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1、取材。
每年的6-8月，选择植株生长健壮，匍匐茎充实，尖端生长良好，无病虫害的优良植株取其茎尖或花药，作为组织培养的外植体。
2、消毒。
材料取来修整后用纱布包好放在自来水龙头下冲洗2-4小时（以茎尖为例），然后进行表面消毒。
先用70%酒精漂洗半分钟，然后用0.1%的新洁尔灭浸泡15-20分钟，再用0.1%的升汞（氯化汞）消毒5-8分钟，最后用1-2%的过氧乙酸消毒1分钟。
每次都要用无菌水冲洗3-4次后再进行下一次消毒。
整个消毒过程都应在超净工作台内完成。
3、接种。
接种在超净工作台内进行，接种前要先用酒精灯对接种用具（镊子、接种针、接种架等）消毒自然放凉。
先用镊子一层层的剥去茎尖外的幼叶和鳞片，然后在解剖镜下找到生长点（可带1-2个叶原基）用接种针挑出生长点（小于0.5毫米），放入事先准备好的盛有培养基的培养瓶内，封好瓶口，置于培养室内培养成小植株。
4、室内培养。
培养室要求干净清洁，室内装有紫外线杀菌灯，每天要对室内进行消毒，以防污染。
培养温度20-28℃，最适温度25℃，相对湿度70%，光照强度1000-2000勒克斯，每日光照10小时左右。
5、继代培养。
每培养25-30天，培养瓶内的小植株就会分出3-5个小植株，把这些小植株分出放于继代培养基内培养；过20-30天后又会长出小植株，如此反复进行继代培养，增加繁殖系数。
6、诱导生根。
根据生产需要可在1-2月份集中一批苗子生根。
草莓试管苗生根很容易，有的在继代培养基上便可生根。
或者在培养基中加入0.5毫克/升的LBA，经30天左右便可长出6-10条长约2-3厘米的小根。
7、温室驯化。
把生好根的小苗经光照锻炼7-10天，从试管内取出，洗净根部培养基，移栽入事先准备好的营养土内，使其逐渐长大发出5-6片新叶的过程称为驯化。
驯化用的营养土要求土质以疏松的沙土掺入少量有机质。
移栽后要浇透水，支小拱棚覆盖塑料薄膜保湿。
驯化温度以15-20℃，前两周空气相对湿度80-100%，第三周开始短时间放风，放风强度逐渐加大，至移栽后第四周可去掉覆盖物。
一、外植体灭菌技术二、不同组织培养基1、种子培养A方法胚培养：MS+BA0.5mg/L+IAA1mg/L +蔗糖3%小苗转移：MS+BA1mg/L+NAA0-0.01mg/L +蔗糖2%-3%B方法胚初代谢培养：MS+BA0.25mg/L+NAA 0.05mg/L +BR 0.00001mg/L 芽增殖培养基：MS+BA1.0mg/L+NAA 0.2mg/L +TDZ 0.001mg/L 生根培养基：1/2MS+IBA0.8-1.2mg/L2、腋芽茎尖培养A方法1/2MS+BA0.5-1.0mg/L +GA30.1-0.5mg/L +KT0.2-1.0mg/L愈伤组织MS+BA0.2-2.0mg/L+GA3 0.2-0.5mg/L +TDZ 0.001mg/L芽生长1/2MS+IBA0.1-2.0mg/L+蔗糖2%+0.5%的活性炭B方法MS+BA2.0mg/L+NAA 0.2mg/L +LH500mg/L+蔗糖5%C方法MS+BA1.5mg/L + KT0.5mg/LD方法1/2MS+BA1.0mg/L+GA3 0.5mg/L3、芽培养A方法1/2MS+IBA1.0mg/L +IAA1.0mg/L +蔗糖20.0mg/L（根诱导）WPM+IBA1.0mg/L+IAA1.0mg/L +蔗糖40.0mg/L（根生长）1/4MS+IBA3.0mg/L+IAA3.0mg/L +蔗糖30.0mg/L（增根数）B方法1/2MS+IBA1.0mg/L +IAA1.0mg/L +蔗糖20.0mg/L（根诱导）WPM+IBA1.0mg/L+IAA1.0mg/L +蔗糖40.0mg/L（根生长）1/2MS+Ca2+（WPM）+IAA3.0mg/L（增根数）4、叶及叶柄培养A方法1/2MS+2,4-D4mg/L + KT0.2mg/L+NAA0.4mg/L+酪蛋白200mg/L （愈伤诱导）WPM+IBA1.0mg/L+IAA1.0mg/L +蔗糖40.0mg/L（根生长）1/4MS+IBA3.0mg/L+IAA3.0mg/L +蔗糖30.0mg/L（增根数）B方法MS+BA15.0mg/L +NAA2.0mg/L（愈伤诱导）WPM+IBA1.0mg/L+IAA1.0mg/L +蔗糖40.0mg/L（根生长）1/2MS+Ca2+（WPM）+IAA3.0mg/L（增根数）5、根培养A方法MS+2,4-D1mg/L（愈伤诱导）MS+2,4-D1mg/L +TDZ5.0mg/L（29℃黑暗继代培养）B方法MS+NAA1.5mg/L（愈伤诱导）MS+NAA1.5mg/L +TDZ5.0mg/L（继代培养）三、组培进展第一阶段：培养物的建立，选着适合的外植株第二阶段：茎芽的增殖方法，诱导不定芽，实强腋芽生枝能力的方法第三阶段：立体植株的生根，生根培养基中培养第四阶段：生根苗的移栽。
