·论著· 参附注射液对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠 海马神经元
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参附注射液对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠大脑皮质分子伴侣介导的自噬激活的干预作用张芳芳;王军;刘芳;刘文强;杨倩倩【期刊名称】《儿科药学杂志》【年(卷),期】2014(20)6【摘要】目的:探讨新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后大脑皮质分子伴侣介导的自噬(CMA)活性的变化及参附注射液的干预作用。
方法:参照Rice法制备HIBD模型。
将新生7日龄SD大鼠随机分为假手术组(S组)、生理盐水对照组(C组)、参附注射液治疗组(SF组),每组按照观察时间依次分为6 h、12 h、1 d、3 d、5 d、7 d六个亚组,每个亚组8只大鼠。
采用免疫组化法和Western Blot法检测大鼠大脑皮质溶酶体相关膜蛋白-2A(LAMP-2A)的表达情况。
结果:免疫组化法和Western Blot法显示LAMP-2A在S组各时间点表达水平差异无统计学意义(P>0.05);C组和SF组LAMP-2A的表达水平在各时间点较S组明显升高(P<0.05),且在3 d达到高峰,随后其表达水平下降;SF组LAMP-2A的表达水平在6 h、12 h、1 d较C组高(P<0.05),但其3 d时峰值表达水平较C组低(P<0.05)。
结论:HIBD时存在CMA现象,参附注射液在早期能促进LAMP-2A大量表达,后期则抑制其过度表达,从而对HIBD后的新生大鼠可能具有保护作用。
【总页数】4页(P1-4)【关键词】新生大鼠;缺氧缺血性脑损伤;CMA;溶酶体相关膜蛋白-2A;参附注射液【作者】张芳芳;王军;刘芳;刘文强;杨倩倩【作者单位】徐州医学院附属医院【正文语种】中文【中图分类】R245【相关文献】1.神经节苷脂联合参附注射液对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用 [J], 张海娇;阴怀清;栗红;武师润;阴崇娟2.参附注射液对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤干预作用的实验研究 [J], 王军;杨丽娟;周长美;朱红梅;张绍美3.褪黑素在缺氧缺血性脑损伤新生大鼠线粒体自噬中的作用 [J], 战美芹;顾燕;李梅;李根;徐利晓;冯星4.褪黑素在缺氧缺血性脑损伤新生大鼠线粒体自噬中的作用 [J], 战美芹;顾燕;李梅;李根;徐利晓;冯星;5.电针调控TXNIP/NLRP3通路介导的焦亡途径对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用研究 [J], 邓寒冰;李春琴;张粲;金祖敏因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
・实验研究论著・参附注射液对大鼠短暂性局灶性脑缺血损伤的保护作用朱正华,熊利泽,董海龙,胡文能,侯立朝(第四军医大学西京医院麻醉科,陕西 西安 710032) 摘要:目的:探讨参附注射液对脑缺血性损伤的保护作用及量效关系。
方法:40只雄性SD 大鼠,随机分为4组,对照组(n =10),即缺血再灌注组,在缺血前30分钟经腹腔注射生理盐水20ml /kg ;各保护组(Cen 5,Cen 10,Cen 20,各组n =10)在缺血前30分钟经腹腔注射参附注射液(剂量分别为5、10、20ml/kg )及生理盐水(剂量分别为15、10、0ml /kg )。
采用右侧颈内动脉丝线栓塞致大脑中动脉阻闭120分钟,术后观察1、3、6、12、16和24小时神经行为学变化并评分,24小时时处死动物,取大脑行T T C 染色以测量脑梗死容积。
结果:24小时神经功能评分,各保护组为Cen 5〔(0.6±0.5)分,P <0.05〕,Cen 10〔(0.8±0.9)分,P <0.05〕,Cen 20〔(0.7±0.4)分,P <0.05〕,均明显低于对照组〔(1.8±1.0)分〕;24小时梗死容积各保护组为Cen 5〔(58.7±21.4)mm 3,P <0.05〕,Cen 10〔(61.5±28.7)mm 3,P <0.05〕,Cen 20〔(31.2±20.6)mm 3,P <0.01〕,明显小于对照组〔(179.5±45.2)mm 3〕。
