定性测定的性能验证PPT课件

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临床免疫定性检测的性能验证

9,500
500
4,500
85,500
95%
1%感染率
检出(+) 未检出(－)
950
50
4,950 94,050
95%
95%
95%
950/[950+4950]=16% 9500/[9500+4500]=67.9%
85500/[85500+500]=99.4 94050/[94050+50]=99.9% %
样本的采集和保存：采集时间、保存方式等必须保证一致性。
CLSI EP12-A2 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance; Approved Guideline
Clinical Laboratory and Standards Institute (CLSI)
路漫漫其悠远
性能验证前的准备
应熟悉待验证的试剂或系统进行必要的培训，包括样本的处理和储存、
试剂的处理和储存、合理的检测方案、对结果合理的解释以及系统的质量控制等。制定质量保证计划确定患者样本的数量及强弱（评价重复性）确定比较的方法
CLSI EP12-A2 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance; Approved Guideline
路漫漫其悠远
性能验证的合格标准从何而来？
试剂盒说明书国际和／或国际标准
路漫漫其悠远
性能验证前样本的准备
质控品：使用商品化质控物进行，包括阴性和阳性。
筛查试验：临床上筛查方法通常用于检测整个人
群（或者人群中的特定部分）中特定指标的情况。例如对需输血患者样本做HIV血清学试验。

定性试验质控 PPT课件

诊断试验
用来评价具有可疑给予特征（如一种感染的特殊类型）的人。
敏感性和特异性应该处于相对平衡状态。如果此特征对治疗或预后考虑很重要，那么敏感性要尽可能的高；而且后续已有准确的确证试验，可以不需要高的特异性。
感染性疾病的大多数临床试验是用于诊断。
确证试验
获得筛选或诊断试验反应性结果后，增加
临床化学仪器精密度分析（ EP5-A2 ）定量分析方法线性评估（EP6-A）临床化学中干扰的测试（ EP7-A2）用患者样品进行方法对比及偏倚评估（EP9-A2）临床实验室定量分析方法的初步评估（EP10-A3）体外诊断实验室要求的统一（EP11-A）定性分析性能的评价协议（EP12-A2）实验室统计-标准差（EP13-A）基质效应的鉴别和量化（EP14-A2）体外诊断产品精密度、准确度的使用证实（EP15）定量分析方法的校准确认（EP16）检测限的评估：评价、确认和论证（EP17-A）
I/LA23-A Assessing the Quality of Immunoassay Systems: Radioimmunoassays and Enzyme,Fluorescence, and LuminescenceImmunoassays; Approved Guideline
I/LA30-P Immunoassay Interference by Endogenous Antibodies；Proposed Guideline
I/LA6-A Detection and Quantitation of Rubella IgG Antibody: Evaluation and Performance Criteria for Multiple Component Test Products, Specimen Handling, and Use of Test Products in the Clinical Laboratory; Approved Guideline

定性实验方法学验证ppt课件

甲肝IgM定性项目方法学验证.doc
2008年3月优生仪器比对.doc
Method validation of the qualitative test
参考资料:
1.《定性实验方法学验证管理程序》KM-MP0301.20 2. User Protocaln for Evaluation of Qualitative Test Performance Performance;Approved Guideline，NCCLS-EP12-A
验证的内容: 准确度(Accuracy) 精密度(Precision) 诊断敏感性（sensitivity of diagnosis）特异性（specificity）:
同一项目不同检测方法或仪器的比对 CUTOFF值验证
Method validation of the qualitative test
Method validation of the qualitative test
二.精密度验证:
1.批内精密度:同一份样本在同一批次内平行重复检测 10次.然后计算均值,SD和CV. 2.批间精密度:同一份样本连续检测10天,每天平行检测双孔.然后计算均值,SD和CV.
Note:1.用S/CO比值进行统计计算.
↓
随机每8份分成一组
↓
两种方法(或两台仪器)每天平行检测一组样本
↓
将所有检测结果汇总
↓
Kappa检验,评价一致性
Method validation of the qualitative test
补充说明:关于CUTOFF值验证定量实验但是报告定性结果的才需要做 CUTOFF值验证.(比如PCR室的乙肝 DNA定性).

