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·79·试 验 研 究农业开发与装备 2015年第1期摘要：本试验旨在建立一种高效液相色谱-紫外检测法（HPLC-UV）测定蒲公英水提液中绿原酸含量的方法。
采用博纳艾杰尔Venusil MP C 18色谱柱 (150 mm×4.6 mm, 5 μm)，以乙腈-0.1%磷酸（15：85）为流动相，流速1.0 mL/min，检测波长327 nm，柱温25 ℃，结果表明绿原酸在2.5~40 µg/mL范围内线性关系良好（r=0.9996），平均加样回收率为96.38%(n=6)，峰面积的相对标准偏差（RSD）为2.33%。
此方法专属性强、重复性好，可用于蒲公英水提液中绿原酸的含量测定。
关键词：蒲公英；绿原酸；高效液相色谱；含量测定蒲公英为菊科植物蒲公英Taraxacum mongolicum Hand.-Mazz.、碱地蒲公英Taraxacum borealisinense Kitam.或同属数种植物的干燥全草[1]。
具有清热解毒，消肿散结，利尿通淋之功效。
用于疔疮肿毒，乳痈，瘰疬，目赤，咽痛，肺痈，肠痈，湿热黄疸，热淋涩痛[2]。
本试验采用高效液相色谱法对蒲公英水提液中的绿原酸含量进行了测定，建立了一种专一性强、重复性好的测定方法,以期为蒲公英水提物的质量控制提供依据。
1 仪器与试药1.1 仪器高效液相色谱仪（Waters Alliance e2695）；美国Millipore 水纯化系统；针筒式微孔滤膜过滤器（天津市科亿隆实验设备有限公司，孔径0.22 μm）。
1.2 药品与试剂绿原酸（批号E-0075，购自上海同田生物技术股份有限公司）；蒲公英水提液，本实验室自制；乙腈（色谱纯，天津市光复精细化工研究所）。
2 方法与结果2.1 色谱条件博纳艾杰尔Venusil MP C 18色谱柱（5 μm, 150 mm×4.6 mm）；流动相：乙腈-0.1%磷酸(15：85)；流速1.0 ml/min；检测波长327 nm；柱温25℃。
高效液相色谱法测定清热祛湿颗粒中绿原酸的含量【摘要】目的：建立高效液相色谱法测定清热祛湿颗粒中绿原酸的含量。
方法：用50%甲醇提取，AgilentC18色谱柱（4.6 mm×250 mm，10 ?滋m）为固定相，乙腈-0.4%磷酸（8∶92）为流动相，检测波长327 nm。
结果：绿原酸在进样量0.0825~0.4949 μg范围，其浓度与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9999)，平均回收率为100.25%（RSD=1.3%）。
结论：该方法能消除其他成分的干扰，准确可靠，重现性好，操作简便快捷，可用于该制剂的质量控制。
【关键词】绿原酸；清热祛湿冲剂；高效液相色谱法清热祛湿颗粒由党参、茵陈、岗梅根、黄芪、苍术、野菊花、陈皮七味药材经加工制备而成，具有清热祛湿，益气生津的功能。
临床上广泛用于暑湿病邪引起的四肢疲倦、食欲不振、身热口干等的治疗。
本品处方中含绿原酸，部颁标准《中药成方制剂》第九册中无该制剂的含量测定方法，文献未见报道，质量可控有待完善。
本实验采用高效液相色谱法测定该制剂中绿原酸的含量，为控制该药品质量提供一种简便快捷、专属性好，结果准确可靠的定量分析方法。
1 仪器和试药LC-10AD vp型高效液相色谱仪，LC-AD vp型高效液相泵，SPD-10A vp型紫外检测器，清热祛湿颗粒（A厂提供，规格：10g/包。
批号分别为：20050501、20050502、20050503），绿原酸对照品（中国药品生物检定所，批号：110753-200212），乙腈为色谱纯，水为纯化水，其它试剂均为分析纯。
2 实验方法与结果2.1 色谱条件：色谱柱：C18柱（4.6 mm×250 mm，10 ?滋m），流动相: 乙腈-0.4%磷酸（8∶92），检测波长：327 nm[1]，流速：1.0 ml/min，柱温：室温，进样量10 μl。
在此色谱条件下所得色谱图（见图1）。
结果表明绿原酸色谱峰与其它成分分离效果良好。
HPLC 法同时测定柴银口服液中5种成分的含量朱日然【摘要】目的：建立高效液相色谱法同时测定柴银口服液中5种成分的含量。
方法用 Zorbaxsb - C18色谱柱（4.6 mm ×250 mm，5μm）分离，乙腈-0.1％磷酸溶液为流动相梯度洗脱，流速为1.0 mL·min -1，检测波长为210 nm。
