抗缪勒氏管激素(AMH)测定试剂盒(光激化学发光法)产品技术要求

抗缪勒氏管激素检测SOP文件1.检验目的：本试剂盒用于体外定量测定人血清和（或）血浆中的抗缪勒氏管激素。

2.检验原理：3.性能参数：3.1线性范围：0.10 ng/mL-16.00 ng/mL；3.2最低检测限：不大于0.010 ng/mL；3.3准确度：回收率在85.0%～115.0%范围内；3.4重复性:重复性检测的变异系数（CV）不大于10.0%；3.5批间差:3个批号试剂批间变异系数（CV）不大于15.0%；3.6特异性:用FSH浓度不低于200 IU/L的样本进行检测，检测结果不高于0.01ng/mL；用LH浓度不低于200 IU/L的样本进行检测，检测结果不高于0.01 ng/mL。

4.样品要求：4.1检测标本：血清和血浆（肝素锂、肝素钠、EDTA和柠檬酸钠抗凝）是推荐使用的样本类型。

尚未验证其他抗凝剂能否适用。

4.2采集及处理：在进行离心操作前需让血清样本完全凝结（凝结时间不小于1小时）。

所有的待测样本在测试前均应进行离心操作。

顶部含脂质的离心样本，需转移澄清、无脂质的部分到新的样本管中。

在测试前，确保已去除了残余的纤维蛋白和细胞类物质。

应小心处理患者样本，避免交叉污染。

在测试前，确保患者样本、校准品、质控品均已平衡至环境温度（20-25°C）。

为避免蒸发可能带来的影响，样本和校准品应在上机后2小时内完成测试。

4.3样品储存：在室温（20-25°C）下，样本保存时间不得超过4小时。

在2-8°C条件下，样本保存时间不得超过3天。

冷冻样本在融化后必须进行充分混匀。

样本冷冻次数不得超过1次5.设备和试剂：5.1仪器：iFlash 3000化学发光免疫分析仪。

5.2试剂：抗缪勒氏管激素测定试剂盒（化学发光法）；包装量：2×50人份/盒；5.3储存要求：（1）储存：存放在2-8°C，保持竖直向上。

（2）有效期：试剂瓶及校准品未开封存放于2-8°C：可稳定365天；试剂瓶使用后存放于2-8°C或在机存储：可稳定28天；校准品复溶后在-20°C保存：可稳定28天（仅可冻融一次）。

2. 性能指标
2.1 外观和性状
试剂盒各组分应齐全、完整、液体无渗漏；包装标签应清晰，准确、牢固；试剂盒内组分（磁性微球除外）应为澄清的液体，无沉淀、无悬浮物、无絮状物。

2.2 批内精密度
批内变异系数（CV）应≤8%。

2.3 批间精密度
批间变异系数（CV）应≤15%。

2.4 准确度
回收率应在（90.0%~110.0%）范围内。

2.5 空白限
空白限应≤0.020 ng/mL。

2.6 线性
在（0.100~25.0）ng/mL浓度区间内，线性相关性系数（r）绝对值应≥0.9900。

2.7 校准品均一性
校准品均一性（CV）应≤8%。

2.8 质控品测量准确度
质控品1测定结果应在[2.80~5.20] ng/mL范围内，质控品2测定结果应在[11.2~20.8]ng/mL范围内。

2.9 质控品均一性
质控品均一性（CV）应≤8%。

2.10 溯源性
本试剂盒校准品可以溯源至企业内部校准品。

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抗缪勒氏管激素（AMH）测定试剂盒（光激化学发光法）适用范围：本试剂盒用于体外定量测定人血清中抗缪勒氏管激素（AMH）的含量。

