电化学发光检验的原理ppt课件
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电化学发光检测原理
电化学发光检测原理是一种基于电化学反应产生发光信号的分析技术。
其基本原理是通过电化学方法激发分析物或电化学系统中的发光物质,使其在特定电位下产生可见光发射,然后利用光电检测器检测并测量发光强度或发光光谱,从而实现对分析物的检测和测量。
电化学发光检测原理涉及到两个关键步骤:电化学激发和发光检测。
在电化学激发过程中,通过人为施加电位差或电流来改变电极表面的电荷态,导致电化学系统中的发光物质发生激发或退激发。
这一过程涉及到电极材料的选择、电解液的成分以及施加的电位差或电流的调节等因素。
通过调节这些条件,可以控制电极表面的电荷态和分析物的浓度,从而实现对分析物的选择性激发。
在发光检测过程中,激发后的分析物将在有限的时间内发光。
发光信号可以是持续的或瞬时的,其强度和发射光谱特征与分析物的种类、浓度以及电化学反应的条件密切相关。
常用的发光检测方法包括荧光法、化学发光法和电化学发光法等。
这些方法利用光电检测器对发光信号进行灵敏的检测和测量,可以实现对分析物的定量和定性分析。
电化学发光检测原理在生物、环境、食品等领域具有广泛的应用。
通过选择合适的电化学系统和发光物质,结合灵敏的光电检测器,可以实现对微量或痕量分析物的高灵敏度检测。
同时,
电化学发光检测原理还具有快速、简便、无标记等特点,成为一种重要的分析技术。
电化学发光免疫检测原理电化学发光免疫测定的基本原理 (Electrochemiluminescence immunoassay,ECLI)是继放射免疫、酶免疫、荧光免疫、化学发光免疫测定以后的新一代标记免疫测定技术,是电化学发光(ECL)和免疫测定相结合的产物。
它的标记物的发光原理与一般的化学发光(CL)不同,是一种在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应,实际上包括了电化学和化学发光二个过程。
ECL与CL的差异在于ECL是电启动发光反应,而CL是通过化合物混合启动发光反应。
ECL 不仅可以应用于所有的免疫测定,而且还可用于DNA,RNA探针检测。
2+其检测原理(以TSH检测为例):第一步:结合了活化的三联吡啶钌衍生物即[Ru(bpy)] + N3羟基琥珀酰胺酯(NHS)的TSH抗体和结合了生物素的TSH抗体与待测血清同时加入一个反应杯中孵育9分钟。
第二步:将被链霉亲和素包被的磁珠加入反应杯中,再次孵育9分钟,使生物素通过与亲和素的结合将磁珠、TSH抗体连接为一体,形成双抗体夹心法。
2+下一步,蠕动泵将形成的 [Ru(bpy)],抗体,抗原,抗体,磁珠复合体吸入流动测量室,此3时,磁珠被工作电极下面的磁铁吸附于电极表面。
同时,游离的TSH抗体(与生物素结合的和2+与[Ru(bpy)]结合的抗体)也被吸出测量室。
3紧接着,蠕动泵加入含三丙胺(TPA)的缓冲液,同时电极加电压,启动ECL反应过程。
发光2+剂 [Ru(bpy)]和电子供体TPA在阳极表面可同时各失去一个电子而发生氧化反应,使二价的32++?[Ru(bpy)]被氧化成三价,后者是一种强氧化剂;另一方面,TPA 被氧化成阳离子自由基TPA,3+?后者很不稳定,可自发失去一个质子(H),形成自由基TPA,这是一种很强的还原剂,可将3+2+一个电子给三价的[Ru(bpy)],使其形成激发态的[Ru(bpy)],而TPA自身被氧化成二丙胺332+和丙醛。