结果绿原酸、苦杏仁苷、葛根素、黄芩苷、连翘苷的线性范围分别为0.388～9.70μg（r =0.9999）、0.736～18.40μg（r =0.9998）、0.21～5.25μg（r =0.9998）、0.242～10.6μg（r =0.9999）、0.868～21.7μg（r =0.9999），平均加样回收率分别为96.80％（RSD =0.29％）、103.50％（RSD =1.29％）、103.60％（RSD =1.12％）、102.90％（RSD =0.88％）、100.90％（RSD =0.90％）。
结论该方法简便、准确，重复性好，可用于柴银口服液的质量控制。
%Objective To establish an HPLC method for the simultaneous determination of five components in Chaiyin Oral Liquid. Methods Using Zorbax SB - C18 column(4. 6 mm × 250 mm,5 μm),acetonitrile - 0. 1% phosphoric acid solution as mobile phase. The flow rate was 1 mL·min - 1 ,the detection wavelength was at 210 nm. Results The linear ranges of chlorogenic acid,amygdalin,puerarin,baicalinand,phillyrin were 0. 388 ~ 9. 70 μg(r = 0. 999 9),0. 736 ~ 18. 40μg(r = 0. 999 8),0. 21 ~ 5. 25 μg(r = 0. 999 8),0. 242 ~ 10. 6 μg(r = 0. 999 9),0. 868 ~ 21. 7 μg(r = 0. 999 9),respec-tively. The average recoveries( n = 6)were 96. 80%( RSD = 0. 29% ),103. 50%( RSD = 1. 29% ),103. 60%( RSD =1. 12% ),102. 90%(RSD = 0. 88% ),100. 90%(RSD = 0. 90% ),respectively. Conclusion The results indicated that the method wassimple,accurate,highly selective and reproducible,thus it can be used as quality control for Chaiyin Oral Liquid.【期刊名称】《药学研究》【年(卷),期】2015(000)009【总页数】3页(P509-511)【关键词】柴银口服液;绿原酸;苦杏仁苷;葛根素;黄芩苷;连翘苷【作者】朱日然【作者单位】山东中医药大学附属医院，山东济南 250011【正文语种】中文【中图分类】R927.2柴银口服液由北柴胡、金银花、黄芩、葛根、荆芥、青蒿、连翘、桔梗、苦杏仁、薄荷、鱼腥草等11味药组成，具有清热解毒，利咽止咳的功效，主要用于上呼吸道感染外感风热证，是风热感冒常用药品之一。
金银花中绿原酸成份的提取方法分析研究陈茜【摘要】目的对金银花中绿原酸的提取方法进行分析研究.方法针对绿原酸的性质,设计了纯乙醇提取、50％乙醇提取、水提取与超声波提取方法对比实验、醇提法与超声波提取方法对比实验,并对每种提取方法的优缺点进行了分析.结果50％的乙醇水溶液比纯乙醇提取效果好.与传统的醇提取法相比较,超声波法提取绿原酸的提取效果更好.研究亦表明,增加乙醇的浓度,提取绿原酸的浓度会增加,但是当绿原酸浓度到达最高峰后,随着乙醇浓度的增加,绿原酸的含量却呈降低趋势.传统醇提法乙醇的最佳浓度是70％,超声波醇提法乙醇的最佳浓度是60％.结论与水提法相比较,醇提法提取效果较好,绿原酸的提取效率也较高,加入超声波后提取效率变得更高,提取物绿原酸的含量也会增加.【期刊名称】《中国中医药现代远程教育》【年(卷),期】2018(016)005【总页数】3页(P88-90)【关键词】金银花;绿原酸;超声波;乙醇提取;中药化学【作者】陈茜【作者单位】锦州市妇婴医院中药局,辽宁锦州121000【正文语种】中文金银花为常用中药，具有清热解毒，保肝利胆、凉风散热，抗病毒等功能[1]。
