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慢病毒介导 Nrp1 过表达促进卵巢癌细胞增殖张燕;滕月;张键;李婧;李旭【摘要】Objective To study the function of neuropilin 1 (Nrp1) in ovarian cancer and the possibility of Nrp1 as therapeutic target. Methods Nrp 1 gene was cloned, and Nrp 1 overexpressing recombinant lentivirus was packed.After infection of SKOV3 ovarian cancer cells, puromycin selection generated the stable cell clones overexpressing Nrp 1.Cell number counting assay was performed to detect the cell proliferation. Results Nrp 1 overexpressing recombinant lentivirus was successfully packed. The stable SKOV3 cell clones overexpressing Nrp 1 was selected, and it had more powerful proliferation ability than control cells (t>t0.05(4),P<0.05).Conclusion Nrp1 promotes the proliferation of SKOV3 cells, and may stimulate the progression of ovarian cancer.%目的研究神经纤毛蛋白1 (neuropilin 1,Nrp1)在卵巢癌中的作用,探讨其作为治疗靶点的可行性. 方法克隆Nrp1基因,采用慢病毒包装体系包装过表达Nrp1的重组慢病毒,感染卵巢癌SKOV3细胞,嘌呤霉素筛选稳定高表达Nrp1的SKOV3细胞,通过细胞计数检测其增殖能力的改变. 结果成功包装了过表达Nrp1重组慢病毒,筛选得到了稳定高表达Nrp1的SKOV3细胞,其增殖能力显著高于对照细胞(t>t0.05(4) ,P<0.05). 结论Nrp1促进卵巢癌SKOV3细胞增殖,可能在卵巢癌发生发展过程中起促进作用.【期刊名称】《中国妇幼健康研究》【年(卷),期】2015(026)004【总页数】4页(P706-709)【关键词】卵巢癌;神经纤毛蛋白1;慢病毒;细胞增殖【作者】张燕;滕月;张键;李婧;李旭【作者单位】西安交通大学第一附属医院转化医学中心,陕西西安710061;西安交通大学第一附属医院转化医学中心,陕西西安710061;西安交通大学第一附属医院转化医学中心,陕西西安710061;西安交通大学第一附属医院转化医学中心,陕西西安710061;西安交通大学第一附属医院转化医学中心,陕西西安710061【正文语种】中文【中图分类】R349.82卵巢癌是女性生殖器官最常见的恶性肿瘤之一，发病率仅次于宫颈癌和宫体癌，居于第3位[1]。
临床实验设计方案范文一、研究背景及目的近年来，临床实验作为一种重要的研究手段，被广泛应用于医学领域中。
因此，为了准确、科学地进行临床实验，我们需要制定一个合理的实验设计方案。
本文旨在提供一个临床实验设计方案范文，供研究者们参考和使用。
二、实验题目该实验的题目为“某某药物对X疾病患者治疗效果的研究”。
三、研究对象本实验计划招募符合以下条件的患者：1. 年龄范围：18-65岁；2. 确诊为X疾病的患者；3. 意愿参与该实验，并签署知情同意书。
四、实验设计本实验采用随机对照试验设计，将符合纳入标准的患者随机分为两组：1. 实验组（药物组）：接受某某药物治疗；2. 对照组（安慰剂组）：接受安慰剂治疗。
