小鼠心梗模型的制备及其心功能检测课件
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大鼠急性心肌梗死动物模型的建立和评估【摘要】目的建立一种稳定可重复的大鼠急性心肌梗死模型。
方法SD大鼠经氯胺酮麻醉后,经口人工呼吸,开胸结扎左冠状动脉前降支。
4周后行超声心动图、血流动力学和组织病理学检查。
结果①心电图和组织病理学检查证实,成功建立了大鼠急性心肌梗死模型,梗死面积40%~45%(平均42%);②与假手术组比较,心肌梗死大鼠左室收缩末径、左室舒张末径和非梗死区增厚指数明显增加(P<0.01),左室后壁、左室前壁、梗死区变薄指数、左室射血分数和左室短轴缩短率显著降低(P<0.05,P<0.01);③心肌梗死大鼠动脉收缩压、舒张压、左室收缩压、左室内压最大上升和下降速率均低于假手术组(P<0.01),心率和左心室舒张末压高于假手术组(P<0.01);④两组大鼠左、右心室实际和相对重量以及胶原容积积分之间的差异有统计学意义(P<0.01)。
结论本文建立心肌梗死动物模型的方法操作简单、重复性好、结果可信。
【Abstract】Objective To develop a steady and reproducible myocardial infarction(MI) model in rats.Methods SD rats were anaesthetized with ketamine.After linking with respiration machine,left anterior decending coronary artery was ligated.Echocardiogram,haemodynamics and histopathology were done four weeks after ligation.Results ①The model of MI was established successfully and proved by electrocardiogram and histopathology.Infarct sizes were 40%~45%(average 42%).②Compared with sham operation group,MI rats had higher left ventricular systolic diameter,left ventricular diastolic diameter and non-infarcted region thickening index (P<0.01),and lower posterior wall diameter,anterior wall diameter,infarcted region thinningz index,left ventricular ejection fraction and fractional shortening (P<0.05,P<0.01).③Systolic blood pressure,diastolic blood pressure,left ventricular systolic pressure and the maximum rising and dropping rates of left ventricular pressure decreased,while heart rate and left ventricular end-diastolic pressure increased after MI.④There were significant differences in left ventricular actual weight,right ventricular actual weight,left ventricular relative weight,right ventricular relative weight and collagen volume fraction between sham operation group and MI rats (P<0.01).Conclusion This experiment provided an easy way to establich the MI model,which was reproducible and credible.【Key words】Coronary artery;Myocardial infarction;Modelanimal;Rats心肌梗死(myocardial infarction,MI)是21世纪医学亟待解决的难题之一[1]。
心肌梗死动物模型具体方法及步骤原型物种人来源结扎冠状动脉左前降支(LAD)导致心梗模式动物品系SPF级SD大鼠,健康,3-4W,雌雄各半,体重为180g-200g。
实验分组实验分六组:正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组。
实验周期72h建模方法心肌梗死是指心肌的缺血性坏死,是一种急性及严重的心脏状态。
心脏作为血液循环动力中心这一功能的实现,需要冠状动脉不断提供的血流供应,当冠状动脉发生病变而狭窄或堵塞,使得冠状动脉的血流急剧减少或中断,便会使相应的心肌出现严重而持久地急性缺血,心肌无法得到足够氧气,最终导致心肌不可逆的缺血性坏死,心脏的收缩和舒张功能降低,机体供血不足,严重者最终导致机体死亡。
