急性髓系白血病AML-MRD的监测(流式细胞术)

MRD检测与AML预后的相关性研究MRD检测与AML预后的相关性研究近年来，随着分子生物学和基因测序技术的快速发展，分子标志物成为白血病预后评估的重要依据之一。

最小残留病(Minimal Residual Disease, MRD) 检测是一种能够确定白血病患者骨髓中残余白血病细胞数量的技术，它在急性髓系白血病（Acute Myeloid Leukemia, AML）的治疗与预后评估中具有重要意义。

AML是一种常见的恶性肿瘤，通常由骨髓干细胞的增殖异常引起。

治疗包括化疗、移植以及靶向药物等，根据患者的基因异常情况和预后风险的评估，在治疗过程中对AML患者进行MRD检测具有重要的指导意义。

MRD检测通常通过骨髓样本的流式细胞术或者聚合酶链反应（PCR）来进行。

在AML患者的诊断和治疗过程中，MRD检测可用于评估治疗的疗效，判断是否需要调整治疗方案，并预测患者的预后。

研究表明，MRD的检测结果与AML患者的预后密切相关。

具体来说，MRD阴性（即未检测到MRD）的AML患者相较于MRD阳性（即检测到MRD）的患者，其生存率明显提高。

这说明在AML的治疗过程中，MRD阳性可能预示着患者仍存在残留病变，而MRD阴性可能意味着患者病情得到较好控制，预后较好。

此外，MRD检测还用于指导AML患者的化疗方案选择和监测治疗的效果。

通过定期进行MRD检测，可以及早发现患者是否存在残留病变，及时调整治疗方案。

这种个体化的治疗策略可以提高治疗效果，并减少治疗相关的不良反应。

虽然MRD检测在AML预后的评估中具有很大潜力，但目前仍存在一些挑战。

首先，MRD的检测方法需要高度灵敏，能够检测到极低浓度的残余病变。

其次，MRD检测没有统一的标准，不同实验室和研究机构采用的方法与指标可能不同，这给结果的可比性带来困扰。

此外，由于AML的异质性，MRD检测方法和指标还需要进一步优化。

综上所述，MRD检测在AML预后评估中起着重要的作用。

成人急性白血病自体造血干细胞移植中国专家共识（2024年版）自体造血干细胞移植是成人急性白血病缓解后的治疗方法之一。

与异基因造血干细胞移植相比，auto-HSCT具有不受供者限制、不发生移植物抗宿主病、移植相关死亡率低等优点；与多疗程的巩固化疗相比，auto-HSCT能显著缩短治疗时间、减轻患者经济负担，提升患者生活质量。

但目前，我国成人AL患者接受auto-HSCT数量较少。

为提高临床医师对auto-HSCT在成人AL治疗中作用和地位的认识、提高auto-HSCT临床疗效，中华医学会血液学分会造血干细胞应用学组制定并发布本共识。

一、 auto-HSCT治疗成人AL的适应证auto-HSCT适用与否取决于患者对治疗的耐受性、疾病危险度分层、移植前疾病状态及有无合适供者等因素。

适合移植的AL患者需全程监测微小残留病/可检测残留病（MRD）状态，MRD持续阴性（连续检测至少两次以上）患者方可行auto-HSCT。

MRD检测手段主要包括多参数流式细胞术（MFC）、实时定量聚合酶链反应（RQ-PCR）技术、数字PCR（dd-PCR）及二代测序（NGS）技术等高通量检测技术，其中dd-PCR和NGS尚处于临床研究阶段，未被常规用于MRD评估。

高龄（≥65岁）并非auto-HSCT的绝对禁忌，除年龄外，还应考虑患者体能状况及心、肺、肝、肾等脏器功能，建议结合造血干细胞移植合并症指数（HCT-CI）等特定风险评估模型进行综合评估。

（一）急性髓系白血病（AML）auto-HSCT的成人AML适应证包括：①预后良好/中等组，1个疗程诱导化疗获得第1次完全缓解（CR1）且MRD持续阴性患者；②预后良好/中等组，2个疗程化疗获得CR1且MRD持续阴性患者；③首次复发后达第2次CR （CR2）且PML-RARα融合基因阴性的急性早幼粒细胞白血病（APL）患者。

