常用乳酸菌培养基

BBL培养基双歧杆菌选择性培养基成份蛋白胨15.0g酵母粉2.0g葡萄糖20.0g可溶性淀粉0.5g氯化钠5.0g5%半胱氨酸10.0mL西红柿浸出液400.0mL吐温80 1.0mL肝提取液80.0mL琼脂20.0g蒸馏水520.0mLpH7.0MRS培养基乳酸细菌培养基（MRS）蛋白胨10.0 g牛肉膏10.0 g酵母膏 5.0 g柠檬酸氢二铵[（NH4）2HC6H5O7] 2.0 g葡萄糖(C6H12O6·H2O) 20.0 g吐温80 1.0 mL乙酸钠（CH3COONa·3H2O） 5.0 g磷酸氢二钾（K2HPO4·3H2O） 2.0 g硫酸镁（MgSO4·7H2O）0.58 g硫酸锰（MnSO4·H2O）0.25 g琼脂18.0 g蒸馏水 1 000 mLpH 6.2~6.6当乳酸菌生长代谢出乳酸后，会使pH下降而使颜色由绿变为黄绿，也由于pH 值降低再加上抗生素及厌氧培养的作用，所以一般的微生物不容易在此培养基上生长，因此十分容易鉴别乳酸菌。

2005-03-10 08:08 消息引用收藏分享奉上一篇实验，以供参考！厌氧菌的分离和培养目前培养厌氧微生物的简便而又有效的技术包括有：厌氧箱培养技术；厌氧罐培养技术；厌氧袋培养技术；亨盖特厌氧滚管技术。

这里介绍的是亨盖特厌氧滚管技术。

亨盖特厌氧滚管技术是美国微生物学家亨盖特（Hungate）于1950年首次提出并应用于瘤胃厌氧微生物研究的一种厌氧培养技术。

以后这项技术又经历了几十年的不断改进，从而使亨盖特厌氧技术日趣完善，并逐渐发展成为研究厌氧微生物的一整套完整技术。

而且多年来的实践已经证明它是研究严格、专性厌氧菌的一种极为有效的技术。

亨盖特厌样滚管培养技术不仅可用于有益厌氧菌如双歧杆菌等的分离、与活菌培养计数，还可以用于有害***菌（如酪酸菌）或病原菌（如肉毒梭状芽孢杆菌）的分离与鉴定。

1. Acetobacter Medium (醋酸菌培养基)Glucose (葡萄糖)，100g；Y easst extract (酵母膏)，10g ；CaCO3，20g；Agar (琼脂)，15g；Distilled water(蒸馏水) ，1000ml；Adjust(调)，pHto 6.8。

适用范围：恶臭醋酸杆菌混浊变种。

2. Nutrient Agar (营养肉汁琼脂)Pepton (蛋白胨) ，5g；Beef extract (牛肉膏)，30g；NaCl ，5g；Agar (琼脂)，15g ；Distilled water (蒸馏水)，1000mL；Adjust (调)，pH to 7.0-7.2 。

[Note]：When cultivation of Bacillus 5mg of to MnSO4.H2O may be added ..适用范围：产气气杆菌、粪产碱杆菌、蜡状芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌蕈状变种、地衣形芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌、尘埃芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌深黑变种、苏云金芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌蜡螟亚种（青虫菌）、苏云金芽孢杆菌戈尔斯德变种、苏云金芽孢杆菌猝倒亚种、产氨短杆菌、黄色短杆菌、谷氨酸棒状杆菌、北京棒杆菌、大肠埃希氏菌（大肠杆菌）、铜绿假单胞菌（绿脓杆菌）、凸形假单胞杆菌、荧光假单胞菌、弯曲假单胞菌、恶臭假单胞菌、假单胞杆菌、藤黄八叠球菌、亚黄八叠球菌、尿素八叠球菌、金黄色葡萄球菌、运动发酵单孢菌。