近年来研究表明，金银花还具有抗人类免疫缺陷病毒、抗肿瘤的功效，具有广阔的临床应用前景。
金银花的主要成分包括绿原酸、肌醇、木犀草素、异绿原酸以及三萜皂苷等，其中，绿原酸是金银花的抗菌有效成分，一般常用绿原酸的含量高低来评价金银花质量的好坏[2]。
绿原酸是一种有机酸，同时含有羧基和邻二酚羟基，易溶于醇溶液、丙酮和水等溶剂。
当前，从金银花当中提取出绿原酸的常用提取方法包括传统的水提法、乙醇提取法、酶提取法等。
本文将对绿原酸的常用提取方法进行实验和分析总结，并根据绿原酸的性质，设计出了水提取、纯乙醇提取、50%乙醇提取、超声波提取方法与醇提法对比实验、水提法与超声波提取方法对比实验，对每种提取方法的优缺点进行了分析。
1 材料与方法1.1 仪器和试药电子天平、烧杯若干、量筒、锥形瓶、漏斗、超声波发生器（郑州予华仪器制造有限公司）、离心机（江苏天瑞仪器股份有限公司）、高效液相色谱仪（上海仪电分析仪器有限公司）。
超声提取及HPLC测定蒲公英中绿原酸作者：冀新花刘艳芳来源：《安徽农学通报》2020年第15期摘要：采用高效液相色谱（HPLC）法测定蒲公英中的绿原酸含量，通过正交试验优化蒲公英超声提取的工艺条件。
结果表明：超声提取优化工艺条件为甲醇浓度60%，提取时间40min，提取温度28℃。
在优化条件下，采用HPLC法测定焦作地区4个蒲公英样品，其绿原酸含量在0.268～0.281mg/g。
因此，超声提取是一种HPLC分析绿原酸含量的适宜前处理方法。
关键词：蒲公英;绿原酸;提取;检测中图分类号 TQ461 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2020）15-0036-03Abstract： To determine of chlorogenic acid in dandelion by HPLC， the ultrasonic extraction conditions were optimal by orthogonal test. The results shown that optimum extraction conditions are as follows： methanol concentration 60%，time 40min，temperature 28℃. Under the optimum extraction conditions. Content of chlorogenic acid for four samples from Jiaozhu city were The content of chlorogenic acid of four dandelion samples from Jiaozhu were determined by HPLC. The content of chlorogenic acid from samples were0.268-0.281mg/g. So ultrasonic extraction was a suitable pre-treatment method for determine chlorogenic acid in dandelion.Key words： Dandelion; Chlorogenic acid; Ultrasonic extraction; Determine蒲公英（Taraxacum mongolicum Hand.-Mazz.），為菊科蒲公英属多年生草本植物[1-2]，具有抗菌[3]、抗氧化[4]、抗肿瘤[5]等作用。
高效液相色谱法测定病毒消口服液中绿原酸的含量【摘要】目的建立病毒消口服液中绿原酸含量的高效液相色谱法。
方法色谱柱为Hypersil ODS C18(5μm，4.6mm×100mm)，流动相为乙腈-0.4%磷酸溶液(13∶87)，检测波长为327nm；柱温为25℃；流速为1.01ml/min。
结果绿原酸在112～1120ng(r=0.99998，n=6)范围内呈良好的线性关系；平均回收率为99.08%，RSD为0.57%。
结论本方法简便、快速，测定结果准确，重现性好。
