食品的测定实验：急性毒性实验

苏贝止咳颗粒小鼠急性毒性实验

【摘要】

苏贝止咳颗粒组方来自民间验方，该方在临床使用多年，疗效确切，安全可靠。具有散寒宣肺，祛痰、止咳、平喘之功，用于急性气管、支气管炎（风寒袭肺证）所致的咳嗽、咳痰稀薄、咽痒、气急等症状。根据该方的功能主治、各味药材的理化性质和验方汤剂的临床应用实践，我们对其进行了止咳、祛痰、抗炎、解热、抗病毒、抗菌等主要药效学实验和急性毒性实验研究。

苏贝止咳颗粒经国家食品药品监督管理总局药品审评中心技术审评，发补充资料通知（药审补字[2014]第1030号），其中药理毒理方面要求为：本品进行的急毒试验未提供剖检结果，建议补充。如果没有观察该方面的内容，建议补充规范的急性毒性试验。针对该问题，该项目研究在前期的申报材料中的确没有详述相关内容，因此按照中心老师的发文内容和相关规定对该品种的急性毒性实验重新进行规范性实验，对实验所有动物进行大体解剖、并对相关重要脏器进行病理形态学观察。

实验结果显示，苏贝止咳浸膏小鼠口服急性毒性实验测不出LD50，从而进行小鼠ig最大给药量实验，单次最大给药剂量164g生药/kg，单次最大给药容积为0.8mL/20g，24h内给药3次，连续观察13天，所观察的各项指标均正常，未见动物死亡，实验观察期结束时对所有动物大体解剖和相关重要脏器进行病理形态学观察，未见与药物相关性病变。

因此苏贝止咳浸膏小鼠一日口服最大给药剂量为492g生药/kg，相当于临床拟用量的424.1倍。表明苏贝止咳浸膏急性毒性较低，提示苏贝止咳浸膏在临床上急性用药具有一定的安全性。

【实验目的】观察苏贝止咳浸膏的小鼠急性毒性。

【供试品】

1.名称：苏贝止咳浸膏（本实验采用苏贝止咳颗粒为浸膏，实验代号：SB-补1），含量规格及配置：4.1g生药/每毫升浸膏，人用临床拟用剂量81g生药/d。采用小鼠灌胃给药，以最大给药剂量164g生药/kg，最大给药容积为0.8mL/20g，24h内给药3次。剂量、给药途径设置依据：参考临床拟用途径，中药、天然药物急