定量项目分析性能验证PPT课件

数据处理
• 数据有效性判断随机误差、操作失误、标本问题等等；产生的有问题数据若参与计算，会使结果判读有较大偏差；根据统计学方法找出离群值，剔除；剔除离群值后应找出问题原因并改正，缺少的标本数应补全。
• 数据计算借助Excel工具，行标和EP文件中都给了完整的数据统计表格形式。
14
结果判读——精密度
12
验证实验
• 校准：按照日常操作校准频率进行校准 or 每个检测批次进行校准 • 质控：闭环质控，每日实验样本检测前做室内质控，实验样本检测
结束后也应做室内质控。当日质控需均在控当日实验数据才有效。 • 样本检测：尽可能接近日常样本检测。
《标准操作流程— 检测系统定量实验分析性能评价/验证》
13
抽样误差——确认限
16
结果判读——精密度
• 确认限的计算需要消除由于抽样误差等造成的统计学差异
1. 自由度v的计算以及假拒绝率α的选择
自由度是有关样本数的数据；假拒绝率选择后得到的为（1-α/1）区间，α一般取5,得到的即为95%置信区间。
2. C值的确定
由确定的自由度v和α查表得到。
3. 确认限计算
准备工作
以TSH做精密度实验为例做样本准备： 1. 说明书中声明，TSH的检测范围为0.005-100.0 uIU/mL，TSH的参考范围
为0.27-4.2 uIU/mL，2008年中国甲状腺疾病诊疗指南-甲状腺功能亢进症诊疗指南中提出甲亢患者TSH一般小于1.0 uIU/mL。故，应挑选1.0 uIU/mL，以及接近参考范围上限4.2 uIU/mL的两水平标本。 2.普通干燥管收集，2-8℃可保存7天；-20℃可保存1个月，不可反复冻融。 3. 一次检测标本用量为50uL，每天需150uL，加上日立杯死腔量100uL，再多预留一些，则每天至少需要300uL样本，总共需1.5mL。因标本量小，且装在同一子弹头及日立杯中，在操作过程中应避免不必要的蒸发。（此处计算的是最少用量，如果标本有富余应多分装一些子弹头）

定性免疫学检验的性能验证与质量控制ppt课件

17
xx
分析物浓度接近C50的定性方法精密度试验
ISO15189实验室认可系列培训讲座
进行重复性研究时，理想情况下需绘制在规定条件下候选方法的整个不精密度曲线，然而具体操作时需要检测的样本数量较大可使用一个简单的方法，即为待评价的检测方法建立分析物的临界浓度，并判定某一特定浓度范围，例如C50±20%，是否包含了C5-C95区间。若-20%到+20%浓度范围包含了C5-C95区间，那么20%或距离 C50更远浓度的样本将得到一致的检测结果，即在 C5-C95区间之外的样本检测结果可认为是精密的，浓度>C95，将持续得到阳性结果，浓度<C5，将持续得到阴性结果。
30
xx
ISO15189实验室认可系列培训讲座
结果判断-4
用该方法检测，C50-20%的样本检测结果一致，C50+20%的样本不一定能得到一致结果；需要用高于C50更大百分率浓度的样本（如+30%）进行补充试验。
31
xx
ISO15189实验室认可系列培训讲座
检出限的验证
检测限（limit of detection）是指检测方法可检测出的最低被测量浓度，也称检测低限（ lower limit of detection ）或最小检出浓度（ minimum detectable concentration），有时也称为分析灵敏度（analytical sensitivity）。如前所述，分析物浓度位于C5-C95区间之外（小于 C5或大于C95）时，候选方法对同一样本的重复性检测将得到相同结果。因此，C95代表了某一试剂可以测出的最低被测量浓度。
8