【关键词】病毒消口服液；绿原酸；高效液相色谱法；含量Determination of the contents of chloralgenic acid in Bingduxiao Koufuye by HPLC【Abstract】 Objective To establish a HPLC method for determining the contents of chloralgenic acid in BingduxiaoKoufuye.Methods Stationary phase was Hypersil ODS C18(4.6min×100mm；5μm)，mobile phase was acetonitrile-0.4% H3PO4 triethylamine(13：87)，election wavelength 327nm，flow rate 1.0ml/min and coulumn temperature 25℃.Results There was good linearity in range of 112～1120ng(r=0.99998，n=6) for chloralgenic acid.The average recovery of chloralgenic acid was 99.08%；RSD was 0.57%.Conclusion This method is simple，fast and accurate.【Key words】 Bingduxiao Koufuye；chloralgenic acid；HPLC；content病毒消口服液为我院内科传统制剂，具有清热解毒，祛湿，凉血作用，用于治疗上呼吸道感染、腮腺炎、风热感冒，瘟热等病毒性疾患。
绿原酸含量计算公式绿原酸这玩意儿，在很多植物里都有，像金银花、杜仲啥的。
要研究绿原酸的含量，就得有个计算公式。
先来说说为啥要算绿原酸含量。
就拿金银花来说吧，金银花是一味常见的中药材，具有清热解毒的功效。
不同产地、不同生长环境的金银花，绿原酸含量可能会有差别。
如果能准确算出绿原酸含量，就能判断金银花的质量好坏，这对制药、医疗行业那可是相当重要。
那绿原酸含量咋算呢？这就得用到一些化学分析的方法和公式啦。
一般来说，常用的方法是高效液相色谱法（HPLC）。
这个方法呢，先得把样品处理好，提取出里面的绿原酸。
然后把提取液打进色谱仪里，根据色谱图上绿原酸峰的面积或者高度，再结合标准曲线，就能算出样品里绿原酸的含量。
具体的计算公式大概是这样：绿原酸含量（%）=（样品中绿原酸的量÷样品的总量）×100% 。
这里面“样品中绿原酸的量”就得通过色谱分析的数据来算啦。
我给您讲讲我之前做实验的事儿。
有一次，我们实验室要检测一批金银花里的绿原酸含量。
那可是个大工程！从早上开始，我们就忙着称取样品、加入溶剂提取绿原酸。
提取的过程可不简单，得控制好温度、时间，还得搅拌均匀，不然提取不完全，结果就不准确。
好不容易提取完了，又得赶紧过滤、离心，把杂质去掉。
然后就是上色谱仪啦。
看着仪器一点点运行，心里那个紧张啊，就盼着结果能好。
等结果出来，对着色谱图，按照公式一点点计算，眼睛都不敢眨一下，生怕算错了。
最后算出来的绿原酸含量，和预期的有些偏差。
我们又回过头去检查实验步骤，找原因。
原来是提取的时候温度没控制好，导致部分绿原酸分解了。
从那以后，我们做实验就更小心了，每个环节都严格把控。
所以说啊，这绿原酸含量的计算，看起来就是个公式的事儿，实际上背后的实验操作、条件控制那可都马虎不得。
在实际应用中，不同的样品、不同的检测方法，可能公式会有些小变化。
但总的来说，原理都是一样的，就是通过测量和计算，得出绿原酸在样品中的比例。
高效液相色谱法测定蒲公英片中绿原酸和咖啡酸的含量
李文琪
【期刊名称】《安徽医药》
【年(卷),期】2005(009)010
【摘要】目的建立蒲公英片的含量测定方法.方法色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱(4.6 mm×150 mm,5 μm)流动相为甲醇-磷酸盐(pH4.2)(23:77),检测波长323 nm,柱温40 ℃,流速1 ml·min-1;.结果在此色谱条件下,绿原酸在5.6～89.6 mg·L-1范围内,有较好的线性,Y=18559.149-11960.966X,s=32 966.36,r=0.999,咖啡酸在12.5～2000 mg·L-1范围内,有较好的线
性,Y=2407.29+2173.99X,s=6285.924,r=0.999 5.结论本方法可有效控制蒲公英片的质量.
