尼康A1共聚焦培训指引
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尼康A1共聚焦培训指引
1.开机顺序
显微镜部分
（1）接通电动载物台电源
（2）接通卤素灯（目视透射光观察用灯）电源
（3）接通水银灯（目视荧光观察用灯）电源
（4）接通显微镜主体电源
共聚焦部分
（5）接通激光台的电源（随配置不同各异）
（6）接通共聚焦控制器电源
计算机部分
（7）开启计算机与显示器
（8）启动“NIS-Elements”软件
关机顺序与以上相反！
2.显微镜操作
2.1认识显微镜各个部件
显微镜主题示意图：Array（1）滤光片：“D”: 毛玻璃,
“NCB”: 色温平衡片,
“GIF”:红外滤光片，用于PFS
（2）视场光阑；
（3）聚光器升降旋钮；
（4）起偏器（DIC用）；
（5）聚光器对中旋钮；
（6）孔径光阑；
（7）聚光器模块（包括明视场，DIC）；
（8）滤色块转盘（包括DIC检偏片）；
（9）手动荧光光闸；
（10）电动焦距调节旋钮；
（11）ND减光片；
（12）遥控器；
（13）透射光电源；
（14）汞灯荧光光源；
（15）HUB控制器
2.2显微镜本机操作
前面板控制
1） 状态显示屏； 2） PFS 开关按钮； 3） 光路端口切换按钮； 4） 中间变倍旋纽；
侧面板控制
1） 调焦旋钮 2） 粗微调切换按钮 3） 物镜切换按钮； 4） 滤光块，DIC 检偏器切换按钮
5） 透射光光源开关（当遥控器透射光源
控制按钮打开时，此按钮无效）；
6） 透射光量度调节旋钮（当遥控器透射光源控制按钮打开时，此旋按钮无效）；
7） 物镜复位
8） 物镜向下移动2毫米
电动载物台控制
注意：在使用显微镜之前，要把主机底座右后端的黑色HUB 控制器（显微镜示意图15位置）右侧的电源开关打开。
速度 Coarse ／Fine ／ExFine Coarse ／Fine ／ExFine
调焦手轮
移动模式开关／指示灯
2.3遥控器操作
长寿命汞灯遥控器
2.4软件操作
面板调出方式：
软件灰色空白处鼠标右键菜单选择[Acquisition Controls] -> [Ti Pad]
显微镜控制面板
1） 镜切换按钮
2） 滤光块，DIC 检偏器切换按
钮
3） DIC 检偏器快速切换按钮 4） 光路端口切换按钮 5） PFS ON/OFF
6） 聚光器转盘切换按钮 7） 透射光源控制按钮 8） 荧光光强控制 9） 荧光光闸
物镜切换
PFS 控制
滤光块切换节
荧光照明强度
荧光光闸 光路切换
聚光镜切换 Z 轴调节
明场照明控制
2 1 4
8 SHUTTER ND ND 指示灯
3 5
6
7
9
软件灰色空白处鼠标右键菜单选择[Acquisition Controls] -> [XYZ Navigation]
二向色镜插拔拨杆
移置控制器，将焦点与需要进行焦点保持的位置重合，开始观察。
的动作开始后，无法通过显微镜主体的调焦手轮进行对焦操作。
按下偏移量记忆按钮，可以登录使用偏移旋钮调节的焦点位置
按下调用按钮，可以调用已登录的焦点位置
PFS ON/OFF
偏移量记忆按钮
偏移调用按钮
移置旋钮粗微调切换按钮
图Ti-E正面操作面板与移置控制器
附录：
（一）柯勒照明的调节方法
1）选择10×物镜；
2）调焦，使标本清晰成像；
3）缩小视场光阑（显微镜视图2位置）；
4）上下调节聚光器（显微镜视图3位置），使视场光阑边缘清晰；
5）调节聚光器对中旋钮，使其居中；
6）放大视场光阑，使其刚刚外切于视野。
（二）汞灯电源的注意事项
1）电源打开以后，大约10分钟左右光源达到稳定状态；
2）电源关闭以后，至少要等10分钟才能重新打开。
（三）物镜盖玻片矫正环的调节方法
1）调焦，使图像相对最清楚；
2）把矫正环向一个方向转动一定角度，此时图像变模糊，
调焦，使图像相对最清楚；
3）判断此时的图像质量是否有所改善。
如有改善，则按照
该方向再旋转一定角度；如质量下降，则反方向旋转；
4）重复2）和3）直到图像质量改善之后又有所下降；
反方向旋转，回到倒数第二次的位置即可。
（四）Ti-E 物镜，DIC 插片，DIC棱镜对照表
A1
拍摄流程
（[Laser InterLocked]按钮，解除闪烁状态，使激光可以通过软件起振。