植物组培外植体消毒详解外植体的消毒植物组织培养用的外植体大部分取自田间，表面上附着大量的微生物，这是组织培养的一大障碍。
因此在材料接种培养前必须要消毒处理，消毒一方面要求把材料表面上的各种微生物杀灭，同时又不能损伤或只轻微损伤组织材料而不影响其生长。
因此，外植体的消毒处理是植物组织培养工作中的重要一环。
（1）常用的消毒剂常用的消毒剂如下表所示。
理想的消毒剂应具有消毒效果好，易被无菌水冲洗掉或能自行分解，对材料损伤小，对人体及其他生物无害，来源广泛，价格低廉。
常用消毒剂的使用方法及效果①酒精酒精是最常用的表面消毒剂，以70%~75%酒精杀菌效果最好，95%或无水酒精会使菌体表面蛋白质快速脱水凝固，形成一层干燥膜，阻止了酒精的继续渗入，杀菌效果大大降低。
酒精具有较强的穿透力，使菌体蛋白质变性，杀菌效果好。
同时它还具有较强的湿润作用，可排除材料上的空气，利于其他消毒剂的渗入。
但酒精对植物材料的杀伤作用也很大，浸泡时间过长，植物材料的生长将会受到影响，甚至被酒精杀死，使用时应严格控制时间。
但酒精不能彻底消毒，一般不单独使用，多与其他消毒剂配合使用。
②升汞又称氯化汞，Hg2+可以与带负电荷的蛋白质结合，使蛋白质变性，从而杀死菌体。
升汞的消毒效果极佳，但易在植物材料上残留，消毒后需用无菌水反复多次冲洗。
升汞对环境危害大，对人畜的毒性极强，使用后应做好回收工作。
③次氯酸钠次氯酸钠是一种较好的消毒剂，它可以释放出活性氯离子，从而杀死菌体。
其消毒能力很强，不易残留，对环境无害。
但次氯酸钠溶液碱性很强，对植物材料也有一定的破坏作用。
④漂白粉漂白粉的有效成分是次氯酸钙[Ca(ClO)2]，消毒效果很好，对环境无害。
它易吸潮散失有效氯而失效，故要密封保藏。
⑤过氧化氢也称双氧水，消毒效果好，易清除，又不会损伤外植体，常用于叶片的消毒。
⑥新洁尔灭这是一种广普表面活性消毒剂，对绝大多数植物外植体伤害很小，杀菌效果好。
（2）消毒方法①茎尖、茎段及叶片等的消毒消毒前先对植物组织进行修整，去掉不需要的部分，然后用自来水冲洗。
组培实验室常见消毒方法优劣比拟组培实验室是生命科学及相关学科实验室建设中必备的实验室。
组培实验室的消毒是实验室一般治理工作的重要环节，直接关系着组培实验的成功与否和组培幼苗的质量上下。
组培实验室的消毒一般又可分为环境消毒、培养基消毒和外植体的消毒。
培养基的消毒主要是在高压灭菌锅中进行，在此不再赘述。
环境消毒和外植体的消毒则有多种方法，这些方法各有优劣，使用不当时还会对人体产生损害，为此，笔者特对这些典型方法进行分析比拟，为组培实验室的科学治理提供一些参考。
1 组培实验室的环境消毒保持组培实验室的空气清洁度是减少组培污染的重要条件，用于实验室消毒的常规消毒方法包含紫外线照耀法、甲醛熏蒸法、新洁尔灭(苯扎溴铵溶液)法等，比拟新的方法有中草药消毒法。
1.1 紫外线照耀法紫外线是波长在10-400 nm之间辐射光的总称，能引起细菌、病毒等微生物遗传物质的结构发生变化，从而影响DNA复制、RNA转录和蛋白质的翻译，导致病菌或病毒死亡。
此外，紫外线辐射所产生的臭氧和各种自由基可损伤蛋白质和酶分子，导致功能改变。
紫外线消毒具有广谱性，可杀灭细菌、病毒、真菌、支原体等各种微生物。
紫外消毒具有较高的杀菌效率，且由于未使用化学药剂，消毒过程中不会产生对人体和环境有害的副产物。
该技术运行维护简单，费用较低。
采纳室内悬吊式紫外线消毒时，室内安装紫外消毒灯的数量为每平方不少于1. 5 W，照耀时间不少于30 min。
但需要指出的是，过量的紫外线照耀对人体有肯定的危害乃至致癌作用。
紫外线作用于中枢神经系统，可出现头痛、头晕、体温升高等病症。
过量辐射会诱发皮肤癌。
紫外辐射对眼睛的损伤特别明显，严峻时可能诱发白内障。
因此，当组培实验室在用紫外消毒期间，工作人员不要呆在正消毒的空间内，切忌用眼睛凝视紫外灯。
特别的，如超净工作台内的紫外灯翻开消毒时，应预防将手长时间暴漏于紫外灯下。
一般在接种室用紫外线消毒后，不要马上进入接种室，此时室内充满高浓度的臭氧，会对人体，尤其是呼吸系统造成损害。
植物组织培养的七大步骤植物组织培养是一种通过体外条件、培养基和植物激素等手段，从植物的细胞或组织片段中培养出完整植株或其它的植物器官的生物技术方法。
它在现代生物技术和农业生产中有着广泛的应用。
下面将详细介绍植物组织培养的七大步骤。
步骤一：组织材料的选择与处理植物组织培养的第一步是选择合适的组织材料。
组织材料可以是从植物的各个部位（如根、茎、叶）中获得的发育中组织片段或细胞。
在选择组织材料时，需要考虑到植物的种类、性别、生长期等因素。
同时，在取材时要注意保持材料的活性和无菌状态，以避免外部微生物的污染。
步骤二：材料的消毒和无菌处理在进行植物组织培养之前，必须对组织材料进行消毒和无菌处理。