五、实验流程本实验的整体流程如下：1. 首先，研究者将对拟纳入的患者进行详细的解释说明，并征得患者的知情同意；2. 接着，将符合纳入标准的患者进行随机分组，并告知其所属组别；3. 实验组患者将按照规定剂量和频次接受某某药物治疗；4. 对照组患者将按照规定剂量和频次接受安慰剂治疗；5. 针对两组患者，记录相关指标的变化情况；6. 直至实验结束，对两组患者的数据进行统计分析。
六、数据收集和分析本实验将收集以下数据指标：1. 患者基本信息：包括年龄、性别、病史等；2. 主要观察指标：例如疾病临床症状缓解程度、相关生化指标变化等。
数据采集后，将进行统计学分析，如描述性统计、方差分析、T检验等，以评估药物治疗的效果。
七、实验伦理本实验将严格遵守伦理准则，确保患者的权益受到保护。
在实验过程中，患者的知情同意书将被认真解释，并确保其自愿参与。
同时，研究者将尊重患者的隐私，保密其个人信息。
八、预期结果通过对两组患者的比较，我们希望能够得出以下结论：某某药物在治疗X疾病方面的疗效是否优于安慰剂。
九、风险与安全措施虽然某某药物在前期的研究中已经显示出良好的安全性，但仍然需要警惕可能存在的不良反应。
因此，在实验过程中，研究者将实时监测患者的安全情况，并采取必要的应对措施。
糖尿病大鼠胰腺组织SUR1蛋白表达及药物干预周晓磊;陈玉涛;薛承锐【期刊名称】《中国老年保健医学》【年(卷),期】2009(7)2【摘要】目的观察糖尿病大鼠胰腺KATP通道的SURl亚基蛋白表达变化,以及那格列奈、丹参素对其干预的结果.方法 wistar大鼠高糖高脂饲料加静脉注射链脲佐菌素法建立糖尿病模型后,西药组给予那格列奈(37.5mg/kg体重),中药组给予丹参素(0.224mg/kg体重)灌胃,4周后摘取胰腺组织,Westem blot法检测SURl蛋白表达改变.结果模型组SUR1蛋白表达显著低于对照组(P＜0.05),那格列奈对SUR1蛋白表达表现了一定的上调作用,丹参素对其表达几乎没有影响.结论胰腺SUR1蛋白表达的降低可能是糖尿病发病的分子机制之一,对其表达的上调是那格列奈的作用机制.【总页数】3页(P55-57)【作者】周晓磊;陈玉涛;薛承锐【作者单位】天津医科大学总医院,300052;天津医科大学总医院,300052;天津医科大学总医院,300052【正文语种】中文【中图分类】R5【相关文献】1.电针对糖尿病大鼠胰腺组织CHOP、Bax、Bcl-2蛋白表达及胰腺超微结构的影响 [J], 邵俊;查必祥;袁爱红;杨骏;张金静;薛秋菊;翟静静;2.实验性糖尿病大鼠胰腺组织Kir6.2表达及药物干预 [J], 周晓磊;薛承锐3.电针对糖尿病大鼠胰腺组织CHOP、Bax、Bcl-2蛋白表达及胰腺超微结构的影响 [J], 邵俊;查必祥;袁爱红;杨骏;张金静;薛秋菊;翟静静4.SD大鼠2型糖尿病动物模型的建立及胰腺组织SUR1 mRNA的表达 [J], 陈嘉;张永斌;桑传兰;陈苑;高欣;董浩然;曹崇波5.胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白Ⅲ在糖尿病大鼠血管病变中的表达及中药的干预 [J], 丁志明;武海阔;王军因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
I期临床试验的设计与操作一、设计1.人体试验对象的选择：I期临床试验应选择符合研究目的和药物特性的特定受试者群体，例如健康志愿者或特定病种的患者。
同时，需要确保参与者的知情同意，并建立详细的纳入和排除标准。
2.药物剂量与给药方式的确定：根据动物实验数据和早期临床试验结果，确定合理的药物剂量范围和给药方式。
常用的剂量选择方法包括多剂组顺序递增、单剂组数剂量递增和定剂量方法。
3.试验设计与样本容量的确定：常见的试验设计包括单剂组试验和多剂组试验。
单剂组试验适用于初步评估药物的安全性和耐受性，而多剂组试验则用于评估不同剂量下药物的药效和副作用。
样本容量的确定应基于统计学原理，以保证试验结果的可靠性和有效性。
4.试验期限和随访时间的安排：试验期限的选择应考虑药物的代谢动力学特性和动物实验数据等因素，一般为数天到数周不等。