各保护组间24小时神经功能评分和梗死容积无显著差别。
结论:参附注射液对大鼠短暂性局灶性脑缺血损伤呈非剂量依赖性保护作用。
关键词:参附注射液;脑缺血,局灶性;剂量效应中图分类号:R 285.5;R 364.1 文献标识码:A 文章编号:10089691(2001)02007903Protective ef f ect of Shenfu inj ection (参附注射液)on transient f ocal cerebral ischemic injury in rats ZH U Zheng hua ,X I ON G L i z e ,DON G H ai long ,et al .X ij ing H osp ital ,Four th M ilitary M edical U nivers ity ,X i ′an Shanx i 710032Abstract :Objective :T o inv est ig ate the pr o tect ive effects of Shenfu injectio n(参附注射液)on tra nsient fo -cal cerebr al ischemic injury in r at a nd do se r espo nse r elat ion.Methods :F or ty ma le SD rats (body w eig ht 350400g )wer e r ando mly div ided into 4g ro ups.I n contr ol g ro up (ischemia r eperfusio n gr o up,n =10),30minutes befor e ischemia the nor mal saline 20ml/kg w as inject ed into per it oneal cavity other w ise in all pr otective gr oups,including Cen 5(n =10),Cen 10(n =10),and Cen 20(n =10)gr oup,30minutes befo re ischemia the Shenfu inject ion (dosage 5,10and 20ml/kg respectiv ely )and no rma l sa line (dosag e 15,10and 0ml/kg r espec-tiv ely )w ere injected into per ito neal cavity.By means o f lig ating t he right caro tid a rter y to o bstr uct the cer ebral middle ar ter y fo r 120minutes,at 1,3,6,12,16and 24hour s after obstruction the changes in neur olog ical be-ha vio r wer e o bser ved and scor ed.A t 24hour s the r ats w er e killed and the vo lume of cerebr al infarction was measur ed using T T C stain.Results :T he neuro lo gic deficit sco r es (N DS)in gr oup Cen 5,g ro up Cen 10and gr oup Cen 20at 24hour s after r eperfusio n w er e (0.6±0.5)scor es ,(0.8±0.9)sco res and (0.7±0.4)sco res respectiv ely and sig nificantly lo wer t ha n that in co nt ro l gr o up (1.8±1.0)sco res (all P <0.05).T he infar ctvo lume in contr ol gr oup 〔(179.5±45.2)mm 3〕was sig nificantly higher than those in gr oup Cen 5〔(58.7±21.4)mm 3,P <0.05〕,Cen 10〔(61.5±28.7)mm 3,P <0.05〕and Cen20〔(31.2±20.6)mm 3,P <0.01〕.A mong all the Shenfu pr etreat ed g r oups bo th N DS