急性毒性试验

第３８卷第３期　２００７年６月　东北农业大学学报　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｎｏｒｔｈｅａｓｔ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　３８（３）：３８０－３８３　Ｊｕｎｅ　２００７　文章编号１００５—９３６９（２００７）０３—０３８０—０４　硝基苯对小鼠急性毒性试验的研究　

邢厚娟，王海波，王　敏，徐世文　（东北农业大学动物医学院，哈尔滨１５００３０）　摘要：用Ｗｅｉｌ　ｓ表的平均移动法进行了ＮＢ对雌性小鼠和雄性小鼠ＬＤ　的测定。以组间距（对数剂量差值）为　ｄ－－－Ｏ．２，测得ＮＢ对雄性小鼠经口服的ＬＤ５０为５２５．８９６２　ｍｇ‘ｋｇ～ＢＷ，９５％可信限为４１７．７３４２￣６６２．０６４０　ｍｇ。ｋｇ　ＢＷ；　以组间距（对数剂量差值）为ｄ＝０．０６６７，测得ＮＢ对雌性小鼠经口服的ＬＤ５０为７７１．９６９２　ｍｇ・ｋｇ－　ＢＷ，９５％可信限为　７１４．８２５４￣８３３．６８１２　ｍｇ・ｋｇ～ＢＷ。　关键词：硝基苯；急性毒性；小鼠；ＬＤ　中图分类号：ＴＱ０８６．５；￥９９４．６　文献标识码：Ａ　

硝基苯（Ｎｉｔｒｏｂｅｎｚｅｎｅ，ＮＢ）是化工产业中应用　广泛的化工原料，危险标记为１４，属剧毒品，毒　性为其他化合物的２０～３０倍，具有致突变性。已　有资料表明，ＮＢ可对造血、肝、肾及中枢神经系　统造成损伤【　。临床已发现，ＮＢ被人体皮肤吸收　或从呼吸道吸人其蒸汽后会引起高铁血红蛋白血　症、溶血等，甚至引起死亡　。为评价ＮＢ对人类　的潜在危险程度，本试验以昆明小鼠为受试动物，　通过灌胃染毒，进行了半数致死量（ＬＤ卯）的测定。　１　材料与方法　．　１．１试验受试物　ＮＢ选用上海凌峰化学试剂有限公司的批号为　０４０４１０，分析纯ＡＲ，纯度为９９．９％。　１．２试验动物及处理　１．２．Ｉ试验动物及管理　选用体重（２１＋３）ｇ的昆明小鼠为受试动物。　常规饲养，自然干燥，鼠粮由哈尔滨兽医研究所实　验动物中心提供。　１，２．２预备试验　将小鼠随机分为４组，雌雄各半，按灌序法测　得小鼠灌胃最小１００％致死量为９４４　ｍｇ・ｋｇ～ＢＷ。　试验发现硝基苯对雌、雄小鼠毒性敏感性有明显差　收稿日期；２００６—０３—３１　基金项目：黑龙江省教育厅资助项目（ＹＪＳＣＸ２００７－００４３ＨＬＪ）　作者简介：邢厚娟（ｚ９８ｏ－），女，黑龙江人，硕士研究生，研究　方向为环境毒理学。　通讯作者Ｅ－ｍａｉｈ　ｘｕｓｈｉｗｅｎｌ０１＠ｓｏｈｕ．ｅｏｍ　异，经口染毒后，雄性小鼠先出现死亡，并且在　５９０　ｍｇ・ｋｇ　ＢＷ剂量组，雌性小鼠没有出现死亡。　在预试验中还发现硝基苯具有很强的溶血作用。　１．２．３正式试验　按Ｗｅｉｌ　ｓ设计，雄性小鼠试验是将１６只小鼠　随机分为４组，每组４只［５－６１，组间剂量对数差值为　０．２。第１、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组小鼠灌服ＮＢ的剂量分别　为２３０．４７，３６８．７５，５９０，９４４　ｍｇ・ｋｇ－　ＢＷ。雌性小　鼠试验是将１６只小鼠随机分为４组，每组４只，　组间剂量对数差值为０．０６６７。第１、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组　小鼠灌服ＮＢ的剂量分别为５９０，６８７．８６，８０２．０５　和９４４　ｍｇ・ｋｇ－　ＢＷ。试验鼠在灌服毒物之前隔夜禁　食，灌服毒物后禁食２　ｈ，ＮＢ用花生油按比例稀　释灌服。在此期间，每１３记录小鼠的饮食、饮水情　况，并观察小鼠的临床表现和死亡只数，剖检死亡　鼠。试验共进行７　ｄ。　１．３数据处理　按以下公式计算，ｌｇＬＤ５０＝Ｄ　（１＋ｆ）；￣ｌｇＬＤ５０＝　ｄ×８ｆ。式中：Ｄ一最小剂量对数值；ｄ一两剂量组间　值；产组合总体反应系数；８ｆ＿－计算可信度系数。　２结果与分析　２．１临床表现　整个试验期内，对照组小鼠一切正常（见图１），　第１、Ⅱ组在灌服ＮＢ后９　ｈ内精神状况良好，之　后表现为轻度精神沉郁、食欲减退，持续９—１２　ｈ　

