大豆转基因检测概述

食品中转基因成分检测第12章ELISA方法定量检测抗农达® (RoundupReady®) 转基因大豆F．Eyquem食品中转基因成分检测 第12章2ELISA 方法定量检测抗农达® (Roundup Ready®) 转基因大豆 目 录第12章ELISA 方法定量检测抗农达® (Roundup Ready®) 转基因大豆引言 3酶联免疫吸附分析 (ELISA) 技术 7 实验部分 10参考文献 20食品中转基因成分检测 第12章3ELISA 方法定量检测抗农达® (Roundup Ready®) 转基因大豆 引言本章介绍一种用免疫学技术检测转基因植物的方法，这种方法是基于对转化事件中转入基因产生的新蛋白的检测。

但是，值得注意的是，基因修饰并不总是直接特异地对应于产生新蛋白，蛋白表达量水平也并不总是足够用于检测的目的。

另外，某些蛋白可能仅在植物的特定部位表达 (如：组织特异性启动子)，或者在不同部位或不同生理时期其表达量水平也不一样。

有报道称植物中转基因产物表达量水平占总可溶性蛋白的0~2%，甚至在一些强启动子植物中也是如此 (Longstaff ，1995)。

然而，在许多情况下，文献资料报道的转入基因蛋白表达量水平 (如：批准的GM 作物) 一般低于2%的表达上限 (henner ，1997)。

免疫学分析是一种用抗体作为检测试剂的分析测定系统。

抗体是一种从动物血清中分离得到的特异性蛋白，它可特异性地结合于诱导它们产物的底物，即抗原。

抗体的制备是通过将待检测的底物 (如：CP4 EPSPS ，是一种产生农达除草剂抗性的蛋白) 注射到动物如兔子或者老鼠体内，然后动物体内的细胞会将此底物识别为外来物质并产生抗体与之对抗。

抗体经过纯化，并用可检测的标记与之连接，然后可作为检测目标底物的试剂。

免疫学检测方法发展和应用的先决条件是：得到可直接和待检测新蛋白作用的高特异性抗体。

大豆转基因检测标准1. 背景介绍大豆是世界上最重要的农作物之一，它不仅是一种重要的食物来源，还被广泛用于饲料和工业原料。

然而，随着转基因技术的发展，转基因大豆的种植和使用逐渐增多。

转基因大豆不仅在农业上具有重要意义，还引发了广泛的争议。

因此，制定一套严格的大豆转基因检测标准对于保障食品安全和消费者权益至关重要。

2. 转基因技术概述转基因技术是指通过人工手段将外源基因导入到目标生物体中，并使之在目标生物体中表达。

在大豆中引入外源基因可以使其具有抗虫、抗草甘膦等特性。

然而，转基因技术也引发了人们对食品安全和环境影响等问题的担忧。

3. 国际转基因检测标准为了保证食品安全和国际贸易畅通，国际上制定了一系列关于转基因检测的标准。

其中最为知名且被广泛采用的是国际贸易法组织（Codex Alimentarius Commission）制定的转基因食品检测指南。

该指南包括了转基因检测的样品准备、检测方法、结果解释等方面的要求，为各国制定转基因食品标签要求提供了依据。

4. 国内大豆转基因检测标准现状在国内，大豆转基因检测标准的制定和执行也取得了一定进展。

2002年，中国农业部发布了《农业转基因生物安全管理办法》，其中包括了对农产品生产和加工中使用的转基因生物的监管要求。

此外，中国质量认证中心还发布了《农产品质量安全监督管理规范》，其中涉及到对大豆及其加工产品中转基因成分的监管。

5. 大豆转基因检测方法为了准确、可靠地检测大豆中是否存在转基因成分，科研人员开发出多种不同的检测方法。

目前常用的方法包括PCR法、ELISA法和质谱法等。

PCR法是一种通过扩增目标DNA片段来判断是否存在特定外源DNA 序列的方法；ELISA法是一种通过特异性抗体与外源蛋白质结合来判断是否存在特定外源蛋白质的方法；质谱法则是通过检测样品中特定外源蛋白质的氨基酸序列来判断是否存在转基因成分。

6. 大豆转基因检测标准的制定制定一套严格的大豆转基因检测标准对于确保食品安全和保护消费者权益至关重要。

转基因大豆海关质检报告
海关实验室进口检测：进境转基因大豆经海关关员现场查验完成后，取样送检海关实验室，依据标准进一步进行转基因品系检测、有害生物检疫及品质检验等项目。

1．转基因品系检测：海关实验室根据送检联系单要求，一般重点对安全证书以外(即国家未批准的转基因品系)实施监控、检测，确保进境的转基因大豆品系已通过国家批准。

2．有害生物检疫鉴定海关实验室对转基因大豆中携带的有害生物进行检疫鉴定，主要包括引起植物病害的真菌、细菌、病毒以及携带的昆虫、杂草种子等，并重点对进境植物检疫性有害生物名录中检疫性有害生物进行检疫鉴定，拒有害生物于国门之外，维护国门生物安全。