and infarct volume had not differ ences .Conclusions :T he Shenfu inject ion possesses dosag e independent pr ot ect ive effects o n tr ansient focal cerebr al ischemic injur y.Key words :Shenfu injection ;t ransient fo ca l cerebr al ischemia ;dose responseCLC number :R285.5;R364.1 Document code :A Artical ID :10089691(2001)02007903 基金项目:国家自然科学基金资助项目(No .39670699)作者简介:朱正华(1971),男(汉族),湖北省人,医学硕士,助教,主治医师。
参附注射液预处理对大鼠急性脑缺血再灌注损伤的保护作用李爱华;李倩;白桂春;朱世纯;李宝丽;周春美【期刊名称】《中成药》【年(卷),期】2015(037)008【摘要】目的观察参附注射液预处理大鼠发生脑缺血再灌注时其神经功能、梗死脑组织体积、形态及显微结构等方面的变化,探讨参附注射液预处理对脑缺血再灌注损伤的保护作用.方法 120只健康雄性SD大鼠随机分为5组,即假手术组,缺血再灌注组(模型组),参附注射液预处理高、中、低剂量组(腹腔注射给药7d,每天1次,第7天腹腔注射2h后制作模型;给药剂量分别为20、10、5 mg/kg).采用线栓法制作大脑中动脉缺血2h再灌注模型,Longa5分制评分评价大鼠行为学改变,TTC 染色法检测脑梗死体积,再灌注24 h电镜观察缺血边缘区脑组织超微结构的变化.结果与假手术组对比,模型组大鼠脑组织梗死体积增大,差异有显著性(均P<0.05);与模型组对比,参附注射液预处理各组大鼠脑梗死体积均呈现不同程度的减少,差异具有统计学意义(P<0.05,或P<0.01);电镜下,参附注射液预处理组大鼠脑组织超微结构损伤较模型组明显减轻,以高剂量组效果最为明显.结论参附注射液预处理对大鼠急性脑缺血再灌注损伤具有保护作用.【总页数】3页(P1818-1820)【作者】李爱华;李倩;白桂春;朱世纯;李宝丽;周春美【作者单位】唐山职业技术学院,河北唐山063004;华北理工大学医学实验研究中心,河北唐山063000;唐山职业技术学院,河北唐山063004;丰润区人民医院,河北唐山 063000;唐山市协和医院,河北唐山063004;唐山职业技术学院,河北唐山063004【正文语种】中文【中图分类】R285.5【相关文献】1.参附注射液预处理对糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用 [J], 唐丕春;陈洪;张鹏;邓秀英;罗文丰2.p53蛋白在电针预处理改善急性脑缺血再灌注损伤大鼠神经功能中的作用 [J], 李雪静;唐强;叶涛;朱路文;吴佳佳;尹侠;秦萍;赵晓倩3.参附注射液预处理对缺血再灌注损伤保护作用的影响 [J], 张锐;张静4.参附注射液预处理对犬心肌缺血-再灌注损伤的保护作用 [J], 王海燕;韩冲芳;刘保江5.参附注射液预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用 [J], 刘齐宁;杨芳欣;丁慧因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
参附注射液对小鼠大脑缺血再灌注损伤保护作用研究赵岩【期刊名称】《中医药临床杂志》【年(卷),期】2015(27)5【摘要】目的 :观察参附注射液对小鼠大脑缺血再灌注损伤保护作用。
方法 :在造成小鼠高脂血症的基础上,进行颈总动脉缺血再灌注造成脑细胞损伤,建立动物模型。
术后分别使用参附注射液5mg/kg.d、10mg/kg.d进行干预治疗。
10天后,跳台试验测试小鼠的学习和记忆能力。
然后将小鼠断头取脑,制备脑匀浆。
以比色法测定谷胱甘肽-S-转移酶(GST)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性及丙二醛(MDA)含量。
结果 :参附注射液能提高小鼠大脑缺血再灌注损伤的神经功能水平,升高大脑SOD、CAT、GSH-PX活性和降低MDA水平。
结论 :参附注射液对小鼠大脑缺血再灌注损伤具有保护作用,机理与降低氧化应激的作用有关,此作用有助于大脑缺血再灌注损伤的治疗。