3. Azotobacter Medium (固氮菌培养基)KH2PO4, 0.2g; K2HPO4,0.8g ;MgSO4.7H2O 0.2g CaSO4.2H2O，0.1ｇ；Ｎa2MoO4.2H2O，Trace(微量)；Y east axtract(酵母膏)，0.5g ；Mannitol(甘露醇)，20g ；FeCl3，Tract(微量) ；Distilled water (蒸馏水) ，1000ml；Agar (琼脂)，15g ；Adjust (调)，pH to 7.2。

乳酸菌菌种的分离筛选原理乳酸菌是一类广泛存在于自然界中的益生菌，广泛应用于食品、饲料、医药等领域。

乳酸菌菌种的分离筛选是乳酸菌应用研究中的重要一环，其目的是从大量的混合菌群中筛选出具有优良特性的菌株。

乳酸菌菌种的分离筛选原理主要包括以下几个方面：1. 选择合适的培养基：乳酸菌菌种对营养要求较高，因此选择适宜的培养基是分离筛选的首要步骤。

常用的培养基有MRS培养基、DC培养基等，它们含有适宜乳酸菌生长的营养成分，能提供所需能量和营养物质。

2. 适宜的培养条件：乳酸菌对培养环境的温度、pH、氧气和二氧化碳等条件有一定要求。

通常情况下，乳酸菌分离筛选需要在适宜的温度（一般为30-40）下进行，pH值保持在4.5-7.0之间，氧气和二氧化碳含量适中。

3. 分离方法：乳酸菌菌种的分离常采用传统的分离培养技术，如层析法、稀释平板法、摇瓶培养法等。

其中，层析法是一种常用的快速分离方法，通过将混合菌群在筛选培养基上涂抹或刺激，使不同菌株在筛选培养基上形成分离的菌落。

4. 鉴定鉴别：乳酸菌菌种的筛选与鉴定是不可分割的一步，只有确定菌株的种属和特性才能真正确认其乳酸菌的菌种类型。

目前，常用的鉴定方法包括形态学观察、生理和生化特性检测、分子生物学方法（如PCR技术、16S rDNA序列分析）等。

在乳酸菌菌种的分离筛选过程中，还需要注意以下几个问题：1. 选择样品：样品的选择对于乳酸菌菌种的分离筛选至关重要。

通常情况下，从乳制品、肠道、土壤等环境中寻找潜在的乳酸菌菌种，可以提高分离到优良菌株的几率。

2. 优化培养条件：对于特殊的乳酸菌菌种，可能需要优化培养条件，如调整温度、添加特定的营养成分等，以促进其生长和繁殖。

3. 评价筛选结果：乳酸菌菌种的分离筛选结果需要综合考虑其特性和应用价值。

如菌株的酸奶生产能力、耐酸碱能力、抗菌能力、抗氧化能力等。

总结起来，乳酸菌菌种的分离筛选原理主要包括选择合适的培养基和培养条件、采用适当的分离方法和鉴定鉴别技术。

改良番茄汁培养基Tomato Juice Agar,Modified 用途：用于食品中乳酸菌总数测定改良MC培养基Chalmers Agar ,Modified 用途：用于食品中乳酸菌总数测定MRS琼脂MRS Agar Base 用途：用于食品中乳酸菌总数测定LBS琼脂LBS agar 用途：用于乳酸菌检测和分离培养BLB培养基BLB Modified 用途：用于双歧杆菌的分离培养改良的M17培养基M17培养基是酸奶中嗜热链球菌计数的重要培养基,它也是从酸奶或牛奶中分离嗜热链球菌的常用培养基。

配方：胰蛋白胨5.0g、鱼蛋白胨5.0 g、牛肉膏5.0 g、酵母浸膏2.5 g、抗坏血酸0.5g、硫酸镁0.25g、甘油10.0g、乳糖3.0g、磷酸二氢钾5.0g、琼脂11.0 g、蒸溜水lL，用NaOH调节pH至6.9，121℃蒸汽灭菌15min。