随访时间的安排则取决于药物的生物学半衰期和可能发生的不良反应，通常至少应为药物最长半衰期的两倍。
二、操作1.药物的制备和质量控制：药物的制备应符合药物管理法规的要求，包括药物的质量控制、标准溶液的制备和新药形式的选择等。
2.受试者的招募和筛选：根据纳入和排除标准，通过广告、公告等渠道招募符合条件的受试者，并进行初步的问卷调查和体格检查等筛选工作。
3.试验方案的制定和提交：试验方案应按照国家和地区的伦理审查和药物监管要求制定，包括试验目的、设计、样本容量、试验流程和药物给药方法等内容，并提交给相关机构进行审批。
4.数据的采集和分析：试验过程中需要进行严格的数据采集和记录，包括受试者的基本信息、药物治疗结果和不良事件等。
此外，还需要进行统计学分析，并撰写试验报告和结论。
5.不良事件的监测和处理：对于试验过程中的不良事件，需要进行及时的监测和处理，包括记录、报告和紧急医疗处理等。
同时，还需建立完善的质量管理和安全监测制度，确保试验过程的安全性。
总之，I期临床试验的设计和操作是保证试验顺利进行和获得可靠结果的基础。
rescue实验方法随着科技的发展，实验方法在各个领域的研究中起着至关重要的作用。
本文将介绍一种名为RESCUE的实验方法，该方法在生物学、医学等领域有广泛的应用。
本文旨在通过详细阐述实验步骤和结果，为研究者提供一个清晰、实用的实验指南。
一、实验背景及目的RESCUE实验方法旨在研究某种特定基因在生物体中的功能。
实验通过对基因进行敲除或过表达，观察生物体在相应条件下的表型变化，从而揭示基因在生物体生理和病理过程中的作用。
二、实验方法概述RESCUE实验方法主要包括以下几个步骤：1.设计并合成特定的基因片段，包括敲除片段和过表达片段。
2.将基因片段导入实验生物体，如细胞或动物模型。
3.观察生物体在敲除或过表达基因后的表型变化。
4.通过一系列实验验证，如分子生物学实验、细胞生物学实验等，分析基因功能。
三、实验步骤详解1.设计基因片段：根据目标基因序列，设计相应的敲除和过表达片段。
通常情况下，敲除片段包含基因的上游和下游片段，而过表达片段包含目的基因本身。
2.构建表达载体：将设计好的基因片段连接到表达载体上，如质粒或病毒载体。
3.导入实验生物体：将构建好的表达载体导入细胞或动物模型中，使其在生物体内表达。
4.观察生物体表型变化：通过显微镜观察、生物化学实验等手段，检测生物体在敲除或过表达基因后的表型变化。
5.验证基因功能：通过一系列实验验证，如Western Blot、实时荧光定量PCR等，分析基因在生物体内的表达水平和功能。
四、实验结果及分析实验结果显示，在敲除基因后，生物体表型出现特定变化，如生长发育异常、生理功能受损等。
而在过表达基因后，生物体表型得到改善或增强，如生长发育加快、生理功能增强等。
通过对实验结果的分析，可以明确基因在生物体中的功能及作用机制。
五、实验启示与应用RESCUE实验方法为研究基因功能提供了一种有效手段。
通过对基因进行敲除或过表达，可以揭示其在生物体生理和病理过程中的作用，为相关领域的研究提供重要线索。
稳定过表达人SIRT1基因的HEK293细胞系的建立林蓉;张凯帆;王维蓉;林琴琴;杨莉娜;任峰;张建丰【期刊名称】《实用医学杂志》【年(卷),期】2013(29)1【摘要】Objective To construct a plasmid expressing human SIRT1 and to establish HEK293 cell line with stable over-expressing human SIRT1. Methods Full length of human SIRT1 gene cDNA was ligated into an expressing vector pcDNA3.1 ( + ). After confirmed by restriction analysis and sequencing, the recombinant plasmid was transfected