（选择要使用的激光/通道。
（要同时获取共聚焦图像和透射图像时，点击TD [IN]按钮，并勾选TD的勾选框。
（Pinhole的项目中选择要使用的激光波长。
▲Home]按钮，选择与物镜最匹配的针孔尺寸。
（[Live]按钮，边观察图像边调节激光功率和检测器的灵敏度
（512×512等）
（
（
（
LUTs 窗口进行细致的图像显示调节
[Acquisition Controls] -> [A1plus Scan Area]
.4.3扫描区域调节
点击Scan Area 窗口
按钮，用鼠标拖动绿色边框，以缩小扫描区域。
在鼠标变为十字箭头的状态下移动边框，鼠标右击以决定扫描的位置。
可在Zoom 中确认缩放倍率。
在绿色边框的旋转用点上拖动鼠标，可以进行扫描区域的旋转。
在Rotation 中可以确认所设定的旋转角度。
旋转范围为 -90度～90度。
缩放区域点右键后，边框变绿，表示区域选定。
用鼠标拖动绿色边框
缩放倍率
旋转用点
旋转角度
5. XYZ三维图像拍摄
5.1拍摄流程
(1) 点击[XYZ…]按钮，启动Capture Z－Series对话框（如下图）。
(2) 点击[Defined top & bottom]按钮。
(3) 点击[Reset]按钮。
(4) 点击[Live]按钮]，边观察图像边转动显微镜的调焦手轮（微调模式），点击
[Top]按钮，决定Top。
(5) 点击[Live]按钮，边观察图像边转动显微镜的调焦手轮（微调模式），点击
[Bottom]按钮，决定Bottom。
(6) 决定Step
(8) 根据需要，选择[Save to File]，在保存的同时获取图像。
(9) 参照“4.1”Live模式下设置拍摄参数。
(10) 点击[Run now]按钮，获取Z序列图像。
可对三维图像进行下列操作：
●缩放、旋转。
●改变渲染模式、渲染品质及显示比例。
●调节照明。
●整体切割，通道切割……
5.3三维动画制作
（1）将[Show Movie Maker]按钮置于
ON。
（2）点击[Settings]按钮，打开Movie
Maker settings对话框。
）选择已得到的旋转图像，从菜单栏中选择[File] -> [Save As]以进行保存。
6. XYT时间序列图像拍摄
（1）点击[XY Time]按钮，启动Capture Timelapse对话框。
（2）决定时间间隔（Interval）和持续时间（Duration）。
（3）选择[Save to File]，在保存的同时获取图像。
（4）参照“4.1”Live模式下设置拍摄参数。
（5）点击[Run now]按钮，获取时间序列图像。
7. 多点时间序列图像拍摄
(1) 点击[XYZ Time…]按钮，启动ND Acquisition对话框。
(2) 选择[XY]选项卡。
(3) 操作电动载物台的摇杆，移动到要获取的点。
（边观察Live图像边移动会比较方便）
(4) 点击Point Name，登录位置信息。
如果选择Include Z ，则Z位置也会被登录。
可登录的有显微镜的Z位置或完美调焦系统的偏移值（要跟踪的焦点的位置）
(5) 重复上述步骤(3)～(4)，登录所需要的点。
(6) 选择[Time]选项卡。
(7) 决定时间间隔（Interval）和持续时间（Duration）。
(8) 选择[Save to File]，在保存的同时获取图像。
(9) 参照“4.1”Live模式下设置拍摄参数。
(10)点击[Run now]按钮，获取多点时间序列图像。
XYZ Overview面板提供高级载物台与Z轴控制功能
软件灰色空白处，鼠标右击菜单中选择[Acquisition Controls] -> [XYZ Overview]
8. 大图扫描
(1) 从菜单栏中选择[Acquire] -> [Scan Large Image]，启动Scan Large Image窗口。
(2) 设定要扫描的范围。
(3) 针对Z Series进行设定。
(4)设定图像的重叠补偿。
(5)选择有无阴影补偿。
(6) 设定多通道拍摄参数
(7) 在Focus中设定对焦方法。
(8) 选择保存方法。
(9) 选择保存路径和保存格式。
(10) 点击按钮，获取Large Image图像。
