacteriostasis):采用化学或物理方法抑制或妨碍细菌生长繁殖及其活性的过程。
五、传播媒介(Vector of spread ):指生活和工作环境中污染病原体的固体、气体和液体物质以及污染了病原体的人体体表和表浅体腔。
六、杀灭对数值(Killing log value ,KL):当微生物数量以对数表示时,指消毒前后微生物减少的对数值。
杀灭对数值(KL)=log N0-log ND七、杀灭率(Killing rate ,KR):在微生物杀灭试验中,用百分率表示微生物数量减少的值。
杀灭率(KR)=NO-ND/NO×100%八、灭菌剂(Sterilant):可杀灭一切微生物(包括细菌芽孢)使其达到灭菌要求的制剂。
九、消毒剂(Disinfectant):用于杀灭传播媒介上的微生物使其达到消毒或灭菌要求的制剂。
十、高效消毒剂(High-efficacy disinfectant):指可杀灭一切细菌繁殖体(包括分枝杆菌)、病毒、真菌及其孢子等,对细菌芽孢(致病性芽孢)也有一定杀灭作用,达到高水平消毒要求的制剂。
可编辑修改精选全文完整版医院消毒灭菌效果监测标准操作规程医院消毒是预防医院内感染的重要措施之一,消毒效果的监测是评价其消毒设备运转是否正常、消毒药剂是否有效、消毒方法是否合理、消毒效果是否达标的唯一手段。
为标准消毒效果监测,特制定医院消毒灭菌效果监测的标准操作规程。
一、空气消毒效果的监测1、监测频次:每季进行。
2、采样⑴采样时间:空气消毒后4小时内、手术操作前。
⑵平板暴露法:暴露前先检查平板是否污染,是否有气泡及霉点。
将普通营养琼脂平板〔直径为 9cm〕放在室内各采样点处,采样高度为距地面 m,采样时将平板盖翻开,斜扣放于平板旁,暴露5min,在放置、收取平皿时,手不能在暴露平皿的正上方移动。
⑶布点方法:室内面积≤30m2,设内、中、外对角线上的3点,内、外点布点部位距墙1M处;室内面积>30m2,设 4 角及中央共 5 点,4 角的布点部位距墙壁 1m 处。
图1 室内面积≤30m2布点图图2 室内面积>30m2的布点图3、考前须知⑴采样前,关好门、窗,在无人走动的情况下,静止10min 进行采样。
⑵平板摆放如取一条对角线,防止离门近的一条。
⑶工作人员不要靠近自动门,以免影响监测结果。
4、结果判定⑴非洁净手术部〔室〕、非洁净骨髓移植病房、产房、导管室、新生儿室、器官移植病房、烧伤病房、重症监护病房、血液病病区空气中的细菌菌落总数≤4cfu/15min·直径9cm平皿。
⑵儿科病房、母婴同室、妇产科检查室、人流室、治疗室、注射室、换药室、输血科、消毒供给中心、血液透析中心〔室〕、急诊室、化验室、各类普通病室、感染疾病科门诊及其病房空气中的细菌菌落总数≤4cfu/5min·直径9cm平皿。
二、手、物体外表消毒效果监测1、监测重点科室:手术室、产房、导管室、层流洁净病房、骨髓移植病房、器官移植病房、重症监护病房、新生儿室、母婴室、血液透析病房、烧伤病房、感染疾病科、口腔科、消毒供给中心等。
消毒和灭菌效果的评价方法和标准.(总25页)本页仅作为文档封面,使用时可以删除This document is for reference only-rar21year.March消毒与灭菌效果的评价方法与标准第一篇压力蒸汽灭菌效果评价方法与标准1主题内容与适用范围本方法规定了压力蒸汽灭菌技术标准及其评价灭菌效果的检测方法。
本方法适用于对压力蒸汽灭菌设备灭菌效果的评价。
2试剂本标准所用试剂,凡未说明规格者,均为分析纯(AR),水为蒸馏水。