1. 大鼠用3%戊巴比妥钠(30mg/kg),腹腔注射麻醉,用小动物剃毛器剃除大鼠胸部及腋下毛发(充分暴露手术区),用碘酒和75%乙醇术区消毒。
2.气管插管:麻醉后,夹趾检测无反应即可进行MI手术。
打开外置光源、显微镜开关,打开呼吸机,设置好各参数(呼吸比2:1,潮气量6-8 mL,频率70 次/min),将气管插管沿声门插入气管,取下大鼠接上呼吸机,观察大鼠呼吸状况,胸廓起伏与呼吸机频率一致表示插管成功,即可进行MI手术。
3. 大鼠采用右侧卧位,用眼科剪在左前肢腋下,用显微剪于三、四肋间打开胸腔充分暴露心脏,显微直镊轻轻夹起少量心包并于左心耳下撕开少许心包,充分暴露左冠状动脉前降支(LAD)或所在区域。
4. 结扎冠状动脉:于显微镜下找到LAD走向或可能所在位置,持针器持取5-0带针缝合线,于左心耳根部下方肺动脉圆锥旁以5-0 无创缝合线穿过左冠状动脉前降支( LAD),以完全阻断LAD血流。
5.关胸:结扎完成后,5-0缝线完全缝合胸腔开口(保证无缝隙、无错位)关闭胸腔,由内向外逐层缝合各层肌肉和皮肤。
6.术后管理:术后密切关注大鼠状态,有无呼吸异常等。
待大鼠自然苏醒后将大鼠从呼吸机上取下并取下气管插管,正常饲养。
小鼠心梗模型的建立与无创评价刘建;范慧敏;汪进益;张治国;曹浩;兰琴;史乾;唐光亮;刘中民【摘要】目的建立小鼠的心肌梗死模型,提高动物存活率,并使用心脏超声进行无创心功能评价.方法昆明雄性小鼠20只,气管插管后由左侧第4肋间进胸,结扎冠状动脉左前降支建立小鼠心肌梗死模型,在模型建立的前1 d和术后1 d、1周分别使用心脏超声检测左室收缩末直径、舒张末直径、缩短分数和射血分数,并于术后第8天进行病理检查.结果小鼠心肌梗死模型建立过程中早期死亡率10%(2/20),术后1周内死亡率15%(3/20),经过超声评价,造模成功率为75%(15/20).小鼠心功能明显下降,射血分数由手术前的(92.1±3.45)%下降到术后1周的(49.8±14.20)%,缩短分数由手术前的(61.4±2.85)%下降到(26.1±9.01)%;心室明显扩大,左室收缩末直径由(13.9±1.98)μm扩大到(36.5±7.37)μm,舒张末直径由(35.9±3.12)μm扩大到(48.9±6.05)μm.病理学检查见明显瘢痕形成.结论通过结扎冠状动脉左前降支的方法建立了小鼠心肌梗死模型并可以使用超声心动图评价这一模型.【期刊名称】《中国实验动物学报》【年(卷),期】2010(018)003【总页数】4页(P196-198, 后插3)【关键词】小鼠;模型;动物;心肌梗死;超声心动图【作者】刘建;范慧敏;汪进益;张治国;曹浩;兰琴;史乾;唐光亮;刘中民【作者单位】同济大学附属东方医院心胸外科,上海,200120;同济大学附属东方医院心胸外科,上海,200120;同济大学附属东方医院心胸外科,上海,200120;同济大学附属东方医院心胸外科,上海,200120;同济大学附属东方医院心胸外科,上海,200120;同济大学附属东方医院心胸外科,上海,200120;同济大学附属东方医院心胸外科,上海,200120;同济大学附属东方医院心胸外科,上海,200120;同济大学附属东方医院心胸外科,上海,200120【正文语种】中文【中图分类】R654.1急性心肌梗死是当代社会的多发病常见病,人们通过制作动物模型,为研究人心肌梗死的发病机制以及开展新疗法提供基础。
大鼠急性心肌梗死动物模型的建立和评估大鼠急性心肌梗死动物模型的建立和评估【摘要】目的建立一种稳定可重复的大鼠急性心肌梗死模型。
方法SD大鼠经氯胺酮麻醉后,经口人工呼吸,开胸结扎左冠状动脉前降支。
4周后行超声心动图、血流动力学和组织病理学检查。
结果①心电图和组织病理学检查证实,成功建立了大鼠急性心肌梗死模型,梗死面积40%~45%(平均42%);②与假手术组比较,心肌梗死大鼠左室收缩末径、左室舒张末径和非梗死区增厚指数明显增加(P<0.01),左室后壁、左室前壁、梗死区变薄指数、左室射血分数和左室短轴缩短率显著降低(P<0.05,P<0.01);③心肌梗死大鼠动脉收缩压、舒张压、左室收缩压、左室内压最大上升和下降速率均低于假手术组(P<0.01),心率和左心室舒张末压高于假手术组(P <0.01);④两组大鼠左、右心室实际和相对重量以及胶原容积积分之间的差异有统计学意义(P<0.01)。
结论本文建立心肌梗死动物模型的方法操作简单、重复性好、结果可信。