乳酸杆菌选择性琼脂Lactobacillus Selective Agar用途：用于乳酸杆菌检测和分离培养APT琼脂APT Agar用途：用于乳酸菌分离培养BL琼脂培养基BL Agar Medium 用途：用于双岐杆菌分离培养（GB标准）BBL琼脂培养基BBL Agar Medium 用途：用于双岐杆菌分离培养（GB标准）TPY琼脂培养基TPY Agar Medium 用途：用于双岐杆菌分离培养（GB标准）PYG液体培养基基础PYG Broth Medium Base用途：用于双岐杆菌增菌培养，使用时需加入氯化血红素和维生素K1（GB标准）MC培养基MC Medium 用途：用于食品中乳酸菌检测的肉汤APT Broth用途：用于异质发酵乳酸杆菌和其它需高含量盐酸硫酸胺素菌的培养。

乳酸杆菌肉汤培养基Lactobacillus broth Medium用途：用于乳酸杆菌增菌培养MRS肉汤MRS Broth 用途：用于乳酸菌增菌培养双歧杆菌BS培养基Bifidobacterium BS Medium 用途：用于双歧杆菌分离培养。

PDA培养基：马铃薯葡萄糖琼脂培养基，即Potato Dextrose Agar （Medium），依次对应马铃薯、葡萄糖、琼脂的英文。

宜培养酵母菌、霉菌、蘑菇等真菌。

改良MC培养基：用于乳酸菌饮料中乳酸菌的菌落计数；原理：大豆蛋白胨、牛肉膏粉和酵母膏粉提供氮源、维生素和生长因子；葡萄糖和乳糖为可发酵糖类提供碳源；乳酸菌发酵糖产酸使菌落周围碳酸钙溶解，以辨别乳酸菌；琼脂是培养基的凝固剂；中性红为pH指示剂。

MRS培养基：乳酸菌培养基，由多种成分组成，适用于乳酸菌的生长，用来分离培养乳酸菌的一类培养基，一种常用的培养基，宜培养分离乳酸菌。

由于该培养基十分适于乳酸菌的生长，而且抑制其他菌的生长，因此具有分离乳酸菌的功能。

当乳酸菌长成后在培养基上显黄色，之后会变淡黑色。

以此分离乳酸菌。

乳酸菌：凡是能从葡萄糖或乳糖的发酵过程中产生乳酸的细菌统称为乳酸菌。

这是一群相当庞杂的细菌，目前至少可分为18个属，共有200多种。

除极少数外，其中绝大部分都是人体内必不可少的且具有重要生理功能的菌群，其广泛存在于人体的肠道中。

目前已被国内外生物学家所证实，肠内乳酸菌与健康长寿有着非常密切的关系。

乳酸菌指发酵糖类主要产物为乳酸的一类无芽孢、革兰氏染色阳性细菌的总称。

常见菌种有双歧杆菌、保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌和嗜酸乳杆菌等自配高浓度污水：葡萄糖5550 mg／L+(NH4)2SO4,1170 mg／L+KH2PO4，170 mg／L+COD为5000 mg／L。

自配污水：葡萄糖555 mg／L+(NH4)2SO4，117mg／L+KH2PO417 mg／L+CaC12 0，08 mg／L+MgSO4，1，534 mg／L+NaHCO3 550．8 mg／L+FeC13·6H2O0．25 mg／L+C0D 500 mg／L+氨氮为30 mg／L．一、LB培养基配制1升LB培养培养基需：蛋白胨10g/L；酵母粉5 g/L、Nacl10 g/L、单/双去离子水、琼脂15~20g/L（配制液体培养基不需要加，配制固体培养基时加入）。