􀅰实验研究􀅰

　基金项目:福建中医药大学药学学科开放性课题(Ｎｏ.ＦＪＴＣＭ－２０１９０１７)　作者简介:严国鸿ꎬ男ꎬ主任药师ꎬ研究方向:药物制剂ꎬＥ－ｍａｉｌ:ｙａｎｇｈ８８８８＠１６３.ｃｏｍ　通信作者:王晓颖ꎬ女ꎬ博士研究生ꎬ副教授ꎬ研究方向:药物新剂型及新技术ꎬＴｅｌ:０５９１－２２８６１３２２ꎬＥ－ｍａｉｌ:ｗａｎｇｘｙ６２３＠ｙｅａｈ.ｎｅｔ鼻腔用冷敷凝胶的急性毒性及纤毛毒性实验研究严国鸿１ꎬ林亚娟２ꎬ胡博志３ꎬ徐伟２ꎬ王晓颖２(１.福建中医药大学附属人民医院ꎬ福建福州３５０１２２ꎻ２.福建中医药大学ꎬ福建福州３５０１２２ꎻ３.蓝佳堂生物医药有限公司ꎬ福建福州３５０００７)摘要:目的　对鼻腔用冷敷凝胶(鼻腔凝胶)进行急性毒性试验及纤毛毒性实验研究ꎮ方法　以高于临床给药浓度１００倍的鼻腔凝胶浓缩液ꎬ采用灌胃方式对小鼠给药ꎬ测定该鼻腔凝胶的急性毒性ꎻ牛蛙上颚黏膜作为动物模型ꎬ以生理盐水作空白对照ꎬ１％去氧胆酸钠作阳性对照ꎬ于显微镜下观察纤毛运动ꎬ记录纤毛停止摆动时间ꎬ计算纤毛持续运动时间的百分率(ＰＰＶ)ꎬ考察鼻腔凝胶对鼻纤毛运动的影响ꎮ结果　用鼻腔凝胶最大允许浓度和最大允许容量给予动物时仍未能测出ＬＤ５０ꎬ表明鼻腔凝胶的安全性较高ꎮ纤毛毒性实验中ꎬ生理盐水组和鼻腔凝胶组纤毛清晰完整ꎬ排列整齐ꎬ有规律地向同一方向摆动ꎬ纤毛运动活跃ꎬ呈“风吹麦浪”式摆动ꎬ且摆动频率极快ꎮ采用间隔３０ｍｉｎ多次给予鼻腔凝胶后ꎬ纤毛持续运动时间的百分率为６９％ꎬ用生理盐水冲洗黏膜上鼻腔凝胶ꎬ纤毛可恢复摆动ꎮ结论　该鼻腔凝胶安全性良好ꎬ对纤毛的毒性很小ꎬ可以用于鼻腔局部ꎮ关键词:鼻腔凝胶ꎻ安全性ꎻ急性毒性ꎻ鼻纤毛毒性中图分类号:Ｒ９９４.３９　文献标识码:Ａ　文章编号:２０９５－５３７５(２０２０)０２－００７４－００３ｄｏｉ:１０.１３５０６/ｊ.ｃｎｋｉ.ｊｐｒ.２０２０.０２.００２ＡｃｕｔｅｔｏｘｉｃｉｔｙｓｔｕｄｙａｎｄｃｉｌｉａｒｙｔｏｘｉｃｉｔｙｏｆｎａｓａｌｃｏｌｄｇｅｌＹＡＮＧｕｏｈｏｎｇ１ꎬＬＩＮＹａｊｕａｎ２ꎬＨＵＢｏｚｈｉ３ꎬＸＵＷｅｉ２ꎬＷＡＮＧＸｉａｏｙｉｎｇ２(１.Ｐｅｏｐｌｅ′ｓＨｏｓｐｉｔａｌＡｆｆｉｌｉａｔｅｄｔｏＦｕｊｉａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅꎬＦｕｚｈｏｕ３５０１２２ꎬＣｈｉｎａꎻ２.ＦｕｊｉａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅꎬＦｕｚｈｏｕ３５０１２２ꎬＣｈｉｎａꎻ３.ＬａｎｊｉａｔａｎｇＢｉｏ－ＭｅｄｉｃｉｎｅＣｏ.ꎬＬｔｄ.