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基金项目：上海市卫生和计划生育委员会科研基金资助项目（２０１８４０２７３）作者单位：２０１１１２ 上海交通大学医学院附属仁济医院南院通讯作者：李晓淼，电子信箱：ｄｒｌｉｘｍ＠１２６．ｃｏｍ瘦素通过ＪＡＫ／ＳＴＡＴ途径对ＩＬ－１β诱导的软骨细胞增殖和炎性反应的影响李 浩 李晓淼 沈 奕 王伟力摘 要 目的 探讨瘦素通过ＪＡＫ／ＳＴＡＴ途径对ＩＬ－１β诱导的软骨细胞增殖和炎性反应的影响及机制研究。
方法 提取ＳＤ大鼠的软骨细胞并进行鉴定；ＣＣＫ－８筛选瘦素最佳浓度；集落形成实验检测细胞增殖能力；ＥＬＩＳＡ检测炎性细胞因子（ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＴＮＦ－α）的表达；Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法检测ＪＡＫ／ＳＴＡＴ途径相关蛋白的表达。
结果 瘦素的最佳作用浓度为１０、２０、４０ｎｇ／ｍｌ；瘦素呈剂量依赖性使ＩＬ－１β刺激诱导的软骨细胞的增殖能力增强（Ｐ＜０．０５），且抑制了由ＩＬ－１β刺激诱导的软骨细胞中炎性细胞因子的上调（Ｐ均＜０．０５）。
此外，瘦素抑制ＩＬ－１β刺激诱导ＪＡＫ／ＳＴＡＴ途径的激活，ＪＡＫ和ＳＴＡＴ３蛋白的磷酸化水平降低（Ｐ均＜０．０５）。
结论 瘦素通过抑制ＪＡＫ／ＳＴＡＴ途径的激活，从而提高软骨细胞的增殖能力，抑制炎性反应，从而对骨关节炎具有潜在的治疗作用。
关键词 瘦素 骨关节炎 增殖 炎症 ＪＡＫ／ＳＴＡＴ途径中图分类号 Ｒ６８１ 文献标识码 Ａ ＤＯＩ １０．１１９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３ ５４８Ｘ．２０２０．１０．０１５ＥｆｆｅｃｔｓｏｆＬｅｐｔｉｎｏｎＩＬ－１β－ｉｎｄｕｃｅｄＨｏｎｄｒｏｃｙｔｅＰｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄＩｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙＲｅｓｐｏｎｓｅｔｈｒｏｕｇｈｔｈｅＪＡＫ／ＳＴＡＴＰａｔｈｗａｙ． ＬｉＨａｏ，ＬｉＸｉａｏｍｉａｏ，ＳｈｅｎＹｉ，ｅｔａｌ．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＯｒｔｈｏｐａｅｄｉｃｓ，ＮａｎｙｕａｎＨｏｓｐｉｔａｌ，ＲｅｎｊｉＨｏｓｐｉｔａｌ，ＳｃｈｏｏｌｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＳｈａｎｇｈａｉＪｉａｏｔｏｎｇＵｎｉｖｅｒ ｓｉｔｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ２０１１１２，ＣｈｉｎａＡｂｓｔｒａｃｔ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ ＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓａｎｄｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆｌｅｐｔｉｎｏｎＩＬ－１β－ｉｎｄｕｃｅｄｃｈｏｎｄｒｏｃｙｔｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄｉｎ ｆｌａｍｍａｔｏｒｙｒｅｓｐｏｎｓｅｔｈｒｏｕｇｈｔｈｅＪＡＫ／ＳＴＡＴｐａｔｈｗａｙ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ＥｘｔｒａｃｔｉｏｎａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｃｈｏｎｄｒｏｃｙｔｅｓｆｒｏｍＳＤｒａｔｓ．ＣＣＫ－８ｗａｓｕｓｅｄｔｏｓｅｌｅｃｔｔｈｅｏｐｔｉｍａｌｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆｌｅｐｔｉｎ．Ｃｏｌｏｎｙｆｏｒｍａｔｉｏｎｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓｗａｓｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｒｍｉｎｅｃｅｌｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｃａｐａｃｉｔｙ．ＥＬＩＳＡｗａｓｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｃｙｔｏｋｉｎｅｓ（ＩＬ－６，ＩＬ－８，ＴＮＦ－α）．ＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｗａｓｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＪＡＫ／ＳＴＡＴｐａｔｈｗａｙｒｅｌａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅｏｐｔｉｍａｌｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆｌｅｐｔｉｎｗａｓ１０，２０，４０ｎｇ／ｍｌ．