猪瘟病毒Elase检测试剂盒(中文翻译)

性能指标
感染后11天可检测到血清阳性、敏感性99%，与中和抗体试验相当；特异性100%，与BVDV/BDV无交叉反应
猪蓝耳病抗体检测试剂盒技术参数
产品名称
猪蓝耳病抗体检测试剂盒
单价
13000.00元（人民币）
规格
5板/盒
储存条件及有效期
2~8℃保存；有效期为12个月
产品成分
1、包被板5×96孔
2、酶标结合物（1号液）55mL
6、样品稀释液（5号液）50mL
7、终止液（6号液）30mL
8、阳性对照品2mL
9、阴性对照品3mL
10、封板膜15片
11、说明书1份
检测样品类型
猪血清或血浆
试剂类型
即取即用型
检测靶物
可检测出猪瘟病毒抗体，与BVDV/BDV无交叉反应
软件支持
免费提供软件供分析数据
结果判断
阻断率PI≥40%，判为猪瘟抗体阳性；PI＜40%，判为猪瘟抗体阴性
3、洗涤液10×（2号液）2504号液）30mL
6、样品稀释液（5号液）50mL
7、终止液（6号液）30mL
8、阳性对照品2mL
9、阴性对照品3mL
10、封板膜15片
11、说明书1份
检测样品类型
口腔黏液
试剂类型
即取即用型
检测靶物
能够最早监测免疫或感染，可检测出美洲株、欧洲株、第三种病毒LENA以及高致病性蓝耳病毒株
软件支持
免费提供软件供分析数据
结果判断
S/P≥0.4，判为猪蓝耳病抗体阳性；S/P＜0.4，判为猪蓝耳病抗体阴性。
性能指标
感染后8-14天可检测到血清阳性，敏感性99%、特异性100%
猪瘟抗体阻断ELISA检测试剂盒技术参数

猪瘟抗体快速检测试剂盒——（胶体金法）使用说明书【名称】通用名称：猪瘟抗体快速检测试剂盒（胶体金法）英文名称：Rapid Anti-CSFV Test汉语拼音：Zhuwen Kangti Kuaisu Jiance ShijiHe(Jiaoti Jin Fa)【用途】用于检测猪血清/血浆/全血样品中猪瘟(Classical Swine Fever, CSF)抗体。

【实验原理】猪瘟抗体快速检测试剂盒（胶体金法），系采用胶体金免疫层析技术，检测样品（血清、血浆或全血）中猪瘟抗体的方法。

在玻璃纤维纸上预包被金标记灭活猪瘟抗原（Au-Agl），在硝酸纤维素膜上检测线和对照线处分别包被猪瘟抗原(Ag2)和兔抗猪瘟抗体。

当检测样品为阳性时，样品中猪瘟抗体与胶体金标记猪瘟抗原（Au-Ag1）结合形成复合物，由于层析作用复合物沿纸条向前移动，经过检测线时与预包被的猪瘟抗原(Ag2)形成“Au-Ag1-猪瘟抗体-Ag2-固相材料”免疫复合物而凝聚显色，游离金标记抗原则在对照线处与兔抗猪瘟抗体结合而富集显色。

阴性样品则仅在对照线处显色。

操作简便，快速，结果直观、准确，灵敏度高，容易判定。

【试剂盒组成】1.猪瘟抗体检测卡50头份2.说明书1份3.一次滴管50根【操作方法】1.用1.5ml样品管，采血0.5-1ml待检测血清自然析出或用离心机离心10分钟左右，使血清析出。

2.将检测卡平置于桌面上，用吸管吸取被检血清，在检测卡的椭圆形加样孔内加入2滴约80~100ul。

在室温下反应20分钟判定结果。

（检测卡如在4℃保存，必须恢复至室温后方可进行检测）【结果判定】阳性：对照线区（C）和检测线区(T)各出现一条紫红色线。

检测线(T)的颜色越深，表明猪瘟抗体的滴度越高。

阴性：只有对照线区（C）出现一条紫红色线。

无效：未出现紫红色线或只在检测区(T)出现紫红色线，对照线区(C)未出现紫红色线。

【诊断参考】被检样品加样后20分钟可与对照卡的色带滴度进行参考比较。

动物疫病ELISA检测试剂盒1 范围本文件规定了动物疫病ELISA检测试剂盒的产品规格、技术要求、试验方法、检验规则、标志、包装、说明书、运输和贮存。

本文件适用于动物疫病ELISA检测试剂盒。

2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。

其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB/T 1.1-2020 标准化工作导则第1部分:标准化文件的结构和起草规则GB/T 20001.10 标准编写规则第10部分：产品标准GB/T 191 包装储运图示标志3 术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。