ꎬＦｕｚｈｏｕ３５０００７ꎬＣｈｉｎａ)Ａｂｓｔｒａｃｔ:Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏｓｔｕｄｙａｃｕｔｅｔｏｘｉｃｉｔｙａｎｄｃｉｌｉａｔｏｘｉｃｉｔｙｏｎｎａｓａｌｃｏｌｄｇｅｌ.Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｔｈｅａｃｕｔｅｔｏｘｉｃｉｔｙｏｆｔｈｅｎａｓａｌｇｅｌｗｅｒｅｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙｏｒａｌａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎｉｎｍｉｃｅａｔａｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｈｉｇｈｅｒｔｈａｎ１００ｔｉｍｅｓｏｆｔｈｅｃｌｉｎｉｃａｌｃｏｎｃｅｎｔｒａ￣ｔｉｏｎ.Ｃｉｌｉａｒｙｔｏｘｉｃｉｔｙｗａｓｅｖａｌｕａｔｅｄｕｓｉｎｇｂｕｌｌｆｒｏｇｐａｌａｔｅｍｕｃｏｓａｍｏｄｅｌ.Ｎｏｒｍａｌｓａｌｉｎｅ(０.９％)ｕｓｅｄａｓｂｌａｎｋｃｏｎｔｒｏｌａｎｄ１％ｓｏｄｉｕｍｄｅｏｘｙｃｈｏｌａｔｅｗｅｒｅｕｓｅｄａｓｐｏｓｉｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌꎬｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ.Ｔｈｅｃｉｌｉａｒｙｍｏｖｅｍｅｎｔｗａｓｏｂｓｅｒｖｅｄｕｎｄｅｒｔｈｅｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅꎬａｎｄｔｈｅｃｉｌｉａｓｔｏｐｓｗｉｎｇｔｉｍｅｗａｓｒｅｃｏｒｄｅｄ.Ｔｈｅｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｏｆｐｅｒｓｉｓｔｅｎｔｖｉｂｒａｔｉｏｎ(ＰＰＶ)ｖａｌｕｅｗａｓｃａｌｃｕｌａｔｅｄｆｏｒｅｖａｌｕａｔｅｄｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｔｈｅｎａｓａｌｇｅｌｏｎｃｉｌｉａｒｙｍｏｖｅｍｅｎｔ.Ｒｅｓｕｌｔｓ　ＴｈｅＬＤ５０ｗａｓｎｏｔｄｅｔｅｃｔｅｄｗｈｅｎｔｈｅｍｉｃｅｗｅｒｅｇｉｖｅｎｔｈｅｍａｘｉｍｕｍａｌｌｏｗａｂｌｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎａｎｄｍａｘｉｍｕｍａｌｌｏｗａｂｌｅｖｏｌｕｍｅｏｆｔｈｅｎａｓａｌｇｅｌꎬｉｎｄｉｃａｔｉｎｇｔｈａｔｔｈｅｎａｓａｌｇｅｌｗａｓｓａｆｅ.