Ｌｅｐｔｉｎｅｎｈａｎｃｅｄｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａ ｔｉｏｎｏｆｃｈｏｎｄｒｏｃｙｔｅｓｉｎｄｕｃｅｄｂｙＩＬ－１βｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎｉｎａｄｏｓｅ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｍａｎｎｅｒ（Ｐ＜０．０５），ａｎｄｉｎｈｉｂｉｔｅｄｔｈｅｕｐ－ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｉｎｆｌａｍ ｍａｔｏｒｙｃｙｔｏｋｉｎｅｓｉｎｃｈｏｎｄｒｏｃｙｔｅｓｉｎｄｕｃｅｄｂｙＩＬ－１βｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ（ａｌｌＰ＜０．０５）．Ｉｎａｄｄｉｔｉｏｎ，ｌｅｐｔｉｎｉｎｈｉｂｉｔｅｄｔｈｅａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆｔｈｅＪＡＫ／ＳＴＡＴｐａｔｈｗａｙｉｎｄｕｃｅｄｂｙＩＬ－１βｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ，ａｎｄｒｅｄｕｃｅｄｔｈｅｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎｌｅｖｅｌｓｏｆＪＡＫａｎｄＳＴＡＴ３ｐｒｏｔｅｉｎｓ（ｂｏｔｈＰ＜０．０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ ＢｙｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇｔｈｅａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆｔｈｅＪＡＫ／ＳＴＡＴｐａｔｈｗａｙ，ｌｅｐｔｉｎｃａｎｉｎｃｒｅａｓｅｔｈｅｖａｌｕｅ－ａｄｄｅｄｃａｐａｃｉｔｙｏｆｃｈｏｎｄｒｏｃｙｔｅｓ，ｉｎ ｈｉｂｉｔｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｒｅｓｐｏｎｓｅｏｆｃｈｏｎｄｒｏｃｙｔｅｓ，ａｎｄｔｈｕｓｈａｓｐｏｔｅｎｔｉａｌｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｅｆｆｅｃｔｓｏｎｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ Ｌｅｐｔｉｎ；Ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ；Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ；Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ；ＪＡＫ／ＳＴＡＴｐａｔｈｗａｙ 骨关节炎（ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ，ＯＡ）是一种常见的慢性关节炎［１］。
JAK-STAT信号转导通路在类风湿性关节炎中的研究进展张晓园;王永辉;李艳彦;柴智;王悦尧;周然【期刊名称】《山西中医学院学报》【年(卷),期】2016(017)002【总页数】3页(P63-65)【关键词】类风湿性关节炎;JAK-STAT;信号转导通路;研究进展【作者】张晓园;王永辉;李艳彦;柴智;王悦尧;周然【作者单位】成都中医药大学基础医学院,四川成都610075;山西省中医院,山西太原030012;山西中医学院,山西太原030024;山西中医学院,山西太原030024;山西中医学院,山西太原030024;山西省中医院,山西太原030012;山西中医学院,山西太原030024【正文语种】中文【中图分类】R593.22类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是以多关节受累为主要表现的自身免疫性疾病，其病理特征主要表现为关节滑膜增生、血管翳生成、炎性细胞浸润、关节软骨破坏，最终关节功能障碍，甚至畸形。
虽然RA的病因及发病机制目前还未完全明确，但其病理过程主要由细胞因子参与和介导。
这些细胞因子在RA滑膜病变中起着核心作用，其主要通过RA滑膜自分泌或旁分泌的形式大量产生，它们相互影响，相互促进，构成了一个较为复杂的网络，最终引起免疫失衡、炎症反应、滑膜细胞增殖［1］。
滑膜细胞的信号转导通路成为近些年来研究的热点。
研究发现：大多数细胞因子与其受体结合后，通过一条共同的信号转导途径非受体酪氨酸蛋白激酶JAK-STAT通路调控基因的表达。
研究RA滑膜细胞中的这些信号转导通路的功能将有助于从一个新的角度探索滑膜细胞的病变发生机制，从而为治疗RA提供新的作用靶点。