【总页数】3页(P721-723)【关键词】参附注射液;大脑缺血再灌注;氧化应激【作者】赵岩【作者单位】南阳医学高等专科学校【正文语种】中文【中图分类】R2【相关文献】1.参附注射液对心肌缺血再灌注损伤保护作用的研究进展 [J], 薛建军;张凌云;谭萍2.参附注射液预处理对心肌缺血再灌注损伤模型大鼠的保护作用研究 [J], 谭冰;熊毅3.丙泊酚对小鼠大脑缺血再灌注损伤保护作用研究 [J], 来炳祺;盖毅文;成少利;刘秋歌;张晶;赵磊4.参附注射液对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用研究 [J], 李长喜;吴莉峰;曾贵荣;石镇港;袁湘中;徐永兴;张妙红5.参附注射液对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用及其机制研究 [J], 杨勇;任长虹;吴晓丹因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
参附注射液对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠血脑屏障通透性及神经功能的影响谢健;闵苏【期刊名称】《重庆医科大学学报》【年(卷),期】2009(34)11【摘要】目的:观察参附注射液(Shenfu injection,SFI)对大鼠脑局灶性缺血再灌注(Ischemic-reperfusion,IR)损伤后血脑屏障(Blood brain barrier,BBB)通透性和神经功能的影响,评价参附注射液对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤有无保护作用,为参附注射液的临床应用提供参考。
方法:清洁级的SD雄性大鼠80只,随机分为A、B、C、D4个组:A组为假手术加生理盐水处理组,B组为假手术加参附注射液处理组,C组为造模加生理盐水处理组,D组为造模加参附注射液处理组。
A、C组于麻醉后5 min经尾静脉注射生理盐水10 ml/kg,B、D组在相同时点给予相同剂量的SFI。
随后对C、D两组采用Zea Longa线栓法制备大鼠右侧大脑中动脉(Middle cerebral artery,MCA)缺血2 h再灌注24 h模型。
A、B两组均不作造模处理,其余处理步骤与C、D两组相同。
记录各组麻醉后苏醒时间,缺血2 h及再灌注24 h两时间点观察神经功能缺损情况,于再灌注24 h结束时在每组随机选择5只取右侧额顶叶大脑皮质部分电镜下观察血脑屏障超微结构的情况,其余15只大鼠静脉注射伊文思蓝(Evan’s blue,EB),对比两组伊文思蓝通过血脑屏障进入脑组织的量。
结果:各组间比较,体重差异无统计学意义。
麻醉后苏醒时间A、B两组短于C、D两组(P<0.05),A、B两组之间无差异,C组长于D组(P<0.05)。
缺血2 h神经功能缺损评分(Longa score,Longa评分):A、B两组低于C、D两组(P<0.01),A、B两组之间以及C、D两组之间差异无统计学意义。
再灌注24 h后Longa评分:A、B两组低于C、D两组(P<0.01),A、B两组之间差异无统计学意义,C组高于D组(P<0.01)。
参附注射液对脑复苏大鼠海马区NMDA受体表达的影响万丽春;刘德红【期刊名称】《南昌大学学报(医学版)》【年(卷),期】2008(048)004【摘要】目的探讨参附注射液对脑复苏大鼠海马区NMDA受体(NMDAR)表达的影响.方法采用四血管阻塞的方法,复制出大鼠脑复苏模型.采用原位杂交法分别检测假手术组(A组)、全脑缺血再灌注组(B组)、参附注射液治疗组(C组)海马CA1区NMDAR亚单位2A mRNA及2B mRNA表达的变化.结果与A组比较,B组海马CA1区NMDAR亚单位2A mRNA及2B mRNA表达于2 h即明显升高(P<0.01),24 h达到高峰,并持续到48 h;与B组比较,C组NMDAR亚单位2A mRNA 及2B mRNA的表达下降(P<0.01).结论在脑复苏救治过程中,参附注射液可减少NMDAR亚单位2A mRNA及2B mRNA的表达,对脑起保护作用.【总页数】5页(P31-33,38,封4)【作者】万丽春;刘德红【作者单位】深圳市第二人民医院急诊ICU,广东,深圳,518029;深圳市第二人民医院急诊ICU,广东,深圳,518029【正文语种】中文【中图分类】R-332【相关文献】1.趋化因子 MCP-1对大鼠海马区NMDA受体介导的兴奋性突触后电流的影响[J], 李珊;胡喆;周燕;熊焕贵2.灵芝孢子粉对癫痫大鼠皮质和海马区NMDAR1免疫反应影响的研究 [J], 王欢;王淑秋3.手术创伤对成年大鼠和老年大鼠海马区CD200及其受体表达的影响 [J], 曹学照;唐冰;谭文斐;马虹4.NGF基因修饰的BMSCs对VaD大鼠海马区细胞凋亡及NMDAR1表达的影响[J], 李涛;程焱5.头穴透刺对AD模型大鼠记忆能力及海马区NMDA受体的影响 [J], 蒋凌飞;吕燕;陈炜因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