Ｔｈｅｃｉｌｉａｏｆｔｈｅｓａｌｉｎｅｇｒｏｕｐａｎｄｔｈｅｎａｓａｌｇｅｌｇｒｏｕｐｗｅｒｅｃｌｅａｒａｎｄｃｏｍｐｌｅｔｅꎬａｒｒａｎｇｅｄｎｅａｔｌｙꎬａｎｄｏｓｃｉｌｌａｔｅｄｉｎｔｈｅｓａｍｅｄｉｒｅｃｔｉｏｎｒｅｇｕ￣ｌａｒｌｙ.Ｔｈｅｃｉｌｉａｍｏｖｅｍｅｎｔｗａｓａｃｔｉｖｅｉｎａｅｘｔｒｅｍｅｌｙｆａｓｔｓｗｉｎｇｆｒｅｑｕｅｎｃｙ.Ａｆｔｅｒｍｕｌｔｉｐｌｅｄｏｓｉｎｇａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｅｄｗｉｔｈｔｈｅｎａｓａｌｇｅｌａｔａ３０ｍｉｎｉｎｔｅｒｖａｌꎬｔｈｅｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｏｆｃｉｌｉａｓｕｓｔａｉｎｅｄｍｏｖｅｍｅｎｔｔｉｍｅｗａｓ６９％.Ｔｈｅｃｉｌｉａｍｏｖｅｍｅｎｔｗａｓｂｅｂａｃｋｔｏｎｏｒ￣ｍａｌａｆｔｅｒｔｈｅｎａｓａｌｇｅｌｗａｓｗａｓｈｅｄａｗａｙｂｙｎｏｒｍａｌｓａｌｉｎｅｓｏｌｕｔｉｏｎ.Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｔｈｅｎａｓａｌｇｅｌｗａｓｓａｆｅ.Ｔｈｅｃｉｌｉａｒｙｔｏｘｉｃｉｔｙｏｆｎａｓａｌｃｉｌｉａｗａｓｆｅｅｂｌｅ.Ｉｔｃａｎｂｅｕｓｅｄｉｎｎａｓａｌｓｙｓｔｅｍｓ.Ｋｅｙｗｏｒｄｓ:ＮａｓａｌｇｅｌꎻＳａｆｅｔｙｔｅｓｔꎻＡｃｕｔｅｔｏｘｉｃｉｔｙꎻＮａｓａｌｃｉｌｉａｔｏｘｉｃｉｔｙ􀅰４７􀅰药学研究􀅰ＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＲｅｓｅａｒｃｈ２０２０Ｖｏｌ.３９ꎬＮｏ.２ 鼻黏膜容易受到外来有害物质或致敏性物质的侵扰ꎬ从而引发鼻充血、鼻炎ꎬ继而可能会造成耳部不适、干扰听觉、影响发音ꎬ甚至会影响睡眠ꎮ配合药物治疗ꎬ缓解局部症状的鼻腔用敷料成为临床需求之一[１－３]ꎮ蓝佳堂生物医药(福建)有限公司研发的由卡波姆、聚乙二醇、卵黄分离物、薄荷脑等组成的鼻腔用冷敷凝胶Ⅱ型(简称鼻腔凝胶)ꎬ针对鼻黏膜局部症状使用ꎬ令使用部位的毛细血管收缩ꎬ减轻局部充血ꎬ黏膜神经末梢的敏感性降低ꎬ可以达到冷敷的目的ꎻ并有助于缓解急慢性鼻炎、过敏性鼻炎、鼻窦炎及普通感冒等引起的不适症状(如:鼻塞、鼻痛、鼻干痒、流鼻涕、打喷嚏等)ꎬ也可用于鼻窦术后或放疗后的冷敷护理ꎬ适合临床需求ꎮ鼻腔制剂或敷料使用后ꎬ由于其组成成分的影响ꎬ鼻纤毛运动常会受到不同程度的损害ꎬ甚至可使纤毛运动不可逆的停止ꎬ影响鼻纤毛的清除功能ꎬ故对鼻纤毛毒性的影响是鼻腔制剂或敷料的重要研究内容之一[４－５]ꎮ本实验采用牛蛙上颚离体法ꎬ对鼻腔凝胶的鼻纤毛毒性进行了研究[６－７]ꎬ并以高于临床给药浓度１００倍的鼻腔凝胶浓缩液ꎬ测定该鼻腔凝胶的急性毒性ꎬ为鼻腔冷敷凝胶的临床应用提供实验依据ꎮ１　材料１.