4 技术要求4.1 外观a)外观整洁完好、各组份齐全无错漏。

b)液体组份澄清、无沉淀/絮状物；瓶盖密封紧实；包被板无漏气。

c)各标识标签正确、清晰。

4.2 性能4.2.1 特异性用试剂盒检验病毒阴性样品及特异性阳性样品，结果应均为阴性。

4.2.2 敏感性用试剂盒检验敏感性质控品，结果应符合相应产品质量标准要求。

4.2.3 精密度用试剂盒平行测定精密性参考品，试剂盒变异系数不大于15%。

4.2.4 稳定性配套组分于37℃置7天后检测，结果应符合4.2.1～4.2.3项要求。

5 试验方法5.1 外观用目测法测定，结果应符合4.1的要求。

5.2 性能5.2.1 特异性对待检阴性样品及特异性阳性样品按照试剂盒说明书进行检验，每种样品至少做两个平行，结果应符合4.2.1的要求。

5.2.2 敏感性取经确证的敏感性质控品，按照检测试剂盒的说明书进行检验，每种样品至少做两个平行，结果应符合4.2.2的要求。

5.2.3 精密度使用待检试剂盒平行测定精密性参考品，计算变异系数，确定试剂盒的精密度，结果应符合4.2.3的要求。

CV （%）=√[∑(xi−x ̅)2]n i=1/（n−1）x ̅×100%式中：CV ——变异系数xi ——每个检测数据x ̅——所有检测数据平均值n ——检测数量6 检验规则6.1 组批和抽样以同批原料在同一生产线、一次性制备的产品为同一批次。

猪瘟ELISA抗体检测试剂盒猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒使用说明书【简介】试剂盒由抗原包被的微孔板，酶标羊抗猪IgG及其它试剂制成，应用间接ELISA原理检测猪血清中抗猪瘟病毒抗体。

【用途】猪瘟ELISA诊断试剂盒用于检测猪血清中猪瘟病毒抗体。

评估猪场猪瘟疫苗免疫状况，感染猪的血清学诊断。

【原理】本试剂盒是采用猪瘟抗原包被微孔板，在试验中，加入稀释的对照血清和待检血清，经温育后，若样品中含有抗猪瘟病毒的特异性抗体，则将与检测板上抗原结合，经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后；再加入酶标二抗，与检测板上抗原抗体复合物发生特异性结合；再经洗涤除去未结合的酶结合物，在孔中加TM B底物液，与酶反应形成蓝色产物，加入HF溶液终止反应后，用酶标仪630nm波长测定各反应孔中的OD 值。

【试剂盒主要成分】1 包被抗原的微孔板 2块（96孔/块）2 阴、阳性对照血清各1管（0.5ml/管）3 羊抗猪酶标二抗 1瓶（20ml/瓶）4 20倍浓缩洗涤液 1瓶（30ml/瓶）5 底物A液、B液各1瓶（10ml/瓶）6 终止液 1瓶（10ml/瓶）7 样品稀释液 1瓶（50ml/瓶）8 血清稀释板 2块（96孔/块）9 说明书 1张【样品制备】取动物全血，按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血。

【洗涤液配制】使用前，浓缩的洗涤液应恢复至室温（25℃左右），并摇动使沉淀的盐溶解（最好在37℃水中加热5-10m in），然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释（例如：每板用20 ml浓缩液加上380ml水），稀释好的洗涤液在4℃可以存放7天。

【样品稀释】在血清稀释板中按1：40的体积稀释待检血清（195μl样品稀释液中加5μl待检血清）。

注意：阳性对照和阴性对照1：40稀释，（234μl样品稀释液中加6μl对照血清）。

【注意事项】1 试剂盒使用前各试剂应平衡至室温，使用后放回2-8℃。

2 不同批号试剂盒的试剂组分不得混用，使用试剂时应防止试剂污染。

猪C反应蛋白(CRP)ELISA试剂盒说明书猪C反应蛋白(CRP)ELISA试剂盒试剂盒组成1 30倍浓缩洗涤液 20ml×1 瓶7终止液6ml×1瓶2 酶标试剂6ml×1瓶8标准品（800pg/ml）0.5ml×1瓶3 酶标包被板12孔×8条9标准品稀释液 1.5ml×1瓶4 样品稀释液6ml×1瓶10说明书1份5 显色剂A液6ml×1瓶11封板膜2张6 显色剂B液6ml×1/瓶1密封袋1个猪C反应蛋白(CRP)ELISA试剂盒操作步骤1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