参附注射液对大鼠短暂性局灶性脑缺血损伤的保护作用朱正华;熊利泽;董海龙;胡文能;侯立朝【期刊名称】《中国中西医结合急救杂志》【年(卷),期】2001(008)002【摘要】目的:探讨参附注射液对脑缺血性损伤的保护作用及量效关系。
方法:40只雄性SD大鼠,随机分为4组,对照组(n=10),即缺血再灌注组,在缺血前30分钟经腹腔注射生理盐水20 ml/kg;各保护组(Cen5,Cen10,Cen20,各组n=10)在缺血前30分钟经腹腔注射参附注射液(剂量分别为5、10、20ml/kg)及生理盐水(剂量分别为15、10、0 ml/kg)。
采用右侧颈内动脉丝线栓塞致大脑中动脉阻闭120分钟,术后观察1、3、6、12、16和24小时神经行为学变化并评分,24小时时处死动物,取大脑行TTC染色以测量脑梗死容积。
结果:24小时神经功能评分,各保护组为Cen5〔(0.6±0.5 )分,P<0.05〕,Cen10〔(0.8±0.9)分,P<0.05〕,Cen20〔(0. 7±0.4)分,P<0.05〕,均明显低于对照组〔(1.8±1.0)分〕;24小时梗死容积各保护组为Cen5〔(58.7±21.4)mm3,P<0.05〕,Cen10 〔(61.5±28.7) mm3,P<0.05〕,Cen20〔(31.2±20.6) mm3, P<0.01〕,明显小于对照组〔(179.5±45.2) mm3〕。
各保护组间24小时神经功能评分和梗死容积无显著差别。
结论:参附注射液对大鼠短暂性局灶性脑缺血损伤呈非剂量依赖性保护作用。
【总页数】3页(P79-81)【作者】朱正华;熊利泽;董海龙;胡文能;侯立朝【作者单位】第四军医大学西京医院麻醉科,;第四军医大学西京医院麻醉科,;第四军医大学西京医院麻醉科,;第四军医大学西京医院麻醉科,;第四军医大学西京医院麻醉科,【正文语种】中文【中图分类】R285.5;R364.1【相关文献】1.异氟醚预处理联合参附注射液对大鼠短暂性局灶性脑缺血损伤协同保护作用的研究 [J], 郑玉;熊利泽;吴明春;张西京;王强2.正常大鼠、高血压大鼠局灶性脑缺血损伤及764-3的保护作用 [J], 卫国;陈飞松3.R(+)-普拉克索对大鼠短暂性局灶性脑缺血损伤的神经保护作用 [J], 尹洁;闫峰;罗玉敏;李森;刘克建;赵咏梅4.β-七叶皂甙钠对大鼠短暂性局灶性脑缺血损伤的保护作用 [J], 黄怡;熊利泽;杨静;计根林;聂煌5.参附注射液对大鼠短暂性局灶性脑缺血损伤的治疗时间窗 [J], 郑玉;熊利泽;朱正华;王强;陈绍洋因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
・论著・收稿日期:2007-09-29。
基金项目:江苏省社会发展科技项目资助(BS2003008)作者简介:王 军,男,主任医师,副教授,硕士学位,硕士生导师,研究方向为新生儿疾病。
参附注射液对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠海马神经元凋亡影响王 军,杨丽娟,何艳芳,陈群娥,张绍美(徐州医学院附属医院新生儿科,江苏徐州221002) 摘要:目的 研究参附注射液对缺氧缺血性脑损伤(H I B D )新生大鼠海马神经元凋亡的影响。
方法 实验分成两部分:1.流式细胞术检测缺氧缺血(H I )前2h 、H I 后2、12、24h,3、7、14和28d 各时间点新生大鼠海马CA1区神经元凋亡率;2.免疫组织化学测H I 前2h 、H I 后2、12、24h,3、7、14和28d 各时间点新生大鼠海马CA1区神经元Bcl 22、Bax 蛋白表达。
建立新生大鼠H I B D 模型。
每组实验随机分为4组:假手术组(S ),9g/L 盐水对照组(C ),参附预处理组(P ),参附治疗组(SF )。
结果 SF 和P 组海马神经元凋亡情况明显低于C 组(P <0.01,<0.05),且Bcl 22表达显著增多(P <0.05,<0.01),而Bax 表达明显下调(P <0105,<0.01)。
结论 参附注射液可明显上调新生大鼠H I B D 后海马神经元Bcl 22蛋白表达,下调Bax 蛋白表达,减少H I B D 新生大鼠海马神经元凋亡发生。