１　动物　ＩＣＲ小鼠ꎬ清洁级ꎬ雌性ꎬ体重２４~３３ｇꎬ由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供ꎬ实验动物许可证号:ＳＣＸＫ(沪)２０１６－０００２ꎮ１.２　试剂　冷敷凝胶Ⅱ型(鼻腔)[蓝佳堂生物医药(福建)有限公司ꎬ批号:Ｌ０１３３２１０１]ꎻ脱氧胆酸钠(美仑生物有限公司ꎬ批号:Ｓ０８０２Ａ)ꎮ１.３　仪器　ＮｉｋｏｎＹＳ１００型生物显微镜(日本Ｎｉｋｏｎ公司)ꎮ２　方法２.１　急性毒性评价２.１.１　急性毒性试验预试验　取２０只ＩＣＲ小鼠ꎬ雌雄各半ꎮ给药前禁食不禁水１２ｈ后进行称重ꎮ体重相近的４只为一组ꎬ共５组ꎮ再随机从各组中取２只作为给药组ꎬ剩余１０只作为生理盐水对照组ꎮ按小鼠灌胃最大给药剂量为０.３ｍＬ/１０ｇꎬ最多不超过１.０ｍＬ/只ꎬ灌胃鼻腔凝胶ꎬ其浓度为临床制剂浓度的１００倍ꎮ给药后记录小鼠体重、外观、行为、饮食、分泌物、排泄物的变化ꎮ２.１.２　小鼠一日最大耐受量(ＭＴＤ)的测定　因鼻腔凝胶用最大允许浓度和最大允许容量给予动物时仍未能测出ＬＤ５０ꎬ为进一步研究该鼻腔凝胶的毒性情况ꎬ做一日最大耐受量(ＭＴＤ)测定ꎮ取ＩＣＲ小鼠２０只ꎬ按０.３ｍＬ/１０ｇ剂量进行灌胃给药ꎬ间隔６ｈ给药１次ꎮ给药３次后连续观察７ｄꎬ记录小鼠给药后外观(体重、皮肤毛发、眼和黏膜的变化)、行为、饮食、分泌物、排泄物及其中毒和死亡情况ꎬ生理盐水组按上述同法操作ꎮ２.２　鼻纤毛毒性２.２.１　鼻纤毛毒性考察方法[６－７]　为考察鼻腔凝胶对纤毛运动的影响ꎬ选择牛蛙上颚黏膜作为动物模型ꎮ将牛蛙脊髓捣毁后ꎬ仰卧固定于自制蛙板上ꎬ使口腔张开ꎬ用止血钳牵拉ꎬ用胶头滴管往上颚黏膜滴加３滴鼻腔凝胶ꎬ使黏膜完全被药物淹没ꎮ接触１０ｍｉｎ后用手术剪小心分离上颚黏膜ꎬ分割成３ｍｍ×３ｍｍ的黏膜ꎮ用生理盐水洗去血块及杂物ꎬ纤毛面向上平铺于载玻片上ꎬ盖上盖玻片ꎬ置于４０×１０倍的光学显微镜下观察纤毛摆动及脱落情况ꎮ观察后立即将载玻片搁置于含有饱和蒸馏水的层析缸中ꎬ密闭(环境温度２０~２５℃ꎬ水蒸气近饱和状态)ꎮ黏膜表面间隔３０ｍｉｎ给药０.２ｍＬꎬ每隔２０ｍｉｎ从展开缸取出观察ꎬ直至纤毛停止运动ꎮ将从给鼻腔凝胶开始到纤毛停止摆动的时间(ＰＶＤ)记录下来ꎮ纤毛停止摆动后ꎬ用生理盐水冲洗黏膜上的鼻腔凝胶ꎬ继续观察纤毛摆动可否恢复ꎬ并记录下纤毛恢复运动持续时间ꎮ另取阳性对照组(１％去氧胆酸钠)、空白对照组(生理盐水)处理方法同上ꎬ观察其纤毛摆动情况ꎮ２.２.２　纤毛毒性评价方法[８]　纤毛持续运动时间的百分率(ＰＰＶ)＝鼻腔凝胶组(或阳性对照组)的纤毛持续运动时间/生理盐水对照组的纤毛持续运动时间ꎮＰＰＶ越高ꎬ表示鼻腔凝胶组(或阳性对照组)对纤毛运动影响越小ꎬ即对纤毛毒性越小ꎮ３　结果３.