1.1 产品型号说明：1. 校准品浓度批特异，详见定值单。

2. 质控品质控范围批特异，详见定值单。

2.1 外观试剂盒组分齐全，内外包装均完整，标签清晰，液体试剂无渗漏。

2.2空白限不高于0.02ng/mL。

2.3准确性回收率应在85.00%～115.00%范围内。

2.4线性在[0.02，24.00]ng/mL区间内，试剂盒剂量-反应曲线线性相关系数（r）应不小于0.9900。

2.5重复性质控品测定结果的变异系数（CV）应不大于8.00%。

2.6批间差在三个不同批次产品之间，质控品测定结果的变异系数（CV）应不大于15.00%。

2.7质控品测定值同一套质控品的测定结果应在本试剂盒规定的范围之内。

2.8特异性2.8.1与促黄体生成素（LH）浓度为500IU/L的LH在本试剂盒上测定的测定结果应不高于0.02ng/mL。

2.8.2 与促卵泡生成激素（FSH）浓度为500IU/L的FSH在本试剂盒上的测定结果应不高于0.02ng/mL。

2.8.3与抑制素A（Inhibin-A）浓度为100ng/mL的抑制素A在本试剂盒上的测定结果应不高于0.02ng/mL。

2.8.4与激活素A（Activin-A）浓度为100ng/mL的激活素A在本试剂盒上的测定结果应不高于0.02ng/mL。

2.9 稳定性取2℃～8℃保存至失效期3个月内的试剂盒，检测2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.7、2.8项，结果应符合相应规定。

2.10 溯源性按照GB/T 21415-2008《体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品和控制物质赋值的计量学溯源性》提供所用AMH校准品的来源、赋值过程以及测量不确定度等内容，本试剂盒配套校准品溯源至本公司抗缪勒试管激素工作校准品。

本技术介绍了一种定量检测抗缪勒氏管激素含量的试剂盒及其检测方法，试剂盒包括NHS磁珠悬浮液、抗缪勒氏管激素单抗I、抗缪勒氏管激素单抗II、偶联缓冲液、封闭液、增强液、清洗液、校准品；本技术将时间分辨荧光免疫分析法的灵敏性、磁分离技术的快速性相结合，检测方法操作简便，检测时间大大缩短，重复性良好，可大面积用于临床检测。

技术要求1.一种定量检测抗缪勒氏管激素含量的试剂盒，其特征在于，包括：NHS磁珠悬浮液、抗缪勒氏管激素单抗I、抗缪勒氏管激素单抗II、偶联缓冲液、封闭液、增强液、清洗液、校准品。

2.一种定量检测抗缪勒氏管激素含量的试剂盒的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)取抗缪勒氏管激素单抗I用偶联缓冲液稀释至浓度≥20ug/mL；(2)取100μL的NHS磁珠悬浮液于反应管中，磁性分离，保留NHS磁珠，弃上清液；加入500μL的偶联缓冲液于反应管中，涡旋15s；磁性分离，保留NHS磁珠，弃上清液；(3)取1mL已稀释的抗缪勒氏管激素单抗I加入到反应管中，涡旋30s，混匀NHS磁珠；将反应管置于旋转混合仪上，室温孵育2h；(4)孵育结束后，磁性分离，弃上清液，保留NHS磁珠；加入1mL的封闭液于反应管中，涡旋20s，将反应管置于旋转混合仪上，室温孵育1h，磁性分离，弃上清液，保留NHS磁珠；最后加入1mL的清洗液于反应管中，涡旋20s，磁性分离，弃上清液，保留NHS磁珠；重复上述清洗步骤1次；得到偶联抗缪勒氏管激素单抗I的磁珠，加入保存液后，4°保存待用；(5)取500μL抗缪勒氏管激素单抗II、200μL的Eu3+-DTPA加入到反应管中，25℃磁力搅拌反应24h，得到Eu3+标记的抗缪勒氏管激素单抗II，将Eu3+标记的抗缪勒氏管激素单抗II用蛋白柱纯化后保存待用；(6)在96孔微孔板中，依次加入偶联抗缪勒氏管激素单抗I的磁珠、50μL校准品或待测血清、150μL Tris-HCL反应缓冲液，25℃振荡孵育5min，静置2min，保留偶联抗缪勒氏管激素单抗I的磁珠，弃上清；用清洗液重复上述清洗步骤5次；再加入200μL的Eu3+标记的抗缪勒氏管激素单抗II，25℃振荡孵育5min；用清洗液重复上述清洗步骤5次；加入200μL增强液，25℃振荡孵育5min；采用时间分辨荧光免疫分析仪进行检测。

