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-细菌染色-CTC快速染色试剂盒

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请在使用前请仔细阅读说明书

-细菌染色- CTC快速染色试剂盒

————激光共聚焦显微镜、流式细胞仪均可

概述：

-细菌染色-系列试剂盒提供了多种用于细菌的荧光染料。除了通常的染色实验，通过其他原理还

可以实现微生物细胞活性的检测。CTC已经被很多科研人员用于微生物细胞呼吸活性的检测。-细菌

染色- CTC快速染色试剂盒提供了快速并且高灵敏度的CTC染色方法。

试剂内含： 流式细胞仪用

- CTC(5-cyano-2,3-ditolyl tetrazolium chloride) 10mg 3tubes

- Enhancing reagent A 100μL(DMSO溶液) 1tube

荧光显微镜用

- CTC(5-cyano-2,3-ditolyl tetrazolium chloride) 10mg 3tubes

- Enhancing reagent B 500μL(水溶液) 1tube

贮藏条件：4℃保存。

所需设备和材料：

 流式细胞仪（488nm 激光，红光发射滤光片）

 荧光显微镜（蓝光激发滤光片，红光发射滤光片）

 培养箱  20 µl，1000 µl单枪

操作说明书：

染色流程：

1. 一个CTC tube中加入750µl蒸馏水，缓慢摇匀（终浓度50mM）a）

2. 用PBS(-)或生理盐水配制细胞悬液，控制细胞量在106个/ mL(流式细胞仪)或108-108个/ mL(荧光

显微镜)b）

3. 向1mL细胞悬液中加入试剂缓慢混匀才c），加入试剂及加入量如下：

4. 37℃培养30min

5. 用流式细胞仪或荧光显微镜检测或观察。

a) 该溶液可以在-20℃保存2周

b) 由于样品中残留的培养基也会经过无差异的染色反应，所以应去除培养基

c) CTC染色不足的时，可以增加CTC溶液的加入量或者增加培养时间。但是原则上每个样品溶液

中CTC溶液的加入量一般小于等于100µl

计数染色：

1. 制备适当浓度微生物细胞的悬液，在96孔板内每孔接种190µl该悬液

2. 每孔加入10µl的染色溶液

3. 将培养板在培养箱中培养（37℃或合适的温度）

4. 用酶标仪测定在450nm处的吸光度

经本试剂盒测试过的微生物种类：

真菌：Candida utilis, Saccharomyces cerevisiae, Zygos accharomyces rouxii, Candida albicans, Candida

krusei, Candida parapsilosis 革兰氏阳性菌：Bacillus cereus, Bacillus subtilis, Corynebacterium glutamicum, Enterococcus faecalis,

Lactobacillus casei, Listeria monocytogenes, Micrococcus luteus, Staphylococcus

aureus, Staphylococcus epidermidis 革兰氏阴性菌：Acetobacter sp., Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Pseudomonas

aeruginosa, Salmonella enteritidis, Salmonella typhimurium, Serratia marcescens, Vibrio

parahaemolyticus, Yersinia enterocolitica

药物敏感性测试： 革兰氏阴性菌：

1. 根据McFarland比浊法制备107CFU/ml的微生物细胞悬液。

（例：用无菌生理盐水稀释细胞悬液，调整550nm处的吸光度在0.125。再用无菌生理盐水10倍稀释，此

时的细胞浓度约为107CFU/ml）

2. 用Mueller-Hinton肉汤稀释制备不同浓度的抗菌药物溶液

（例：64, 32, 16, 8, 4, 2, 1, 0.5, 0.25, 0.12, 0.06 µg/ml）

3. 每孔加入Mueller-Hinton肉汤稀释过的抗菌药物溶液180µl

4. 每中接种10µl的107CFU/ml的细胞悬液（最终细胞密度为104CFU/ml）

5. 在适当温度的培养箱内培养6个小时

6. 每孔加入10µl的染色溶液后再培养2个小时

7. 用酶标仪测定在450nm处的吸光度 革兰氏阳性菌、真菌、副溶血弧菌：

用DMSO或无菌水8倍稀释电子载体溶液，将WST溶液和稀释后的电子载体溶液按照9:1的比例配制成染色溶液。

其他步骤与革兰氏阴性菌的操作步骤一样。

SA : Staphylococcus aureus subsp. aureus

( NBRC12732 ),

MRSA : Methicillin-resistant Staphylococcus

aureus subsp. aureus ( FJCM8702 )

注意事项：

1. WST®-8有可能会和还原物质反应造成吸光度的增加，如果检测时的背景值过高（O.D. >0.5）请将还原物

质从样品中分离。

2. 操作时要尽量避免气泡的产生，否则会造成实验误差。

3. 实验的灵敏度（O.D.