400pg/ml5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液200pg/ml4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液100pg/ml3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液50pg/ml2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液25pg/ml号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。

在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl （样品最终稀释度为5倍）。

加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。

4. 配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此重复5 次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7. 温育：操作同3。

8. 洗涤：操作同5。

9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15 分钟.10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

非洲猪瘟病毒荧光PCR检测试剂盒（一步法）说明书和内包装标签（一）非洲猪瘟病毒荧光PCR检测试剂盒（一步法）说明书【兽药名称】通用名非洲猪瘟病毒荧光PCR检测试剂盒（一步法）商品名无英文名African Swine Fever Virus Real - time PCR Test Kit （One - step）汉语拼音Feizhouzhuwenbingdu Yingguang PCR Jiance Shijihe （Yibufa）【主要成分与含量】编号试剂盒组分装量用法ASFV01 -qf50缓冲液Bl5ml/瓶直接使用ASFV 02 - qf50缓冲液B25ml/瓶直接使用ASFV 03 - qf50PCR反应液900叱管直接使用ASFV 04 - qf50阳性对照1ml /管直接使用ASFV 05 - qf50阴性对照1ml /管直接使用【作用与用途】用于全血、血清、血浆、淋巴结、脾脏、肾脏、扁桃体和肌肉等样品中的非洲猪瘟病毒核酸的检测。

【用法与判定】1用法1.1样品处理1.1.1全血、血清、血浆直接进行下一步试验。

淋巴结、脾脏、肾脏、扁桃体、肌肉等组织样品取0.1〜0.2g,置研钵充分研磨，加入10倍体积约1〜2ml生理盐水，混匀；或置研磨管中，加入10倍体积约1〜2ml生理盐水及研磨珠，用组织研磨仪匀浆。

以5000转/分钟离心5分钟，留上清，即为组织匀浆液。

1.1.2取1.5ml离心管加入100川缓冲液B1,每管分别加入10可全血（EDTA抗凝剂）或20m组织匀浆液、血清、血浆样品、阳性对照和阴性对照混匀。

室温3分钟内涡旋混匀3〜5次。

1.1.3每管加入100W缓冲液B2,涡旋混匀，12000转/分钟离心1分钟，上清为待检核酸。

1.2扩增试剂准备取18WPCR反应液至PCR反应管；依次分别加入2囚阴性对照、样品和阳性对照待检核酸，盖紧管盖，每个反应管内反应体积为20N。

1.3将PCR反应管瞬时离心，置荧光PCR仪内，进行如下反应：1） 95℃预变性20秒；2）95c变性10秒，58c延伸20秒，共40个循环；设置58c收集FAM 荧光信号。