【Abstract】Objective To develop a steady and reproducible myocardial infarction(MI) model in rats.Methods SD rats were anaesthetized with ketamine.After linking with respiration machine,left anterior decending coronary artery was ligated.Echocardiogram,haemodynamics and histopathology were done four weeks after ligation.Results ①The model of MI was established successfully and proved by electrocardiogram and histopathology.Infarct sizes were 40%~45%(average 42%).②Compared with sham operation group,MI rats had higher left ventricular systolic diameter,left ventricular diastolic diameter and non-infarcted region thickening index (P<0.01),and lower posterior wall diameter,anterior wall diameter,infarcted region thinningz index,left ventricular ejection fraction and fractional shortening (P<0.05,P<0.01).③Systolic blood pressure,diastolic blood pressure,left ventricular systolic pressure and the maximum rising and dropping rates of left ventricular pressure decreased,while heart rate and left ventricular end-diastolic pressure increased after MI.④There were significant differences in left ventricular actual weight,right ventricular actual weight,left ventricular relative weight,right ventricular relative weight and collagen volume fraction between sham operation group and MI rats (P<0.01).Conclusion This experiment provided an easy way to establich the MI model,which was reproducible and credible.【Key words】Coronary artery;Myocardial infarction;Modelanimal;Rats心肌梗死(myocardial infarction,MI)是21世纪医学亟待解决的难题之一[1]。
大鼠心肌梗死模型建立方法选择及心电图表现王勇;李攀;高大中;殷跃辉;佘强;高翠菊;赵江龙;谭勇;唐永岗;陈运清【期刊名称】《中国实验动物学报》【年(卷),期】2011(19)6【摘要】目的探讨构建心肌梗死模型的大鼠左冠状动脉结扎位置及心电图特点.方法 SD大鼠经麻醉后,气管切开插管及连通呼吸机,打开左侧胸腔后分别在距离左心耳尖端约2 mm水平处(低位结扎组)与在距主动脉根部约3 mm处(高位结扎组)结扎左冠动脉,假手术组除不结扎冠脉外步骤同低位结扎组,术前术后分别行心电图检查,且4周后取出心脏行病理学检查及测定心肌梗死面积.结果高位结扎组大鼠心肌梗死面积约55.5%,总存活率13.3%;低位结扎组大鼠心肌梗死面积约36.2%,总存活率66.7%;假手术组大鼠无心肌梗死,存活率100%.大鼠体表心电图在非心肌梗死者QRS -T波群呈成“M”型波,在心肌梗死者R波与T波融合成高大的帐篷状单波,无明显ST段.4周后心肌组织形态学特点符合心肌梗死的病理改变.结论距大鼠主动脉根部约3 mm结扎左冠状动脉,不能满足实验需要;距离左心耳尖端约2 mm水平结扎左冠状动脉,能满足实验需要;大鼠的体表心电图无明显ST 段.%Objective To explore the site of left coronary artery ligation on establishing myocardial infarction model and the electrocardiographic features in those rat models. Methods After the Sprague-Dawley(SD) rats were anaesthetized and put on chine-assisted respiration, an occluding suture was placed at one of two distinct sites along the left coronary artery. The suture was placed about 3 mm distal to the aortic root (high) and about 2 mm distal to the horizontal line of left atrial appendage tip (low) ,respectively, and underwent the same procedure as the low suture group except left coronary artery ligation ( sham) , monitored by electrocardiography (ECG) before and after operation, respectively. At 4 weeks after operation they were sacrificed for histopathological analysis and measurement of the infarct area. Results The infarct area was about 55. 