【总页数】2页(P744-745)
【作者】李文琪
【作者单位】安徽医科大学第一附属医院药剂科,安徽,合肥,230022
【正文语种】中文
【中图分类】R9
【相关文献】
1.高效液相色谱法同时测定蒲公英中绿原酸与咖啡酸含量的研究 [J], 刘如良;崔宇宏;高天爱
2.高效液相色谱法测定蒲公英注射液中咖啡酸和绿原酸含量 [J], 张西如;姜建国
3.高效液相色谱法测定蒲地蓝消炎片中咖啡酸、绿原酸的含量 [J], 邵礼梅;李延雪;王云龙
4.HPLC法测定蒲公英中绿原酸和咖啡酸的含量 [J], 夏琴;张新选
5.HPLC-PDA双波长法同时测定蒲公英片中咖啡酸、绿原酸、原儿茶酸的含量 [J], 杨丽群
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HFLC法测定陆英中绿原酸的含量
摘要：本研究以陆英为研究对象，对具有抗肝炎活性的化学成分绿原酸进行了提取工艺、含量测定方法的研究。
实验结果表明：绿原酸在0.8～40 μg/ml浓度范围内线性关系良好，相关系数为0.9998，平均回收率为96.1%，RSD值为4.5%。
该方法准确性、重复性好，为评价陆英质量提供了一个定量依据。
关键词：陆英提取工艺质量评价高效液相色谱法
该文建立了陆英药材中绿原酸的HPLC含量测定的方法，该方法简便、准确、重复性好，为全面评价陆英药材质量提供了定量依据。
1药品、色谱条件及其优化、对照品溶液和供试品溶液的制备
1.1药品
绿原酸对照品，中国药品生物制品检定所提供。
1.2色谱条件
色谱柱：phenomenexC18反相色谱柱(250×4.6 mm，5 μm)。
流动相：(A)乙腈-(B)0.8%甲酸水溶液梯度洗脱：0～12 min：
A7%升至11%，B93%降至89%；
12～49 min：A11%升至25%B89%降至75%。
检测波长：326 nm。
流速：1.0 ml/min。
柱温：35 ℃。
进样量：20 μl。
1.3色谱条件的优化
①流动相系统的考察：试验采用乙腈-水系统，由于目标成分为酸性物质，经试验测定，最终确定采用乙腈-0.8%甲酸水溶液系统进行梯度洗脱。
②流速的影响：考察了流速为0.8、1.0、1.2ml/min对分离效果的影响，结果表明流速为1.0ml/min时分离效果最佳。
③柱温的影响：考察了柱温为30、35℃对分离效果的影响，结果表明柱温为35℃时分离效果最佳。
综上所述，最终确定以采用乙腈-0.8%甲酸水溶液系统进行梯度洗脱，流速为1.0ml/min，柱温为35 ℃。
1.4对照品溶液的制备
分别取绿原酸的对照品适量，精密称定，置于10ml容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，配制成浓度为
0.402 mg/ml的标准储备液I，备用。
再精密量取储备液I 0.10 ml，置5 ml容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，配制成浓度为8.04 μg/ml的标准储备液Ⅱ。
1.5供试品溶液的制备
取陆英药材粉末约 1.0 lg，精密称定，至100ml锥行瓶中，加100ml85%甲醇溶液，超声提取1.0 h。
抽滤，旋转蒸发至近干，用甲醇转移至10 ml容量瓶中，定容至刻度，摇匀，微孔滤膜（0.45 μm）过滤后取续滤液作为供试品溶液。
2结果
2.1标准曲线的绘制