ＸＵ ＡＮ ｅｚ ｅ ｇ ，ＸＵ ｅｍｉ２ ＨＡＯ —ｕ ，Ｚ Ｌｕ ，Ｆ Ｘｕ －ｈ ｎ Ｈ － ｎ ，Ｚ Ｑｉ ＯＵ ｎ － ｉ， ｚ Ｘｉｇ ｑ
ＺＨＵ ａ － ｕ ｎ ，ＷＡＮＧ ｎ ，ＮＩ Ｙｕ ｎｙ ａ Ｑｉ ＮＧ — ａ Ｙｉ ｏ，Ｓ ｂ ＨＥ Ｑｉｇｃ ａ Ｎ ｎ －ｈ ｎ
Ｃｈｎ ｓ ｏ ｒａ ｏ ｔｒ ａｙＭｅ ｉｎ ｉｅｅＪ ｕｎ ｌ ｆＶｅｅｉ ｒ ｄｃ ｅ ｎ ｉ
中 国兽 医杂 志 ２ １ ０ ２年 （ ４ 第 ８卷 ） ９期 第
２ １
猪 瘟 抗 体 间 接 Ｅ ＩＡ 检 测 ＬＳ 试 剂 盒 的 研 制 和 应 用
徐 璐 ，范 学政 ，徐 和 敏 赵 启 祖 ， ，邹 兴 启 ，朱 元 源 ，王 琴 ，宁 宜 宝 ，沈 青春
中 图分 类 号 ： ８ ２ ６ １ ￥５．５ 文献标识码 ： Ａ 文 章 编 号 ： ５ ９ ６ ０ （ ０ ２ ０ — ０ １０ ０ ２ ０ ５ ２ １ ） ９０ ２ ３
Ｄｅ ｅ ｏ ｖ ｌ ｐｍ ｅ ｔ ａ ｐ ｉ ａ ｉ ｎ ｏ ｎ ｉ ｅ ｔＥＬＩ Ａ ｉ ｏ ｄｅ ｅ ｔ ｎ ｎｄ ａ ｐｌｃ ｔｏ ｆｉ ｄ ｒ ｃ Ｓ ｋ ｔｔ ｔｃ ａ ｉ ｄｙ ａ ａ ｎ ｔｃ ａ ｓ ｃ ｌｓ ｎ ｅ ｅ ｉ ｕ ｎｔｂｏ ｇ ｉ ｓ ｌ ｓ ｉ ａ ｗｉ ｅ ｆ ｖ ｒ ｖ ｒ ｓ
（ ．Ｃｈｎ ｎ ｔ ｕ ｅｏ ｔｒｎ ｒ ｕ ｎ ｒ ｌ ｅｊ ｇ １ ０ ８ Ｃｈｎ ； １ ｉａＩ ｓｉ ｔ ｆＶｅｅ ｉａｙ Ｄｒ ｇ Ｃｏ ｔｏ ，Ｂ ｉｎ ０ ０ １， ｉａ ｔ ｉ ２ ．Ｚｈ ｎ ｍｕ Ｉ ｓｉ ｔ ｆＣ ｉａＡｎｍａ ｕ ｓ ａ ｄ ｙＧｒｕ ｏ ｇ ｎ ｔ ｕ ｅｏ ｈ ｎ ｉ ｌ ｎ ｂ ｎ ｒ ｏ ｐ，Ｂｅ ｉｇ １ ０ ９ Ｃｈｎ ） ｔ Ｈ ｉｎ ０ ０ ５， ｉａ ｊ Ａ ｂ ｔ ａ ｔ Ｉ ｈ ｓｓ ｕ ｓｒ ｃ ： ｎ ｔ ｉ ｔ ｄｙ，ｔ ｅ ｅ ｔ ｂｉｉｙ ａ ｄ ｒ ｐｒ ｄｕ ｉ ｉｉｙ ａ ｈ ｌ－ｉｅｏｆｔ ｎｄ ｒ ｃ ｈｅ ｒ ｐ ａ ａ ｌｔ ｎ ｅ ｏ ｃ ｂ ｌｔ ｎｄ ｓ ｅ ｆｌｆ ｈｅＩ ｉｅ ｔＥＬＩ ＳＡ ｉ ｏ ｋ ｔｔ

非洲猪瘟病毒荧光PCR核酸检测试剂盒说明书【兽药名称】通用名称：非洲猪瘟病毒荧光PCR核酸检测试剂盒汉语拼音:Feizliouzhuwen Bingdu Yingguang PCR Hesuan Jianceshijihe英文名称：African swine Fever Virus (ASFV) PCR Nucleic Acid Diagnostic Kit 商品名称：无【用法与判定】1 用法1.1待检样品釆集、保存及运输1.1.1样品釆集（1）活猪样品无菌采集抗凝血或血清5mL（2）病死猪剖检样品或屠宰场剖检样品无菌采集死猪的牌、肺、肾、扁桃体、淋巴结、肌肉等组织样品。

2〜8°C低温运至实验室用于检测。

（3）病猪污染的周边环境采集与病猪相关场所的粪便、饲料、污水样品。

2〜8°C低温运至实验室用于检测。

1.1.2样品保存采集的样品在2〜8°C保存应不超过24小时，-70°C条件下保存，避免反复冻融。

1.1.3样品运输泡沫箱加冰袋后密封进行运输。

包装和运输应符合农业农村部《高致病性动物病原微生物菌（毒）种或者样品运输包装规范》和交通运输部门关于危险品运输管理的有关规定。

1.2样品处理1.2.1血液样品处理抗凝血样品置于离心管中，8000 r/min离心2分钟取上层血浆，编号待检。

非抗凝血样品置于离心管中，待凝固后，8000 r/min离心2分钟取200μL上层血清，编号待检。

1.2.2组织样品处理取适量脾脏、肝脏、淋巴结、扁桃体、肌肉等组织，置于研磨器或研磨管中研磨，再加适量生理盐水混匀，制成约10%的组织匀浆，8000 r/min离心2分钟，取200μL上清于RNase/DNase-free无菌离心管中，编号备用。