3．品质检验主要包括转基因大豆水分、蛋白质、脂肪以及杂质、破碎粒，热损伤粒、损伤粒等不完善粒的检验。

大豆中转基因成分定性PCR 检测一、 实验目的 (1)DNA 的原理和操作技术。

(2)DNA 的纯度、含量与分子大小。

(3)学习PCR 的基本原理和操作方法。

(4)掌握高速冷冻离心机、微量移液枪、水平电泳仪、PCR 仪等仪器设备的使用。

二、 实验原理由于现有的商品化转基因产品中绝大多数含35S 启动子和NOS 终止子。

故转基因食品的检测一般基于聚合酶链式反应(PCR)35S 启动子和NOS 终止子进行筛选。

聚合酶链反应(PCR)是近年来常用的一种快速、灵敏的检测转基因产品的方法,但要求待分析的基因组DNA 样品尽可能纯化。

PCR 技术的基本原理类似于DNA物。

PCR 由变性、退火、延伸三个基本反应步骤构成。

三、 PCR 引物设计表1 引物序列及扩增产物长度四、 转基因大豆抗草甘膦转基因大豆品种京引D-1 、京引D-2 、京引D-3 、京引D-4获市面上购买的转基因大豆，万能粉碎机粉碎。

五、 DNA 的提取 1、称取约0.1g 2ml 离心管中；2、加入600μl CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)缓冲液震荡均匀，65℃水浴保温30min；3、加入500μl 酚：三氯甲烷：异戊醇(25:24:1)，振荡均匀，12000r/min离心15min；4、吸取上清液，放入另一新管中加入500ul的异丙醇，12000r/min离心10min。

5、弃去上清液，加入70%乙醇溶液洗涤，12000r/min离心1min。

6、弃去上清液，干燥，用50μl TE缓冲溶液溶解沉淀。

7、加入5μl RNA酶溶液，37℃水浴保温30min。

8、加入400μl的CTAB缓冲溶液，振荡均匀。

9、加入250μl的三氯甲烷：异戊醇(1:1)，振荡均匀，12000r/min离心15min。

10、吸取上清液，放入另一个新管中，加入200μl的异丙醇，12000r/min离心10min。

11、弃去上清液，干燥，用50μl TE缓冲液溶解沉淀。

转基因大豆的检测实验设计生物技术安全评估 092012年5月目录前言........................................................................3. 实验一大豆样品的准备 (4)实验二大豆DNA的提取和纯化 (4)实验三靶标基因的扩增 (6)实验四反应产品检测 (10)实验五结果分析 (12)参考文献 (12)前言随着转基因工程技术的迅速发展与在生物改良及遗传育种中的大规模应用，转基因生物（Genetically Modified Organism）及其产品的种类越来越多，含有的外源基因类型也越来越多。

抗草甘膦（glyphosate）大豆（商品名，roundup ready soybean）是在传统大豆株Variety A5403中转入外源基因CAMV-35S启动子、抗草甘膦基因CP4-EPSPS和NOS终止子而得到。

它是目前使用最广的转基因作物之一，每年至少有800万吨转基因大豆进入我国市场。

因此，研究抗草甘膦大豆的快速检测方法具有重要意义。

基于核酸的检测技术主要有PCR 方法和基于PCR 原理的其他检测方法如多重PCR、巢式PCR 等等。

普通PCR 方法已经成为转基因检测中常用的方法，通常是作为定性检测方法，早在2003 年就成为出入境检验检疫系统的行业标准。

这些标准涉及的转基因作物有大豆（SN/T 1195-2003）、玉米(SN/T 1196-2003)、棉花(SN/T 1199-2003)、油菜籽(SN/T 1197-2003)、烟草(SN/T 1200 -2003) 和马铃薯(SN/T 1198 -2003)。

目前广泛应用于进出口商品的转基因成分检测。

随后在2004 年又制定了转基因定性检测的国标(GB/T 19495.4-2004)，该国标中用的方法还是普通PCR。

因此，普通PCR 方法的研究主要在于新的转基因作物的鉴定研究。

PCR检测转基因大豆：[目的]定性检测转基因大豆。

[方法]以非转基因大豆和CP4-EPSPS转基因大豆为材料,以大豆内源基因Lectin和外源基因5-莽草酸-3-磷酸合成酶基因(CP4-EPSPS)为检测的目的片段,建立PCR反应体系。

采用改进CTAB法提取大豆基因组DNA,并对所提DNA进行PCR扩增和电泳检测,确定转基因大豆的PCR检测限。

实时荧光定量PCR技术检测转基因大豆方法的建立：采用实时荧光定量PCR技术,通过使用特异的引物和探针,对大豆中的内源基因Lectin和转基因大豆中的外源基因EPSPS进行了定量检测,建立了Monsanto公司生产的商业化转基因大豆Roundup Ready○R的定量PCR检测方法。

该方法的检测灵敏度<001%,是国际上设定的转基因最低限量的100倍用巢式和半巢式PCR检测转基因大豆Roundup Ready及其深加工食品：用从转基因大豆(Glycinemax )颗粒中提取的DNA作为模板,经过稀释,形成不同浓度梯度的DNA溶液,然后用巢式和半巢式PCR进行扩增反应。

结果表明,巢式和半巢式PCR均可以扩增DNA浓度为10-14g/μL的溶液。

用巢式和半巢式PCR对市场的食品原料和深加工食品进行检测,可以从大豆油、酱油、面酱、大豆磷脂、豆腐、豆浆等食品原料和深加工食品的17个品牌的食品中检测出大豆内标基因(housekeepinggene)。

ELISA方法定量检测转基因大豆及其产品的研究：以美国、阿根廷、巴西转基因大豆等为材料,建立了ELISA法定量检测抗草甘膦转基因大豆CP4 EP- SPS蛋白的方法,成功检测出美国转基因大豆含量为3.768%、阿根廷转基因大豆含量为2.820%、巴西转基因大含量为1.920%,转基因豆粉、转基因豆粕和中国大豆未检测到CP4 EPSPS蛋白。

此方法具有简便、快速、稳定等优点,其检测灵敏度可达到0.0075%,并且稳定性良好,为抗草甘膦转基因大豆中CP4EPSPS蛋白的定量检测提供了有效的手段。