常用的消毒方法有热处理和化学消毒法。
热处理是将组织材料放入含有消毒剂的培养基中，在适当的温度下进行反复处理，以达到杀灭细菌和真菌孢子的目的。
化学消毒法是使用一些消毒剂如过氧化氢、酒精等对组织材料进行处理，以达到无菌状态。
步骤三：培养基的配制与过滤培养基是植物组织培养的基础，它提供了植物生长所需的营养和生长因子。
培养基的配制需要根据组织材料的特性和需求来确定。
一般来说，培养基包括有机营养物、无机盐、糖类、维生素、植物激素等成分。
配制好的培养基需要进行过滤，以去除其中的颗粒物和微生物，保证培养基的无菌状态。
步骤四：培养体外的组织将经过消毒和无菌处理的组织材料，放在含有适当培养基的培养容器中。
培养容器可以是培养皿、瓶子或装载体。
然后，将培养容器放在恒温恒湿的光照条件下进行培养。
在培养过程中，需要定期检查培养容器的状态，确保培养基和气氛的正常。
步骤五：选择培养因子和激素在组织培养过程中，可以根据需要添加不同的培养因子和激素，以促进组织的生长和发育。
常见的培养因子包括生长素、细胞分裂素、维生素等，它们可以提供植物生长所需的营养物和调节植物生长的信号。
激素包括植物生长素、植物激素、生长激素等，它们可以调节植物的生长和发育，促进组织的分化和再生。
组培期末考试题及答案一、选择题（每题2分，共20分）1. 组培技术中，通常使用哪种培养基？A. 固体培养基B. 液体培养基C. 半固体培养基D. 气体培养基答案：B2. 植物组织培养中，以下哪个激素不是必需的？A. 生长素B. 细胞分裂素C. 乙烯D. 赤霉素答案：C3. 组培中诱导分化的常用方法是什么？A. 改变光照条件B. 改变温度C. 改变培养基成分D. 所有以上答案：D4. 以下哪个不是植物组织培养的优点？A. 快速繁殖B. 保持母本性状C. 降低成本D. 产生新品种答案：D5. 组培中常用的消毒方法是什么？A. 紫外线消毒B. 高温消毒C. 化学消毒D. 所有以上答案：D6. 植物组织培养中，愈伤组织的形成通常发生在哪个阶段？A. 诱导期B. 增殖期C. 分化期D. 成熟期答案：B7. 组培中，哪个因素对细胞生长和分化影响最大？A. 光照B. 温度C. pH值D. 培养基成分答案：D8. 组培中，以下哪种培养方式不是常用的？A. 固体培养B. 液体培养C. 气体培养D. 半固体培养答案：C9. 植物组织培养中，以下哪个不是常用的外植体？A. 叶片B. 根C. 种子D. 果实答案：D10. 组培中，以下哪个不是愈伤组织的形态特征？A. 无定形B. 无分化C. 有组织结构D. 细胞密集答案：C二、填空题（每空2分，共20分）1. 组培技术是指在无菌条件下，利用植物的________进行快速繁殖的技术。
答案：组织或细胞2. 在植物组织培养中，常用的生长素有________和________。
答案：吲哚乙酸（IAA）、萘乙酸（NAA）3. 组培过程中，光照对植物的________和________有重要影响。
答案：光合作用、形态建成4. 组培中，培养基的pH值通常控制在________至________之间。
答案：5.5、6.55. 组培中，常用的消毒剂有________和________。
答案：酒精、次氯酸钠6. 组培技术在生产上的应用包括________、________和________。
脱分化外植体继代培养植物细胞全能型种质褐变人工种子器官培养.胚胎培养植物组织培养．灭菌：驯化愈伤组织培养：玻璃化现象无病毒苗．胚状体．愈伤组织．消毒植物生长调节物质接种细胞悬浮培养脱毒苗褐化．再分化．1 植物组培对象分为，，,细胞培养，原生质体培养几种类型。
2 培养基中有机态氮素营养主要是和MS3 种质保存的方式有，，。
4在组织培养中，不耐热对的用法灭菌，耐热的培养基用法灭菌5幼胚培养的三种常见方式是，，。
6 去除植物病毒的主要方法是，，。
7 愈伤组织的形成大志经历，，三个时期8植物组培过程中，最常用的培养基是，大多数植物组培的适宜范围是1．植物组织培养过程中，最常用的培养基是MS ，培养基的pH因外植体的来源不同而异，大多数植物的pH要求调节在 5.8-6.0 范围内。
．2．植物组织培养根据培养方式分为固体培养和液体培养。
3．培养基的灭菌要求压力为一、温度为、维持时间为10～20min．4．在离体叶培养中，6-BA和KT利于的形成：2，4-D利于的形成。
5．茎尖分生组织培养的目的主要是，其茎尖一般取毫米。
6．污染的原因从病源菌上分析主要有两大类和。
7．一个已停止分裂的成熟细胞转变为分生状态，并形成未分化的愈伤组织的现象称为8 White培养基浓度低，适合生根培养，．9．植物组织培养的理论基础是。
糖在植物组织培养中是不可缺少的,它不但作为离体组织赖以生长的碳源,而且还能维持。
11．花药培养前的预处理是最常用的方法。
12．在进行花药和花粉培养时，最适宜的花粉发育时期是。
13，组织培养植株再生的两条途径是和。
