微生物快速检测方法精编版

【最新整理，下载后即可编辑】土壤微生物量碳测定方法及应用土壤微生物量碳（Soil microbial biomass ）不仅对土壤有机质和养分的循环起着主要作用，同时是一个重要活性养分库，直接调控着土壤养分（如氮、磷和硫等）的保持和释放及其植物有效性。

近40年来，土壤微生物生物量的研究已成为土壤学研究热点之一。

由于土壤微生物的碳含量通常是恒定的，因此采用土壤微生物碳(Microbial biomass carbon, Bc)来表示土壤微生物生物量的大小。

测定土壤微生物碳的主要方法为熏蒸培养法（Fumigation-incubation, FI ）和熏蒸提取法（Fumigation-extraction, FE ）。

熏蒸提取法（FE 法）由于熏蒸培养法测定土壤微生物量碳不仅需要较长的时间而且不适合于强酸性土壤、加入新鲜有机底物的土壤以及水田土壤。

Voroney (1983)发现熏蒸土壤用0.5mol ·L -1K 2SO 4提取液提取的碳量与生物微生物量有很好的相关性。

Vance 等(1987)建立了熏蒸提取法测定土壤微生物碳的基本方法：该方法用0.5mol ·L -1K 2SO 4提取剂（水土比1：4）直接提取熏蒸和不熏蒸土壤，提取液中有机碳含量用重铬酸钾氧化法测定；以熏蒸与不熏蒸土壤提取的有机碳增加量除以转换系数K EC (取值0.38)来计算土壤微生物碳。

Wu 等（1990）通过采用熏蒸培养法和熏蒸提取法比较研究，建立了熏蒸提取——碳自动一起法测定土壤微生物碳。

该方法大幅度提高提取液中有机碳的测定速度和测定结果的准确度。

林启美等（1999）对熏蒸提取-重铬酸钾氧化法中提取液的水土比以及氧化剂进行了改进，以提高该方法的测定结果的重复性和准确性。

对于熏蒸提取法测定土壤微生物生物碳的转换系数K EC 的取值，有很多研究进行了大量的研究。

测定K EC 值的实验方法有：直接法（加入培养微生物、用14C 底物标记土壤微生物）和间接法（与熏蒸培养法、显微镜观测法、ATP 法及底物诱导呼吸法比较）。

微生物快速检测方法概述微生物快速检测方法是通过各种技术手段，利用微生物的生物特性来快速检测微生物的存在和数量。

传统的微生物检测方法需要长时间的培养时间，而且需要复杂的设备和技术，费用昂贵，而新兴的微生物快速检测技术则能够快速、准确地检测微生物，被广泛应用于农业、食品、医疗等领域。