许多细胞因子（cytokine）如：白介素（IL）、生长激素（GH）、集落刺激因子（CSF）、干扰素（IFN）等，它们的受体为单次跨膜蛋白，这种蛋白不具有酶的活性，但其可以与配体结合后产生二聚化从而被激活，这类连接胞内酪氨酸蛋白激酶（JAK）的信号通路称为JAK－STAT信号转导通路。
JAK/STAT信号通路与类风湿关节炎的相关性探讨作者：杨永生李荣亨董秋梅来源：《风湿病与关节炎》2018年第07期【摘要】类风湿关节炎是一种自身免疫性炎性关节病，滑膜组织增生和滑膜炎是其主要病理改变。
遗传环境、免疫紊乱、细胞因子、滑膜细胞过度增殖被认为是类风湿关节炎发病的主要机制。
Janus激酶/信号转导与转录激活因子（JAK/STAT）信号通路在类风湿关节炎发病过程中发挥主要作用。
故对类风湿关节炎与JAK/STAT信号通路关系进行探讨，旨在为类风湿关节炎的机制和治疗靶点研究提供新的思路。
【关键词】关节炎，类风湿；发病机制；JAK/STAT；相关性类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是一种主要影响关节的慢性全身性自身免疫性疾病，其特点是滑膜组织的增生，软骨和骨的破坏，最终可导致身体功能的残疾[1]。
全球成年人口的患病率大约1%，具有较高的发病率和死亡率，严重影响人类的健康和生活质量。
本病的发病机制尚不明确，大量的研究证实，Janus激酶/信号转导与转录激活因子（JAK/STAT）信号通路参与调控RA关节滑膜中细胞因子的产生和激活，参与调节该疾病的病理生理过程。
本文就JAK/STAT信号通路与RA相关性进行探讨。
1 JAK/STAT1.1 JAK/STAT家族的組成及结构 JAK/STAT是一条从胞外到胞核的信号转导通路，依次由酪氨酸激酶相关受体、酪氨酸激酶JAK和转录因子STAT构成，主要参与细胞的增殖、分化、凋亡以及免疫调节等许多重要生物学过程[2]。
JAK家族是一类非受体型的酪氨酸蛋白激酶，由4个家族成员组成：JAK1、JAK2、JAK3和TYK2，除JAK3仅表达于骨髓和淋巴系统中，其余JAK激酶家族成员广泛存在于各种组织和细胞中。
JAK激酶家族成员有7个高度同源性的功能结构区：JH1～JH7[3]，分子量120～140 kDa，包含4个功能性结构域：酪氨酸激酶结构域（JH1），主管JAK激酶活性；不具有直接催化活性，但能够对JH1的激酶活性进行调节的伪激酶结构域（JH2）；SH2结构域（JH3～JH5）和FERM结构域（JH6、JH7）能识别并结合细胞膜上的特异性受体，尽管JAK 激酶没有显示任何底物特异性，但是体内靶基因研究证实它们有不同的特定生物学功能[4]。
JAK-STAT信号通路负反馈调节家族与类风湿性关节炎杨馨;金荣疆;吴沛遥;杨慎峭;冯跃;刘旭光【期刊名称】《内蒙古中医药》【年(卷),期】2010(029)013【摘要】类风湿性关节炎是临床常见的自身免疫性疾病,其病理过程的发生、发展都与细胞因子信号转导密切相关,而JAK-STAT通路是介导细胞因子信号转导的重要途径.目前,关于JAK-STAT信号通路的研究多是遵循由胞外至胞内的传递过程进行的,但时于其负反馈调节机制的研究却少有涉及.实际上,负反馈调节能维持机体内环境的稳态,细胞因子信号转导的强度和持续时间过度会对机体造成严重伤害.我们的前期研究发现:艾灸能有效控制实验性RA滑膜炎症,对滑膜细胞分泌功能及细胞内JAK-STAT信号通路具有良性调控作用.而JAK-STAT通路负反馈调节的重要家族:SOCS、PLAS、PTP与类风湿关节炎高度相关,在未来可能成为类风湿性关节炎等自身免疲性疾病科学研究的新途径.【总页数】3页(P122-124)【作者】杨馨;金荣疆;吴沛遥;杨慎峭;冯跃;刘旭光【作者单位】成都中医药大学针灸推拿学院,610075;成都中医药大学针灸推拿学院,610075;成都中医药大学针灸推拿学院,610075;成都中医药大学针灸推拿学院,610075;成都中医药大学针灸推拿学院,610075;成都中医药大学针灸推拿学院,610075【正文语种】中文【中图分类】R593.22【相关文献】1.艾灸对实验性类风湿性关节炎家兔滑膜细胞JAK-STAT信号通路影响的研究 [J], 杨馨;李继书;杨慎峭;张新星;张天生;周海燕;刘旭光2.SLC34A2通过JAK-STAT信号通路调节肺癌肿瘤干细胞侵袭和增殖作用研究[J], 任贺庄;席俊峰;毕鑑红;蒋占新;张志斌3.SLC34A2通过JAK-STAT信号通路调节肺癌肿瘤干细胞侵袭和增殖作用研究[J], 任贺庄;席俊峰;毕鑑红;蒋占新;张志斌;4.基于JAK-STAT+SOCS负反馈调节信号通路探讨眩晕方对神经根型颈椎病大鼠镇痛作用的机制研究 [J], 蒋锦;陆培春;刘琴;徐静5.热补针法对类风湿关节炎大鼠滑膜细胞JAK-STAT信号通路调节因子SOCS1、SOCS3表达的影响 [J], 王芬;赵彬元;严兴科;杜小正;赵耀东;刘强因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
骨关节炎患者关节软骨细胞合成和分解基因的表达研究作者：陈颖娟黄慈波牛素平张亚军杨昕来源：《风湿病与关节炎》2016年第05期【摘要】目的：初步探讨合成和分解相关基因Ⅱ型胶原a1（COL2A1）、聚蛋白多糖（ACAN）、含Ⅰ型血小板结合蛋白基序结构的去整合素金属蛋白酶-5（ADAMTs-5）、基质金属蛋白酶组织抑制剂-3（TIMP-3）在骨关节炎患者关节软骨细胞和外周血的表达水平。