定性分析调PPT课件

[Cd2+][S2-]=Ksp [S2-]=Ksp/[Cd2+]=7.1×10-23
[H+]=0.31mol/L 。溶液的酸度不大于0.3mol/L，第二组硫化物都可以完全沉淀出来。
.
10
第三组用溶度积最小的ZnS来计算，设[Zn2+]
＝0.1mol/L，与之平衡的[S2-]为：
[Zn2+][S2-]＝Ksp=1.2×10-23
0.2mol/LHCl。
.
12
（三）铜组与锡组铜组(IIA)：铅、铋、铜、镉。硫化物属于碱性
，不溶于NaOH、Na2S、(NH4)2S等碱性试剂锡组(IIB)：砷、锑、锡(IV)、汞。硫化物属于两
性，且酸性更为明显，能溶于上述几种碱性试剂。
本组硫化物与Na2S的反应是：
HgS+S2-＝HgS22As2S3+3S2-＝2AsS33Sb2S3+3S2-＝2SbS33SnS2+S2-＝SnS32-
.
3
2. 检出限量m(μg): 在一定条件下，某鉴定反应所能检出离子
的最小质量，单位：μg，记为m。检出限量越小，反应越灵敏。又称为质量灵敏度。 3. 两种灵敏度间的换算关系
1:G=m×10-6:V m=V×106/G 表示反应的灵敏度时，要同时指出其最低浓度和检出限量。
.
4
（二）鉴定反应的选择性特效反应在其他离子共存时不受干扰地鉴
过量的浓NaOH，这时只有Cd(OH)2能够沉淀，将 Cd(OH)2以稀的甘油 —碱溶液洗净，溶于3mol/L HCl中，用水稀释，至酸度约为0.3mol/L，通人
.
8
三、第二组阳离子的分析
（铜锡组、硫化氢组）

定性测定的性能验证--李金明2010最新版

质控品：如方法学比较在10天内完成，则每一批次都要对每份质控样本进行检测，共提供20次重复检测结果。如果方法比较研究超过20天，则每一批次都要对每份对照样本进行单次检测，总计也提供20次重复结果。如出现失控，则当次检测结果无效。在当天或第二天安排新批次的检测以替换不合格的批次。实验室要分析失控的原因。不合格批次在10天内不应超过1次或20天内不超过两次。如若超出，所在实验室应中止检测工作并咨询试剂制造商以确定原因并采取纠正措施。 CLSI EP12-A2 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance;

定义

阳性结果的可靠性（‘预示值’）：即测定为阳性的标本实际上为阳性的可能性。 =[真阳性/（真阳性+假阳性）]×100%

阴性结果的可靠性:则为一份给出阴性结果的样本实际上为阴性的可靠性。 = [真阴性/（真阴性+假阴性）]×100%
“预示值”对临床检验结果影响
预示值对一个有95%敏感性和95%特异性的试剂检测结果的影响（100,000人）
CLSI EP12-A2 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance; Approved Guideline
编制性能验证的SOP
定义

筛查试验：临床上，筛查方法通常用于检测整个人群
（或者人群中的特定部分）中特定指标的情况。例如对样本做粪便隐血检测或者性病研究实验室（VDRL）梅毒血清学试验。一般来说，这些用于筛查的定性试验必须具有高敏感性以确保真阳性结果的检出。因此通常筛查试验比诊断试验或确认试验会产生更多的假阳性结果。如果筛查试验的假阳性结果所造成的社会及经济后果不是非常严重，这种低特异性可通过特异性较好的确认试验加以弥补。尽管阳性筛查试验结果需要确认试验来进一步证实，但是这依然要优于假阴性筛查试验结果的出现。因为假阴性结果会造成更严重的后果，例如疾病通过已感染的血液传播或者延误了对于可治愈的严重疾病的治疗。