into HEK293 cells mediated with liposome. G418-resistant clones of HEK293 cells were then detected by real-time PCR and Western blot for the expression level of SIRT1. Results The accuracy of constructed and selected plasmids was confirmed by restriction enzymatic analyses and DNA sequencing. As compared with untransfected HEK293 cells, the levels of SIRT1 mRNA and SIRT1 protein of transfected HEK293 cells were significantly increased (P<0.01). Conclusions The pcDNA3.1 ( + )-SIRTl plasmid is successfully constructed. HEK293 cell line with stable over-expressing SIRT1 is established, which provides a useful tool for further study on the effect of SIRT1 on cardiovascular diseases.%目的:构建人沉默信息调节因子2同源蛋白1(SIRT1)基因的真核表达载体,建立稳定过表达人SIRT1的HEK293细胞系.方法:将含有SIRT1的克隆载体pCRⅡ-TOPO-SIRT1双酶切后,连接至真核表达载体pcDNA3.1(+)中,连接产物经酶切鉴定后进行测序.构建的重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)-SIRT1转染HEK293细胞.G418进行筛选.Real-time PCR和Western Blot分别从mRNA和蛋白水平检测SIRTI的表达.结果:酶切分析和测序结果证实,SIRT1基因成功插入真核表达质粒pcDNA3.1(+)中.Real-time PCR和Western Blot结果显示稳定转染pc:DNA3.1(+)-SIRT1的HEK293细胞SIRT1的表达水平明显高于未转染细胞(P<0.01).结论:成功构建了真核表达载体pcDNA3.1(+)-SIRT1,并建立了稳定过表达SIRT1基因的HEK293细胞系.为进-步研究SIRT1基因在心血管疾病中的作用及其机制奠定了基础.【总页数】3页(P18-20)【作者】林蓉;张凯帆;王维蓉;林琴琴;杨莉娜;任峰;张建丰【作者单位】710061,西安交通大学医学院药理系;710061,西安交通大学医学院药理系;710061,西安交通大学医学院药理系;710061,西安交通大学医学院药理系;710061,西安交通大学医学院药理系;710061,西安交通大学医学院药理系;710061,西安交通大学医学院药理系【正文语种】中文【相关文献】1.稳定表达hHCN2基因 HEK293细胞系的建立 [J], 赵欣;杨向军;白霞;李红霞;程绪杰;蒋文平2.稳定表达人BACE1启动子及荧光素酶报告基因HEK293细胞株的建立 [J], 邓常青;朱炳林;龙艳;罗伟;陈国俊3.人MCHR1真核表达载体构建及稳定转染HEK293细胞系的建立 [J], 袁成福4.稳定表达人水通道蛋白4的胚肾细胞系HEK293/AQP4的建立及应用 [J], 刘俊秀;孙巧松;丰岩清;曾缨;赖蓉;陈曦;黄帆5.人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体稳定过表达基因工程修饰人脐带间充质干细胞亚细胞系的建立 [J], 林榕;左伟敏;祝玲;王瑾;路君;黄梁浒;王庆华;谭建明;王水良因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