实用儿科临床杂志,2007,22(21):1658-1659关键词:参附注射液;缺氧缺血性脑病;Bcl 22;Bax;凋亡;海马中图分类号:R722.1 文献标志码:A 文章编号:1003-515X (2007)21-1658-02Effect of Shenfu I n jecti on on Neuron Apoptosis Caused by Hypox i c -Ische m i c Bra i n Damage i n Neona t a l Ra ts ′H i ppocam pusWAN G Jun,YANG L i -juan,HE Yan -fang,CHEN Q un -e,ZHANG Shao -m ei(Depart m ent of Neonat ol ogy,the Affiliated Hos p ital of Xuzhou Medical College,Xuzhou 221002,China )Abstract:O bjecti ve T o study the effect of shenfu injecti on on the neur on apopt osis in hi ppoca mpal CA1regi on of ne wborn with hy poxic -ische m ic brain da mage (H I B D ).M ethods The experi m ent included 2parts .One was t o measure the apop t osis rate by the fl ow cyt ometry,and the other was t o investigate the exp ressi on of Bcl -2and Bax of neur ons in left hi ppoca mpal CA1regi on .Models of postnatal 7-day Sp rague -Da wley (S D )rats with H I B D were established,and were equally divided int o 4gr oup s:sham operati on (gr oup S ),contr ol gr oup (gr oup C ),shen 2fu injecti on p retreat m ent (gr oup P ),and shenfu injecti on treat m ent (gr oup SF ).The neur on apop t osis rate in hi ppoca mpal CA1regi on in every gr oup was measured at 2h before and 2,12,24h,3,7,14and 28d after hypoxic ische m ic (H I )insult .The exp ressi ons of Bcl -2and Bax were perf or med by i m munohis oche m istry .Results The apop t osis of neur on in hi ppoca mpal CA1regi on in gr oup P and gr oup SF after H I insult was significantly less than that of gr oup C (P <0.01,<0.05).The exp ressi on of Bcl -2wasmarkedly higher than that in gr oup C (P <0.05,<0.01)and the exp ressi on of Bax was markedly down -regulated (P <0.05,<0.01).Conclusi on Shenfu injecti on effectively p revents apop t osis of hi ppoca mpus neur ons fr om H I insult by up -regulati on of the anti -apop t otic gene Bcl -2and down -regulati on of the p r o -apop t otic gene Bax .J Appl C li n Ped i a tr,2007,22(21):1658-1659Key words:shenfu injecti on;hypoxic -ische m ic encephal opathy;Bcl -2;Bax;apop t osis;hi ppoca mpa 研究表明,缺氧缺血性脑损伤(H I B D )后迟发性神经元死亡发生与细胞凋亡密切相关。