嗜酸乳杆菌试验方法一株嗜酸乳杆菌产共轭亚油酸条件的优化[J]. 中国酿造，20091、基础培养基(脱脂乳培养基)12.0 g脱脂奶粉，蒸馏水100 mL，pH自然，115℃灭菌20 min。

2、MRS固体培养基葡萄糖20.0g，蛋白胨10.0g，牛肉膏10.0g，酵母浸膏5.0g，无水乙酸钠5.0g，磷酸氢二钾2.0g，柠檬酸氢二铵2.0g，MgSO4·7H2O 0.58g，MnSO4·H2O 0.33g，琼脂15g，pH 6.8左右，加蒸馏水至1000mL，121℃灭菌20min。

3、产酶培养基：脱脂乳培养基，并加入一定浓度的亚油酸来诱导产酶。

1 出发菌株的活化及纯化保藏的嗜酸乳杆菌接种于液体MRS培养基，摇匀后置36℃恒温箱中培养12h，接种于液体培养基中活化2次。

划线接种到MRS固体培养基，36℃恒温培养36h，嗜酸乳杆菌在120r／min的状态下培养有利于嗜酸乳杆菌的繁殖*。

长出单个菌落后，挑取菌落进行革兰氏染色镜检，确定是否纯种。

嗜酸乳杆菌的形态与菌落特征在MRS琼脂培养基上需氧培养48h后，菌落微小，不规则，微隆起，有光泽，灰白色，呈透明的玻璃霜花样。

10倍显微镜观察表面凸凹不平，边缘为丝状或卷发样。

革兰氏染色后可见菌体呈短杆状，单个或短链状排列，革兰氏染色阳性。

肉眼观察，嗜酸乳杆菌菌落较小,平台状，不规则、圆形凸起、边缘整齐、质地柔软、灰白色、有光泽。

1）500mL MRS液体培养基2）5个250mL的三角瓶，橡胶塞，牛皮纸，绳子3）5个培养皿4）1个接种环，酒精灯，打火机，酒精2 种子的制备活化的菌种接种于基础培养基，于36℃恒温培养24 h，保藏备用。

增菌培养基最佳接种量为3%（活菌数为108个/mL）★3 产酶诱导培养用脱脂乳配成12%的产酶液体培养基，每250mL三角瓶中装入100mL(含12g脱脂乳、1.50‰亚油酸)，加入1mL吐温80，115℃灭菌30 min后，接入2 mL 种子液(每mL含菌体5×108个)，36℃培养36h。

乳酸菌菌种的分离筛选方法乳酸细菌是一类能利用发酵糖产生大量乳酸的细菌通称。

为兼性厌氧菌，杆状或球状，革兰氏阳性菌，无芽孢，不运动。

营养要求高，需要提供丰富的肽类氨基酸维生素。

在琼脂表面或内层形成较小的白色或淡黄色的菌落。

通常用作为有益微生物的菌种有乳酸乳杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、粪肠球菌、乳酸片球菌、双歧杆菌、屎肠球菌、戊糖片球菌等。