2．在分离原生质体的酶溶液内，需要加入一定量的其作用是保持原生质体膜的稳定，避免破裂。
．3. 1902年德国植物生理学家Haberlandt第一次提出植物的理论概念；1943年white提出植物细胞¨¨学说，并出版了《植物组织培养手册》，从而使植物组织培养成为一门新兴的学科．．4 用烘箱迅速干燥洗净后的玻璃器皿时温度可以设在100-130 ℃的温度范围内，而若用它高温干燥灭菌则需在160-180 ℃的温度下1一3小时：烘干植物材料的温度是80 ℃。
植物组织培养是人为控制培养条件，根据植物不同提供特定的培养条件。
组培可以使植物能按几何级数繁殖生产，平均成本低，能快速及时提供规格一致的优质种苗和脱病毒种苗。
植物组织培养需要在十分苛刻的无菌环境进行，组培实验室的环境和空气消毒十分重要，要做到杀孢子的级别（杀灭芽孢和孢子），否则实验室环境中的微生物极易使植物染菌，培养失败。
一．组培实验室常用消毒方式组培实验室常用消毒方式有酒精、升汞、次氯酸钠、漂白粉（次氯酸钙）、新洁尔灭、硝酸银等，虽然这些传统消毒剂各有特色，但也存在诸多缺点，往往造成灭菌不彻底或其它问题，主要有如下情况。
●杀菌率低，不能杀灭芽孢、霉菌孢子等高抗性微生物；●易产生耐药性，需多种消毒剂交替使用；●毒性和刺激性，传统消毒剂对操作人员健康有极大危害；●有残留，传统消毒剂对植物危害较大二．高效、生态的奥克泰士消毒剂Oxytech/奥克泰士作为过氧化氢银离子的倡领者，是多组分杀菌剂，协同微动作用，使用的氧化剂为过氧化氢，结合稳定剂形成复合溶液，作为催化剂添加的痕量银离子可以持久抑菌的效用。
过氧化氢与银结合形成强大的消毒杀菌与抑菌剂。
研究显示，Oxytech/奥克泰士是一种安全有效的抑菌剂和消毒杀菌剂，具有长久的效用，不会产生任何令人不愉快的外观、气味或味道。
更重要的是，奥克泰士-过氧化氢银溶液没有产生任何消毒副产物或其它有毒物质，其作用后完全分解为氧气和水。
三．奥克泰士用于组培实验室消毒的优势✧高效杀菌剂，杀局率大于99.999%，属于广谱消毒剂，能够杀灭细菌、真菌、霉菌、病毒等目前所知的所有类型微生物，且能够杀灭芽孢、霉菌等传统方式难以杀灭的微生物。
✧无色无味、无毒无残留，安全可靠，荣获国际专利的生态安全环保型消毒剂。
杀孢子剂对材料的兼容性很好✧杀菌性能稳定，不易受环境HP、温度及光照的影响，彻底杀灭微生物不会产生耐药性。
✧杀菌作用迅速，3-5分钟可以杀灭芽孢，大大节约时间，从而提高企业的生产效率。
外植体消毒方法比较组培实验室是生命科学及相关学科实验室建设中必备的实验室。
组培实验室的消毒是实验室日常管理工作的重要环节，直接关系着组培实验的成功与否和组培幼苗的质量高低。
组培实验室的消毒一般又可分为环境消毒、培养基消毒和外植体的消毒。
培养基的消毒主要是在高压灭菌锅中进行，在此不再赘述。
环境消毒和外植体的消毒则有多种方法，这些方法各有优劣，使用不当时还会对人体产生伤害，为此，笔者特对这些典型方法进行分析比较，为组培实验室的科学管理提供一些参考。
1 组培实验室的环境消毒保持组培实验室的空气清洁度是减少组培污染的重要条件，用于实验室消毒的常规消毒方法包括紫外线照射法、甲醛熏蒸法、新洁尔灭(苯扎溴铵溶液)法等，比较新的方法有中草药消毒法。
1.1 紫外线照射法紫外线是波长在10-400 nm之间辐射光的总称，能引起细菌、病毒等微生物遗传物质的结构发生变化，从而影响DNA复制、RNA转录和蛋白质的翻译，导致病菌或病毒死亡。
此外，紫外线辐射所产生的臭氧和各种自由基可损伤蛋白质和酶分子，导致功能改变。
紫外线消毒具有广谱性，可杀灭细菌、病毒、真菌、支原体等各种微生物。
紫外消毒具有较高的杀菌效率，且由于未使用化学药剂，消毒过程中不会产生对人体和环境有害的副产物。
该技术运行维护简单，费用较低。
采用室内悬吊式紫外线消毒时，室内安装紫外消毒灯的数量为每平方不少于1. 5 W，照射时间不少于30 min。
但需要指出的是，过量的紫外线照射对人体有一定的危害乃至致癌作用。
紫外线作用于中枢神经系统，可出现头痛、头晕、体温升高等症状。
过量辐射会诱发皮肤癌。
紫外辐射对眼睛的损伤特别明显，严重时可能诱发白内障。
因此，当组培实验室在用紫外消毒期间，工作人员不要呆在正消毒的空间内，切忌用眼睛注视紫外灯。
特别的，如超净工作台内的紫外灯打开消毒时，应避免将手长时间暴漏于紫外灯下。
一般在接种室用紫外线消毒后，不要立即进入接种室，此时室内充满高浓度的臭氧，会对人体，尤其是呼吸系统造成伤害。
组织培养的方法和步骤日期：2010年4月1日来源：互联网作者：植物组培网点击：3033要根据培养目的适当选取材料，选择原则：易于诱导、带菌少。
要选取植物组织内部无菌的材料。
这一方面要从健壮的植株上取材料，不要取有伤口的或有病虫的材料。
另一方面要在晴天，最好是中午或下午取材料，决不要在雨天、阴天或露水未干时取材料。