一种卵巢目标基因过表达模型构建的方法哇塞，今天要给大家讲讲一种卵巢目标基因过表达模型构建的方法呢！
首先呢，这个方法的步骤其实并不复杂啦。
先选取合适的实验动物，比如小鼠之类的。
然后通过特定的技术手段，将目标基因导入到卵巢细胞中。
这可不是随便搞搞就行的哦，这里面可有不少要注意的地方呢！比如说，在导入基因的时候，要确保操作的精准度，不能有偏差呀，不然可就前功尽弃啦！而且还要注意对实验动物的护理，让它们能在舒适的环境中进行实验呢。
这就好像盖房子，每一块砖都要放对位置，才能盖出坚固漂亮的房子呀！
接下来谈谈安全性和稳定性吧。
在整个过程中，安全性那可是至关重要的呀！要确保实验对动物的伤害最小化，不能让它们太遭罪呀。
而且稳定性也不能忽视，得保证基因能够稳定地表达，不能一会儿有一会儿没的，那可不行呀！这就像走钢丝，得稳稳当当的，不能摇摇晃晃的。
再说说这个方法的应用场景和优势。
它可以用于研究卵巢相关疾病的发生机制呀，还能为药物研发提供重要的依据呢。
它的优势可多啦，比如能够更直接地研究基因的功能和作用，这可比间接研究厉害多了吧！就像直接看到了问题的本质，而不是绕着弯子去猜呀！
给大家举个实际案例吧。
之前有研究人员利用这种方法构建了一个卵巢早衰的模型，通过对这个模型的研究，深入了解了卵巢早衰的发生过程，为治疗提供了新的思路和方向呢。
这效果，是不是很厉害呀！
所以呀，这种卵巢目标基因过表达模型构建的方法真的是超级有用的呀！它为我们打开了一扇了解卵巢奥秘的大门，让我们能够更好地探索和解决相关的问题呢！。
SUR1过表达实验设计方案一实验目的：使SUR1基因在植物体内超表达二实验方法：三实验步骤①RT-PCR将RNA反转录成CDNARNA提取（-70℃保存）1.组织剪碎加入1ml Trizol，冰上匀浆（边匀浆边暂停）2.转入一新EP管中（1.5ml），室温保存5min3.加氯仿0.2ml，振荡混合（手摇剧烈），室温放置5min4.10000 rpm 4℃离心15min5.转移上层水相（吸70%）到一新EP管中，加异丙醇0.5ml,振荡混合，室温保存10min6.12000rpm 4℃离心15min7.倒掉上清，加1ml 75%无水乙醇（4℃保存），振荡混合，10000rpm 4℃离心5min8.倒掉上清，室温或37℃放置20min(EP管倒置在滤纸上)使RNA沉淀干燥9.加20ul DEPC水至EP管中10.在60℃孵育3-5min(或手握3-5min),使RNA充分溶解逆转录以Fernentas试剂盒为例，反应体系20ul1.RNA短暂离心2.将11ul的DEPC水和RNA（1ug）放入EP管内，置于冰上，使RNA终浓度为0.5ug/ul,再加入Oligo(dt) 1ul,轻轻混合均匀，短时间离心×6 ；DEPC水=11-RNA)(RNA=1/总RNA浓度=1/ OD2603.将反应液置于65℃ 5min 冰上1min,短时间离心4.按顺序加入：5×buffer 4ul200ul核糖核苷酸酶抑制剂 1ul10mm dNTP MIX 2ulM-Mulu逆转录酶 1ul轻轻混合均匀，短时间离心5.将混合物置于42℃，60min6.70℃加热5min,中止上述反应，置于冰上②据序列设计引物对CDNA进行PCR扩增在TAIR上查出SUR1的序列1 ATGAGCGAAG AACAACCACA CGCCAATCTA GCGGTTCCCG CGTTTAAAAC51 TGAGAAAGAG CCCATAACGC AAACACGAAA TGGTCAAAGT AGCGTTTGGC101 GTTTCGGTGG AAGTGATAAG GCAGCGAAAG CATCCACCGT AACGCTTAGA151 GGTGTCATCT ACATGCTCTT CGACAACTGC GGCAAAGACG TCAATAAGAC201 CATTTTACCC CTCGGCCACG GTGACCCTTC CGTCTACCCT TGCTTCCGTA251 CCTGTATCGA AGCTGAAGAC