值）与微生物细胞的种类和代谢活性有关。建议先做预实验，找出最佳的细胞数量和染色时间。

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SDH COX双染试剂盒说明书

SDH COX双染试剂盒说明书

北京索莱宝科技有限公司

第1页，共1页SDH/COX双染试剂盒说明书货号：G2005保存：-20℃避光，6个月产品内容：名称规格Storage试剂A：COX染色液5ml-20℃避光试剂B：SDH染色液5ml-20℃避光产品说明：SDH（琥珀酸脱氢酶）/COX（细胞色素氧化酶）双染试剂盒可用于显示COX阴性纤维。COX阴性部位可能是SDH阳性。COX13个亚单位中的3个由线粒体DNA编码，而SDH则由核DNA编码。因此，SDH不受线粒体DNA突变的影响。线粒体肌病破碎红纤维一般COX阴性。操作步骤：1、冷冻切片用电吹风风干载玻片上的水雾，将切片浸入COX孵育液，于37℃恒温水浴锅内孵育40min。此时应将切片放在显微镜下观察并控制染色时间。若孵育时间过长，会有沉淀产生，若孵育时间太短，结果显示比较弱，分型不明显，均影响结果的观察。2、蒸馏水洗去COX孵育液。3、将切片浸入SDH孵育液，于37℃恒温水浴锅内孵育1-2h。显微镜下观察并控制染色时间。蒸馏水稍洗。4、10％甲醛钙固定10min。5、流水冲洗3min。6、甘油明胶封固。染色结果：COX阳性部位（线粒体COX阳性部位）棕红色SDH阳性部位（线粒体COX阴性部位）蓝色

Calcein PI细胞活性与细胞毒性检测试剂盒说明书

Calcein PI细胞活性与细胞毒性检测试剂盒说明书

Calcein/PI细胞活性与细胞毒性检测试剂盒 产品编号 产品名称 包装 C2015S Calcein/PI细胞活性与细胞毒性检测试剂盒 100次 C2015M Calcein/PI细胞活性与细胞毒性检测试剂盒 500次 C2015L Calcein/PI细胞活性与细胞毒性检测试剂盒 2500次

产品简介：  碧云天生产的Calcein/PI细胞活性与细胞毒性检测试剂盒(Calcein/PI Cell Viability/Cytotoxicity Assay Kit，或Calcein/PI Live/Dead Viability/Cytotoxicity Assay Kit)是一种非常便捷的基于Calcein-AM (钙黄绿素)和PI (碘化丙啶)双荧光染色法检测动物细胞死活的试剂盒。  本试剂盒使用便捷，荧光染色和检测仅需约30分钟。本试剂盒染色30分钟后，就可进行后续的荧光显微镜拍照、流式分析或者荧光酶标仪定量等荧光检测和分析。  本试剂盒的原理是两种探针可分别检测细胞内酯酶活性和细胞膜完整性，从而反映细胞活性与细胞毒性。其中Calcein AM染色活细胞，呈现绿色荧光；而碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)染色死细胞，呈现红色荧光。本试剂盒用于检测动物细胞活性与细胞毒性效果参考图1。 图1. Calcein/PI细胞活性与细胞毒性检测试剂盒用于HT-29(人结肠癌细胞)细胞活性与细胞毒性检测的效果图。HT-29细胞(C6410)在明场视野下仔细观察可以看到有明显的坏死细胞(图A)；绿色荧光标记的即为Calcein染色的活细胞(图B)，红色荧光标记的即为PI染色的死细胞(图C)；Calcein和

PI

双染叠加

(merge)后可以非常清晰地观察到活细胞和死细胞的荧光染色差别(图D)。在本实验中，HT-29细胞经TSZ处理4小时。TSZ为TNFα、SM-164和Z-VAD-FMK组成的细胞程序性坏死诱导试剂(C1058)。实测数据会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。  Calcein AM (Calcein Acetoxymethyl Ester，中文名称为钙黄绿素AM

Gimenez染色液

Gimenez染色液

Beijing Leagene Biotechnology Co., Ltd.

