谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase, GSH-Px)试剂盒使用说明

禾本科植物谷胱甘肽氧化物酶的活性测定摘要：本文以羊草的叶片和根为材料, 用0. 2 mo l /L pH 6. 2的磷酸缓冲液( 含1 mmo l/L EDTA-2Na，5%的水溶性PVP)作为谷胱甘肽过氧化物酶（GSH一PX）的提取介质，偏磷酸为酶促反应的蛋白质沉淀剂, 二硫代对二硝基苯甲酸(DTNB ) 与GSH显色反应3min, 在412 nm测定酶管和非酶管的OD值, 以测定谷胱甘肽过氧化物酶的活性关键词：盐碱胁迫；羊草；GSH-PX；酶活性Analyzing Soluble Sugar Content and Biomass of Sweet Sorghumunder Saline-alkali StressAbstract:Soil salinization is a global issue. Experiments prove that growing state of sweet sorghum shows growth inhibition，lower production and physiological disorders under soil salinity In this study,sweet sorghum as our material，was sowed in neutral soil and saline soil, respectively，exploring characteristics of salinity stress for the sweet sorghum and the change of soluble sugar and biomass. According to the particularity of different soils，we observed the relationship between different varieties and salt-alkali stress at different growth stages.Profound understanding of physiological mechanism of sweet sorghum response to salt-alkali stress for screening sweet sorghum germplasm,identifying salinity tolerance and cultivating the new sweet sorghum species is significance.Keywords: Salt stress; sweet sorghum; Glutathione peroxidase; enzyme actirityⅠ1前言植物是一个需氧代谢的有机体。

抗氧化酶的作用简介抗氧化酶是一类在生物体内起到抗氧化作用的酶。

它们能够通过将氧自由基转化为无害物质，从而保护细胞免受氧化损伤。

氧自由基是一种高度反活性的分子，通过与细胞中的脂质、蛋白质和核酸发生反应，会导致细胞损伤甚至死亡。

而抗氧化酶正是在这一过程中发挥重要作用。

抗氧化酶的分类超氧化物歧化酶（superoxide dismutase, SOD）超氧化物歧化酶是最早被发现的抗氧化酶，它能够将超氧自由基（一种常见的氧自由基）转化为分子氧和过氧化氢。

超氧自由基非常容易与生物体内的其他分子发生反应，导致细胞损伤。

超氧化物歧化酶的存在可以有效地清除超氧自由基，减少细胞的氧化损伤。

过氧化氢酶（catalase, CAT）过氧化氢酶是另一种重要的抗氧化酶。

它能够将过氧化氢（一种产生于氧自由基反应中的有毒物质）转化为水和氧气。

过氧化氢是一种强氧化剂，会导致蛋白质、脂质和DNA等生物分子的氧化损伤。

而过氧化氢酶的作用是将过氧化氢分解，从而减轻氧化损伤对细胞的影响。

谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase, GPx）谷胱甘肽过氧化物酶是一类依赖于谷胱甘肽的酶，它能够将多种过氧化物转化为相应的醇。

谷胱甘肽是一种三肽，包含谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸，它具有较强的还原能力，可以和氧自由基等产生活性物质反应而保护细胞。