第３３卷第１期　２０１２年１月１日　水产养殖　

Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ａｑｕａｃｕｌｔｕｒｅ　Ｖｏ１．３３，Ｎｏ．１　

Ｊａｎ．１，２０１２　

ｄｏｉ：１０．３９６９￣．ｉｓｓｎ．１００４—２０９１．２０１２．０１．０ｌ１　

胡秀彩．．２，边延峰３，周　捷　，吕爱军　（１．徐州师范大学生命科学学院，江苏徐州２２１１１６；２．江苏省药用植物生物技术重点实验室，江苏徐州２２１１１６；　

３．天津生机集团股份有限公司，天津３００３８４）　

摘要：为探究消毒液和农药对斑马鱼的毒性与安全评价，首次选用高锰酸钾、甲醛、精碘和卡螨死四种试剂进行急性毒　

性试验，以２４～９６　ｈ半致死浓度（Ｌｃ　）判断斑马鱼对四种药物的敏感性。结果表明，２４、４８、７２、９６　ｈ的ＬＣ５０，高锰酸钾分别　勾　１．１５、１．１２、１．１２、１．１１　ｍｇ／Ｌ；甲醛为４８、４５、４５、４０　ｍｇ／Ｌ；精碘分别为７．８ｘ１０￣，５．８ｘ１０￣．５．６ｘ１０￣，５．３ｘｌＯ　ｍｇ／Ｌ；卡螨死分别为１．９５￣　

１０－７、１．２３ｘ１０￣、０．６５ｘ１０－７、Ｏ．６２ｘ１０－Ｔｍｇ／Ｌ。高锰酸钾、甲醛、精碘和卡螨死的安全质量浓度（ＳＣ）分别为１．０７、１１．８、０．９６ｘ１０。和　１．４８×１０－６　ｍｇ，【Ｊ。参照我国化学物质对鱼类毒性分级标准，判定高锰酸钾对斑马鱼急性毒性为ＩＩ级，甲醛为ＩＩＩ级，精碘和卡螨死　

对斑马鱼急性毒性为Ｉ级。　关键词：斑马鱼；急性毒性；半致死浓度；安全质量浓度　中图分类号：Ｑ１７６　文献标识码：Ａ　文章编号：１００４—２０９１（２０１２）０ｌ一００４３—０５　

斑马鱼（Ｂｒａｃｈｙｄａｎｉｏ　ｏ）作为一种模式生物，　

除了具有经济、观赏价值外，目前已成为研究脊椎　

动物胚胎发育及对外界环境变化，如紫外线、重金　

属盐类、农药、消毒液、工业污水、放射性物质等对　

人类影响的良好研究材料，是一种极好的实验模式　

鱼　

高锰酸钾是一种外用消毒药物，通过强氧化性　

五种农药对小鼠的急性毒性试验

绪论

随着现代农业的飞速发展，农药的应用越来越广泛，在农林作物的病虫防治中,农药一直发挥着巨大作用,尤其是本世纪60-70年代,人们大量使用农药,几乎使粮食产量增长一倍,但随着农药长期的、大量的、不合理的使用,导致了对环境的严重污染并对人体健康产生极大的影响。它们对动、植物和人类的危害越来越严重。一方面它们可以直接进入生物体内引起急性、慢性中毒和畸变，同时还通过径流、排污、挥发等途径进入土壤、大气和水体，引起各种生态环境下生物的死亡，并通过食物链的富集影响人类的食品安全。 目前，因农药使用与管理失控而引发的一系列水域环境污染以及食品安全等问题，已引起政府相关部门和业内学者的广泛重视。当前，随着有机氯农药的禁用，菊酯类和有机磷类等成为我国目前使用较广泛的农药。

