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分枝杆菌分离培养和药敏试验引言分枝杆菌（Branchiobdella）是一类无脊椎动物寄生虫，常见于淡水环境中。
它们具有扁平的身体和分枝状的触手，因此得名。
分枝杆菌对环境条件非常敏感，因此分离培养和药敏试验对其研究具有重要意义。
分枝杆菌分离培养的方法1.样品采集：在淡水环境中选择活跃的分枝杆菌寄生体作为样品。
2.样品处理：将样品置于理化条件适宜的培养基中，如R2A培养基等。
以适宜的温度和光照条件下培养。
3.分离纯培养：利用无菌技术将分枝杆菌从其他微生物分离出来。
常用方法包括稀释涂布法、均匀涂布法等。
4.单菌种培养：将分离得到的单个分枝杆菌菌落接种到新的培养基上进行单菌种培养。
5.培养基优化：根据菌株特性，优化培养基组成、温度、光照和其他环境条件。
通过观察菌落形态、生长速度等指标，选择适宜的培养条件。
分枝杆菌药敏试验的方法1.制备药敏试验板：选择适宜的培养基，如Mueller-Hinton琼脂、肉汤琼脂等。
将药物分别加入琼脂中，并制备成不同浓度的试验板。
2.培养分枝杆菌：将分枝杆菌菌液均匀涂布在药敏试验板上，培养在适宜的温度下。
3.药敏试验观察：观察菌落的生长情况和抑菌效果。
记录最小抑菌浓度（MIC）。
4.药敏结果解读：根据国际标准或相关研究的参考值，判断分枝杆菌对药物的敏感性和抗药性。
可以根据MIC值进行药物分类，如敏感、中度敏感和耐药。
5.药敏结果分析：根据实验结果，分析分枝杆菌的药物抗性特征，为临床治疗提供参考。
结论分枝杆菌分离培养和药敏试验是研究该虫寄生虫的重要手段。
合理的分离培养方法可以得到纯种菌落，为后续研究和药敏试验提供可靠的基础。
药敏试验能够判断分枝杆菌对药物的敏感性，为临床治疗提供重要参考。
参考文献： 1. Johnston, D.J. (2000). A new family of Branchiobdellidan (Annelida: Clitellata) ectosymbiontic on freshwater crayfishes: The Evansobdellidae. Proceedings of the Biological Society of Washington, 113(3): 842-850. 2. Erséus, C. (2001). Chapter 25 PhylumAnnelida: Clitellata, Branchiobdellida. In: Animal biodiversity: an outline of higher-level classification and survey of taxonomic richness (ed. by Z.Q. Zhang). pp. 281-282. 3. Erséus, C. (2005). Order Branchiobdellida. In: Annelida: Polychaeta, Myzostomida, Branchiura and Vestimentifera (ed. by J. B. Hutchings, S. P. Nimis, and C. Reish). pp. 97-100.。
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结核菌药物敏感性测定标准化操作及质量保证手册国家结核病参比实验室2010年3月前言结核病细菌学检查是结核病控制规划重要的组成部分，随着现代结核病控制策略（DOTS）在我国的广泛实施，以及结核病控制三大目标的全面实现，结核病防治政策与技术策略有了很大的发展，在继续扩展高质量的DOTS的基础上，积极应对耐多药肺结核（MDR-TB）、结核菌/艾滋病病毒（TB/HIV）和其他挑战。
为满足当前结核病防治工作的需要，结核病实验室的工作任务也从之前的以痰涂片镜检发现传染性肺结核病人为重点，扩展到细菌学诊断、耐药结核病诊断等更加广泛的服务领域。
结核分枝杆菌药物敏感性测定（简称）是耐（多）药结核病防治中必不可少的重要工具，其主要作用是诊断耐药结核病、选择和调整耐药结核病治疗方案、开展耐药监测以了解某一地区结核分枝杆菌的耐药水平。
目前耐多药结核病规划性管理（PMDRTB）已在我国部分地区开展了试点，并将以较快的速度在全国扩展。
但在我国公共卫生领域，分枝杆菌药敏试验开展得并不普遍，大部分结核病防治机构的结核病实验室没有相应的经验和技术，缺乏系统的标准化文件，存在标准不一致、操作不规范、质量良莠不齐的问题。
为进一步规范药敏试验的操作，保证工作质量和试验人员安全，国家结核病参比实验室与世界卫生组织合作，编制了本册《结核分枝杆菌药物敏感性测定标准化操作手册》，详细描述结核菌药敏试验各个过程的操作程序。
目前世界卫生组织推荐的药敏试验方法包括比例法、绝对浓度法和液体培养法。
其中比例法为目前我国流行病学监测和耐多药结核病规划管理项目所采用的方法，将在本手册中重点介绍。
绝对浓度法是我国三十多年沿用的药敏试验方法，为目前我国大多数结核病专科医院常规使用的用于临床检测的方法，本手册也有独立章节进行描述，方法引自《中国防痨协会结核病诊断实验室检验规程》。
本手册参考世界卫生组织系列的结核病实验室标准化操作程序（SOP）的主要框架和内容，按照我国结核病规划的实际情况和具体要求进行了调整，并通过在部分省份的试点进一步进行了修改和完善，使之更具有可操作性，供开展药敏试验的实验室使用。
比例法检测结核分枝杆菌药物敏感性以下是操作步骤及结果判读标准：将待测菌液制备成10-2g/L和10-4g/L菌悬液，分别用22SWG标准接种环蘸取1环（即0.01ml）的菌液，用划线法均匀接种至对照及含药培养基表面，应注意是菌液尽可能均匀分散于培养基斜面，最终的接种量为10-4mg和10-6mg。
接种后培养基置于37℃培养，4周后读菌落数，计算耐药百分比，≤1%为敏感，＞1%为耐药。
耐药率（%）=含药培养基上菌落数/对照培养基上菌落数×100%解读：将高倍稀释的菌液即10-4g/L菌悬液接种至生长对照管，也就是不含药物的培养管；将低倍稀释的菌液即10-2g/L菌悬液接种至含药管，只接种2管，仅此而已。
不是生长对照管和含药管分别接种两种浓度的菌悬液，估计LZ是这样理解的吧。
因接种的2种不同浓度的菌液在浓度上相差了100倍，最后理论上两种菌的菌落数也应该相差在100倍左右，但因为加入了药物，所以如果菌是对所测药物敏感，那菌落数比例肯定是小于1/100，即耐药率<1%；如果为耐药菌，药物无法抑制菌落生长，相对的菌落数比例会大于1/100，耐药率>1%。
目前结核分枝杆菌复合群的药敏试验一线药物以比例法为金标准，是WHO制定公布的，而二线药物的金标准则以仪器法的MGIT960为金标准。
但目前在国内还都以固体L-J培养基为主，MGIT960的费用高，在县级以下的地区应用显然是不现实的每份标本只接种2只管：生长对照管和含药管，没有必要做双份的。
如果是做了双份的，菌落数也不会相差太大，因为菌液是一样的，除非你的菌长了很长时间，老化或死亡的结核菌多，而活菌的数量过少；还有可能是你的培养基有问题，比如不是同一批号的，药物浓度有差别。
结核菌药敏试验中菌龄是非常重要的，MGIT960的说明书中明确提出菌龄从肉眼在培养基上能观察到算起，生长不能超过14天，否则生长久了再做药敏试验就不准确了，特别是对吡嗪酰胺的药敏结果影响是非常大的。