方法：入选行关节置换术的骨关节炎患者3例、类风湿关节炎患者3例和创伤截肢患者4例，分成骨关节炎组、类风湿关节炎组和创伤对照组，分别取离体关节软骨标本体外培养软骨细胞；入选骨关节炎患者9例、类风湿关节炎患者10例和健康对照者10例，分成骨关节炎组、类风湿关节炎组和正常对照组，分别抽取4 mL外周静脉血提取外周血单个核细胞，利用实时荧光定量聚合酶链反应法（RT-PCR）检测关节软骨细胞和外周血单个核细胞COL2A1、ACAN、ADAMTs-5、TIMP-3基因表达。
采用非配对资料t检验比较各基因分别在关节软骨细胞、外周血单个核细胞表达的组间差异。
结果：骨关节炎组与创伤对照组组间比较提示ACAN、TIMP-3、COL2A1基因在骨关节炎关节软骨细胞表达下调，ADAMTs-5基因表达上调，TIMP-3表达低于创伤对照组（P < 0.05）；各基因在骨关节炎外周血单个核细胞表达无统计学意义（P > 0.05）。
结论：TIMP-3、COL2A1、ACAN和ADAMTs-5基因在关节软骨细胞中的异常表达趋势对骨关节炎发生发展有预警作用，在外周血的表达无特异性。
【关键词】骨关节炎；软骨细胞；基因【ABSTRACT】Objective：To study the expression level of synthesis and decomposition genes such as COL2A1，ACAN，ADAMTs-5 and TIMP-3 in articular cartilage cells and peripheral blood.Methods：There were three selected groups：an osteoarthritis group （3 cases for joint replacement），a rheumatoid arthritis group （3 cases with rheumatoid arthritis） and a trauma control group （4 cases of amputation due to trauma）.Cartilage specimens in vitro were taken to culture chondrocytes.In addition，Peripheral blood mononuclear cells were obtained from 4 mL peripheral vein blood taken from the other three groups：an osteoarthritis group （9 cases with osteoarthritis），a rheumatoid arthritis group （10 cases with rheumatoid arthritis） and a health control group （10 healthy people）.RT-PCR method was used to detect the gene expressions of COL2A1，ACAN，ADAMTs-5 and TIMP-3in articular cartilage cells and peripheral blood.Non-pairing data t was used to test and compare the expression differences of genes in articular chondrocytes and peripheral blood mononuclear cells.Results：The comparison between the osteoarthritis group and the trauma control groupsuggested that the expression of ACAN，TIMP-3 and COL2A1 had a down regulation in osteoarthritic articular cartilage cells，the expression of ADAMTS-5 was up-regulated，and the expression of TIMP-3 was lower than that of the trauma control group （P < 0.05）.The expression of each gene in peripheral blood mononuclear cells was not statistically significant （P >0.05）.Conclusion：The abnormal expression of TIMP-3，COL2A1，ACAN and ADAMTs-5 in articular chondrocytes has a warning effect on the occurrence and development of osteoarthritis but no specificity in peripheral blood.【Keywords】 osteoarthritis；chondrocyte；gene骨关节炎（osteoarthritis，OA）是老年人最常见的关节疾病，诊断依赖于临床症状和影像学，缺乏有效的早期诊断生物标志，不利于早期防治[1-2]。