阻断神经元凋亡是目前研究的主要方向之一。
参附注射液主要成分为人参皂甙Rb1和乌头类生物碱,在儿科临床已有应用[1]。
研究证明其有多种药学作用,具有多靶效应。
实验表明人参皂甙有神经保护作用,在细胞凋亡模型上,观察到单体人参皂甙Rb1对缺血再灌注损伤诱发细胞凋亡有抑制作用[2],但其对H I B D 新生大鼠是否有保护作用,尚未见报道。
本文旨在探讨参附注射液对新生大鼠H I B D 后海马神经元凋亡及Bcl 22、Bax 蛋白表达影响。
材料与方法一、材料 7日龄新生S D 大鼠(徐州医学院实验动物中心提供);雌雄不限;体质量12~16g 。
80mL /L 氧气和920mL /L 氮气混合气(上海特种气体厂);碘化丙啶(P I )、核糖核酸酶(RNase )、兔抗Bcl 22抗体、兔抗Bax 抗体、P V 试剂盒和联苯二胺显色剂(北京中杉公司);参附注射液(雅安三九药业有限公司,生产批号:991210);常压缺氧舱(上海市儿科研究所);LE I CA Qwin 图像处理与分析系统(德国)。
二、方法11模型制作及分组:建立新生大鼠H I B D 模型。
实验分成2大部分:(1)将模型随机分为4组:假手术组(S ),9g/L 盐水对照组(C ),参附预处理组(P ),参附治疗组(SF )。
研究缺氧缺血(H I )前2h 、H I 后2、12、24h,3、7、14和28d 共8个亚组,每组6只,各组海马神经元凋亡率及新生大鼠海马CA1区神经元Bcl 22、Bax 表达。
H I B D 模型制作:参照文献[3]。
乙醚吸入麻醉后,结扎鼠左侧颈总动脉,术毕2h 后置容器中持续吸入80mL /L 氧气、920mL /L 氮气混合气体,流速2.0L /m in,以钠石灰吸收二氧化碳,持续2h,S 组仅切开颈正中皮肤和分离左侧颈正中动脉,不结扎,不缺氧,P 组在H I 前连续4d 腹腔注射参附注射液10mL /kg,SF 组分别于H I 后即刻腹腔注射(i p )参附注射液10mL /kg,1次/d,H I 7d内,按观察时间连续用药直至7d,C 组用法同SF 组。
H I 后与母鼠同窝,母乳喂养,室温22.0~25.9℃,避免强光和噪音刺激,12h 光照与黑暗交替。
2.观察指标和测定方法:(1)流式细胞术检测各组各时间点新生大鼠海马神经元凋亡率:动物当时断头取脑,将新鲜H I 侧海马组织在含有磷酸盐缓冲液(P BS )中轻柔剪碎,剪碎后组织放离心管中用P BS 稀释为4mL,反复吹打20次,沉淀5m in,取上清,经200目尼龙网过滤2次,制成单细胞悬液,以700mL /L 乙醇4℃固定12h,上机前再用P BS 稀释,再次离心去上清,加入P I 染液,4℃避光放置30m in,24h 内应用流式细胞仪检测。
(2)免疫组织化学方法检测各组各时间点新生大鼠海马CA1区锥体神经元Bcl 22、Bax 蛋白表达:全部脑标本立即用40g/L 中性甲醛固定5d,取材、常规脱水、透明、浸蜡、包埋后,选取海马、齿状回互包平面行连续切片,片厚4μm 。
Bcl 22和Bax 免疫组织化学染色(P V 法)。
三、统计学处理 数据以 x ±s 表示,采用SPSS 11.5软件进行处理,多组间比较采用单因素方差分析法(O ne -W ayANOVE ),P <0.05为差异有统计学意义。
结 果一、SF 对H I 新生大鼠海马神经元凋亡率影响 见表1,图1。
表1 H I 后各组各时间点大鼠左侧海马神经元凋亡率比较( x ±s ,n =6)组别H I 后2h 12h 24h72h 7d S 组0.48±0.150.50±0.160.60±0.180.67±0.170.48±0.14C 组 1.52±0.353 4.88±1.17318.13±3.84315.10±3.8732.28±0.363P 组 1.0±0.253△ 3.68±0.793○11.94±2.273○7.72±1.743○ 1.26±0.273△SF 组 1.34±0.283 4.21±1.38315.96±4.2338.67±2.063○ 1.39±0.413△F 17.8323.1338.6237.5631.7P<0.05<0.05<0.05<0.05<0.05 与S 组比较3P a <0.01;与C 组比较△P a <0.01,○P a <0.05图1 流式细胞术测得各组各时间点新生大鼠海马神经细胞凋亡率二、各组新生大鼠海马CA1区Bcl 22、Bax 蛋白表达 1.Bcl 22分布及灰度 见表2。