因为健壮的植株和晴天光合呼吸旺盛的组织，有自身消毒作用，这种组织一般是无菌的。
培养材料的消毒从外界或室内选取的植物材料，都不同程度地带有各种微生物。
这些污染源一旦带人培养基，便会造成培养基污染。
因此，植物材料必须经严格的表面灭菌处理，再经无菌操作手续接到培养基上。
第一步，将采来的植物材料除去不用的部分，将需要的部分仔细洗干净，如用适当的刷子等刷洗。
把材料切割成适当大小，即灭菌容器能放人为宜。
置自来水龙头下流水冲洗几分钟至数小时，冲洗时间视材料清洁程度而宜。
易漂浮或细小的材料，可装入纱布袋内冲洗。
流水冲洗在污染严重时特别有用。
洗时可加入洗衣粉清洗，然后再用自来水冲净洗衣粉水。
洗衣粉可除去轻度附着在植物表面的污物，除去脂质性的物质，便于灭菌液的直接接触。
当然，最理想的清洗物质是表面活性物质—吐温。
第二步是对材料的表面浸润灭菌。
要在超净台或接种箱内完成，准备好消毒的烧杯、玻璃棒、70%酒精、消毒液、无菌水、手表等。
用70%酒精浸10～30s。
由于酒精具有使植物材料表面被浸湿的作用，加之70%酒精穿透力强，也很易杀伤植物细胞，所以浸润时间不能过长。
有一些特殊的材料，如果实、花蕾、包有苞片、苞叶等的孕穗，多层鳞片的休眠芽等等，以及主要取用内部的材料，则可只用70%酒精处理稍长的时间。
处理完的材料在无菌条件下，待酒精蒸发后再剥除外层，取用内部材料。
第三步是用灭菌剂处理。
表面灭菌剂的种类较多，可根据情况选取1—2种使用见表。
第四步是用无菌水涮洗，涮洗要每次3min左右，视采用的消毒液种类，涮洗3-l0次左右。
组培试题及答案一、选择题（每题2分，共20分）1. 组培技术中常用的培养基是：A. 固体培养基B. 液体培养基C. 半固体培养基D. 以上都是答案：D2. 植物组织培养中，脱分化过程发生在：A. 愈伤组织形成阶段B. 胚状体形成阶段C. 根状体形成阶段D. 芽状体形成阶段答案：A3. 下列哪项不是植物组织培养的优点？A. 快速繁殖B. 无性生殖C. 遗传变异D. 易于操作答案：C4. 组织培养中常用的消毒方法是：A. 高压蒸汽灭菌B. 紫外线照射C. 酒精擦拭D. 以上都是答案：D5. 组培过程中，光照对植物组织的影响是：A. 促进光合作用B. 影响形态建成C. 促进细胞分裂D. 以上都是答案：D6. 组织培养中常用的激素是：A. 生长素B. 细胞分裂素C. 乙烯D. 以上都是答案：D7. 组培中，植物的再生途径包括：A. 直接形成器官B. 通过愈伤组织形成器官C. 通过胚状体形成器官D. 以上都是答案：D8. 组培中，植物脱毒的主要方法有：A. 热处理B. 化学处理C. 辐射处理D. 以上都是答案：D9. 组培中，植物生长的适宜温度范围是：A. 10-15℃B. 15-25℃C. 25-35℃D. 35-45℃答案：B10. 组培中，植物生长的适宜光照强度是：A. 100-200 luxB. 200-400 luxC. 400-600 luxD. 600-800 lux答案：C二、填空题（每题2分，共20分）1. 组培中常用的固体培养基成分包括______、______和______。
答案：水、无机盐、碳源2. 植物组织培养的三个基本过程是______、______和______。
答案：脱分化、再分化、再生3. 在组培中，______是影响植物生长和发育的关键因素之一。
答案：激素4. 组培中，______是植物组织培养中常用的消毒剂。
答案：酒精5. 组培中，______是植物组织培养中常用的生长调节剂。
叶片组培消毒方法
叶片组培消毒方法主要包括以下步骤:
1.剪取所需消毒的叶片，用自来水冲洗干净。
2.将叶片放入70%~75%的酒精中浸泡10~30秒,然后用无菌水冲洗2~3次。
3.将叶片放入0.1%的升汞溶液中消毒5~8分钟，然后用无菌水冲洗3~4次。
4.将消毒后的叶片放入铺有滤纸的无菌培养皿中，用解剖刀切成5mmx5mm左右的小块。
在消毒过程中，需要注意以下几点:
1.消毒前先对植物组织进行修整，去掉不需要的部分，然后用自来水冲洗。
2.对于-些表面不光滑或长有绒毛的材料，可用洗涤剂清洗，必要时用毛刷充分刷洗，硬质材料可用刀刮。
3.消毒时在超净台上操作，先用70%酒精浸泡10~30秒，以无菌水冲洗2~3次。
4.消毒后的叶片转入到铺有滤纸的无菌培养皿内，用解剖刀切成5mmx5mm左右的小块。
通过以上步骤，可以有效地对叶片进行消毒，为后续的组培实验打下基础。
同时，在消毒过程中需要注意安全和卫生，避兔交叉污染和意外事故的发生。
制表：审核：批准：。
摘要：控制污染是植物组培苗工厂化生产中重要的技术环节，本文从外植体消毒、操作污染和环境污染、继代培养中污染的防治、减少培养基中的有机成分等方面讨论了减少污染的措施和方法。
关键词：组织培养污染防治方法植物组培苗的工厂化生产在我国发展速度很快，组织培养技术日趋完善，在市场竞争中，如何降低成本是提高经济效益的首要问题，组织培养中污染率的增加势必引起组培苗成本的提高，经济损失很大。