GCCGTCGTCG ACGTCCTTCG CTCCGGCAAA301 GGCAATTCTT ACGGTCCCGG AGCTGGGATT CTCCCCGCAA GACGAGCCGT351 TGCTGATTAT ATGAACCGAG ATCTTCCGCA CAAGTTAACG CCTGAAGATA401 TTTTTCTGAC CGCTGGATGC AACCAAGGGA TAGAGATCGT GTTCGAATCG451 TTGGCTCGAC CAAACGCAAA CATCTTGCTC CCACGTCCTG GCTTCCCTCA501 CTACGACGCT CGTGCTGCTT ACAGTGGTCT CGAGGTTCGC AAGTTTGATC551 TTCTTCCCGA GAAAGAATGG GAGATTGATC TTGAAGGTAT CGAAGCCATT601 GCAGACGAGA ACACTGTGGC TATGGTTGTA ATTAACCCCA ACAATCCCTG651 TGGAAATGTC TACTCTCACG ACCATCTCAA AAAGGTTGCA GAGACGGCTA701 GGAAGCTCGG GATAATGGTG ATCTCAGACG AAGTATATGA CCGAACTATA751 TTCGGAGACA ATCCATTTGT TTCAATGGGG AAGTTTGCTT CGATAGTCCC801 TGTATTGACA CTAGCAGGCA TATCTAAGGG ATGGGTTGTT CCTGGATGGA851 AAATTGGCTG GATCGCCTTG AATGATCCCG AGGGCGTTTT CGAGACCACC901 AAGGTGTTAC AATCCATCAA ACAGAATCTT GACGTAACTC CTGACCCTGC951 CACAATAATT CAGGCTGCAC TTCCAGCGAT CCTGGAGAAA GCGGACAAAA1001 ACTTCTTTGC AAAGAAGAAC AAGATACTCA AACATAATGT TGATTTGGTG1051 TGTGATAGGC TCAAGGACAT CCCCTGTGTC GTCTGTCCCA AGAAACCTGA1101 GTCTTGCACT TACTTATTGA CAAAGTTGGA GCTGTCATTG ATGGATAATA1151 TCAAGGACGA TATAGATTTT TGCGTAAAAC TGGCCAGAGA GGAGAATCTC1201 GTGTTTCTAC CAGGGGATGC TCTGGGTTTG AAGAACTGGA TGAGGATAAC1251 CATCGGAGTC GAAGCTCATA TGCTTGAGGA TGCACTTGAG AGACTGAAGG1301 GTTTCTGTAC ACGTCATGCC AAGAAGACAG AGACAGAAAC TGAGTCACTT1351 CAAGCTTTGA AACTGAGTGA TAATAATCTC GAAATGTAA根据引物设计原则，利用软件Primer premier 5.0设计上下游引物进行PCR扩增得到目的基因SUR1③载体的构建图1：过表达载体User载体的连接User酶：1ul载体：1ulPCR产物：10ul将混匀的产物于37℃放置25min,再25℃放置25min，完成后加入感受态大肠杆菌中。
大肠杆菌感受态转化LB培养基（1L）：蛋白胨10g酵母提取物（Yest）5gNaCl5g固体LB：0.75g琼脂/50ml高压灭菌14min感受态转化：1.-70℃取感受态，冰上融化在超净台中加入载体2.冰上静止30min，42℃水浴热激90s，冰置90s,42℃水浴30s3.在超净台中加入800ul液体LB，37℃，100r/m1h，活化菌4.准备涂菌用的平板，融化固体LB，不烫手时加入选择抗生素，迅速摇匀并倒平板，冷却至凝固5.将活化后的菌4000r/m离心沉淀，其大部分上清，剩约100ul重悬，用移液枪吹起菌体，转移到平板上6.烧涂布棒，前端放在平板盖内侧冷却后，将菌液均匀涂布在平板上，封上封口膜7.培养箱37℃倒置培养12~16h8.菌落PCR鉴定（50mlLB中加入50ul卡那霉素）④测序测序与已知序列一致进行下一步⑤转化农杆菌重组表达载体导人农杆菌。