JAK-STAT信号转导及其临床意义王关嵩;钱桂生;关崧;蔡文琴【期刊名称】《中国老年学杂志》【年(卷),期】2002(022)001【摘要】@@ 细胞因子作用的靶细胞中存在的蛋白酪氨酸激酶(PTK)可以介导细胞因子与其受体结合后的信号蛋白分子级联活化反应.JAK(Janus kinase)是一种重要的PTK.细胞因子与受体结合后激活JAK,进而激活“信号转导子和转录激活子”(signal transducer and activator of transcription,STAT),应激反应也能激活JAK-STAT信号传导,再诱导目的基因表达.近来研究表明,JAK-STAT途径是人体内生理和病理反应的共同通路之一,与多种疾病发病及防治密切相关.【总页数】3页(P70-72)【作者】王关嵩;钱桂生;关崧;蔡文琴【作者单位】第三军医大学附属新桥医院,全军呼吸内科研究所,重庆,400037;第三军医大学附属新桥医院,全军呼吸内科研究所,重庆,400037;第三军医大学附属新桥医院,全军呼吸内科研究所,重庆,400037;第三军医大学基础医学部,重庆市神经科学研究所【正文语种】中文【中图分类】Q257【相关文献】1.贝类多糖对HepG2.2.15细胞JAK-STAT信号转导途径分子表达的影响 [J], 湛孝东;王克霞2.维生素D对慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞α干扰素JAK-STAT信号转导途径的影响 [J], 侯杰;管世鹤;杨凯;穆玄玄3.JAK-STAT信号转导通路在类风湿性关节炎中的研究进展 [J], 张晓园;王永辉;李艳彦;柴智;王悦尧;周然4.JAK-STAT信号转导在急性淋巴细胞白血病细胞中的表达特征分析 [J], 李晓荣;明丹;石锐;魏娜5.益气活血方(脑络欣通)对MCAO-R大鼠JAK-STAT信号转导通道的影响 [J], 韩义皇;王键因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
JAK-STAT信号通路与癌细胞凋亡关系的研究进展
周庆锣;黄继尚;姬广林
【期刊名称】《赣南医学院学报》
【年(卷),期】2022(42)8
【摘要】JAK-STAT信号通路是人体内广泛表达的胞内信号转导通路,与许多重要的生物学过程息息相关,包括细胞的增殖、分化、免疫调节及凋亡等。
它为细胞的核-膜信号传递提供了有效途径。
值得一提的是细胞异常增殖和凋亡逃避是癌症发生的标志之一。
越来越多的证据表明,JAK-STAT信号通路与癌细胞的凋亡密切相关,但具体机制仍不十分明了。
因此,有必要对JAK-STAT信号在癌细胞凋亡影响中的详细机制进行研究,探讨其对相关疾病的影响,为可能的临床治疗提供参考。
本文重点介绍了JAK-STAT通路的组成与运行机制,综述了其与癌细胞凋亡的可能关系以及该通路及其抑制剂在相关疾病的临床应用可能。
【总页数】8页(P792-799)
【作者】周庆锣;黄继尚;姬广林
【作者单位】赣南医学院;赣南医学院第一附属医院骨科
【正文语种】中文
【中图分类】R730.2
【相关文献】
1.苦参碱和氧化苦参碱对肝癌细胞增殖凋亡及JAK-STAT信号通路的影响
2.JAK-STAT信号通路阻断剂AG490对肺癌细胞凋亡的影响
3.丹皮酚对肝癌细胞增殖凋
亡及JAK-STAT信号通路的影响4.索拉非尼对肝癌细胞增殖凋亡及JAK-STAT信号通路的影响5.Notch信号通路与肝癌细胞凋亡关系的研究进展
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人骨关节炎软骨细胞上调成骨细胞中骨保护素的作用途径李家乐;罗达胜;郑刘杰;刘伟;姚运峰【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2024(28)26【摘要】背景:研究发现上调的刺猬蛋白信号将导致骨关节炎标志物蛇毒蛋白Runx2、聚蛋白多糖酶5、COL10A1以及基质金属蛋白酶13的升高,而抑制刺猬蛋白能减轻骨关节炎的严重程度。
猜测骨关节炎软骨细胞能够通过印度刺猬蛋白(Indian hedgehog protein,IHH)信号通路影响成骨细胞来影响骨的形成。
目的:探索人骨关节炎软骨细胞对软骨下成骨细胞的影响。
方法:收集骨关节炎患者的胫骨平台标本,使用酶解法提取软骨细胞,利用酶预消化+骨块法提取成骨细胞。
采用甲苯胺蓝染色和免疫荧光鉴定软骨细胞;采用碱性磷酸酶染色和免疫荧光鉴定成骨细胞,在海藻酸钠珠中以维持软骨细胞表型,将其与成骨细胞共培养,共培养系统中分别加入IHH信号通路的抑制剂(Cyclopamine,10 nmol/L)和激活剂(Purmorphamine,10 nmol/L),48 h后收集各组成骨细胞,利用qRT-PCR检测成骨细胞中Gli1、骨保护素、Runx2、甲状旁腺激素相关肽、碱性磷酸酶、核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of NF-kBligand,RANKL)以及骨钙素等基因mRNA的表达;利用Westernblot检测各处理组的成骨细胞中GLi1、骨保护素、RANKL蛋白的表达。