因此,组织培养中降低污染率是工厂化生产中不可忽视的技术环节[1]。
植物组织培养过程中造成污染的原因是多方面的，应根据具体情况从不同方面预防解决。
1 外植体的消毒要尽量选取带菌少的材料，如果室外栽培的材料污染太严重，就要采取一些预防措施：先将植物样本挖出，改为室内盆栽，喷布杀虫剂和杀菌剂，不便移栽的，可套塑料袋，等它们长出新枝条后，再行采样接种。
邢震等对比野外直接采用外植体和经室内黄化处理的外植体组织培养效果分析发现，经黄化处理的外植体污染率低，但分化明显没有野外直接采用的外植体强[2]。
先对材料进行低温预处理也有利于降低污染率，于福科等把刚采回的玫瑰枝置于冰箱7d后，选取带芽茎段培养，并与未经低温处理的材料作对照，发现低温处理后的材料，污染和褐化均有不同程度的降低，且带芽茎段的萌动也明显提早。
这可能与杂菌或某些酶的活性在低温下受抑制或被冻结有关[3]。
高成伟等在夏橙的组织培养中用10ｍｇ/Ｌ培福朗溶液预处理56ｈ接种枝条也取得了较好的消毒效果[4]。
外植体消毒常用药剂有：70 %～75%的乙醇溶液，0.3－0.6％的次氯酸钠溶液和0.1 %的升汞溶液。
选用何种灭菌剂和灭菌时间根据操作者的经验来掌握，既要求将外植体表面的微生物彻底杀死，又要求尽可能少伤害外植体组织和表层细胞。
先用75％的酒精棉花擦拭外植体材料再使用消毒药剂常能取得较好的消毒效果，尤其对有毛的材料。
周俊辉等对玛丽安万年青采用减压灭菌，利用减压抽走植物组织中的气体使消毒剂更易进入植物内部，从而增强杀菌效果，使污染率从对照的93.3 %降低到40.0 %[5]。
植物组培外植体消毒详解Modified by JACK on the afternoon of December 26, 2020植物组培外植体消毒详解外植体的消毒植物组织培养用的外植体大部分取自田间，表面上附着大量的微生物，这是组织培养的一大障碍。
因此在材料接种培养前必须要消毒处理，消毒一方面要求把材料表面上的各种微生物杀灭，同时又不能损伤或只轻微损伤组织材料而不影响其生长。
因此，外植体的消毒处理是植物组织培养工作中的重要一环。
（1）常用的消毒剂常用的消毒剂如下表所示。
理想的消毒剂应具有消毒效果好，易被无菌水冲洗掉或能自行分解，对材料损伤小，对人体及其他生物无害，来源广泛，价格低廉。
常用消毒剂的使用方法及效果①酒精酒精是最常用的表面消毒剂，以70%~75%酒精杀菌效果最好，95%或无水酒精会使菌体表面蛋白质快速脱水凝固，形成一层干燥膜，阻止了酒精的继续渗入，杀菌效果大大降低。
酒精具有较强的穿透力，使菌体蛋白质变性，杀菌效果好。
同时它还具有较强的湿润作用，可排除材料上的空气，利于其他消毒剂的渗入。
但酒精对植物材料的杀伤作用也很大，浸泡时间过长，植物材料的生长将会受到影响，甚至被酒精杀死，使用时应严格控制时间。
但酒精不能彻底消毒，一般不单独使用，多与其他消毒剂配合使用。
②升汞又称氯化汞，Hg2+可以与带负电荷的蛋白质结合，使蛋白质变性，从而杀死菌体。
升汞的消毒效果极佳，但易在植物材料上残留，消毒后需用无菌水反复多次冲洗。
升汞对环境危害大，对人畜的毒性极强，使用后应做好回收工作。
③次氯酸钠次氯酸钠是一种较好的消毒剂，它可以释放出活性氯离子，从而杀死菌体。
其消毒能力很强，不易残留，对环境无害。
但次氯酸钠溶液碱性很强，对植物材料也有一定的破坏作用。
④漂白粉漂白粉的有效成分是次氯酸钙[Ca(ClO)2]，消毒效果很好，对环境无害。
它易吸潮散失有效氯而失效，故要密封保藏。
⑤过氧化氢也称双氧水，消毒效果好，易清除，又不会损伤外植体，常用于叶片的消毒。
1．材料的选用一般用于组织培养的材料称为外植体。
常分为两类。
一类是带芽的外植体，如茎尖、侧芽、鳞芽、原球茎等，组织培养过程中可直接诱导丛生芽的产生。
其获得再生植株的成功率较高，变异性也较小，易保持材料的优良性状。
另一类主要是根、茎、叶等营养器官和花药、花瓣、花轴、花萼、胚珠、果实等生殖器官。
这一类外植体需要一个脱分化过程，经过愈伤组织阶段，再分化出芽或产生胚状体，然后形成再生植株。
外植体的取用与组织部位、植株年龄、取材季节以及植株的生理状态、质量，都对培养时器官的分化有一定影响。
一般阶段发育年幼的实生苗比发育年龄老的栽培品种容易分化，顶芽比腋芽容易分化，萌动的芽比休眠芽容易分化。
在组织培养中，最常用的外植体是茎尖，通常切块在0．5厘米左右，太小产生愈伤组织的能力差，太大则在培养瓶中占据空间太多。
培养脱毒种苗，常用茎尖分生组织部，长度为0．1毫米以下。
2．外植体的消毒植物组培能否取得成功的重要因素之一，就是保证培养物在无菌条件下安全生长。
为此，必须抓好外植体的消毒和实行无菌操作。
由于培养的植物材料大都采集于田间栽培植株，材料上常附有各种微生物，一旦被带入培养基，即会迅速繁殖滋长，造成污染，培养失败。