依次分别精密称取绿原酸的储备液I0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml 置于10ml量瓶中；再分别精密称取储备液Ⅱ1.0ml，至10ml量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，制成7个不同浓度的标准溶液。
分别取上述溶液20μL进样，在上述色谱条件下进行HPLC分析，以对照品峰面积A对浓度C(μg/ml)回归分析，得绿原酸的标准曲线，绿原酸的回归方程为：A=5.8×104C-28121(r=0.9998，n=7)。
结果表明，绿原酸在0.8～40μg/ml浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系。
2.2检测限(LOD)和定量限(LOQ)
检测限是信噪比为3时的被测物浓度，为能从背景信号中区分出被检测物的最低浓度。
定量限是信噪比为10时的被测物浓度，是指在保证具有一定可靠性的前提下，能够测定出的样品中被测物的最低浓度。
通过重复测量3次求的平均值，RSD平均值小于5%，绿原酸的检测限和定量限分别为1.28ng/ml和3.84ng/ml。
2.3重复性试验
取陆英药材粉末5份，约1.0g，精密称定1.005g。
进行HPLC分析，记录色谱图峰面积：412028、389181、390383、412370和419431，RSD=3.4%。
2.4稳定性试验
取陆英药材粉末约1g，精密称定，按“供试品溶液的制备”的方法制备供试品溶液，避光保存，备用。
分别在0，4，8，12，24，48h 测试一次，记录色谱峰面积分别为：381583、380548、377956、376437和374985，RSD为0.7%。
结果表明所有分析物在常温下，48h内保持稳定。
2.5回收率试验
向含量已知的陆英样品中加入已知量（72.6μg）的混合标准储备液，然后进行提取和HPLC测试，通过测得量和加入量的比值计算回收率。
提取回收率考察了3个不同浓度，即分别在标准曲线的高、中、低三个水平，每个试验重复三次，计算平均回收率。
结果见表1。
方法的平均回收率为96.1%（100±10%），且RSD=4.5%（小于5%），表明本实验建立的方法具有良好的准确度。
3结语
该文考察了提取溶剂的浓度、提取溶剂用量、提取时间三个因素，对提取工艺进行了优化。
考察50%到90%的甲醇溶剂作为提取溶剂对提取效率的影响：称取药材粉末1.00g，分别加入50%、70%、85%和90%的甲醇，超声提取相同时间，平行操作4次，所得峰面积分别为：271254、367806、
414800和424131。
结果表明随着甲醇浓度增加，提取效率增加，但同时被提出的脂溶性杂质也增多，干扰目标成分的测定，最终确定85%甲醇溶剂为提取溶剂。
以85%甲醇溶剂为提取溶剂，考察溶剂量从50ml到120ml的提取效率。
操作过程同上，所得50、100、120ml 的峰面积分别为364216、426583和429823。
可见，随着甲醇浓度增加，提取效率增加，但是100ml和120ml 提取的量相差不多，所以最终确定以85%甲醇100ml为提取溶剂。
在确定提取溶剂量和浓度之后，试验考察了从30min到90min提取时间对提取效率的影响。
操作过程同上，结果见表2。
可见，60min和90min 的提取效率相差不多，最终确定为60min为提取
时间。
因此，综合上述试验结果，确定最佳提取方法为：称取药材粉末1.0 g，加入85%甲醇溶剂100 ml，超声提取1.0 h。
综上所述，该方法准确性和重复性较好，为评价陆英中绿原酸的含量提供了一个定量依据。