1.2.3环境样品处理1.2.3.1粪便、饲料样品处理方法取适量的粪便、饲料放入盛有PBS缓冲液的研磨管中研磨混匀，制成约10%的匀浆液.8000 r/min离心2分钟，取200μL上清于RNase/DNase-free无菌离心管中，编号备用。

2 4 0 滋l ， 移 液 器 吹 匀 后 分 两 次 吸 取 ， 每 次 取 1 0 0 滋l 加 到 抗 原 包
的 浓 缩 洗 涤 液 加 上 190m l纯 水 )。
被 板 孔 )。
3 操作步骤
(2)
实 验 过 程 使 用 一 次 性 枪 头 移 液 器 标 准 操 作 （吸 液 时 摁
(1)
1 0 0 滋l 加 人 到 抗 原 包 被 板 孔 中 ， 阳 性 对 照 和 阴 性 对 照 各 设 2
(4)
所 有 试 剂 用 前 应 恢 复 至 室 温 （2 0 耀2 5 益 )， 回 温 至 少
孔 （轻 轻 振 匀 孔 中 样 品 ， 勿 溢 出 )， 用 封 板 膜 覆 盖 包 被 板 ， 置
后 一■次拍干)。
不准确。
(4)
每 孔 加 酶 标 记 物 1 0 0 滋l ， 用 封 板 膜 覆 盖 包 被 板 ， 置
(6)
不 同 批 次 试 剂 盒 组 分 不 能 混 用 ，尤 其 是 反 应 板 ，对
3 7 益 孵 育 3 0 min。
照 及 酶 标 抗 体 ，避 免 影 响 实 验 结 果 。
如 果 阻 断 率 逸 4 0 % 判 为 阳 性 ， 阻 断 率 在 30耀 40%，该 样 品 判 为
阳 性 和 阴 性 对 照 血 清 （例 如 : 1 2 0 滋 l 样 品 稀 释 液 中 加 1 2 0 滋l 待
可疑。
检Байду номын сангаас血 清 )。
5 检测中应注意事项
2 洗涤液准备
(1)
在 抗 原 包 被 板 设 阴 、 阳 性 对 照 各 2 孔 ，每 孔 的 阴 、
畜业技术 疫病防治

经典猪高热病毒抗原ELISA试剂盒JENO Biotech Inc.描述：VD Pro®CSFV抗原检测试剂盒采用双夹心ELISA法。

介绍：CSFV抗原ELISA检测试剂盒是用来检测CSFV感染的细胞、白细胞以及猪组织提取物样品中是否存在CSFV抗原。

此检测方法快速、简单、特异性好，而且与其它瘟病毒属病毒如牛病毒性腹泻粘膜病病毒（BVDV）和博尔纳病病毒（BDV）之间不存在交叉反应。

CSFV抗原ELISA检测试剂盒与反转录聚合酶链式反应（RT-PCT）和病毒分离有很好的相关性。

原理：CSFV抗原ELISA检测试剂盒是在抗E2单克隆抗体包被的ELISA板上进行的。

白细胞、组织匀浆液或组织培养液的提取样品或稀释样品滴加到ELISA板的每一个孔里，如果样品中存在病毒抗原（gp55），在滴加过氧化物酶连接的抗E2单克隆抗体和TMB显色液后颜色会发生变化。

结果用OD的比值来表示，由样品孔中的OD值和阳性对照孔中的OD 值得出。

试剂盒成分1. CSFV抗E2单克隆抗体包被的板子………………………………………....2块2. 10×样品处理缓冲液（STB）………………………………………………..30ml3. 10×洗涤液…………………………………………………………………….100ml4. 全血处理缓冲液（WTB）……………………………………………..…….100ml5. 稀释缓冲液………………………………………………………………...….50ml6. HRPO 抗-CSFV连接液………………………………………………..……..20ml7. 强阳性对照（SPC）…………………………………………………………..1.0ml8. 弱阳性对照（WPC）…………………………………………………………1.0ml9. 阴性对照（NC）…………………………………………………………..….1.0ml10. TMB显色液…………………………………………………………………..20ml11. 终止液………………………………………………………………..……….10ml12. 指导手册……………………..……………………………………………….1份重要的注意事项在开始任一程序时请阅读下列注意事项。