所以培养前必须对外植体进行严格的消毒处理，消毒的尺度为既能全都杀灭外植体上附带的微生物，但又不伤害材料的生活力。
因此，必须正确选择消毒剂和使用的浓度、处理时间及程序。
目前，常用的消毒剂有次氯酸钙、氯化汞、次氯酸钠、双氧水、酒精（70％）等。
具体消毒方法如下：（1）茎尖、茎、叶片的消毒消毒前先用清水漂洗干净或用软毛刷将尘埃刷除，茸毛较多的用皂液洗涤，然后再用清水洗去皂液，洗后用吸水纸吸干表面水分，用70％酒精浸数秒钟，取出后及时用10％次氯酸钙饱和上清液浸泡10～20分钟。
或用2％～10％次氯酸钠溶液浸泡6～15分钟。
消毒后用无菌水冲洗3次，用无菌纱布或无菌纸吸干接种。
（2）根、块茎、鳞茎的消毒这类材料大都生长在土中，常带有泥土，挖取时易遭损伤。
组培常用的消毒方法一、物理消毒方法：是利用物理因素作用于病原微生物将之杀灭或清除的方法。
物理因素按其在消毒中的作用可分为五类：（１）具有良好灭菌作用的，如热力、微波、红外线、电离国徽等，它杀灭微生物的能力很强，可达来灭菌要求；（２）具有一定消毒作用的，如紫外线、超声波等，可杀灭绝大部分微生物；（３）具有自然净化作用的如寒冷、冰冻、干燥等，它们杀灭微生物的能力有限；（４）具有除菌作用的，如机械清除、通风与过滤除菌等，可将微生物从传染媒介物上去掉；（５）具有辅助作用的，如真空、磁力、压力等，虽对微生物无伤害作用，但能为杀灭、抑制或清除微生物创造有利条件。
二、热力灭菌法：包括干热灭菌与湿热灭菌法。
热力灭菌效果可靠又简便易行，为首选的灭菌方法。
干热灭菌可使菌体蛋白质变性及电解质浓缩。
湿热灭菌可使菌体蛋白质变性，核酸降解及损伤细菌的细胞膜。
湿热灭菌的优越性有穿透力强，菌体吸收水分易变性凝固及蒸汽有潜在热能。
干热灭菌法主要有焚烧法、烧灼法和干烤法3种。
（1）焚烧法：是一种较彻底的灭菌方法，在焚烧炉内焚烧尸体及废弃物，可杀灭细菌芽胞。
（2）烧灼法：为直接用火焰灭菌，例如在微生物实验室内，利用火焰对接种环，试管口等灭菌。
（3）干烤法：为利用烤箱加热至160～170℃，2小时，适用于耐高温的玻璃、陶瓷或金属器皿的灭菌。
湿热灭菌法包括巴氏消毒法、煮沸法、加压蒸汽灭菌法和间歇蒸气灭菌法等。
（1）巴氏消毒法：加热62℃30分钟或71.1℃15～30秒（s），不使蛋白质变性，但可杀灭常见致病菌常用于牛奶和酒类的消毒。
（2）煮沸法：在1个大气压下，将水煮沸（100℃）5分钟，可杀灭细菌繁殖体，如加入2%碳酸钠，可提高沸点至105℃并可防锈，常用于餐具及一些医疗器皿的消毒。
（3）加压蒸汽灭菌法：应用高压蒸汽灭菌器，加压至1.05kg/cm2即温度达121.3℃，15～20分钟，可杀灭细菌芽胞和各类微生物，常用于培养基、葡萄糖盐水输液、手术敷料及各种耐高温湿物品的灭菌。
组培常用的消毒方法
一、物理消毒方法：
是利用物理因素作用于病原微生物将之杀灭或清除的方法。
物理因素按其在消毒中的作用可分为五类：
（１）具有良好灭菌作用的，如热力、微波、红外线、电离国徽等，它杀灭微生物的能力很强，可达来灭菌要求；
（２）具有一定消毒作用的，如紫外线、超声波等，可杀灭绝大部分微生物；
（３）具有自然净化作用的如寒冷、冰冻、干燥等，它们杀灭微生物的能力有限；
（４）具有除菌作用的，如机械清除、通风与过滤除菌等，可将微生物从传染媒介物上去掉；
（５）具有辅助作用的，如真空、磁力、压力等，虽对微生物无伤害作用，但能为杀灭、抑制或清除微生物创造有利条件。
二、热力灭菌法：
包括干热灭菌与湿热灭菌法。
热力灭菌效果可靠又简便易行，为首选的灭菌方法。
干热灭菌可使菌体蛋白质变性及电解质浓缩。
湿热灭菌可使菌体蛋白质变性，核酸降解及损伤细菌的细胞膜。
湿热灭菌的优越性有穿透力强，菌体吸收水分易变性凝固及蒸汽有潜在热能。
干热灭菌法主要有焚烧法、烧灼法和干烤法3种。
（1）焚烧法：是一种较彻底的灭菌方法，在焚烧炉内焚烧尸体及废弃物，可杀灭细菌芽胞。
（2）烧灼法：为直接用火焰灭菌，例如在微生物实验室内，利用火焰对接种环，试管口等灭菌。
（3）干烤法：为利用烤箱加热至160～170℃，2小时，适用于耐高温的玻璃、陶瓷或金属器皿的灭菌。
湿热灭菌法包括巴氏消毒法、煮沸法、加压蒸汽灭菌法和间歇蒸气灭菌法等。
（1）巴氏消毒法：加热62℃30分钟或71.1℃15～30秒（s），不使蛋白质变性，但可杀灭常见致病菌常用于牛奶和酒类的消毒。
（2）煮沸法：在1个大气压下，将水煮沸（100℃）5分钟，可杀灭细菌繁殖体，如加入2%碳酸钠，可提高沸点至105℃并可防锈，常用于餐具及一些医疗器皿的消毒。
（3）加压蒸汽灭菌法：应用高压蒸汽灭菌器，加压至1.05kg/cm2即温度达121.3℃，
15～20分钟，可杀灭细菌芽胞和各类微生物，常用于培养基、葡萄糖盐水输液、手术敷料及各种耐高温湿物品的灭菌。
（4）间歇蒸气灭菌法采用流动蒸气间歇加热方式，以达到灭菌的目的。