5% and 36. 2% , and the total survival rate was 13. 3% and 66. 7% in the high and low suture groups, re- spectively. There was no myocardial infarction and the survival rate was 100% in the sham operation group. ECG; QRS-T wave displayed an intersection "M" shape in the sham group and before left coronary artery ligation. The R wave and T wave fused into one large tent-like single wave after the left coronary artery ligation, and without visible ST segment. His-topathological changes of myocardial infarction were seen at 4 weeks after operation. Conclusions It is a novel method to establish myocardial infarct model that the suture is placed about 2 mm distal to the horizontal line of left atrial appendage tip, and all ECG showed no visible ST segment in the rats.【总页数】5页(P525-529)【作者】王勇;李攀;高大中;殷跃辉;佘强;高翠菊;赵江龙;谭勇;唐永岗;陈运清【作者单位】重庆市第七人民医院心内科,重庆400054;重庆医科大学超声影像学研究所,重庆400010;重庆医科大学第二附属医院心内科,重庆400010;重庆医科大学第二附属医院心内科,重庆400010;重庆医科大学第二附属医院心内科,重庆400010;重钢总院心内科,重庆400080;宝鸡市人民医院心内科,宝鸡721000;重庆市第七人民医院心内科,重庆400054;重庆市第七人民医院心内科,重庆400054;重庆医科大学第二附属医院心内科,重庆400010【正文语种】中文【中图分类】Q95-33;R542.22【相关文献】1.超急性期心肌梗死的细胞电生理基础和心电图表现(二)--心电图表现、电生理机制和临床诊断要点 [J], 郭勇娟;葛海燕;李忠杰2.超急性期心肌梗死的细胞电生理基础和心电图表现(二)——心电图表现、电生理机制和临床诊断要点 [J], 郭勇娟;葛海燕;李忠杰;3.大鼠急性心肌梗死模型建立的影响因素 [J], 张伟;许静;汤小江;王婷;何建军;施秉银;王惠芳;王丽君4.大鼠心肌梗死模型建立方法若干探讨 [J], 陈昭喆;宋亚辉;谢秀乐;蔡伦安5.心电图诊断心肌梗死的当今评析:(一)急性心肌梗死早期不典型心电图表现 [J], 吕安康;沈卫峰;戚文航因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
微创建立小鼠心肌梗死模型及其评价张红霞;刘艳;李玲萍;贺忠梅【摘要】目的探索一种微创建立小鼠心肌梗死模型的方法,并利用超声心动图进行评价.方法 40只C57BL/6雄性小鼠随机分为心梗组(MI,n=30)与假手术组(Sham,n=10).术前及术中用异氟烷对动物行吸入麻醉,于左胸3、4肋间做一1.0 cm左右切口,将心脏从胸壁窗口挤出.MI组结扎冠脉左前降支建立心梗模型;Sham 组冠脉只穿线不结扎,其余操作同MI组.术后4周采用超声心动图检测心脏结构与功能,经心肌组织病理学分析以判断模型成功与否.结果 MI组小鼠存活率为78.6%,Sham组为100%.超声结果显示,与Sham组相比,MI组小鼠的LVAWd、LVAWs、EF及FS均明显降低(P<0.05),LVIDd与LVIDs明显增加(P<0.05).Masson染色可见MI组小鼠的左心室腔明显增大,心室壁变薄,纤维化面积增加[(13.54±1.39)%比(0.08±0.03)%,P<0.01].结论采用本法制备小鼠心梗模型具有微创、快捷、高效、无需使用呼吸机的优势,而且模型稳定可靠.【期刊名称】《中国心血管病研究》【年(卷),期】2014(012)004【总页数】4页(P334-336,383)【关键词】心肌梗死;动物模型;微创;超声心动图【作者】张红霞;刘艳;李玲萍;贺忠梅【作者单位】030001 太原市,山西医科大学生理学系,细胞生理学山西省重点实验室;030001 太原市,山西医科大学生理学系,细胞生理学山西省重点实验室;030001太原市,山西医科大学生理学系,细胞生理学山西省重点实验室;030001 太原市,山西医科大学生理学系,细胞生理学山西省重点实验室【正文语种】中文【中图分类】Q95-33;R542.2+2心肌梗死(myocardial infarction,MI)是一种发生率和病死率极高的严重病症,对其发病机制与防治策略的研究需要高效稳定的动物模型。