Precautions for Users
Carefully read this kit insert. Store all reagents between 2 and 8 ºC (do not freeze). Unused strips must be stored between 2 and 8 ºC sealed inside the plastic bag with silica gel as moisture can damage the plates. Even though the antigen has been inactivated during the manufacturing process, the antigen-coated plates should be treated as a potential source of E. rhusiopathiae. Do not expose substrate solution to strong light or any oxidising agents. ABTS substrates are very sensitive even to trace levels of contamination and should not therefore be returned to the bottle once removed. Approximately 25% overage is supplied to allow the removal of a little over the exact requirements. Do not use components past expiry date and do not intermix components from kits with different lot numbers. Careful pipetting and washing throughout the procedure are necessary to maintain precision and accuracy. Do not pipette by mouth. Use gloves during the process. The stop solution is an organic acid, which is toxic, and may be corrosive, handle with care. All waste materials must be properly decontaminated prior to disposal. For veterinary use only. Unopened reagents, correctly stored, are stable until the expiry date printed in the external label.

ELISA试剂盒报价表（一）试剂数量用猪瘟病毒抗原包被的ELISA反应板5块。

（二）操作步骤在使用时，所有的试剂盒组分都必须恢复到室温18～25℃。

使用前应将各组分放置于室温至少一小时。

1.分别将50μl样品稀释液加入每个检测孔和对照孔中。

2.分别将50μl的阳性对照和阴性对照加入相应的对照孔中，注意不同对照的吸头要更换。

3.分别将50μl的被检样品加入剩下的检测孔中，注意不同检样的吸头要分开，以防污染。

4.轻弹微量反应板或用振荡器振荡，将反应板中的溶液混匀。

5.将微量反应板用封条封闭或于湿箱中（18～25℃）孵育2小时，也可以将微量反应板用封条封闭或于湿箱中孵育过夜。

6.吸出反应孔中的液体，并用稀释好的洗涤液洗涤3次，注意每次洗涤时都要将洗涤液加满反应孔，弃去反应孔中的洗涤液并拍干反应板。

也可以用洗板机洗涤3次，每个反应孔应加300μl左右的洗涤液。

注意洗板时要小心，以免样本之间的交叉污染。

7.分别将100μl的抗-CSFV酶标二抗(即取即用)加入反应孔中，用封条封闭反应板并于室温下或湿箱中孵育30分钟。

8.洗板（见6）后，分别将100μl的底物溶液加如反应孔中，并于黑暗的、室温条件下放置10分钟。

加完第一孔后即可计时。

9.在每个反应孔中加入100μl的终止液终止反应。

注意要按加酶标二抗的顺序加终止液。

10.在450nm处测定样本以及对照的吸光度值，也可用双波长（450nm和620nm）测定样本以及对照的吸光度值。

空气调零。

11.计算样本和对照的平均吸光度值。

（三）计算计算被检样本的平均值OD450（＝ODTEST）、阳性对照的平均值（＝ODPOS）、阴性对照的平均值（＝ODNEG）。

根据以下公式计算被检样本和阳性对照的阻断率；（阳性对照阻断率的计算方法基本一致）ODNEG－ODTEST阻断率＝————————X 100ODNEG（四）试验有效性阴性对照的平均OD450应大于0.50。