抗氧化酶的工作机制抗氧化酶通过各自不同的反应机制来清除细胞内的氧自由基，起到抗氧化作用。

超氧化物歧化酶的工作机制超氧化物歧化酶通过催化超氧自由基的转化来发挥作用。

其反应式如下：2O2·⁻ + 2H⁺ → H2O2 + O2超氧化物歧化酶能够加速这一反应，从而将超氧自由基转化为水和氧气。

该酶钴离子和铜离子作为辅助因子，可以促进反应的进行。

过氧化氢酶的工作机制过氧化氢酶主要通过催化过氧化氢的分解来发挥作用。

其反应式如下：2H2O2 → 2H2O + O2过氧化氢酶能够提供合适的活化能，加速这一分解反应的进行。

谷胱甘肽过氧化物酶和硒的关系(一)
谷胱甘肽过氧化物酶和硒的关系
谷胱甘肽过氧化物酶 (Glutathione Peroxidase，GPx)
•GPx是一种重要的酶类，存在于细胞内和细胞外
•GPx能够催化谷胱甘肽（Glutathione，GSH）与过氧化氢（Hydrogen Peroxide，H2O2）等有害物质反应，将其还原为无害物质
•GPx具有抗氧化作用，能够防止有害物质对细胞的损害
硒
•硒是一种微量元素，是人体必需的营养物质之一
•硒存在于许多食物中，如鱼类、肉类、谷类等
•硒具有抗氧化作用，能够帮助清除体内的自由基
•硒还能够促进谷胱甘肽过氧化物酶的活性，增强其抗氧化能力谷胱甘肽过氧化物酶与硒的关系
•谷胱甘肽过氧化物酶的活性与硒的供应密切相关
•硒作为GPx活性中心的一部分，能够与GPx产生稳定的结合
•硒通过参与GPx的催化反应，增强了GPx对有害物质的还原能力和抗氧化能力
•缺乏硒会导致GPx活性下降，降低抗氧化能力，增加细胞受损的风险
结论
•谷胱甘肽过氧化物酶和硒之间存在密切的关系
•硒可以促进谷胱甘肽过氧化物酶的活性，提升细胞的抗氧化能力•适量的硒摄入有助于保护细胞免受有害物质的损害
•合理的膳食结构和均衡摄入硒的食物是维持谷胱甘肽过氧化物酶功能的重要措施。

大鼠谷胱甘肽过氧化物酶正常范围大鼠谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase，GPx）是一种重要的抗氧化酶，具有保护细胞免受氧化应激损伤的重要功能。

它能够将有害的过氧化物质转化为无害的代谢产物，从而维护细胞内氧化还原平衡。

该酶的正常范围可作为综合评估大鼠健康状况的重要指标。

一般来说，正常大鼠的GPx活性应在一定的范围内。

实验研究表明，GPx活性与大鼠的年龄、性别、营养状况等因素相关。

首先，GPx活性随着大鼠的年龄增长而发生变化。

在幼年阶段，大鼠体内GPx活性较低。

随着成长，GPx活性逐渐增加，达到成年期的稳定水平。

然而，在老年阶段，GPx活性又会逐渐降低。

因此，根据大鼠的年龄，我们可以了解其GPx活性是否处于正常范围内。

其次，性别也会对大鼠GPx活性产生一定的影响。

一项研究发现，雄性大鼠的GPx活性明显高于雌性大鼠。

这可能与雄性大鼠对氧化应激的抵抗能力更强有关。

因此，在评估大鼠GPx活性时，应考虑到性别差异。

此外，营养状况也会对大鼠GPx活性产生影响。

一项研究发现，摄入富含谷胱甘肽的食物可以提高大鼠体内GPx活性。

这表明，适当的营养摄入对维持GPx活性的正常范围非常重要。

总结起来，大鼠GPx活性的正常范围受到多种因素的影响，包括年龄、性别以及营养状况等。

我们可以通过测量大鼠的GPx活性来评估其细胞内氧化还原平衡情况。

如果GPx活性超出正常范围，则可能存在氧化应激损伤等问题。

因此，掌握大鼠GPx活性的正常范围对于研究大鼠健康状况具有指导意义。

在实际应用中，我们可以通过特定的实验方法检测大鼠GPx活性，并结合其他指标综合评估大鼠的氧化应激状况。

这为大鼠健康管理和疾病研究提供了重要的参考依据。

谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px/GPX ）活性检测试剂盒说明书微量法注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。

货号：BC1195规格：100T/48S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称规格保存条件提取液液体60 mL×1瓶4℃保存试剂一粉剂×2瓶4℃保存试剂二液体10 μL×1瓶4℃保存试剂三液体30mL×1瓶4℃保存试剂四液体15 mL×1瓶4℃保存试剂五液体5mL×1瓶4℃保存标准品粉剂×1支 4℃保存稀释液液体20 mL×1瓶4℃保存溶液的配制：1、试剂一：临用前加入3.3 mL 稀释液，充分溶解；2、试剂二：临用前按2 μL 试剂二：10 mL 蒸馏水的比例稀释试剂二，现用现配；3、试剂三：瓶底若有结晶可50℃水浴溶解，此溶液为饱和溶液，若底部最终还有结晶，吸取上清使用即可；4、标准品：10 mg 还原型谷胱甘肽。

临用前加入0.405 mL 稀释液溶解为80 μmol/mL 的标准溶液备用。

产品说明：谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase, GSH-Px 或GPX ）是机体内广泛存在的一种重要的过氧化物分解酶。

GPX能够催化还原型谷胱甘肽（GSH ）生成氧化型谷胱甘肽（GSSG ），使有毒的过氧化氢还原成无毒的羟基化合物。

GPX 催化H 2O 2氧化GSH ，产生GSSG ，GSH 能与DTNB 生成在412nm 处有特征吸收峰的化合物，412nm 下吸光度的下降即可反应GPX 的活性。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：可见分光光度计/酶标仪、天平、台式离心机、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、EP 管。