乳杆菌常用MRS琼脂作半选择培养基。

当乳杆菌仅是复杂区系中的部分菌类时，SL培养基常用作为选择性培养基。

对于芽孢乳杆菌常用GYP培养基，链球菌有TYC培养基、MS培养基。

M17培养基被用作乳球菌的分离培养基。

嗜酸乳杆菌属于乳杆菌属的一个种。

其特性为：杆菌，两端圆，不运动，无鞭毛。

粪肠球菌为革兰氏阳性，圆形或椭圆形。

乳酸片球菌细胞呈球状，直径0.6~1.0μm，在直角两个平面交替形成四联状，一般细胞成对生，单生者罕见，不成链状排列。

革兰氏阳性，不运动，兼性厌氧。

在MRS培养基上菌落小，呈白色。

沿洋菜穿刺线的生长物呈丝状。

乳酸菌在一般琼脂培养基上形成微小菌落，不易观察，所以分离时先富集培养并选择合适的培养基。

分离培养基一般添加西红柿、酵母膏、吐温-80等物质，也常常加入醋酸盐，因醋酸盐能抑制部分细菌生长，对乳酸菌无害。

培养基中添加碳酸钙，乳酸溶解培养基中的碳酸钙形成透明圈，作为分离鉴别的依据，通过对生成的乳酸量进行性能鉴定。

乳酸菌生长繁殖时需要多种氨基酸，维生素及微氧，一般菌落比较小。

分离培养基一般可添加西红柿酵母膏油酸吐温等物质，均具有促进生长作用。

也常常添加醋酸盐抑制有些细菌的生长，对乳酸菌无害。

一.筛选方法：1.溶钙圈法：利用一些产酸类细菌在含CaCO3的培养基上产生CaCO3溶解圈，从而筛选出这些产酸类细菌，可用于乳酸菌的筛选。

其中培养基中加入CaCO3的作用是：①鉴别能产生酸的细菌；②中和产生的酸，以维持培养基的PH。

筛选过程：样品预处理→梯度稀释至10-6→选择合适的稀释度涂布→37℃培养48h→挑选产生溶钙圈的菌落反复在MRS培养基上划线→挑起单菌落染色，经镜检确认为纯种→挑选革兰氏阳性单菌落→试管穿刺4℃冰箱保存。

《乳酸细菌分类鉴定及实验方法》一、引言乳酸细菌（Lactobacillus）是一类常见的益生菌，它们能帮助消化系统聪明，同时也可以通过促进有益的肠道微生物的生长来改善肠道健康。

因此，乳酸细菌的分类和鉴定对于研究乳酸细菌的功能和应用具有重要意义。

本文将首先介绍乳酸细菌的分类和鉴定，然后介绍乳酸细菌的实验方法。

二、乳酸细菌的分类和鉴定1. 乳酸细菌的分类乳酸细菌是属于细菌科（Bacteroidetes）的一类细菌。

它们可以分为三大类：乳酸菌（Lactobacillus）、乳酸乳球菌（Streptococcus）和乳酸变形杆菌（Bifidobacterium）。

每一类乳酸菌都有不同的特征，如形态、生长习性和生理功能。

2. 乳酸细菌的鉴定乳酸细菌的鉴定可以分成宏观鉴定和微观鉴定两种。

宏观鉴定可以从外观上分辨不同种类的乳酸细菌，其中包括形态、大小、色泽和膜结构等。

微观鉴定则是从细节上来识别乳酸细菌的特征，包括菌体的形态、菌落的形状、菌落的大小和染色等。

三、乳酸细菌的实验方法1. 样品采集乳酸细菌的实验方法首先要从样品的采集开始。

乳酸细菌的样品可以从食品、生物体表面、自然环境或肠道等环境中获取。

采集的样品应当及时保存，以防乳酸细菌的生长和繁殖。

2. 培养基制备乳酸细菌的培养基是乳酸细菌实验的基础，它可以保证乳酸细菌的生长和繁殖。

常用的乳酸细菌培养基有MRS培养基、MRS-glucose培养基和MRS-sucrose培养基等。

这些培养基中的成分可以满足乳酸细菌的需求，从而促进乳酸细菌的繁殖和活力。

3. 培养和筛选采集到的样品和制备好的培养基可以混合在一起，然后置于培养室中，根据规定的条件进行培养。

一旦乳酸细菌在培养基中获得了生长和繁殖的机会，就可以开始筛选。

筛选的过程可以通过诸如生长观察、生理鉴定和生化鉴定等方法来进行。

4. 分子鉴定最后，分子鉴定是乳酸细菌分类鉴定的最关键步骤。

分子鉴定可以通过PCR技术、限制性片段长度多态性分析（RFLP）和16S rRNA基因测序等方法准确地识别乳酸细菌的种类。