本文将介绍几种常见的微生物快速检测方法。

1. 荧光PCR荧光PCR指的是利用荧光标记的探针来检测PCR反应中产生的特定DNA序列。

在PCR反应过程中，如果存在目标DNA序列，则荧光标记的探针将与其特异结合，产生荧光信号，在荧光仪中进行检测即可得到检测结果。

荧光PCR具有高灵敏度、高特异性、快速方便等优点，被广泛应用于微生物检测中。

同时，还可以通过荧光PCR技术构建荧光定量PCR系统，实现对微生物数量的精确测定。

2. 生物传感器生物传感器是一种新型的可重复使用、非侵入式的微生物检测方法。

生物传感器利用生物体内酶、免疫学反应或细胞作为传感元件，将其与物理、化学、电子等传感技术相结合，实现对微生物的快速检测。

生物传感器具有检测速度快、检测灵敏度高、检测范围广等优点，而且能够实现实时在线监测，被广泛应用于工业用水、环境监测、食品安全等领域。

3. 免疫学检测法免疫学检测法利用生物的免疫反应来检测微生物的存在和数量。

常用的免疫学检测法包括酶联免疫吸附检测法（ELISA）、荧光免疫检测法、放射免疫检测法等。

免疫学检测法具有高度的特异性和灵敏度，能够快速、准确地检测微生物，被广泛应用于食品卫生和临床诊断等领域。

4. 质谱技术质谱技术是一种通过分子量确定分子结构和组成的方法，能够检测各种化合物和生物大分子。

在微生物快速检测中，质谱技术通常用于检测微生物的蛋白质组成、代谢产物和生长情况等。

质谱技术具有高度的特异性和灵敏度，能够快速地检测微生物，而且对检测结果进行质量控制，确保结果的可靠性。

总结微生物快速检测方法的发展给微生物检测带来了很大的便利，提高了检测效率和准确性。

微生物快速检测方法第一篇：微生物快速检测方法是一种用于检测微生物数量和类型的技术，它排除了传统方法中需要多日甚至数周才能得到结果的限制。

目前，有多种不同的微生物快速检测方法可供选择，以下是其中几种。

1. PCR检测法聚合酶链式反应（PCR）是一种广泛使用的微生物检测方法。

该技术依赖于单个微生物细胞中的DNA模板，通过重复循环DNA引物扩增模板DNA，从而在富集的样品中检测出微生物DNA。

相比于传统方法，PCR不需要等待微生物生长，因此它可以极大地减少样品准备和数据分析的时间。

2. 荧光定量PCR检测法荧光定量PCR（qPCR）是PCR技术的一种变体，它使用荧光探针来实现DNA扩增的实时监测。

具体地，qPCR将荧光探针引入PCR反应体系中，当扩增过程中的DNA与荧光探针结合时，就会放出荧光信号。

这种方法在微生物检测中广泛应用，因为它可以定量检测微生物数量，同时还可以消除污染的干扰。

3. 基因测序技术基因测序技术是一种高通量的检测方法，它可以快速测定微生物所携带的基因序列。

基于DNA序列的比对和解码，可以对微生物进行鉴定和分类。

整个测序过程可以在几个小时内完成，可以检测出样品中的潜在病原微生物，并发现抗药性和毒力相关基因。

基因测序技术可以通过揭示微生物的全基因组，来理解微生物的生长和感染机制。

上述方法都可以提供快速并准确的微生物检测结果，可以用于食品、环境、医疗设备等领域。

但是，所有这些方法都需要具备高质量的DNA和RNA作为输入，否则检测结果可能会出现假阳性或假阴性。

第二篇：微生物快速检测方法在农业和食品安全领域中非常重要。

传统的分离和培养方法需要数天才能得到微生物检测结果，且很难检测到低浓度菌群。

为了更快速、准确地检测微生物，出现了一些新的技术，以下是几种常用的方法。

1. 生物传感器生物传感器技术利用大肠杆菌与质粒间的交互作用来检测特定代谢产物。

这种方法可以用于检测细菌、真菌和病毒等微生物。

生物传感器不仅可以检测单一代谢产物，还可以监测多种种类，可以在几分钟内获得结果。

食品微生物快速检测方法传统的微生物培养法耗时太多，不利于工厂生产的快速调整，因此，需要建立现代的微生物快速检测方法。

快速测定方法建立的基础是：利用现代技术测定微生物的代谢产物或微生物的繁殖速度，以确定微生物的数量。

现将国外较成熟，常刚的典型快速测定方法介绍如下：微生物的快速检测方法按检出时间可分为三类：第一类方法是在比相应的传统方法短的时间内得出结果。

此类方法的典型例广是：膜过滤一微菌落一荧光法。

具体方法是将一定量的样品(或样品稀释液)经膜过滤(过滤膜φ巾≤0．45μm)，再过滤膜放在培养基上或放在浸行液体培养基的厚纸板上在适宜温度条件下培养一段时间，然后将膜放在浸过0．1％ANS(8一苯胺基萘磺酸镁)溶液的纸片上作用10分钟，将膜揭下，在80℃条件下干燥 5—10分钟，最后在100倍的荧光显微镜(入=340~ 380nm)下计数蓝绿色菌落的数目。