阳性对照的阻断率应大于50％。

Porcine IL-4 ELISA KitCatalog Number ES14RB (96 tests)Rev. 6Product descriptionThe Porcine IL-4 ELISA Kit is a solid-phase sandwich Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) designed to detect and quantify the level of porcine IL-4 in cell culture supernatants, plasma, and serum.Contents and storageUpon receipt, store at 2-8°C for 6 months or -20°C for 1 year.Components Cat. No. ES14RB(96 tests)Porcine IL-4 Antibody Coated wells, 96-well plate 1 platePorcine IL-4 Biotin Conjugate 2 vialsPorcine IL-4 Standard, recombinant porcine IL-4 2 vialsWash Buffer Concentrate (20X)25 mLAssay Diluent (5X)15 mL Streptavidin-HRP (500X)0.2 mLTMB Substrate12 mLStop Solution8 mLAdhesive Plate Covers2Materials required but not suppliedDistilled or deionized waterMicrotiter plater reader with software capable of measuring at 450 nmPlate washer-automated or manual (manifold dispenser)Calibrated adjustable precision pipettes and glass or plastic tubes for diluting solutionsProcedural guidelinesReview the Procedural guidelines and Plate washing directions in the ELISA Technical Guide at for details prior to starting the procedure.Reagents are lot-specific. Do not mix or interchange different reagent lots from various kit lots.Prepare 1X Wash Buffer1.Allow Wash Buffer Concentrate (20X) to reach room temperature and mix to redissolve any precipitated salts.2.Dilute 20 mL of the Wash Buffer Concentrate into 380 mL of deionized or distilled water. Label as 1X Wash Buffer.3.Store the concentrate and 1X Wash Buffer in the refrigerator. Use the diluted buffer within one month.Prepare diluentAssay Diluent should be diluted 5-fold with deionized or distilled water before use.Prepare biotin conjugate1.Briefly spin down the biotin conjugate before use.2.Add 100 µL of 1X Assay Diluent into the vial to prepare a biotin conjugate concentrate.3.Pipette up and down to mix gently (the concentrate can be stored at 4°C for 5 days).4.The biotin conjugate concentrate should be diluted 80-fold with 1X Assay Diluent and used in step 2 of ELISA procedure.Sample preparation guidelinesCollect samples in pyrogen/endotoxin-free tubes.Freeze samples after collection if samples will not be tested immediately. Avoid multiple freeze-thaw cycles of frozen samples.Thaw completely and mix well (do not vortex) prior to analysis.Avoid the use of hemolyzed or lipemic sera. If large amounts of particulate matter are present in the sample, centrifuge or filter sample prior to analysis.Pre-dilute samples1X Assay Diluent should be used for dilution of serum, plasma, and cell culture supernatant samples.Dilute serum and plasma 2-fold.Because conditions may vary, it is recommended that each investigator determine the optimal dilution to be used for each application.Dilute standardsNote: Use glass or plastic tubes for diluting standards.1.Briefly spin down a vial of lyophilized standard.2.Add 400 µL of (Assay Diluent should be diluted 5-fold with deionized or distilled water before use) into vial to prepare a 400pg/mL standard. Dissolve the powder thoroughly by a gentle mix. Pipette 270 µL of 1X Assay Diluent into each tube. Use the stock standard solution to produce a dilution series (shown below). Mix each tube thoroughly before the next transfer. 1X Assay Diluent serves as the zero standard (0 pg/mL).180180180180180180Diluentvolume270 µL270 µL270 µL270 µL270 µL270 µL270 µLStd1 400 pg/mLStd2160 pg/mLStd364 pg/mLStd425.6 pg/mLStd510.24 pg/mLStd64.096 pg/mLStd71.638 pg/mLBlank0 pg/mLPrepare 1X Streptavidin-HRP solutionNote: Prepapre the Streptavidin-HRP within 15 minutes of usage.1.Briefly spin the Streptavidin-HRP and pipette up and down to mix gently before use, as precipitates may form during storage.2.Dilute Streptavidin-HRP 500-fold with 1X Assay Diluent.3.Do not store diluted solution for future use.Perform ELISA (Total assay time: 4 hours and 45 minutes)Allow all reagents to reach room temperature before use. Mix all liquid reagents prior to use.IMPORTANT! Perform a standard curve with each assay.Determine the number of 8-well strips required for the assay. Insert the strips in the frames for use. Re-bag any unused strips and frames, and store at 2 to 8°C for future use.1Bind antigen a.For the standard curve, add 100 µL of standards to the appropriate wells (see Dilute standards). Forsamples, add 100 µL of diluted samples (see Dilute samples) to the wells.b.Cover wells and incubate for 2.5 hours at room temperature or over night at 4°C with gentle shaking.c.Discard the solution and wash 4 times with 1X Wash Buffer. Wash by filling each well with WashBuffer (300 µL) using a multi-channel Pipette or autowasher. Complete removal of liquid at each stepis essential for good performance. After the last