１　急毒性试验评价３.１.１　急性毒性试验预试验结果　小鼠给予鼻腔凝胶或生理盐水后ꎬ均出现短暂静卧ꎬ大约１ｈ后恢复正常ꎬ均无小鼠死亡情况ꎮ鼻腔凝胶组与生理盐水组小鼠ꎬ大、小便颜色正常ꎬ毛色光泽ꎮ连续观察７ｄꎬ分别于给予鼻腔凝胶或生理盐水后每天同一时间称量各组小鼠的体重ꎮ结果(见表１)数据表明各剂量组小鼠体重与空白对照组比较无统计学差异(Ｐ>０.０５)ꎮ给药后１４ｄ各组小鼠无死亡、无异常反应ꎮ处死小鼠ꎬ解剖后ꎬ检测各组小鼠的心、肝、脾、肺、肾、胃、胰腺、大肠、小肠等主要脏器体积、颜色、质地均无明显改变ꎬ故无法测得ＬＤ５０ꎮ３.１.２　小鼠ＭＴＤ测定结果　给予鼻腔凝胶或生理盐水后动物表现均无异常ꎬ除第１天小鼠灌胃后出现短􀅰５７􀅰药学研究􀅰ＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＲｅｓｅａｒｃｈ２０２０Ｖｏｌ.３９ꎬＮｏ.２暂不适ꎬ活动减少以外ꎬ均未见小鼠中毒与死亡ꎮ结果(见表２)表明鼻腔凝胶组小鼠体重与生理盐水组比较无统计学差异(Ｐ>０.０５)ꎮ给予鼻腔凝胶或生理盐水后７ｄ各组小鼠均无死亡及任何异常反应ꎮ处死小鼠后观察其心脏、肝脏、脾脏、肺、肾脏、胃、胰腺、大肠及小肠等主要脏器体积、颜色、质地均无明显改变ꎮ本实验给予小鼠的鼻腔凝胶浓度为成品浓度的１００倍ꎬ日累积剂量为临床成人拟推荐日用剂量的１６０倍ꎮ表明鼻腔凝胶型临床应用的安全性较高ꎮ表１　一日最大给药量各组小鼠体重变化(ｎ＝２０)天数/ｄ给药组平均值/ｇ给药组ＳＤ值对照组平均/ｇ对照组ＳＤ值１２８.６２.１７２８.４２.３２２３０.９２.８１３２.２２.５３３３１.１３.６０３３.３２.７１４３１.６３.０６３３.１３.８１５３１.８３.４３３３４.２７６３１.５３.５４３２.８４.２４７３１.９３.５７３４.２４.３４表２　一日最大耐受量各组小鼠体重变化(ｎ＝２０)天数/ｄ给药组平均值/ｇ给药组ＳＤ值对照组平均/ｇ对照组ＳＤ值１３０.４３.２０２８.４２.４１２３２.７２.６３３１.６２.９５３３３２.７９３２３.３０４３３.２３.２６３２.１３.４５５３３.４２.９５３２.１３.９８６３３.４３.２４３２４.３７７３４２.９８３３４.６９３.２　鼻纤毛毒性试验结果　显微镜下观察结果显示ꎬ生理盐水组和鼻腔凝胶组纤毛清晰完整(如图１Ａ)ꎬ排列整齐ꎬ有规律地向同一方向摆动ꎬ纤毛运动活跃ꎬ呈“风吹麦浪”式摆动[８]ꎬ且摆动频率极快ꎻ鼻腔凝胶组纤毛较清晰ꎬ纤毛运动较活跃(见图１Ｂ)ꎮ给予脱氧胆酸钠后ꎬ纤毛停止摆动、纤毛边缘基本脱离ꎬ黏膜受损较严重ꎬ部分基部裸露(见图１Ｃ)ꎬ表明脱氧胆酸钠对黏膜组织有严重的破坏作用ꎬ对纤毛运动有严重的不可逆的抑制作用ꎮ