心肌梗死的动物模型制作[ 08-10-02 17:11:00 ] 作者:靳激扬编辑:Studa_hasgo122【关键词】心肌梗死模型动物心肌梗死是严重危害人类健康的心血管疾病,也是主要致死因素之一。
在心血管疾病研究中,动物模型被广泛用于发病机制和药物治疗研究。
研究目的不同则所需的动物模型平台亦不同,心肌梗死动物模型的有效建立是完成相关实验的前提,对研究急、慢性心肌梗死的病理演变过程、诊断及治疗均有重要意义。
目前国内外常见的建立心肌梗死动物模型的方法主要有两大类:⑴采用各种方法直接造成冠状动脉狭窄或堵塞,其试验周期短,可以观察梗死后再灌注对心肌细胞的损伤。
⑵诱发冠状动脉粥样硬化形成狭窄与梗死,其试验周期长,死亡率较高。
通过开胸结扎不同部位冠状动脉建立急性心肌梗死模型已沿用多年[1~5],结扎大鼠冠状动脉是医学实验中已得到公认、最常用的心肌梗死模型。
国外多采用Jons法[6]即在自主呼吸下,开胸迅速挤出心脏,结扎冠状动脉。
结扎时固定部位于左心耳下缘与肺动脉圆锥间,以左冠状静脉主干为标志,连同一小束心肌一同结扎,于左心耳根部下方2mm处进针,在肺动脉圆锥旁出针,深度为0.3mm~0.5mm,过浅缝线易于脱落、血管结扎不完全,过深易致传导阻滞。
由于大鼠冠状动脉发育变异较大,血管常显示不清,此时可固定部位盲扎,亦可达到结扎目的。
观察近心尖的左室前壁,是否失去原有光泽,而显暗灰色或青紫色;收缩力是否降低或消失。
观察心电图是否逐渐出现ST 段弓背向上抬高及Q波等,心电图变化才能说明冠脉结扎情况,只有看到上述肯定结果,才可关闭胸腔,否则需重新结扎冠脉。
此法结扎冠状动脉后心电图及病理表现相似,多为广泛前壁心肌梗死,稳定性较好。
在开胸状态下直接用缝合线结扎冠状动脉分支,造成该支配区域的永久性缺血。
此法动物创伤大、死亡率高,要求术者技术娴熟,动作快,难度大。
大鼠右肺四叶,左肺一叶,呈海绵状,有时左肺将心脏大部分覆盖,因此在开胸时最易伤及充气的肺组织。
小鼠心肌梗死模型建立的简化方法研究作者:史建伟来源:《中西医结合心血管病电子杂志》2018年第27期【摘要】目的探讨小鼠心肌梗死模型建立的简化方法。
方法选入昆明小鼠35只进行心肌梗死动物模型实验研究,在人工气道开通过程中,借助经皮冠状动脉球囊成形术导丝简化插管,并实施冠状动脉左前降支开胸结扎术,统计术后小鼠存活率、心电图走势以及心肌染色情况。
结果 35只小鼠心梗模型建立成功,术后一天33只小鼠存活,术后两周,共存活31只;33只小鼠心肌染色提示心肌梗死。
结论导丝简化气管插管联合开胸式冠状动脉左前降支结扎术,操作简便,能够提高小鼠心肌梗死模型建立成功率,借鉴价值极高。
【关键词】心肌梗死;动物模型;导丝插管【中图分类号】R259 【文献标识码】B 【文章编号】ISSN.2095.6681.2018.27..02心肌梗死动物模型的建立能够模拟心梗发生,有利于医疗界深入研究心肌梗死,提高心梗防治效果。
为探讨简单易行、切实有效的小鼠心肌梗死模型建立对策,本研究小组开展了实验研究。
现报道如下。
1 材料与方法1.1 研究动物本次研究动物源自某实验动物中心养殖的昆明雄性小鼠,入选小鼠鼠龄11~12周,体重25~30 g,共选入35只。
1.2 器械和用品本次研究所用医疗器械包括小动物呼吸机、心电图机;工具有眼科专用剪、镊,刀片、直/弯钳、大头针、缝合针、留置针、持针器及经皮冠状动脉球囊成形术导丝;医疗用品包括消毒碘酒/酒精,2%戊巴比妥钠溶液、医用胶带、动物手术台等。
1.3 方法①术前监护。
以50 mg/kg的标准,经腹腔为小鼠注射2%戊巴比妥钠溶液实施诱导麻醉,用药后5~7 min后,实施夹趾反射试验,若提示阳性结果则可继续注射麻醉药,以初始剂量的10%~20%为准;准备就绪后,摆放小鼠体位为右侧卧位,将5-0尼龙线系在小鼠前上切牙并连接操作台边缘,确保鼠鼻与边缘保持5~10 mm距离,同时,应用医用胶带将小鼠四肢、尾巴等部位进行妥善固定;借助刀片将手术部位毛发剔除,并使用碘酒、酒精进行全面消毒;启动心电图机,并妥善连接小鼠肢体与机器,实现导联监测。
新型心肌梗死大鼠模型制备方法的建立和模型鉴定裴之俊;李伏燕;陈义加;王俊杰;李薇;吴瑞敏;杨怡【摘要】目的:建立可用于制备心肌梗死大鼠模型的新方法。
方法异氟醚气体麻醉Sprague‐Dawley 大鼠后,钝性分离肋间肌,结扎左冠状动脉前降支,制备心肌梗死大鼠模型。
以仅穿刺不结扎左冠状动脉前降支的方法制备假手术大鼠模型。
术后采用小动物心电图仪、血流动力学分析仪、2,3,5‐氯化三苯基四氮唑(TTC)染色及苏木素‐伊红(HE)染色鉴定心肌梗死大鼠模型。
结果心肌梗死大鼠模型及假手术大鼠模型存活率均为80.0%。
心肌梗死模型组大鼠术后第2、7天心电图检查可见 ST 段明显抬高。