wash, remove any remaining Wash Buffer byaspirating or decanting. Invert the plate and blot it against clean paper towels.2Add biotin conjugate a.Add 100 µL of prepared biotin conjugate (see Prepare biotin conjugate) to each well.b.Incubate for 1 hour at room temperature with gentle shaking.c.Discard the solution. Repeat the wash as in step 3.3Add Streptavidin-HRP a.Add 100 µL of prepared Streptavidin-HRP solution (see Prepare Streptavidin-HRP solution) to eachwell.b.Incubate for 45 minutes at room temperature with gentle shaking.c.Discard the solution. Repeat the wash as in step 3.4Add TMB substrate a.Add 100 µL of TMB Substrate to each well. The substrate will begin to turn blue.b.Incubate for 30 minutes at room temperature in the dark with gentle shaking.5Add stop solution Add 50 µL of Stop Solution to each well. Tap the side of the plate gently to mix. The solution in thewell changes from blue to yellow.Read the plate and generate the standard curve1.Read the absorbance at 450 nm. Read the plate within 30minutes after adding the Stop Solution.e curve-fitting software to generate the standard curve. Afour parameter algorithm provides the best standard curve fit.Optimally, the background absorbance may be subtracted from all data points, including standards, unknowns and controls,prior to plotting.3.Read the concentrations for unknown samples and controlfrom the standard curve. Multiple value(s) obtained forsample(s) by the appropriate factor to correct for the sampledilution.Note: Dilute samples producing signals greater than that of thehigest standard in Standard Diluent Buffer and reanalyze.Multiply the concentration by the appropriate dilution factor.Performance characteristicsStandard curve (example)These standard curves are for demonstration only. A standardcurve must be run with each assay.Intra-assay precisionTo determine intra-assay precision, two standard curves and 3 samples for each standard curve are run. The standard curve concentration points as well as the samples are tested in duplicates on a single plate. Two different concentration values are obtained for each sample, using the two separate standard curves. The two concentration values for each sample is compared to each otherusing the CV% calculation. Intra-Assay CV%: <10%Inter-assay precision To evaluate inter-assay precision, the second standard curve is tested on a separate plate along with the second set of samples. Inter-Assay CV%: <12%RecoverySample TypeAverage % Recovery Range (%)Cell Culture Supernatants 10171-134Plasma 9072-126Serum9968-133SpecificityCross Reactivity: This ELISA kit shows no cross-reactivity with the following cytokines tested: porcine IL-1 beta, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12, GM-CSF, IFN-gamma, TGF beta 1, TNF alphaLinearity of dilutionThe cell culture supernatants, plasma, and serum samples were spiked with recombinant porcine IL-4, serially diluted in sample diluent and evaluated. Observed values were compared to expected values to calculate percent recovery and demonstrate the dilution linearity of the assay.Sample TypeAverage % Expected Range (%)1:2 Dilution1:4 Dilution1:2 Dilution1:4 DilutionCell CultureSupernatants12579114-13570-88 Plasma979476-11071-119Serum948086-10267-94SensitivityThe minimum detecable dose of porcine IL-4 is 1.5 pg/mL. Thiswas determined by assaying replicates of zero and the standardcurve. The mean signal of zero + 2 standard deviations read indose from the standard curve is the LLD. This value is thesmallest dose that is not zero with 95% confidence.Limited product warrantyLife Technologies Corporation and/or its affiliate(s) warrant theirproducts as set forth in the Life Technologies' General Terms andConditions of Sale found on Life Technologies' website at/us/en/home/global/terms-andconditions.html. If you have any questions, please contactLife Technologies at /support.Product label explanation of symbols and warningsCatalogNumberBatchCodeTemperaturelimitationUsebyManufacturerConsultinstructions for useCaution, consultaccompanying documentsDISCLAIMERTO THE EXTENT ALLOWED BY LAW, LIFE TECHNOLOGIES AND/OR ITS AFFILIATE(S) WILL NOT BE LIABLE FOR SPECIAL, INCIDENTAL, INDIRECT, PUNITIVE, MULTIPLE, OR CONSEQUENTIAL DAMAGES IN CONNECTION WITH OR ARISING FROM THIS DOCUMENT, INCLUDING YOUR USE OF IT. Important Licensing Information: These products may be covered by one or more Limited Use Label Licenses. By use of these products, you accept the terms and conditions of all applicable Limited Use Label Licenses.Corporate entity: Life Technologies Corporation | Carlsbad, CA 92008 USA | Toll Free in USA 1 800 955 6288©2021 Thermo Fisher Scientific Inc. All rights reserved. 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