对于不同样品，膜过滤一微菌落一荧光法使用的培养基和培养时间不同。

检验凝乳中酵母菌时，可采用含琼脂的固体培养基，也可放在2ml双料液体培养基浸润的纸片上培养15—24小时。

检验食品中需氧性细菌数时，可用琼脂计数平板，也可用营养肉汤或酪蛋白胨一豆粉蛋白胨液体培养基，培养8小时。

食品中酵母和霉菌的选择性检测可使用添加100ppm氯霉素的麦芽汁提取物琼脂培养基，或添加100ppm氯霉素的双料麦芽汁提取物液体培养基。

糖果中耐渗透酵母的检测可采用50% 葡萄糖液体培养基，培养时间为48小时(菌数>10个／克)—72小时(菌数≤10个／克)。

第二：类快速检测方法一般在6—12小时内得出检验结果。

典型的方法有放射性示踪法和阻抗测定法。

放射性示踪法是以放射性标记物作碳源，测定经微生物发酵产生的有放射性标记的CO2量，从而确定样品中含菌量。

测定菌数小于1000个／毫升的样品，大约需要7小时。

阻抗测定法可根据食品的微生物污染程度在一天内完成检测。

这种方法依据的原理是：微生物在培养基中不断缯殖，其代谢产物的增加会导致液体培养基中电阻的变化，使介质的导电性增强，即电阻减小。

大肠菌群测试片产品名称：大肠菌群测试片∙产品规格： 24片/包∙产品用途：食品、饮用水、原料和食品加工设备表面大肠菌群的检测产品说明1、原理及适用范围大肠菌群是评价食品卫生质量的重要指标之一，目前已被广泛应用于食品卫生检验工作中。

大肠菌群多存在于温血动物粪便、人类经常活动的场所以及有粪便污染的地方，大肠菌群数的高低，表明了食品及食品生产过程中受污染的程度。

大肠菌群测试片（Filmplate TM Enumeration of Coliform BE211）含有选择性培养基、大肠菌群特异性半乳糖苷酶的显色指示剂和高分子吸水凝胶，运用微生物测试片专有技术，做成一次性快速检验产品。

本产品适合于食品、饮用水及原料中大肠菌群的计数，也可用于食品加工设备表面的卫生检测。

执行标准：食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数（GB/T 4789.3—2010）。

2、操作方法2.1、样品处理：取样品25mL（g）放入含有225mL灭菌磷酸缓冲液稀释液（或生理盐水）的取样罐或均质杯内，制成1:10的样品匀液，用1mL灭菌吸管吸取1:10样品匀液1mL，注入含有9mL稀释液的试管内，振摇后成为1:100的样品匀液。