《中华人民共和国农药管理条例》指明，农药是指用于预防、消灭或者控制危害农业、林业的病、虫、草和其他有害生物以及有目的地调节植物、昆虫生长的化学合成物或者几种物质混合物及其制剂。农药残留是指农药使用后残存于环境、生物体和食品中的农药及其衍生物和杂质的总称。动植物在生长期间、食品在加工和流通中均可受到农药的污染，导致食品中农药残留。

相关报道表明，农药利用率一般为10%，约90%的残留在环境中，过多地使用农药，大量未被利用的农药经过降雨、农田渗滤和水田排水等进入水体，同时，还有大量散失的农药挥发到空气中，最后汇入水域，沉降积淀在土壤中，通过农作物吸收和食物链进入人体进行累积，并对人体健康造成危害。目前中国一些食品，如茶叶、大米、肉、蛋等食品中农药残留量常超过规定标准，过多的残留量对人体健康会造成危害。为此，论述农药残留对人体健康的危害效应及其毒理机制和防治措施，以期对防治食品中农药残留对人体健康的危害提供理论依据。

在哺乳类实验动物中，由于小鼠个体小，饲养管理方便，生产繁殖快，质量控制严格，价廉可以大量供应，又有大量的具有各种不同特点的近交品系，突变品系，封闭群及杂交一代动物，小鼠实验研究资料丰富参考对比性强；更重要一点乃是全世界科研工作者均用国际公认的品系和标准的条件进行试验，其实验结果的科学性、可靠性、重复性高，自然会得到国际认可。

试验目的：急性毒性试验是在24小时内给药1次或2次（间隔6-8小时），观察动物接受过量的受试药物所产生的急性中毒反应，为多次反复给药的毒性试验设计剂量、分析毒性作用的主要靶器官、分析人体过量时可能出现的毒性反应、I期临床的剂量选择和观察指标的设计提供参考信息等。

一、啮齿类动物单次给药的毒性试验

（一）试验条件

1.动物品系：常用健康的小鼠、大鼠。选用其他动物应说明原因。年龄一般为7-9周龄。同批试验中，小鼠或大鼠的初始体重不应超过或低于所用动物平均体重的20%.实验前至少驯养观察1周，记录动物的行为活动、饮食、体重及精神状况。

2.饲养管理：动物饲料应符合动物的营养标准。若用自己配制的饲料，应提供配方及营养成分含量的检测报告；若是购买的饲料，应注明生产单位。应写明动物饲养室内环境因素的控制情况。

3.受试药物：应注明受试药物的名称、批号、来源、纯度、保存条件及配制方法。

（二）试验方法：

由于受试药物的化学结构、活性成分的含量、药理、毒理学特点各异，毒性也不同，有的很难观察到毒性反应，实验者可根据受试药物的特点，由下列几种实验方法中选择一种进行急性毒性试验。

1.伴随测定半数致死量（LD50）的急性毒性试验方法。

2.最大耐受剂量（MTD）试验方法：最大耐受剂量，是引起动物出现明显的中毒反应而不产生死亡的剂量。

3.最大受试药物量试验方法：在合理的浓度及合理的容量条件下，用最大的剂量给予实验动物，观察动物的反应。

4.单次口服固定剂量方法（Fixed-dose procedure）。选择5、50、500和2000mg/kg四个固定剂量。

实验动物首选大鼠，给药前禁食6-12小时，给受试药物后再禁食3-4小时。如无资料证明雄性动物对受药试物更敏感，首先用雌性动物进行预试。根据受试药物的有关资料，由上述四个剂量中选择一个作初始剂量，若无有关资料作参考，可用500mg/kg作初始剂量进行预试，如无毒性反应，则用2000mg/kg进行预试，此剂量如无死亡发生即可结束预试。如初始剂量出现严重的毒性反应，那就用下一个挡次的剂量进行预试，如该动物存活，就在此两个固定剂量之间选择一个中间剂量试验。每个剂量给一只动物，预试一般不超过5只动物。每个剂量试验之间至少应间隔24小时。给受试药物后的观察期至少7天，如动物的毒性反应到第7天仍然存在，尚应继续再观察7天。