用电转化法将重组表达载体导入农杆菌感受态细胞中，电转化参数为：电压2 500 kV／em；电容25 F；电阻500 Q。
电击3～5 ms后，取出电击杯，迅速加入800 L的LB液体培养基，混匀并转移至1．5 mL 的EP管中，在28℃震荡培养3 h；取100／,L菌液涂布于含Gen(50／,g／mL)和Kan(50／,g／mL)的LB平板中28℃培养24 h，即可长出阳性克隆。
阳性克隆的菌落PCR与酶切鉴定。
随机挑取单菌落，在装有1 mL的LB和1．5 mL 的抗生素的离心管中28℃培养12 h左右。
取5O L培养物，煮沸5 rain，5 000 r／rain离心2 min，取1～2／,L上清进行PCR扩增后电泳检测。
选取菌落PCR 验证后的菌液抽提质粒，并用BstE 1I和Bgl 1I双酶切后，电泳检测。
⑥农杆菌浸染法侵染拟南芥前期准备：取150ml 含相应抗生素的液体LB培养基，接入2-3ml准备好的农杆菌菌液，大摇过夜至培养基由红色转为黄色。
将培养后的150ul农杆菌菌液导入灭过菌的50ml离心管中，4℃，3000rmp离心15min弃上清，加入50ml 1／2 MS，将菌泥搅起。
用于侵染的1／2 MS配方：（每150 ml菌液加50 ml 1／2 MS液）MS大量 5 ml蔗糖 10 g水 95 ml表面活性剂 20 ul常用1／2 MS配方（1 L）：10X大量元素 50 ml100X微量元素 5 ml100X铁盐 5 ml蔗糖（1%） 10 g琼脂粉 8 g拟南芥生长土壤：腐殖土：蛭石=1:1混匀，装双层袋子，高压121℃灭菌40分钟注意：灭完菌后要加适量水将土和湿，不能太湿，然后土装入钵里压实，将钵放入装有水的底盘中，一个小时左右钵中土壤浸湿后便能种苗。
种子消毒：30%H2O2+85%乙醇 1:4混合取250微升混合液加入种子种用枪头吹打40S，放在滤纸上晾干，然后铺在1／2 MS平板上。
4℃冰箱中放置春花1-5天，一般新种子春花时间长点。
16\8 光周期，待真叶长出时，用镊子将苗从平板移植到土壤中。
后续操作1 种植健康的拟南芥直到开花。
在种子种下后浇水盖膜，盖膜的目的是为了保持水分。
移栽拟南芥后还需要盖3到4天的膜。
2 初次开花时将花蕾剪掉以促进更多花枝的增生，修剪后越4至5天可使用，这样优化后的植物含有很多未成熟的花序并没有很多受精的角果，以保证大多数植物被成功的转化。
3准备携带目的基因在双元载体（双元载体有两套筛选引子，菌体中用一种，植物中用一种）里的农杆菌菌株。
养殖在一个大的液体LB培养基中，培养基带有抗生素，以为筛选二元质粒。
4 摇床摇农杆菌，用5%的蔗糖溶液（蔗糖溶液中加入表明活性剂，达到浓度0.05%）混悬到OD600 = 0.8（左右）把100ml的5﹪的蔗糖悬浮的菌液倒入大皿内，然后把拟南芥的花序浸入进去侵染2分钟，侵染的过程要转动钵子，（侵染之前一晚上最好给钵子里浇些水，以免第二天侵染后钵子里的土容易掉出来），侵染后用滤纸擦干。
5 侵染后的拟南芥用黑色塑料袋或者薄膜覆盖，暗培养24小时后继续光照。
侵染后悉心照料，保持水分充足。
一周后可再侵染一次，这是由于拟南芥的盛花期较长，一般要侵染2—3次。
6 浇水松土正常养殖，种子成熟后停止浇水。
7 角果自然开裂后收获干燥的种子，独立分装备用。
筛选Basta筛选转基因拟南芥收获后的干燥种子经表面消毒，放于4℃冰箱，春化4天后，播种于培养土中，待长出2片真叶后，喷洒1：1 000的Basta除草剂进行筛选。
设计特性引物，采用RT_PcR方法对具有Basta抗性的拟南芥转基因植株进行鉴定。
⑥分子检测收获种子进行自交，在T2或T3代进行分子检测采用半定量PCR的方法6.1总RNA的提取：同第一步6.2基因组DNA的去除RNA样品中痕量的基因组DNA的去除方法参照DNase I(RNase Free)试剂说明书进行。