2.2、接种：一般食品选2～3个适宜的稀释度进行检测，含菌量少的液体样品（如饮用纯水和矿泉水等）可直接吸取原液进行检测。

将大肠菌群测试片置于平坦实验台面，揭开上层膜，用无菌吸管吸取1mL样品匀液慢慢均匀地滴加到纸片上，然后将上层膜缓慢盖下，静置10s左右使培养基凝固。

每个稀释度接种两片。

同时做一片空白阴性对照。

2.3、培养：将测试片叠在一起放回原自封袋中，并封口，透明面朝上水平置于恒温培养箱内，堆叠片数不超过12片。

培养温度为36℃±1℃，培养15～24h。

3、计数原则及报告方式3.1、培养后纸片上的蓝色菌落为大肠菌群菌落，选择菌落数在15CFU～150CFU之间的纸片进行计数。

3.2、若两个稀释度的菌落数均在15CFU～150CFU之间，则取其平均菌落数乘以稀释倍数报告之，即为每毫升（或每克）样品中的大肠菌群菌落数。

微生物快速检查方法我这微生物快速检查方法，那可真是摸索了好久才有了点心得。

我一开始啊，真的是瞎摸索。

就像没头的苍蝇一样乱撞。

我想到的第一个方法呢，就是直接用显微镜看。

我想这微生物不就是小嘛，放大了看肯定行。

我费了好大劲，弄了样本放在载玻片上，就开始看。

结果呢，发现样本里乱糟糟的一片，啥也看不清。

后来我才知道，样本处理可重要了。

就好比盖房子打地基一样，地基没弄好，楼肯定盖不起来。

这样本要是没处理好，微生物在里面就跟缠在一起的乱麻似的，怎么能看得清呢。

后来我又试了染色的方法。

我寻思着给微生物上个色，不就更容易区分了嘛。

但是这个染色可不好掌握。

你得选择合适的染料，还要控制好染色的时间。

我一开始是染色时间太长了，结果把整个样本都染得黑乎乎的，还以为自己发现了什么超级大细菌呢，哈哈哈，现在想想真好笑。

在不断尝试后，我总算知道了不同类型的微生物大概要用多久染色。

而且染色后确实清楚了不少，就像在一群穿着黑白衣服的人里给几个人穿上了鲜艳颜色的衣服，一下子就能看到他们在哪了。

还有培养法，这也是常见的。

我把样本放到培养皿里，等着微生物慢慢长。

可是这个时间太长了，有时候等得心焦。

而且有的微生物还特别挑剔，稍微培养条件不对，它们就不长。

这就像我们种花似的，有的花得天天浇水施肥，稍微没照顾到就死翘翘了。

所以培养的时候，温度啊，营养物质啊，都得仔细控制。

再说说分子生物学的方法，像PCR之类的。

这个方法我不太确定我完全掌握了。

我知道这个方法是根据微生物的核酸来检测的。

但是操作起来，对仪器和试剂的要求特别高。

一旦试剂哪个没加对量，或者仪器的操作步骤错了一步，结果就完全不对。

记得有一次，我可能在加某种试剂的时候手抖了一下，量不对了，结果出来的东西那叫一个莫名其妙。

不过这个方法要是做得好了，那确实能非常快速准确地检测出微生物。

总的来说呢，微生物快速检查方法，真的是得不断尝试，总结经验。

样本处理是基础，选择合适的检测方法也很重要，每一个小细节都不能放过，不然都可能导致失败。

微生物快检方法作者：苏野柴景亮李亮亮来源：《丝路视野》2019年第13期摘要：随着当今社会的飞速发展，越来越多的家庭已经步入小康，人们也从如何“生存”转向了如何“生活”，民众的目光也渐渐地聚焦在了食品安全问题上。

那么如何快速准确地监控、检测食品安全呢？本文主要在微生物快速检测方法中，通过纸片法和平板培养法的对比，对它们的优缺点进行探究。

关键词：快检纸片法平板培养法就食品服务行业来说，目前存在着一些不明来历的“三无食品”“黑工厂”“黑作坊”，导致老百姓时刻都要担心吃进肚子里的食品到底是不是安全的。

由于这些问题的存在，拥有高效、便捷的食品安全检验检测方法是迅速发现并解决食品安全问题的关键所在，这也导致了食品检验检测的发展方向是向着“批量检测”和“快速检测”两方面发展。

一、研究目的及意义研究目的：1.研究“纸片法”和“平板培养法”的优缺点和特点;2.通过研究各种食品微生物快速检验来对比“纸片法”和“平板培养法”的优势。

研究意义：食品微生物快检方法的不断发展与进步是保障民众的饮食安全和生活质量的重要保证之一。

食品微生物快检这项技术，还能对食品类产品受到的病原微生物污染程度做出一个十分具有科学性及准确性的正确评价，从而对那些被判定为受到污染的食品产品立案调查，以此作为防治食品安全隐患的重要保障措施。

现今食品微生物快检方法多种多样，但其中的大部分都需要一定的经济基础来支持检验项目的顺利进行，而食品微生物快速检验则是一种以“预防”为主的检控手段，它需要检验人员和市场监管人员大量、定期地进行市场产品管理与抽样检控，因此，当食品微生物快速检验技术进入了现今的“n=5/AC=0”时代后，如何做到快速化、批量化、准确化和经济化四者兼顾变成了全世界所有检验人的研究方向与目的。

二、食品微生物快速检验的常用方法介绍1.纸片法：在使用快检纸片时，确保除样品外一切与纸片直接接触的物品、工具都应经过无菌处理，操作人员进行操作时需佩戴头套、口罩及无菌手套，将纸片取出后，以生理盐水浸泡后，用纸片充分接触样品，维持30秒左右，后取下纸片，放入培养箱，以37°恒温培养，一般18小时后便可查看结果。