药物分析-14维生素类药物的分析
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§14 维生素类药物的分析·脂溶性维生素：VitA、D2、D3、E、K1等·水溶性维生素：VitB族（B1、B2、B6、B12）、VitC、叶酸、烟酸、烟酰胺一、维生素A中国药典收载的维生素A是指人工合成的维生素A醋酸酯结晶加精制植物油制成的油溶液。
（一）结构与性质1.具有一个共轭多烯侧链的环己烯·具有UV吸收·存在多种立体异构化合物2.不稳定性（1）易发生脱氢、脱水、聚合反应·脱氢维生素A（A2），脱水维生素A（A3）效价低于维生素A ·鲸醇（维生素A醇的二聚体）无生物活性（2）共轭多烯侧链易被氧化维生素A应凉暗处保存，充氮气或加抗氧剂★3.与三氯化锑发生呈色反应4.溶解性不溶于水，乙醇中微溶；易溶于有机溶剂和植物油等（二）鉴别试验1.三氯化锑反应条件: 无水（SbCl3水解），无醇（和碳正离子作用使其电荷消失）。
2.UV法（BP2003）VitA有一个吸收峰，盐酸催化下加热30s生成脱水VitA，有三个吸收峰，且红移（向长波长位移）。
3.TLC法·BP 对照品法（供试品与不同VitA酯类），显色剂：三氯化锑·USP 规定斑点颜色和Rf值，显色剂：磷钼酸（氧化剂）12（三）含量测定 ★1.三点校正法 （1）原理①杂质的吸收在310~340nm 波长范围内呈一条直线，且随波长的增大吸收度减小；②物质对光的吸收具有加和性。
（2）波长的选择λ1为VitA 的λmax ；λ2、λ3为分别在λ1的两侧各选一点 ①等波长差法——VitA 醋酸酯nm 12340316328=∆λλλλ，、、)2(52.3340316328328A A A A --=（校正）②等吸收比法——VitA 醇33431032576A A A == 334310325325260.4555.2815.6A A A A --=（校正）（3）测定方法①直接测定法（等波长差法）——高纯度维生素A 醋酸酯 Ⅰ核对λmax/329~326max 328改用造化法与规定值比较求否是−→−−→−∈A A nm i λ Ⅱ计算吸收度比及比值差规定吸光度比值-328/A A iⅢ判断差值是否超过±0.02，确定用A 或A 校正%15%3)3%%,15(]%3,%3[32802.032832832802.0计算用改用皂化法＜或＞计算用计算用、计算无超过（校正）（校正）有超过A f f A f A f f A −−−−→−→-+→--∈→+-∈→−−−−→−±±)2(52.3340316328328A A A A --=（校正）%100328328328⨯-=A A A f （校正）Ⅳ求（样品）%11cm E lc AE cm ⨯=)%(%11（样品）·注意：（纯品）（样品）%11%11cm cm E E ≠，c 为混合样品的浓度。
Ⅴ求效价（IU/g ）3·效价（IU/g ）：每克供试品中所含维生素A 的国际单位数。
（换算因子）（样品）（样品）1900IU/g %11⨯=cm E （纯品）换算因子%11IU/gcm E =·1IU=0.344 µg 维生素A 醋酸酯，换算因子为1900 Ⅵ求标示量％%100)100(%100g /IU %100/IU %⨯⨯⨯=⨯⨯=⨯=标示量平均丸重换算因子标示量平均丸重标示量丸标示量ml g/c A★【示例】维生素A 软胶囊中VitA 的含量测定精密称取本品（规格10 000IU/丸）装量差异项下（平均装量0.07985g/丸）的内容物 0.1287g 至50ml 量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀；精密量取2.0ml ，置另一50 ml 量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀。
以环己烷为空白，测定最大吸收波长为328nm ，并在下列波长处测得吸收度如下：求本品中VitA 的含量？②皂化法（等吸收比法）——杂质含量较多的维生素A 醋酸酯、维生素A 醇 Ⅰ核对λmax/327~323max 325300法纯化后再测定取未皂化样品采用色谱求否是−→−−→−∈A A nm λ Ⅱ计算325300/A A Ⅲ判断比值是否超过0.73%3%3]%3,%3[73.0/325325325300法纯化后再测定取未皂化样品采用色谱计算用＜或＞计算用计算＞是（校正）否−→−→-+→+-∈→−→−A f f A f f A A 334310325325260.4555.2815.6A A A A --=（校正）4%100325325325⨯-=A A A f （校正）Ⅳ求（样品）%11cm EⅤ求效价（IU/g ）换算因子（样品）（样品）⨯=%11IU/g cm E ·1IU=0.344 µg 维生素A 醋酸酯，换算因子为1900 ·1IU=0.3 µg 维生素A 醇，换算因子为1830 Ⅵ求标示量％2.高效液相色谱法——正相色谱法HPLC 中系统适用性试验目的：考察分离度，加碘液目的：反式→顺式 3.三氯化锑比色法——标准曲线法二、维生素B 1（盐酸硫胺）（一）结构与性质1.溶解性易溶于水，水溶液呈酸性；干燥品在空气中迅速吸水。