性能验证PPT课件

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性能验证的内容
定量项目验证内容
精密度（Precision）验证（包括批内和总精密度）正确度（Trueness）验证分析测量范围（AMR）验证临床可报告范围（CRR）验证自动稀释（Auto-dilution）验证参考区间（Reference Interval）验证空白限（LOB）验证检出限（LOD）验证定量检测限（LOQ）验证污染携带（Carryover）验证方法学比对（Method Comparison）分析干扰（Interference）性能评价测量不确定度（Measurement Uncertainty）评定
应用准则对方法学性能的通用要求(1)
检验程序需文件化；实验室负责人或指定的人员应在开始即对程序评审并定期评审。评审通常每年一次。评审应文件化。性能验证：定量试验：正确度、精密度、可报告范围、（携带污染率）定性试验：阴性符合率、阳性符合率、重复性、最低检出限等半定量试验：重复性生物参考区间验证及评审：20份健康人标本，生物参考区间的评审还应该有临床医生的参与。评审内容：生物参考区间的来源、针对的人群、生物参考区间验证结果、与临床诊断的符合性等。生物参考区间建立：120份健康人标本
5.3.2.7试剂和耗材-记录
应保存影响检验性能的每一试剂和耗材的记录，包括但不限于以下内容： h) 证实试剂或耗材持续可使用的性能记录。
微生物专业要求：5.3.2.3 试剂和耗材验收试验应符合如下要求：（a）新批号及每一货次试剂和耗材使用前，应通过直接分析参考物质、新旧批号平行实验或常规质控等方法进行验证，并记录；（b）新批号及每一货次试剂和耗材，如吲哚试剂，杆菌肽，奥普托辛，X、V、XV 因子纸片等应使用阴性和阳性质控物进行验证；（c）新批号及每一货次的药敏试验纸片使用前应以标准菌株进行验证；（d）新批号及每一货次的染色剂（革兰染色、特殊染色和荧光染色）应用已知阳性和阴性（适用时）的质控菌株进行验证；（e）新批号及每一货次直接抗原检测试剂（无论是否含内质控）应用阴性和阳性外质控进行验证；（f）培养基外观良好（平滑、水分适宜、无污染、适当的颜色和厚度，试管培养基湿度适宜），新批号及每一货次的商品或自配培养基应检测相应的性能，包括无菌试验、生长试验或与旧批号平行试验、生长抑制试验（适用时）、生化反应（适用时）等，应以质控菌株进行验证；（g）一次性定量接种环每批次应抽样验证。

临床检测系统的方法学性能验证ppt

计算公式为：真阴性/( 真阴性+假阳性） X 100% .
第二十七页，共四十三页。
阳性结(Jie)果的可靠性（预示值）：即测定为阳性的标本实际上为阳性的可能性。 =[真阳性/（真阳性+假阳性）]×100%
阴性结果的可靠性（预示值）：则为一份给出阴性结
果的样本实际上为阴性的可靠性。
= [真阴性/（真阴性+假阴性）]×100%
分析特异性(包括干扰物质）（ EP7-P）
第五页，共四十三页。
定量试验方法的验证和(He)确认试验
一.未更改检测系统的验证 1、精密度（批内、批间） 2、准确度（标准物质、标准方法、方法
学比对） 3、可报告范围（验证最大稀释倍(Bei)数） 4、参考区间（检测20个正常样本验证）
第六页，共四十三页。
3.总精密度评价：用2个样品每天测定2批，批间测定间隔不得少于2h，每批平行测定2份，至少共测定20天，80个数据。每对结果间的差（共40个）代表批内差；2批均值之间的差（共20个）代表批间差；每天4个结果的均值（共20个）代表日间差。每批测定至少做一个质控。
第十三页，共四十三页。
（二）正确度(Du)评价试验
准确度是测量结果中系统误差（正确度）与随机误差（精密度）的综合。
第四页，共四十三页。
定量试验(Yan)方法的验(Yan)证和确认试验(Yan)
二.更改检测系统的确认试验
准确度（EP9）
精密度（EP5）
可报告范围（EP6-P2）参考区间（C28-A2）
分析灵敏度（ EP17-A）线性(Xing)范围（EP6-A）
第三十三页，共四十三页。
选取40份（20份）样本,最好阴阳性各半 ↓
随机每8（4）份分成一组 ↓