谷胱甘肽对氧化应激的保护作用及其机制氧化应激是一种生理过程，指在细胞内外环境中产生的自由基和其他氧化性物质对细胞内的蛋白质、核酸和膜等分子的电子结构造成的影响。

长期以来，人们认为氧化应激是许多疾病的罪犯，如癌症、心血管疾病、糖尿病等。

在这样的情况下，寻找能够减轻氧化应激损伤的化合物备受关注。

而此时，谷胱甘肽就成为了研究的热门。

谷胱甘肽（glutathione，GSH）是一种三肽，由谷氨酸（glutamate）、半胱氨酸（cysteine）和甘氨酸（glycine）形成的。

GSH是细胞内最主要的抗氧化剂，可以保护细胞内的生物分子不受被氧化损伤。

近年来，越来越多的研究表明，GSH除了作为抗氧化剂防止氧化应激伤害外，还能调节细胞信号转导、细胞凋亡等生物学过程。

GSH含量的变化与机体很多疾病的发生、发展有着密切关系。

在生物体内，GSH的状态可以由其氧化形式（二硫键形式，GSSG）和还原形式（GSH）的比例反映出来。

长期以来，GSH的氧化还原状态被认为是细胞抗氧化能力和氧化应激响应的重要指标之一。

氧化应激状态的提高会导致GSH氧化还原状态的变化，例如GSSG水平升高，GSH水平下降。

因此，监测GSH的氧化还原状态对于评估氧化应激的程度以及细胞抗氧化能力的状况非常重要。

GSH保护细胞的机制有多种，一般主要包括以下几个方面。

首先，GSH可以直接降解有毒物质，如270.0,4-二氯苯氧基乙酰胺（CDNB）、二硫联苯（DTNB）等。

其次，GSH还可以与氧化剂等抗氧化损伤物质发生还原反应，生成具有抗氧化作用的还原性物质。

此外，GSH还能够维持其他抗氧化剂的代谢和再生，并通过调节肝脏、脾脏、淋巴细胞和肾上腺等生物器官和组织的代谢和解毒功能，发挥更全面的保护作用。

但是，GSH对于氧化应激的保护机制还没有被完全阐明。

研究表明，GSH除了参与直接降解有毒物质的反应外，还可以通过间接途径发挥抗氧化作用。

比如，GSH参与多种抗氧化酶的酶促辅助酶的再生，其中最显著的就是谷胱甘肽过酸化酶（glutathione peroxidase，GPx）和谷胱甘肽还原酶（glutathione reductase，GR）。

1.3.6.2 血或组织中谷胱甘肽过氧化物酶（GSH－Px）活力测定1.3.6.2.1 原理谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）是体内存在的一种含硒清除自由基和抑制自由基反应的系统。

对防止体内自由基引起膜脂质过氧化特别重要，其活力以催化GSH氧化的反应速度，及单位时间内GSH减少的量来表示，GSH和5,5’-二硫对硝基苯甲酸（DTNB）反应在GSH-Px催化下可生成黄色的5-硫代2-硝基苯甲酸阴离子，于423nm波长有最大吸收峰，测定该离子浓度，即可计算出GSH减少的量，由于GSH能进行非酶反应氧化，所以最后计算酶活力时，必须扣除非酶反应所引起的GSH减少。

1.3.6.2.2 试剂和仪器仪器：可见光分光光度计、酶标仪、低温高速离心机、匀浆器、恒温水浴锅、微量加样器试剂：叠氮钠磷酸缓冲液pH7.0N a N316.25mg 终浓度2.5mmol/LEDTA-N a27.44mg 终浓度0.2mmol/LN a2HPO4 1.732g 终浓度0.2mol/LN a H2PO4 1.076g 终浓度0.2mol/L加蒸馏水至100mL，用少量HCL、N a OH调pH7.0，4℃保存。

1mmol/L谷胱甘肽（还原型GSH）溶液GSH 30.7mg加叠氮钠磷酸缓冲液至100mL，临用前配制，冰冻保存1－2日。

1.25－1.5mmol/LH2O2溶液取30％H2O20.15－0.17mL，用双蒸水稀释至100mL，作为贮备液，4℃避光保存，临用前将贮备液用双蒸水稀释10倍即可。

偏磷酸沉淀液HPO316.7g（先用蒸馏水溶解）EDTA 0.5gN a Cl 280g加蒸馏水至1000mL，用普通滤纸过滤，室温保存。

0.32mol/LN a2HPO4溶液:N a2HPO422.7g加蒸馏水至500mL，室温保存。

DTNB显色液DTNB 40mg柠檬酸三钠 1.0g加蒸馏水至100mL，4℃避光保存1个月。

0.2M磷酸缓冲液pH7.40.9%生理盐水1.3.6.2.3 实验步骤1.3.6.2.3.1 样品制备溶血液：取鼠血10μl加入到1mL双蒸水中，充分振摇，使之全部溶血1:100待测，4h内测定酶活力。