2.存在共轭双键，具有UV 吸收盐酸溶液中λmax = 246nm★3.硫色素反应4.碱性 嘧啶环——伯氨 （1）可与酸成盐（2）与生物碱沉淀试剂反应生成沉淀 （3）含量测定——非水碱量法 5.氯化物特性 （二）鉴别试验 ★1.硫色素反应荧光复现荧光消失蓝色荧光硫色素正丁醇、环合、开环−−→−−−→−−−→−−−−−−→−−−→−−−→−−−−−→−-+++-OH H ]O [)CN (Fe K O H NaOH 1632B2.沉淀反应5↓−−−−→−↓−−−−→−↓−−−−→−↓−−−−−−−→−++++-白色扇形白色红色淡黄色苦酮酸、硅钨酸、、（碘化汞钾）、H H H KI I H HgI K 2423.硫元素反应4.氯化物反应水溶液显氯化物的鉴别反应 （三）含量测定1.非水溶液滴定法——原料药照电位滴定法，高氯酸滴定；VitB 1：HClO 4=1:2 ★2.UV 法——片剂、注射剂吸收系数法，稀盐酸溶液溶解稀释，421%11=cm E·片剂的含量测定%100100%11⨯⨯⨯⨯=标示量标示量％WW D E A cm ·注射液的含量测定%1001100%11⨯⨯⨯⨯=标示量标示量％V D E A cm 3.硫色素荧光法%100d S b A %21⨯⨯⨯⨯--=D W D W 样品对照标示量 ①灵敏度高，线性范围宽②代谢产物不干扰，氧化剂选用溴化氰可用于体液分析三、维生素C （己糖醛酸、L －抗坏血酸）（一）结构与性质1.溶解性 易溶于水2.旋光性 L(+)－抗坏血酸活性最强3.酸性 一元酸4.强还原性——烯二醇结构失去活性去氢维生素二酮基（弱活性）维生素烯二醇基（有活性）氧化氧化−−→−-−−→−-CL C L65.水解反应（与碱反应）酮酸盐单钠盐、、−−−−→−−−−−→−OH NaOH O H CO Na 22326.糖类的性质 结构与糖类相似，可发生糖类的显色反应7. UV 特征·稀盐酸溶液中：λmax = 243nm ·中性或碱性条件下：λmax = 265nm （二）鉴别试验 ★1.与氧化剂反应 （1）与AgNO 3反应（2）与2,6-二氯靛酚反应还原型：无色色中性、碱性介质中：蓝酸性介质中：玫瑰红色氧化型酚亚胺二氯靛酚−−→−⎩⎨⎧−−→−-VitC VitC 6,2 （3）与其他氧化剂反应 ·亚甲蓝或高锰酸钾→试剂褪色 ·碱性酒石酸铜→砖红色沉淀 ·磷钼酸→钼蓝 2.TLCChP2015维生素C 泡腾片鉴别·固定相：硅胶GF254薄层板 ·检视方法：紫外灯下检视暗斑 3.糖类的反应（USP ）蓝色糠醛戊糖℃吡咯、脱水水解脱羧三氯醋酸或盐酸−−−→−−−→−−−−→−−−−−−→−05VitC4.UV （BP ） （三）杂质检查1.溶液的澄清度与颜色检查——ChP 采用控制吸收度的方法（420nm ）2.铁、铜离子的检查——原子吸收分光光度法3.草酸的检查——形成草酸钙的沉淀 （四）含量测定 ★1.碘量法-+−→−++I I V itC H2去氢抗坏血酸·指示剂：淀粉指示液（1）酸性环境 减慢VitC 被O 2氧化速度 （2）新沸冷水 赶走水中O 2 （3）立即滴定 减少O 2的干扰 （4）附加剂干扰的排除·片剂——滑石粉——过滤，取续滤液·注射剂——抗氧剂（Na2SO3、NaHSO3、Na2S2O3、Na2S2O5）——测定前加丙酮★2.二氯靛酚滴定法USP酚亚胺二氯靛酚−−→−-VitC6,2·自身指示终点法：滴定至玫瑰红色，持续5秒不褪色（1）酸性环境HPO3-HAc，稳定VitC（2）快速滴定2min内，防止其他还原性物质干扰（3）也可用剩余比色法测定（4）缺点二氯靛酚不稳定，需经常标定贮存≤一周；干扰多，氧化力较强。
3.HPLC法——主要用于体内药物分析四、维生素D（甾醇的衍生物）（一）结构与性质·维生素D2——骨化醇3·维生素D3——胆骨化醇362126271.溶解性·维生素D2－在氯仿中极易溶解，在乙醇、丙酮或乙醚中易溶·维生素D3－在乙醇、丙酮、氯仿或乙醚中极易溶解·二者均在植物油中略溶，在水中不溶。
2.不稳定性因含有多个烯键，所以极不稳定，遇光或空气及其他氧化剂均发生氧化而7变质，使效价降低，毒性增强。
本品对酸也不稳定。
3.旋光性维生素D2具有6个手性碳原子。
维生素D3有5个手性碳原子。
5.显色反应本品的氯仿溶液，加醋酐与硫酸，初显黄色，渐变红色，迅即变为紫色，最后变为绿色。
本反应为甾醇类化合物的共有反应。
6.UV吸收特性无水乙醇溶解，在265nm有最大吸收。
（二）鉴别试验★1.显色反应（1）与醋酐—浓硫酸反应VitD2：黄色，红色，紫色，绿色。
VitD3：黄色，红色，紫色、蓝绿色，绿色。
（2）与三氯化锑反应显橙红色，逐渐变为粉红色。
（3）其它显色反应（专属性不强）三氯化铁→橙黄色二氯丙醇和乙酰氯试剂→绿色2.比旋度鉴别3.其他鉴别方法TLC、HPLC、IR等4.VitD2、VitD3区别反应取维生素D 10 mg，溶于96％乙醇10ml中。
取此液0.1ml，加乙醇1ml 和85％硫酸5ml。
·维生素D2显红色，在570nm波长处有最大吸收；·维生素D3显黄色，在495nm波长处有最大吸收。