抗缪勒管激素（AMH）测定试剂盒（磁微粒化学发光法）适用范围：该产品用于体外定量测定人血清样本中的抗缪勒管激素（AMH）含量。

1.1 规格100测试/盒50测试/盒。

1.2 主要组成成分试剂盒由试剂1、试剂2、磁分离试剂、校准品和质控品组成。

校准品和质控品浓度具有批特异性，具体浓度见瓶标签。

2.1外观2.1.1试剂盒各组分应齐全、完整、液体无渗漏；2.1.2磁分离试剂摇匀后为均匀悬浊液，无明显凝集；2.1.3液体组分应澄清，无沉淀或絮状物；2.1.4包装标签应清晰，易识别。

2.2线性在[0.02, 30.00]ng/mL的测量范围内，试剂盒的相关系数（r）应≥0.9900。

2.3空白限应不大于0.015ng/mL。

2.4准确度回收率应在85.0%~115.0%范围内。

2.5重复性批内变异系数（CV）应不大于10.0%。

2.6批间差批间变异系数（CV）应不大于15.0%。

2.7质控品的赋值有效性质控品的测量值应在质控范围内。

2.8分析特异性试剂盒与表1中有关潜在交叉反应物应无显著的交叉反应。

表1特异性2.9 校准品和质控品的批内瓶间差2.9.1 校准品的批内瓶间差校准品A的S(瓶间)≤1.0，校准品B～校准品F的批内瓶间差CV≤10.0%。

2.9.2 质控品的批内瓶间差质控品的批内瓶间差CV≤10.0%。

2.10 溯源性根据GB/T 21415及有关规定提供校准品的来源、赋值过程以及不确定度等内容，抗缪勒管激素（AMH）校准品溯源至企业校准品，企业校准品与已上市产品比对赋值。

2.11 稳定性2.11.1 效期稳定性试剂盒在2℃～8℃条件下储存，有效期为12个月，取超过有效期一个月内的试剂盒检测线性、空白限、准确度、重复性、质控品的赋值有效性应符合2.2、2.3、2.4、2.5、2.7的要求。

2.11.2 复溶稳定性2.11.2.1校准品和质控品开瓶复溶后，室温保存，可稳定4小时，在第5个小时再次检测，其中校准品A的绝对偏差应在±1ng/mL范围内，校准品B～校准品F和质控品相对偏差应在±10%范围内。

本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断人（Human）缪勒管抑制物质/抗缪勒管激素（MIS/AMH）ELISA检测试剂盒使用说明书检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。

往预先包被缪勒管抑制物质/抗缪勒管激素（MIS/AMH）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。

用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的缪勒管抑制物质/抗缪勒管激素（MIS/AMH）呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

样品收集、处理及保存方法1.血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2.血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。

3000转离心30分钟取上清。

3.细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。

3000转离心10分钟取上清。

5.保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

自备物品1.酶标仪（450nm）2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3.37℃恒温箱操作注意事项1.试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。

从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。

2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。

3.浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。

4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

5.所有液体组分使用前充分摇匀。

试剂盒组成名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无标准品0.3mL*6管0.3mL*6管无样本稀释液6mL3mL无检测抗体-HRP10mL5mL无20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释底物A6mL3mL无底物B6mL3mL无终止液6mL3mL无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无注：标准品（S0-S5）浓度依次为：0、250、500、1000、2000、4000pg/mL 试剂的准备20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。

抗缪勒氏管激素（AMH）测定试剂盒（化学发光免疫分析法）性能指标2.性能指标2.1试剂条性能指标2.1.1外观和性状试剂盒各组分应齐全、完整、液体无渗漏；包装标签应清晰、准确、牢固；试剂条中第7孔内组分应为棕色含固体微粒的液体或含棕色固体沉淀的透明液体；第12孔内化学发光底物应为无色或淡绿色液体；其余皆应为无色透明液体，无悬浮物、无沉淀、无絮状物。