2.1蛋白胨。
2.2葡萄糖。
2.3溴甲酚紫酒精溶液:取溴甲酚紫2.0g,溶于100mL95%乙醇中。
2.4溴甲酚紫蛋白胨水培养基配制:蛋白胨10.0g,葡萄糖5.0g,溶于1000mL蒸馏水中,调pH值至7.0~7.2,然后再加2%溴甲酚紫酒精溶液0.6mL,摇匀后,按5mL/管,分装包口,置压力蒸汽灭菌器中,于115℃灭菌40min后备用。
3指示菌嗜热脂肪杆菌芽胞(ATCC 7953或SSI K31)菌片,含菌量为5×105~5×106c fu/片,121℃下,杀灭90%微生物所需时间D121值为1.3~1.9min,杀灭时间(KT值)为≤19min,存活时间(ST值)为≥3.9min。
4化学指示剂需用卫生部批准的化学指示剂。
5技术要求国家技术监督局1995-12-15批准 1996-07-01实施6检测方法6.1生物学指标(用作压力蒸汽灭菌设备灭菌效果的依据)。
6.1.1将嗜热脂肪杆菌芽胞菌片两个分别放入灭菌小纸袋内,置于标准试验包中心部位。
6.1.2灭菌柜室内,上、中层中央和排气口处各放置一个标准试验包(由3件平纹长袖手术衣,4块小手术巾,2块中手术巾,1块大手术巾,30块10cm×10cm、8层纱布敷料包裹成25cm×30cm×30cm大小)。
手提压力蒸汽灭菌器用通气贮物盒(22cm×13cm×6cm)代替标准试验包,盒内盛满中试管,指示菌片放于中心部位两只灭菌试管内(试管口用灭菌牛皮纸包封),将盒平放于手提压力蒸汽灭菌器底部。
医院消毒供应中心清洗消毒及灭菌效果监测标准医院消毒供应中心清洗消毒及灭菌效果监测标准医院消毒供应中心清洗消毒及灭菌效果监测标准供应室负责全院灭菌物品的供应任务,灭菌质量直接关系到患者的安危,灭菌质量和灭菌器的灭菌效果与操作情况密切相关。
湿包是蒸汽灭菌中常出现的问题,因为,潮湿使包裹内外形成一个连续的液体通道,使包裹的无菌性受到破坏,所以视为灭菌失败。
必须重新包装灭菌方可下送至临床科室使用。
如此反复的消毒灭菌既浪费时间又消耗材料,也影响临床正常工作,因此,供心室工作中应注意对湿包的识别判断并采取有效措施加以控制。
1湿包判断根据卫生部《消毒技术规范》规定,消毒包含水量一般不超过3%,超过6%为湿包。
有以下情况之一致使包装材料受潮造成生物破坏,均视为湿包。
1.1消毒包外有水滴,触摸包布有潮湿感。
1.2固定的化学指示胶带有水痕迹。
1.3消毒包内有水滴。
1.4消毒包内有被吸收的水分。
被吸收的水分是指盆具和器械盘垫的吸水巾吸收的细小水分,通常只在打开消毒包后,检查触摸吸水巾时才发现。
这部分水分可通过蒸发和再冷凝穿过包裹布。
2引起湿包的因素2.1锅炉房供给蒸汽不稳定,蒸汽压力不足0.3MPa。
2.2蒸汽中水分含量过高。
2.3干燥时间不足。
2.4待消毒包过大,布包包装过紧,器械包包内器械件数多,没有用吸水巾分隔,产生冷凝水不易汽化。
2.5灭菌前后消毒包摆放不当致使潮气不能脱离包裹。
2.6金属物品置上层冷凝水滴湿下层布类物品。
2.7消毒车架上灭菌物品紧贴锅壁或锅底被冷凝水打湿。
2.8蒸汽排出管道未及时清除纤维屑及沉积物致堵塞不畅。
2.9灭菌器性能的维护及保养不当。
3湿包控制3.1加强与锅炉房的沟通,取得适合灭菌所需的安全稳定蒸汽,避免正在灭菌中锅炉加水。
灭菌前排尽管道内冷凝水,预热时间不少于15分钟。
3.2强制干燥时间不少于20分钟,并根据实际情况予以调整。
灭菌结束后,灭菌器内温度降至60℃以下,待自然冷却10分钟以上再打开灭菌器,取出灭菌物品。