结果与结论:①与骨关节炎软骨细胞共同培养时,成骨细胞中GLi1、骨保护素、RUNX2的mRNA表达水平明显增加,而甲状旁腺激素相关肽的mRNA表达水平相对降低(P<0.05);加入IHH抑制剂(Cyclopamine)后,IHH 信号通路目的基因Gli1在mRNA和蛋白水平上表达均明显降低(P<0.05),加入IHH信号通路激活剂(Purmorphamine)后,Gli1在mRNA及蛋白水平上表达均明显升高(P<0.05);骨保护素在实验中表现出与Gli1相同的变化趋势。
电针后血清对肿瘤坏死因子α诱导软骨细胞凋亡的影响吴明霞;李西海;吴广文;李俐;陈文列;刘献祥【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2011(015)046【摘要】BACKGROUND: Electro-acupuncture (EA) can promote blood circulation, remove blood stasis, regulate vital energy circulation to relieve pain, relieve rigidity of muscles and actuate collaterals, and effectwely relieve symptoms of osteoarthritis. OBJECTIVE: To observe the effect of serum ontumor necrosis factor a (TNF-a) induced chontroclye apoptosE following EA METHODS: Knee joint chondrocytes from3-week-old SD rats were isolated using enzymatic digestion and apoptosE induced with 10ug/L TNF-a m vitro. The normal group rats were routine^ rased and did not recede any treatment. The osteoarthritis rats were routinely rased, intraarticularly injected with sodium hyaluronate(p.4uUg. Once a week, fo r s u ccess we 5 weeks), or gwen EA at the Ateixiyan and Wakiyan (5. 15 and 30 min/d). And all rats were interfered with serum, and then the apoptotic rate of theRESULT SAND CONCLUSION: After 15 and 30 minutes of EA at the Afekiyan and Wakiyan, osteoarthrfe rafe we re interfere d with serum for 24 hours. The activrty of chondrocytes was significantly increased and the apoptotic rate of the chondroytes was significantly decreased. These findings suggest that serum can inhibit TNF-a induced chondrocyte apoptosis following EA%背景:电针具有活血化瘀、行气止痛、舒筋通络的作用,能有效缓解骨性关节炎的临床症状.目的:观察电针后血清对肿瘤坏死因子α 诱导软骨细胞凋亡的影响.方法:采用机械-酶消化法分离3 周龄SD大鼠膝关节软骨细胞,用10 μg/L 的肿瘤坏死因子α 诱导体外培养软骨细胞的凋亡,同时给予正常大鼠血清、骨性关节炎大鼠血清、透明质酸钠治疗的骨性关节炎大鼠血清、及电针内、外膝眼5,15,30 min 治疗的骨性关节炎大鼠血清进行干预.结果与结论:电针内、外膝眼15,30 min 治疗的骨性关节炎大鼠血清干预24 h,软骨细胞活力显著增高,凋亡显著减少.说明电针后血清能有效抑制肿瘤坏死因子α 诱导的软骨细胞凋亡.【总页数】5页(P8551-8555)【作者】吴明霞;李西海;吴广文;李俐;陈文列;刘献祥【作者单位】福建中医药大学附属第二人民医院针灸科,福建省福州市350003;福建中医药大学中西医结合研究院,福建省福州市350108;福建中医药大学中西医结合研究院,福建省福州市350108;福建中医药大学附属第二人民医院针灸科,福建省福州市350003;福建省中西医结合老年性疾病重点实验室,福建省福州市350108;福建中医药大学中西医结合研究院,福建省福州市350108【正文语种】中文【中图分类】R318【相关文献】1.电针后血清对脂多糖诱导的软骨细胞IL-1β、IL-6表达的影响 [J], 陈后煌;李西海;李俐;吴追乐;郑春松;徐欣;洪秀娥;吴明霞2.大鼠电针后血清对肿瘤坏死因子α诱导凋亡软骨细胞Erk1/2、C-Myc、C-Fos 和C-Jun基因表达的影响 [J], 林洁;吴广文;付长龙;洪秀娥;李俐;林秋祥;吴明霞3.电针后血清对TNF-α诱导凋亡软骨细胞MAPK信号通路的影响 [J], 吴明霞;李西海;李俐;刘伯龄;林久茂4.电针对大鼠脊髓损伤后细胞凋亡受体及肿瘤坏死因子1表达的影响 [J], 时素华;李志刚;宋萌;郑光华;许红;白丽敏;李丽娜5.五福饮含药血清对大鼠软骨细胞肿瘤坏死因子-α诱导凋亡软骨细胞活性及基质金属蛋白酶表达的影响 [J], 汪灿锋; 叶正从; 沈钦荣; 韩雷; 曹国平因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