2.1.2空白限应不大于0.01 ng/mL2.1.3准确度回收率应在[90%-110%]区间内。

2.1.4线性区间试剂盒在0.1ng/mL～23ng/mL区间内，其线性相关系数（r）应不小于0.9900。

2.1.5重复性用同一批次的试剂盒，两个浓度内控品各重复检测10次，其变异系数（CV）应不大于10.0%。

2.1.6批间差用3个批号试剂盒检测两个浓度内控品，内控品重复检测10次，内控品测定结果的变异系数（CV）应不大于15.0%。

2.2校准品性能指标2.2.1外观校准品应为白色或浅黄色粉状冻干块。

校准品复溶液应为淡蓝色液体，无悬浮物、无沉淀、无絮状物。

冻干粉加入校准品复溶液后应在10min内完全溶解。

2.2.2装量校准品复溶液装量偏差应在±10%之内。

2.2.3准确度和溯源赋值程序检测抗缪勒氏管激素（AMH）校准品，测试结果偏差应在±10%之内。

校准品的溯源及赋值程序文件见附录A。

2.2.4均一性对同一瓶校准品1、校准品2分别重复10次检测，对同一批次10瓶校准品1、校准品2进行检测，检测校准品1、校准品2瓶内差CV应≤10%，批内瓶间差CV应≤10%。

2.3质控品性能指标2.3.1外观质控品应为白色或淡黄色粉状冻干块，纯化水复溶后无色，无悬浮物、无沉淀、无絮状物。

冻干粉加入纯化水复溶后应在10min内完全溶解。

2.3.2准确度抗缪勒氏管激素（AMH）质控品，测试结果应在靶值范围内。

2.3.3均一性对同一瓶质控品重复10次检测，对同一批次10瓶质控品进行检测，检测瓶内差CV应≤10%，批内瓶间差CV应≤10%。

抗缪勒氏管激素质控品产品技术要求博粹抗缪勒氏管激素（Anti-Müllerian Hormone, AMH）是一种重要的生物标志物，用于评估卵巢储备功能和女性生殖健康状况。

其测试结果对于评估女性的生殖健康状态、确定生育年龄、进行不孕不育疾病的诊断和治疗具有重要意义。

1.纯度要求：抗AMH质控品的纯度要求高，必须纯净且不含其他有可能对测试结果造成干扰的杂质。

其纯度可以通过高效液相色谱（HPLC）和酶联免疫吸附测定（ELISA）等技术进行验证。

2.稳定性要求：抗AMH质控品应具有良好的稳定性，以确保其在长期储存和使用过程中的一致性和可靠性。

稳定性可以通过长期储存试验、温度敏感性试验等进行验证。

3.活性要求：抗AMH质控品应具有高度的活性，能够与AMH快速、特异地结合，并能够准确地模拟AMH在生物体内的生理功能。

其活性可以通过生物活性试验、逆向酶联免疫吸附测定等进行验证。

4.重复性要求：抗AMH质控品的制备应具备良好的重复性，确保每一批制备的质控品在不同的实验条件下具有一致的检测结果。

重复性测试可以通过同批次和不同批次的重复性试验进行验证。

5.安全性要求：抗AMH质控品应符合生物安全要求，不得存在有害成分，并且对操作人员和环境无危害。

安全性可通过毒理学试验进行验证。

总之，抗缪勒氏管激素质控品的产品技术要求包括纯度、稳定性、活性、重复性和安全性等方面。

制造商在生产过程中应严格按照相关质量标准进行操作，确保质控品的质量稳定和一致，并通过严格的质量控制措施
确保质控品的合格率和可靠性，以满足AMH检测试剂盒的准确性和可靠性要求。

1.性能指标
1.1外观检查
外观应平整，标识清晰，各组分齐全，液体无渗漏。

1.2物理检查
膜条宽为4.0±0.5mm；液体移行速度应不低于10mm/min。

1.3准确度
用参考品作为样本进行测定，其测定结果的相对偏差（Bias）不应超过±15%。

1.4最低检出限
应不大于0.1 ng/mL。

1.5线性
在0.1 ng/mL～16 ng/mL 的范围内，线性相关系数r≥0.9900。

1.6精密度
1.6.1批内精密度
用同一批号的试剂分别测定 2 个不同浓度的参考品，其测定结果的变异系数（CV）应不大于10%。

1.6.2批间精密度
用三个不同批号的试剂分别测定2 个不同浓度的参考品，其测定结果的变异系数（CV）应不大于15%。

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