将需灭菌物品臵于灭菌器中，100℃15～30分钟，每日一次，连续三日，即可杀灭芽胞。
此法适用于一些不耐高热的含糖、牛奶等培养基。
三、紫外线消毒
（1）特性紫外线属电磁波辐射，最大杀灭微生物波长为253.7nm,其释放的能量较低，故穿透能力较弱。
紫外线杀灭微生物的机理为紫外线主要作用于DNA,使DNA形成胸腺嘧啶二聚体，使微生物DNA失去转化能力而死亡。
（2）主要产品有：普通直管热阴极低压汞紫外线消毒灯，循环风紫外线空气消毒机，紫外线表面消毒器，紫外线消毒箱等。
(3)使用范围适用范围为室内空气，物体表面消毒。
常用的室内悬吊式紫外线灯对室内空气消毒时安装的数量为平均 1.5W/m3,照射时间不少于30分钟。
（4）紫外线消毒应注意的问题
1）保持紫外线灯表面的清洁(酒精擦拭)；定期监测紫外线强度（30W要>70μW/cm2）；
2)消毒室内空气时，房间内应保持清洁干燥，减少尘埃和水雾，温度低于20℃或高于40℃，相对湿度大于60%时，应适当延长照射时间；
3)用于消毒物体表面时，应便于紫外线直接照射于被消毒物体表面；
4)不得使紫外线光源直接照射到人体，以免引起损伤。
四、静电吸附式空气消毒器：
（1）特性静电吸附式空气消毒器采用静电吸附原理，加以过滤系统，不仅可过滤和吸附空气中带菌的尘埃，也可吸附微生物。
（2）适用范围主要用于有人在的条件下空气的消毒。
（3）使用方法在一个20～30m2的房间内，使用一台大型静电式空气消毒器，消毒30min后，可达到国家卫生标准。
（4）注意事项
1）所用消毒器的循环风量(m3/h)必须是房间体积的8倍以上。
2）使用过程中，如发现有电源线损坏、漏电或臭氧泄漏等现象，应马上停止使用，请专业人员修理。
五、常用化学消毒法：
1.漂白粉：为常用消毒剂。
主要成分为次氯酸钙，其杀菌作用决定于次氯酸钙中含的有效氯的量。
由于其性质不稳定，使用时应进行测定，一般以有效氯含量≥25％为标准，少于25％则不能使用。
漂白粉有乳剂、澄清液、粉剂三种剂型。
六、其它消毒法：
澄清液通常用500g粉剂加水5升搅匀，静臵过夜，即成10％澄清液。
常用浓度为0.2％。
用于浸泡、清洗、擦拭、喷洒墙面（每1cm2地面、墙面用200～1000ml）。
对结核杆菌和肝炎病毒用5％澄清液作用1～2小时。
乳剂：20％乳剂用于粪、尿、痰、剩余食物的消毒。
粉剂：用于排泄物、分泌物等消毒。
将排泄物1/5～2/5量的干漂白粉加入后，搅拌均匀，放臵1～2小时即可。
容器再用0.5％澄清液浸泡1～2小时后清洗。
粉剂还可用于潮湿地面消毒，每cm2用20～40g。
漂白粉不适宜对衣服、纺织品、金属品和家具进行消毒。
漂白粉用于消毒剂已有100多年的历史，虽有不稳定等缺点，因其价格便宜及杀菌谱广，现仍用于饮水、污水、排泄物及其污染环境消毒。
2.过氧乙酸：无色透明液体，有刺激性酸味和腐蚀、漂白作用，是强氧化剂，杀菌能力强，0.01％溶液可杀死各种细菌，0.2％溶液可灭活各种病毒，是肝炎病毒较好的消毒剂，1％～2％溶液可杀死霉菌与芽胞。
国内成品为将其原料冰醋酸300ml加浓硫酸15.8ml，装在一个塑料瓶内；另一个塑料瓶装过氧化氢150ml。
需要时合于1瓶摇匀，静臵3天，即成18％过氧乙酸。
溶液使用：对衣物用0.04％浸泡2小时；洗手用0.2％液体；表面喷洒用0.2％～1％溶液，作用30～60分钟；食具洗净后用0.5％～1％溶液浸泡30～60分钟；蔬菜、水果洗净后，用0.2％溶液浸泡10～30分钟。
过氧乙酸也可用于熏蒸，用量1～3g/m3，关闭门、窗，熏蒸30分钟。
过氧乙酸具有腐蚀性和漂白性，因此一些物品及衣物消毒后必须立即洗涤干净。
3.乙醇：为临床最常用消毒剂。
可与碘酊合用于皮肤消毒。
浓度为70％～90％，能迅速杀灭细菌繁殖体，革兰阴性菌尤为敏感，不能杀灭细菌芽胞，不得用于外科器械灭菌。
对肝炎病毒也无效。
4.甲醛：含甲醛36％水溶液，又称福尔马林，是一种古老的消毒剂。
具有刺激性臭。
主要用于熏蒸消毒。
对于皮毛、衣物、污染房间均有效。
有强大杀菌作用，能杀灭芽胞，对细菌繁殖型效果更好。
使用方法为在一密闭房间，用12.5～25ml/m3（有芽胞时加倍）
甲醛液，加水30ml/m3，一起加热蒸发，提高相对湿度。
无热源时，也可用高锰酸钾30g/m3加入掺水的乙醛（40ml/m3），即可产生高热蒸发。
两种方法均要防止发生火灾。
蒸气发生后，操作者迅速离开房间，关好门后，再将门缝封好。
约12～24小时后，打开门窗通风驱散甲醛即可。
或用25％氨水加热蒸发或喷雾以中和甲醛，用量为福尔马林用量之半。
5.碘伏消毒液
主要有效成分及其含量：碘，有效碘含量为0.45～0.55%（W/V）。
主要性能：可杀灭肠道致病菌、化脓性球菌、致病性酵母菌和医院感染常见菌。
使用范围：适用于皮肤消毒，手术部位消毒及手术前刷手消毒
皮肤消毒、手术部位消毒：用原液涂抹擦拭，作用3～5分钟。