版本：A3 修改日期：2023.12.20

Gimenez染色液

产品简介：

美国病理学家霍华德·泰勒·立克次（Howard Taylor Ricketts）(1871-1910年)在1909年发现洛基山斑疹伤寒的独特病原体并被它夺取生命，故名立克次氏体（Rickettsia），立克次氏体属于革兰氏阴性菌，是介于细菌与病毒之间的接近于细菌的一类专性寄生于真核细胞内的G-原核生物，一般呈球状或杆状。立克次氏体主要寄生于节肢动物，常引起Q热、洛基山斑疹热或伤寒，可通过革兰氏、Giemsa、Gimenez、Macchiavello等染色技术显示。

Gimenez染色液也称作吉曼尼兹染色液，可把立克次体、埃立克体、沃尔巴克体、病毒包涵体、幽门螺旋杆菌等染色，菌体呈红色/紫红色、深蓝色等，背景呈绿色或青绿色，不同细菌染色效果不同。该试剂仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

产品组成：

自备材料：

1、固定液：10%中性福尔马林、4%多聚甲醛等、系列乙醇、蒸馏水

操作步骤(仅供参考)：

1、 根据实验具体要求操作。

染色结果：

立克次体、埃立克体、某些病毒包涵体、螺杆菌 红色-紫红色-深紫色

沃尔巴克体 深蓝色

背景 绿色-蓝色-蓝绿色

注意事项：

1、 切片脱蜡应尽量干净。

2、 孔雀绿染色容易出现过染等染色不均的现象，请注意染色时间和水洗时间。 编号

名称 DM0155

2×50ml Storage

试剂(A):

Gimenez染色液 A1: 品红染色液 16ml RT

A2: PB Buffer 40ml RT

细菌16SrDNA的克隆

细菌16SrDNA的克隆

细菌16SrDNA的克隆

一． 总体安排:

分三个班，每班30人，每个班分10组，每组三人。 试验于第十三周开始。

二． 试验所需各种试剂及毫材

1．PCR引物

引物合成 5 OD

引物rdn1： 5′-TGCGGTTGGATCACCTCCT-3′

引物rdna2：5′-TCCCCACCTTCCTCCAGTT-3′

正向引物16Sf：5‘-AGA GTT TGA TCC TGG CTC AG-3’；

反向引物16Sr：5‘ACG GCT ACC TTG TTA CGA CT-3’，

2 实验仪器与毫材

冷冻离心机，高压灭菌锅，ZF紫外透射分析仪，凝胶电泳成像仪，电泳仪，水平板电泳槽及梳子，PCR仪各一台；移液枪每班室套；枪头和各种eppendorf管若干。

3 试剂与药品

SDS 500g

CaCl 500g

Tris 500g

EDTA 500g

CTAB 500g

蛋白酶 K 1g

Tris 饱和酚 500ml

氯仿 500ml

异戊醇 500ml

T4 DNA连接酶 50ul

T载体 50次

EcoRI 500U 2 EcoR V 500U

HindIII 500U

BamH I 500U

Xgal 2g

IPTG 5g

琼脂糖 10g

PCR 产物纯化试剂盒 50

三． 实验步骤与实验方法

1． 配置试剂

基因组DNA抽提

TE缓冲液

10%（w/v）十二烷基硫酸钠（SDS）

20mg/ml蛋白酶K

5mol/L NaCl溶液

CTAB/ NaCl溶液

24：1氯仿/异戊醇

25：24：1酚/氯仿/异戊醇

异丙醇

70%乙醇

重组质粒DNA提取

氨苄青霉素储存液（无菌水配制5mg/ml，分装后-20C保存），

溶液Ｉ，配100ml：高压灭菌20min。

50mmol ／L葡萄糖，