电针治疗骨性关节炎具有独特的特色与优势，其治疗成本小，副作用少，患者痛苦少，临床效果显著［1-2］，但具体作用机制有待于深入研究。
本研究采用4%木瓜蛋白酶注射SD 大鼠双膝关节腔复制骨性关节炎模型，给予电针治疗，旨在观察电针对关节软骨中JAK-STAT 信号转导通路的影响，探讨电针治疗骨性关节炎的可能作用机制，为中医防治骨性关节炎提供新的思路。
1实验材料与方法1.1实验动物清洁级成年SD 大鼠60只，2月龄，雌雄各半，上海斯莱克实验动物有限责任公司提供，合格证号：SCXK （沪）2007-0005。
医学实验动物环境设施为福建中医药大学动物实验中心鼠类实验室，清洁级（合格证号：医动学第23-016号）。
实验过程中对动物的处置符合2006年科技部《关于善待实验动物的指导性意见》的规定。
1.2主要试剂及仪器透明质酸钠（山东正大福瑞达制药有限公司，国药准字H10960136），电子针疗仪（华佗牌SD-Z 型，苏州医疗用品厂有限公司）。
TGF-β1试剂盒（北京普尔伟业生物科技有限公司），逆转录试剂盒（Promega 公司），木瓜蛋白酶（上海泛柯生物科技有限公司），TRIZOL （Invitrogen 公司），RT-PCR 引物（上海生工生物技术有限公司），SYBR 荧光定量试剂盒（美国Invitrogen 公司），蛋白核酸分析仪（DU-640，美国贝克曼公司），荧光定量PCR 仪（Bio-rad iCycler iQ 伯乐公司）。
1.3实验方法SD 大鼠抽签法随机分为2组，即：正常组（10只）和实验组（50只）。
实验组第1、4、7天，水合氯醛3mL ／kg 麻醉成功后，4%木瓜蛋白酶0.2mL 双膝关节腔注射复制骨性关节炎模型［3］，术后2周，抽签法随机分为5组，即模型组（10只）、对照组（10只）、实验1组（10只）、实验2组（10只）、实验3组（10只），包括正常组，共6组。
正常组、模型组，常规饲养，未行治疗；对照组关节腔注射透明质酸钠0.04mL ／100g ，7天1次，连续5周；实验组取穴内、外膝眼，电针（脉冲频率8Hz ，输出脉冲强度10V ）治疗，实验1组5min ／d 、实验2组10min ／d 、实验3组15min ／d ，5d 为1个疗程，疗程间休息2d ，治疗5个疗程。
根据临床上电针治疗骨性关节炎时间为30min ，参照动物的体表面积计算法，根据实验动物的平均体重，采用Meeh-Rubner 氏公式计算电针干预的临床等效时间为15min 。
1.4放射免疫分析法检测TGF-β1测定各组SD 大鼠水合氯醛腹腔麻醉成功后，常规膝关节腔穿刺术，先注入0.9%生理盐水1.5mL 后，反复活动膝关节20次，缓慢抽取关节液，离心取上清；按照放射免疫分析法检测说明，测定关节液中TGF-电针对骨性关节炎软骨细胞JAK-STAT 信号通路表达的影响吴明霞1，李西海2，李俐1，梁文娜3，林久茂2，刘献祥2（1.福建中医药大学附属第二人民医院，福建福州350003；2.福建中医药大学中西医结合研究院，福建福州350108；3.福建中医药大学中医学院，福建福州350108）摘要：目的探讨电针影响骨性关节炎软骨细胞JAK-STAT 信号通路表达的作用机制。
方法采用成年SD 大鼠60只，抽签法随机分为正常组、造模组，造模组采用4%木瓜蛋白酶双膝关节腔注射建立骨性关节炎模型，抽签法随机分为模型组、对照组、实验1组、实验2组、实验3组，实验组采用电针干预，检测关节液中TGF-β1含量，Real time RT-PCR 检测软骨细胞STAT3、Smad3、LepR mRNA 的表达。
结果电针治疗后关节液中TGF-β1含量明显高于模型组（P ＜0.01），关节软骨中STAT3、Smad3、LepR mRNA 表达均明显高于模型组（P ＜0.01，P ＜0.05）。
结论电针有效增加TGF-β1含量及促进关节软骨中STAT3、Smad3、LepR mRNA 的表达，可能是其防治骨性关节炎的重要机制之一。
关键词：骨性关节炎；电针；信号转导；关节软骨中图分类号：R245.3文献标志码：A文章编号：1004-5627（2011）06-0021－03收稿日期：2011-09-18基金项目：国家自然科学基金（30873277），陈可冀中西医结合发展基金（CKJ2008003）作者简介：吴明霞（1965—），医学博士，主任医师，主要从事针灸防治骨关节病研究。
·实验研究·Journal of Fujian University of TCM December 2011，21（6）福建中医药大学学报2011年12月第21卷第6期21DOI:10.13261/ki.jfutcm.002568β1的浓度。