临床检验定性方法学评价学习课件

和+20%浓度的样本；对以上低、高浓度样本分别测定20次，记
录阴性及阳性结果数；
14
确定Cut-off value
当实验结果表明“临界值”样本的阴性结果和阳性结果不是各占50%时，原因可能是：
被评估的临界值浓度不准确、或结果数据不充足、或方法学剂量反应曲线在临界值处是非线性
的
保证足够的样本量，确保对实验方法的评价在常规实验条件下进
行。
18
参考样本盘
由一组临床样本组成，测定结果可与指定的参考方法或临床诊断
相联系，参考样本盘通常包含不同浓度被测物的临
床样本，可能时，还包括干扰物质。对评价定性实验方法是非常有效的。
19
已知样本临床诊断结果
临床诊断
阳性
当样本浓度在临界值以上增加时，阳性结果比率增加；
而当样本浓度在临界值以下减低时，阴性结果比率增加。
12
临界值的95%区间
当样本浓度高于临界值时，重复实验产生 95%阳性结果；
当样本浓度低于临界值时，重复实验产生 95%阴性结果；
之间的样本浓度范围。
13
定性实验重复性评价
确立方法的临界值；在临界值基础上准备出-20%浓度的样本
10
临界值（cutoff）
实验结果处于（阴、阳性）分界点时的样本中分析物浓度值；
低于此值，定性实验的结果为阴性；高于此值，定性实验的结果为阳性。
对定性实验来讲，临界值是唯一的医学决定水平.
11
临界值（cutoff）
当样本中被测物浓度处于临界水平时，定性实验重复检查同一样本，将产生50%的阳性结果和50%的阴性结果。
1
实验室认可对方法学验证的要求