血流动力学检测结果显示,心肌梗死模型组大鼠颈总动脉收缩压和舒张压,左心室收缩压,以及左心室压力上升和下降最大速率均较假手术模型组均明显降低,心率和左心室舒张末压则明显增加(P<0.05)。
TTC 染色显示梗死心肌与正常心肌色差明显,坏死心肌呈白色。
HE染色显示梗死心肌细胞肿胀、排列紊乱,出现空泡,甚至断裂,部分断裂心肌细胞间隙见炎症细胞浸润。
结论建立的方法效果理想且操作简单,适用于心肌梗死大鼠模型的制备。
%Objective To establish a new ,fast and efficient preparation methodof myocardial infarction model . Methods Sprag ue‐Dawley rats were anesthetized by using isoflurane gas ,then myocardial infarction models were prepared by ligation of ramus descendens anterior arteriae coronaria sinistrae ,after bluntly separation of intercostal muscle .Sham operation rat models were prepared by punctuation ,not ligation ,of ramus descendens anterior arteriae coronaria sinistrae .Small animalelectrocardiograph ,hemodynamic analyzer ,2 ,3 ,5‐triphenyltetrazolium chloride (TTC) staining and hematoxylin‐eosin (HE) staining were used toidentify myocardial infarction models .Results Survival rates of myocardial infarction models and sham operation models were both80 .0% .Electrocardiograph anal‐ysis indicated that ST segment was raised apparently in myocardial infarction models on 2 and 7 days after operation . Hemodynamic detection indicated that diastolic blood pressure ,systolic blood pressure ,left ventricular systolic pres‐sure and max ascending and descending rate of left ventricular pressure in myocardial infarction models were lower than sham operation models ,but heart rate and heart ventricle end diastolic pressure were higher (P <0 .05) .TTC staining showed that the color of infracted myocardium was white ,which was obviously different with normal myo‐cardium ,HE staining showed that infracted cardiac muscle cells wereswelling ,disorderly arranged ,with cavity or e‐ven break ,and inflammatory cell infiltration could be found within intercellular spaces of fractured cardiac muscle cells .Conclusion Preparation method ,constructed in this research ,could be efficient and easily performed to estab‐lish myocardial infarction models .【期刊名称】《检验医学与临床》【年(卷),期】2015(000)007【总页数】3页(P937-939)【关键词】心肌梗死;动物模型;大鼠;冠状动脉【作者】裴之俊;李伏燕;陈义加;王俊杰;李薇;吴瑞敏;杨怡【作者单位】湖北医药学院附属太和医院 PET 中心,湖北十堰 442000;湖北医药学院附属太和医院 PET 中心,湖北十堰 442000;湖北医药学院附属太和医院 PET 中心,湖北十堰 442000;湖北医药学院附属太和医院 PET 中心,湖北十堰442000;湖北医药学院附属太和医院 PET 中心,湖北十堰 442000;湖北医药学院附属太和医院 PET 中心,湖北十堰 442000;湖北医药学院附属太和医院 PET 中心,湖北十堰 442000【正文语种】中文随着人们生活习惯的改变及胆固醇摄入量的增加,缺血性心血管疾病发病率逐年增加。