1.5Real time RT-PCR法检测各组STAT3、Smad3、LepR mRNA的表达各组关节软骨标本，采用液氮研磨法提取总RNA，每50mg组织加入Trizol1mL，按Triol操作说明提取总RNA，取1μg RNA逆转录成cDNA，以此cDNA为模板行SYBR Real time RT-PCR扩增STAT3（116bp，S 5′-AAC TTC AGA CCC GCC AAC AAA T-3′，A 5′-CAG ATC CAC GAT CCT CTC CTC C-3′）、Smad3（102bp，S5′-TCC CTA CAA TCC TCT CCC TT-3′，A5′-CGC TCA GAC TGT CCC TTA CC-3′）、LepR（184bp，S5′-CTT ATG CTG GGA TGT GCC TT-3′，A5′-ATC AGT TGT ACT CGG TGG CG-3′）、GAPDH（143bp，S5′-CGG CAA GTT CAA CGG CAC AG-3′，A5′-CGC CAG TAG ACT CCA CGA CAT-3′），Primer5设计引物序列。
Real time RT-PCR扩增反应条件：94℃4min，（94℃30s，50℃40s，72℃45s），40循环，溶解曲线分析确定Real time RT-PCR扩增的特异性。
基因表达的差异分析，以GAPDH mRNA表达为内参照基因，检测待测样品中的目的基因的表达水平，以对照组数据为标准样本，各实验组为待测样品，比较待测样本相对校准样本的表达差异，采用2-ΔΔCt法计算基因表达的差异。
1.6统计学处理SPSS13.6统计软件处理数据，计量资料采用x±s表示，组间比较用One－Way ANOVA方差分析，多重比较用SNK－q检验。
2结果2.16组干预后TGF-β1含量变化见表1。
2.2SD大鼠关节软骨组织总RNA鉴定各组SD大鼠关节软骨组织所有抽提的总RNA经微量核酸－蛋白定量仪定量，且OD260／OD280值均在1.80～2.00范围内，表明RNA纯度高，无蛋白和DNA污染，可用于后续的实验研究。
2.36组干预后关节软骨中STAT3、Smad3、LepR mRNA表达差异见表2。
3讨论骨性关节炎（osteoarthritis，OA）是一种常见的慢性进展性关节疾病，发病率随年龄而增加，以关节软骨退变为主要特征。
研究表明，促合成性细胞因子TGF-β1作为调节者，通过调节激酶信号转导子与转录激活子（janus kinase-signal transducers and activator of transcription，JAK-STAT）通路，在关节软骨的修复过程中发挥重要的作用［4-5］。
电针具有行气止痛、舒筋通络的作用，治疗作用具有多层面、多途径、多靶点的特点，其作用机制可能是电针信号经过中枢神经系统整合后，可有效的调控内分泌系统功能释放激素、自主神经系统释放神经递质、信号转导通路调节细胞因子的分泌以及机体的免疫应答，从而能有效减轻患者的临床症状［6］。
JAK-STAT信号通路是众多细胞因子信号转导的重要途径之一，广泛参与细胞的增殖、分化、凋亡过程。
细胞因子是骨性关节炎发病过程中的重要调节因素之一，通过激活各种信号转导通路调节软骨细胞的生物学功能，从而有效调控关节软骨退变。
JAK蛋白酪氨酸激酶是以与细胞因子受体胞浆区偶联的方式发挥作用，其受体与相应配体结合后活化，并通过激活STAT而调控目的基因的表达［7］。
Leptin与靶细胞上的Lep结合后，可以通过激活JAK-STAT信号通路，诱导一系列细胞内反应，从而激活相应目的基因的转录与表达，调控细胞的生物学功能［8］。
TGF-β超家族分子通过细胞膜表面Ⅰ和Ⅱ型丝氨酸／苏氨酸激酶受体进行信号转导，在软骨细胞增殖、分化以及相关疾病发生过程中具有重要的作用［9］。
Smad2、3蛋白是TGF-β通路胞浆信号转导的关键分子，其中表16组干预后TGF-β1含量比较（x±s）组别正常组模型组对照组实验1组实验2组实验3组TGF-β115.80±3.148.46±2.332）12.56±2.402）3）5）9.16±3.062）11.82±2.802）3）4）13.42±3.171）3）5）pg／mL注：与正常组比较，1）P＜0.05，2）P＜0.01；与模型组比较，3）P＜0.01；与实验1组比较，4）P＜0.05，5）P＜0.01。
表26组干预后关节软骨中STAT3、Smad3、LepR mRNA表达差异比较（x±s）组别正常组模型组对照组实验1组实验2组实验3组STAT31.00±0.000.69±0.062）0.80±0.062）4）0.74±0.072）0.79±0.092）3）0.83±0.082）4）5）注：与正常组比较，1）P＜0.05，2）P＜0.01；与模型组比较，3）P＜0.05，4）P＜0.01；与实验1组比较，5）P＜0.05，6）P＜0.01。
Smad31.00±0.000.75±0.052）0.85±0.092）3）0.79±0.072）0.84±0.072）3）0.88±0.082）4）5）LepR1.00±0.000.77±0.072）0.87±0.052）4）5）0.78±0.072）0.86±0.062）3）5）0.91±0.081）4）6）福建中医药大学学报第21卷22Smad3介导的TGF-β1信号抑制关节表面软骨细胞的肥大性分化，从而抑制关节软骨的退变［10］。