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4
定性测定系统/试剂性能验证
特异性敏感性确性抗干扰能力
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5
性能验证的合格标准从何而来？
试剂盒说明书
国际和／或国际标准
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7
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8
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9
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15
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17
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18
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19
什么时候进行性能验证
筛查试验：临床上，筛查方法通常用于检测整个人群
（或者人群中的特定部分）中特定指标的情况。例如对样本做粪便隐血检测或者性病研究实验室（VDRL）梅毒血清学试验。一般来说，这些用于筛查的定性试验必须具有高敏感性以确保真阳性结果的检出。因此通常筛查试验比诊断试验或确认试验会产生更多的假阳性结果。如果筛查试验的假阳性结果所造成的社会及经济后果不是非常严重，这种低特异性可通过特异性较好的确认试验加以弥补。
.
29
“预示值”对临床检验结果影响
预示值对一个有95%敏感性和95%特异性的试剂检测结果的影响（100,000人）
结果
10%感染率
1%感染率
检出 (+) 未检出 (－) 检出未检出(－) (+)
+
9,500
500
950
50
－
4,500
85,500
4,950 94,050
敏感性
95%
95%
(TP/[TP+FN])
尽管阳性筛查试验结果需要确认试验来进一步证实，但是这依然要优于假阴性筛查试验结果的出现。因为假阴性结果会造成更严重的后果，例如疾病通过已感染的血液传播或者延误了对于可治愈的严重疾病的治疗。
CLSI EP12-A2 User Protocol for . Evaluation of Qualitative Test 24 Performance; Approved Guideline
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25
定义
确认试验：确认试验用于验证筛查试验或者诊断试验结果。如果确诊试验证实了之前的检测结果，临床医生即可作出诊断。确认试验通过设计使其具有较高的特异性（有时甚至以牺牲敏感性为代价）以及高阳性预测值。螺旋体抗体荧光吸附（FTA-ABS）梅毒血清学试验就是一种用于VDRL梅毒血清学试验等筛查试验之后的确认试验。
批内变异的验证批间变异的验证
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32
重复性验证的质量控制
质控品：如方法学比较在10天内完成，则每一批次都要对每份质控样本进行检测，共提供20次重复检测结果。如果方法比较研究超过20天，则每一批次都要对每份对照样本进行单次检测，总计也提供20次重复结果。
如出现失控，则当次检测结果无效。在当天或第二天安排新批次的检测以替换不合格的批次。实验室要分析失控的原因。不合格批次在10天内不应超过1次或20天内不超过两次。如若超出，所在实验室应中止检测工作并咨询试剂制造商以确定原因并采取纠正措施。
定性测定的性能验证
李金明卫生部临床检验中心
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1
临床定性检验的报告方式
有反应、无反应、阳性、阴性是、不是（或有、没有）
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2
“性能验证”？
ISO15189实验室认可的要求？（任务？）
实验室检测临床应用的必需？
.
3
高速列车性能验证
空气动力学速度车体转向架运行固定、悬挂的零部件强度稳定性舒适感故障率 ……
使用新的检测试剂或系统时更换检测试剂或系统时
.
20
临床实验室为什么更新检测试剂或系统？新的试剂或系统
更易于操作更高的检测性能更经济更能满足实验室测定要求
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21
性能验证前的准备
应熟悉待验证的试剂或系统进行必要的培训，包括样本的处理和储存、试
剂的处理和储存、合理的检测方案、对结果合理的解释以及系统的质量控制等。
样本的采集和保存：采集时间、保存方式等必须保证一致性。
CLSI EP12-A2 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance; Approved Guideline
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31
重复性验证
CUT-OFF的重复性（同时包含测定下限的验证）
制定质量保证计划
确定患者样本的数量及强弱（评价重复性）
确定比较的方法
CLSI EP12-A2 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance; Approved Guideline
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22
编制性能验证的SOP
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23
定义
定义
诊断试验：通常用于临床怀疑某种特定疾病或状况是否存在的诊断性定性试验。例如各种微生物培养就是用于检查感染情况的诊断试验。因临床上对治疗的及时的要求，诊断试验应具有很好的敏感性和特异性。如果诊断试验后还进行确认试验，那么诊断试验的特异性要求可以稍微降低。
CLSI EP12-A2 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance; Approved Guideline
特异性
95%
95%
(TN/[TN+FP])
阳性预示值 TP/[TP+FP]
9500/[9500+4500]=67.9% 950/[950+4950]=16%
阳性预示值 TN/[TN+FN]
85500/[85500+500]=99.4% 94050/[94050+50]=99.9%
.
30
样本的准备
质控品：使用商品化质控物进行，包括阴性和阳性。
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26
定义
临床敏感性：在患有明确临床疾病的患者中，其检测结果呈阳性或者超过正常值范围的比率（即出现阳性结果和确定患者患病）；注：该临床疾病必须由不依赖于被评价试验的标准确定。
临床特异性：在没有特定临床疾病的患者中，其检测结果呈阴性或者在正常值范围内的比率。
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27
定义
阳性测定能力指数（DI（＋））：可定义为一实验对阳性标本测定后给出阳性结果的能力（通常称为“敏感性”）； DI（＋）=[真阳性/（真阳性+假阴性）]×100%
阴性测定能力指数（DI（－））：则为对阴性样本测定给出阴性结果的能力（通常称为“特异性”）； DI（－）= [真阴性/（真阴性+假阳性）]×100%
.
28
定义
阳性结果的可靠性（‘预示值’）：即测定为阳性的标本实际上为阳性的可能性。 =[真阳性/（真阳性+假阳性）]×100%
阴性结果的可靠性:则为一份给出阴性结果的样本实际上为阴性的可靠性。 = [真阴性/（真阴性+假阴性）]×100%