消毒与灭菌效果的评价方法与标准第一篇压力蒸汽灭菌效果评价方法与标准1 主题内容与适用范围本方法规定了压力蒸汽灭菌技术标准及其评价灭菌效果的检测方法。
本方法适用于对压力蒸汽灭菌设备灭菌效果的评价。
2 试剂本标准所用试剂,凡未说明规格者,均为分析纯(AR),水为蒸馏水。
2.1 蛋白胨。
2.2 葡萄糖。
2.3 溴甲酚紫酒精溶液:取溴甲酚紫2.0g,溶于100mL95%乙醇中。
2.4 溴甲酚紫蛋白胨水培养基配制:蛋白胨10.0g,葡萄糖5.0g,溶于1000mL蒸馏水中,调pH值至7.0~7.2,然后再加2%溴甲酚紫酒精溶液0.6mL,摇匀后,按5mL /管,分装包口,置压力蒸汽灭菌器中,于115℃灭菌40min后备用。
3 指示菌嗜热脂肪杆菌芽胞(ATCC 7953或SSI K31)菌片,含菌量为5×105~5×106cfu/片,121℃下,杀灭90%微生物所需时间D121值为1.3~1.9min,杀灭时间(KT值)为≤19m in,存活时间(ST值)为≥3.9min。
4 化学指示剂需用卫生部批准的化学指示剂。
5 技术要求国家技术监督局1995-12-15批准 1996-07-01实施6 检测方法6.1 生物学指标(用作压力蒸汽灭菌设备灭菌效果的依据)。
6.1.1 将嗜热脂肪杆菌芽胞菌片两个分别放入灭菌小纸袋内,置于标准试验包中心部位。
6.1.2 灭菌柜室内,上、中层中央和排气口处各放置一个标准试验包(由3件平纹长袖手术衣,4块小手术巾,2块中手术巾,1块大手术巾,30块10cm×10cm、8层纱布敷料包裹成25cm×30cm×30cm大小)。
手提压力蒸汽灭菌器用通气贮物盒(22cm×13cm×6c m)代替标准试验包,盒内盛满中试管,指示菌片放于中心部位两只灭菌试管内(试管口用灭菌牛皮纸包封),将盒平放于手提压力蒸汽灭菌器底部。
6.1.3 经一个灭菌周期后,在无菌条件下,取出标准试验包或通气贮物盒中的指示菌片,投入溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培养基中,56℃培养48h,观察培养基颜色变化。
6.2 化学指标在物品包外用化学指示胶带,可作为物品是否经过灭菌的处理标志。
在物品包内中心部位用化学指示剂,可作为物品是否灭菌的参考标志。
7 结果判定及评价7.1 同次检测中,标准试验包或通气贮物盒内,每个指示菌片接种的溴甲酚紫蛋白胨水培养基全部不变色,判定为灭菌合格。
指示菌片之一接种的溴甲酚紫蛋白胨水培养基由紫色变为黄色时,判定为灭菌不合格。
7.2 化学指示剂的颜色变为与灭菌合格标准色相同时,或熔化时作为灭菌合格的参考标准。
第二篇紫外线表面消毒效果评价方法与标准8 主题内容与适用范围本方法规定了物体表面消毒用紫外线的波长、强度及评价其消毒效果的物理学指标和生物学检测方法。
本方法适用于紫外线直接照射到的物体表面消毒效果评价。
9 指示菌9.1 大肠杆菌(8099或ATCC 25922)。
9.2 枯草杆菌黑色变种芽胞(ATCC 9372)。
10 物理学指标10.1 在电压220V时,普通30W直管型紫外线灯,在室温为20~25℃的使用情况下,253.7nm紫外线辐射强度(垂直1m处)应≥70μW/cm2。
10.2 在电压220V时,高强度紫外线灯,在室温为20~25C的使用情况下,253.7nm紫外线辐射强度(垂直1m处)应≥200μW/cm2。