《食品毒理学》经口急性毒性试验

一、实验目的和要求

掌握给药方法；了解一次或24小时内多次给予受试化学物后，动物所产生的急性毒性反应及其严重程度，中毒死亡的特征以及可能的死亡原因，观察受试动物毒性反应与剂量的关系，求出半数致死量。

二、主要仪器设备

实验动物：成年昆明系实验小鼠（SPF级别）。

器材：注射器（0.25，1，2，5ml）、吸管（0.1，0.2，0.5，1，2，10ml）、容量瓶（10，25，50ml）、烧杯（10，25，50ml）、滴管、灌胃针12号、动物体重秤、解剖剪刀、镊子、手术手套，口罩。

试剂：受试化合物（氯化钡溶液，20mg/mL）。

三、实验原理

氯化钡是强电解质，可完全电离出钡离子，导致钡离子在小鼠血液内部引发急性低钾血症，故小鼠会出现肌无力和发作性软瘫，心肌应激性减低，各种心律失常和传导阻滞，由于肌无力，严重中毒的小鼠还会出现呼吸困难乃至死亡等症状。

四、实验内容

1． 健康动物的选择和性别鉴定。

2． 实验动物称重、编号和随机分组。

3． 受试化学物溶液的配制。

4． 小鼠灌胃操作技术。

（1）预实验，取小白鼠、称重、随机分为5组，每组3只，以灌胃的方式给予等体积、不同剂量的氯化钡溶液，摸索小鼠接近100%和0%死亡的剂量范围。

（2）小鼠随机分为5组，每组3只，以灌胃的方式给予等体积、不同剂量的氯化钡溶液。

小鼠灌胃法：

将钝头的12号注射针（适用于小鼠），安装在适当容积的注射器上，吸取所需的受试物溶液，左手抓住动物双耳后至背部的皮肤（小鼠仅抓住耳后、颈部的皮肤，用无名指、小手指和大鱼际肌将其尾根部压紧），将动物固定成垂直体位，腹部面向操作者。

注意使动物的上消化道固定成一直线。右手持注射器，将针头由动物口腔侧插入，避开牙齿，沿咽后壁缓缓滑人食管。若遇阻力，可轻轻上下滑动探索，一旦感觉阻力消失，即可深入至胃部。如遇动物挣扎，应停止进针或将针拔出，千万不能强行插入，以免操作穿破食管，甚至误人气管，导致动物立即死亡。

・试验研究・　北方蚕业２０１３，３４（２）　１７　

柞蚕丝素解酒保肝功能食品急性毒性评价实验　

韩建华　杨淑芳　孙继红　

（吉林省蚕业科学研究院，吉林吉林１３２０１２）　

摘　要　为了探明柞蚕丝素解酒保肝功能食品的食用安全性，以小鼠为实验对象，灌服柞蚕丝素纳米粉产品，　观察小鼠的毒性反应症状和死亡情况，连续观察１４　ｄ。结果表明：一次最大给药量为１２　ｇ／ｋｇ，一日给药３次，　小鼠表现正常，无一例死亡，未出现毒性反应。　关键词　丝素食品　最大给药量　急性毒性实验　

目前，我国柞蚕原料茧和蚕丝产量约占世界　

总产量的四分之三，每年都会产生大量的废蚕丝，　

丝素占蚕丝的８５　Ｅｌｉ。关于丝素可以促进乙醇　

代谢，增强肝功能的研究已有诸多文献报道＿２　］。　

柞蚕丝素解酒保肝功能食品采用纳米技术，以柞　

蚕丝素纳米粉为主，配以药食兼用中药精制而成，　

降低酒精对人体的危害。本文通过对柞蚕丝素纳　

米粉产品给予小鼠所产生的急性毒性反应进行研　

究，为食品的开发和应用提供安全实验依据。　

１材料与方法　

１．１　药物　

柞蚕丝素解酒保肝功能食品由吉林省蚕业科学研　

究院柞蚕丝素提取及产品开发课题组提供，为黄　

褐色粉末，临床用量５～１Ｏ　ｇ／日。称取柞蚕丝素　

纳米粉产品１２　ｇ加水至４Ｏ　ｍＬ混匀，按４０　ｍＩ　／　

ｋｇ给予小鼠灌胃。　

１．２　实验动物　

昆明种小鼠１９～２１　ｇ，雌雄均用，购自吉林大　

学实验动物中心，合格证号为ＳＣＸＫ一（吉）２００８—　

０００５。　１．３方法　

１．３．１一次最大给药量的测定　］　

取小鼠４０只，雌雄各半，体重１９～２１　ｇ（雌雄　

各半），随机分为对照组及柞蚕丝素解酒保肝功能　

食品给药组，每组２０只，雌雄各半。称取柞蚕丝　

素解酒保肝功能食品１２　ｇ加水至４０　ｍＬ（０．３　ｇ／　

ｍＩ　、３０　），按４０　ｍＬ／ｋｇ灌胃给药１次（给药前　

禁食１８　ｈ），给药浓度为３　ｇ／１０　ｍＬ，给药体积为　

收稿日期：２０１３－０５—２１　作者简介：韩建华（１９７２一），男，硕士，副研究员。　４０　ｍＩ　／ｋｇ・次，给药后观察１４日内小鼠的外观、