10.3 照射剂量按式(1)计算:剂量(μW.s/cm2)=强度(μW/cm2)×时间(s) (1)11 检测方法11.1 物理学检测方法11.1.1 灯管的紫外线强度(μW/cm2)用中心波长为253.7nm的紫外线强度测定仪(标定有效期内),在灯管垂直位置1m处测定。
11.1.2 在实际应用中消毒表面的照射强度应以灯管与消毒对象的实际距离测定。
11.1.3 表面消毒接受的照射剂量,应达杀灭目标微生物所需。
对大肠杆菌,照射剂量应达到20000μW·s/cm2,对枯草杆菌黑色变种芽胞应达到100000μW·s/cm2。
11.2 生物学检测方法11.2.1 采用载体定量消毒试验。
载体制备按本标准附录C进行。
11.2.2 开启紫外线灯5min后,将8个染菌玻片平放于灭菌器皿中,水平放于适当距离照射,于4个不同间隔时间各取出2个染菌玻片,分别投入2个盛有5mL洗脱液(1%吐温80,1%蛋白胨生理盐水)试管中,振打80次。
11.2.3 经适当稀释后,取0.5mL洗脱液,作平板倾注,每个染菌玻片接种两个,放37℃培养48h作活菌计数。
11.2.4 阳性对照,除不作照射处理外,取2个染菌玻片分别投入2个盛有5mL洗脱液中振打80次,余按4.2.3进行。
11.2.5 计算杀灭率12 判定标准12.1 对指示菌杀灭率≥99.9%判为消毒合格。
12.2 达物理学检测标准时,作为消毒合格的参考标准。
第三篇液体消毒剂消毒效果评价方法与标准13 主题内容与适用范围本方法具体规定了消毒剂消毒效果生物学检测方法及其评价标准。
本方法适用于消毒剂对各种物体的消毒效果评价。
14 理化指标将消毒剂置20±2℃水浴中,测定在使用浓度下杀灭指示微生物达到消毒或灭菌所需的最短时间(min)。
15 指示微生物15.1 细菌15.1.1 细菌繁殖体:金黄色葡萄球菌(ATCC 6538)、大肠杆菌(8099或ATCC 25 922)。
15.1.2 细菌芽胞:枯草杆菌黑色变种芽胞(ATCC 9732)。
15.2 真菌:白色念珠菌(ATCC 10231)。
15.3 乙型肝炎表面抗原:纯化抗原(1.0mg/mL)。
16 检测方法16.1 中和试验(见附录 A)。
16.2 消毒剂定性消毒试验(见附录 B)。
16.3 消毒剂定量消毒试验(见附录 C)。
16.4 消毒剂杀菌能量试验(见附录 D)。
16.5 乙型肝炎表面抗原(HBsAg)抗原性破坏试验(见附录 E)。
17 消毒效果评价标准17.1 对细菌和真菌的杀灭率≥99.9%,对HBsAg,将检测方法灵敏度104倍或5×1 04倍(载体试验)的HBsAg抗原性破坏,可判为消毒合格。
17.2 对枯草杆菌黑色变种芽胞全部杀灭,可判为灭菌合格。
17.3 在实际应用中消毒效果评价以有机物保护试验的最低浓度和最短时间为该消毒剂达到实用消毒所需的浓度和时间。
附录A中和剂中和效果试验(补充件)A1 内容提要为了准确评价消毒剂对微生物的杀灭作用,消毒试验中要求选择适当中和剂。
所选中和剂不仅能及时中止消毒剂的杀微生物作用,且中和剂本身及其与消毒剂的反应产物(下称中和产物)尚需对微生物无抑制或杀灭作用,对培养基无不良影响。
A2 培养基和试剂A2.1 营养琼脂培养基成分:蛋白胨10.00g牛肉膏 3.00g氯化钠 5.00g琼脂15.00g蒸馏水 1000.00mL制法:除琼脂外,其他成分溶解于蒸馏水中,调pH至7.2~7.4,加入琼脂后加热溶解,过滤分装,经121℃、压力蒸汽作用30min,灭菌后备用。
A2.2 0.03mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.2~7.6,下称PBS)。
成分:磷酸氢二钠2.84g磷酸二氢钾1.36g蒸馏水1000.00mL制法:将磷酸氢二钠与磷酸二氢钾溶解于蒸馏水中,pH为7.2~7.4,分装,经121℃、30min压力蒸汽灭菌后备用。
A3 器材A3.1 锥形烧瓶。
A3.2 平皿(直径9cm)。
A3.3 量筒。
A3.4 精密pH试纸。
A3.5 无菌试管。
A3.6 无菌刻度吸管(1.0,5.0,10.0mL)。
A3.7 恒温培养箱。
A3.8 冰箱。
A3.9 菌落计数器。
A3.10 酒精灯。
A4 中和剂(注明生产厂家,批号)A5 操作方法A5.1 用PBS将指示菌制成5×105~5×106cfu/mL悬液。
A5.2 将消毒剂用灭菌蒸馏水配制成3种不同浓度,在不加中和剂的情况下,测知该消毒剂10min抑杀指示菌99.9%以上的最低有效浓度。
A5.3 取消毒剂10min抑杀指示菌的最低有效浓度与待选择中和剂进行试验,选出中和剂种类并依据等当量中和原则,调整中和剂浓度,选出试验浓度的消毒剂使用中和剂的浓度。
A5.4 中和剂选择试验时,先将消毒剂1.0mL与中和剂溶液9.0mL混合,制成中和产物溶液,再按表A1 分组进行。
表A1 中和剂选择试验photo-2A6 中和试验结果报告方法(如表A2)表A2 中和试验结果举例photo-33、4、5组间误差率计算公式A7 判定标准A7.1 3、4、5组菌数相似,其误差率≤10%。
A7.2 6组无菌生长。
A7.3 2组菌数明显少于3、4、5组。
A7.4 1组不长菌或明显少于2组。
符合上述标准的中和剂表明可消除消毒剂对指示菌的作用,中和剂及其与消毒剂的中和产物对指示菌无毒害,判定为该消毒剂的中和剂。
A8 消毒试验用中和剂浓度的选择按A5.4步骤进行,按A7.1~7.4的标准判定。
附录B消毒剂定性消毒试验(补充件)B1 内容提要定性消毒试验是测定受消毒因子作用后的样本有无细菌生长的试验方法。
用于对消毒因子灭菌效果的鉴定和消毒剂杀灭细菌效果的初步评价。
B2 培养基与试剂B2.1 普通肉汤培养基B2.1.1 成分:蛋白胨10.00g氯化钠 5.00g肉浸液 1000.00mLB2.1.2 制法:取蛋白胨、氯化钠加入肉浸液内,微温溶解,调节pH至弱碱性,煮沸、滤清,调节pH使灭菌后为7.2~7.4,压力蒸汽灭菌备用。
B2.2 试剂B2.2.1 稀释液:含1%蛋白胨的0.03mol/L PBS(pH7.2~7.4)。
B2.2.2 灭菌蒸馏水。
B2.2.3 中和剂:按本标准附录A选择。
B3 器材B3.1 灭菌刻度吸管(1.0,5.0,10.0mL)。
B3.2 灭菌试管。
B3.3 灭菌三角烧瓶。
B3.4 酒精灯。
B3.5 恒温水浴箱。
B3.6 恒温培养箱。
B4 试验方法B4.1 将菌液进行活菌计数,并用稀释液配制成含菌量为5×105~5×106cfu/mL的菌悬液。
B4.2 将灭菌试管10支排列于试管架上,标记管号。
B4.3 每个试管加灭菌蒸馏水2.5mL,放20±2℃水浴中。
B4.4 于第1管内加适当浓度消毒液2.5mL,混匀后取2.5mL移入第2管,再次混匀,从第2管中取2.5mL移入第3管,以此类推至第9管,混匀后弃去2.5mL,第10管中不加消毒液作对照。
B4.5 加菌悬液2.5mL于各管中,混匀并记录各管加菌时间,使菌药混合液中含菌量均为105~106cfu/mL。
B4.6 各管分别于加菌后4个不同间隔时间,取出0.5mL,加入4.5mL中和剂内,中和10min后,取出0.5mL加入4.5mL营养肉汤管内。