（二）急性淋巴细胞白血病（ALL）auto-HSCT的ALL适应证包括：①预后良好组费城染色体阴性（Ph-）获得CR1、MRD持续阴性且充分巩固强化治疗后的患者；②预后不良组Ph-、MRD持续阴性且无合适供者或不适合allo-HSCT的CR1患者；③治疗3个月内标准化疗后实现完全分子学缓解并持续至移植的费城染色体阳性（Ph+）患者。

四色流式细胞术用于急性白血病免疫分型的中国专家共识（完整版）白血病免疫分型是利用不同单克隆抗体检测白血病细胞胞膜和胞质抗原，通过流式细胞术(FCM）分析其表型，实现对白血病细胞系列来源及其分化程度的诊断。

白血病免疫分型已成为诊断白血病的必要依据，同时也可为微小残留病（MRD)的检测以及白血病的治疗和预后提供重要信息。

白血病免疫分型是细胞形态学分型的重要补充和进一步深化，以荧光标记技术联合FCM检测并判定白血病免疫表型，具有准确、快速、客观、重复性好、特异性强等特点，提高了白血病诊断的准确性[1, 2]。

采用不同数量及组合的荧光标记免疫抗体处理白血病细胞并进行荧光检测及分型是免疫分型的关键环节。

准确诊断需要选择一定数量的抗体，白血病免疫分型涉及多个造血系列的抗原，但目前国内甚至国际上均无规范化的方案可以借鉴；国内不同的医疗单位所用的抗体数量和种类均有较大的异质性，有些单位由于应用的抗体数量较少或抗体选择不当，影响对疾病的诊断、分期和预后的判断。

鉴于国内的实际情况，中国免疫学会血液免疫分会临床流式细胞术学组经过多次讨论，提出以CD45/侧向散射光（SSC）为基础的中国FCM急性白血病免疫分型四色方案，本方案以2组表面抗原作为筛查抗原，试图利用相对少的抗体，达到对各个类型白血病进行较全面的检测，具有快速、客观、准确的特点。

已在国内的多家医疗单位试用，证明此方案能够满足临床的需要[3, 4]。

目前，虽然国际上有八色甚至十色方案[5, 6, 7]，但对仪器及操作人员的技术要求较高。

鉴于国内的实际情况，我们首先提出中国FCM急性白血病免疫分型四色方案，供从事急性白血病免疫分型的实验室参考，以期促进我国急性白血病免疫分型诊断的规范化及整体水平的提高。

一、四色方案的基本要求理想的急性白血病免疫分型方案应满足以下几点要求：①识别白血病细胞，能将其与正常细胞或反应性细胞相区别；②鉴别白血病细胞的系列来源；③根据细胞的分化程度对疾病进行亚型分型；④鉴别用于检测MRD 的白血病相关免疫表型(LAIP) ;⑤帮助判断某些特异分子改变，即基因型检测；⑥提供预后相关及治疗靶点的免疫标志检测结果。

列出mrd检测方法(一)MRD检测方法MRD（Minimal Residual Disease）是指在治疗后仍残留在患者体内的极小数量的癌细胞或其他致病微生物。

准确检测MRD对于判断患者的治疗反应和预后具有重要意义。

以下是一些常用的MRD检测方法：流式细胞术（Flow Cytometry）•流式细胞术是一种基于免疫荧光标记的技术，用于检测细胞表面标记物。

•通过在血液或骨髓细胞中使用特定的抗体标记淋巴细胞亚群或白血病细胞，并通过仪器测量它们的荧光强度来判断是否存在MRD。

•优势：高灵敏度，可以同时检测多个标记物。

•缺点：不能准确区分MRD来源于异常克隆细胞还是正常克隆细胞。

定量聚合酶链反应（qPCR）•定量聚合酶链反应是一种可以检测特定DNA序列的方法。

•通过使用合适的引物和荧光探针，对靶DNA进行扩增，并测定荧光信号来定量目标序列。

•优势：高灵敏度，可以定量测定MRD的数量。

•缺点：需要已知的特异性引物和标准品，适用于特定的疾病类型。

基于DNA测序的方法•基于高通量测序的方法对MRD的检测具有高灵敏度和高分辨率的优势。

•可以通过对患者骨髓或血液中的DNA进行测序，通过比对准确鉴定MRD。

•优势：高灵敏度和高分辨率，可以鉴定MRD的突变谱。

•缺点：设备和技术要求较高。

表面增强拉曼散射光谱（SERS）•表面增强拉曼散射光谱是一种能够检测极小分子浓度的方法。

•通过将样本与纳米结构表面接触，利用拉曼散射光谱的特征峰来检测MRD。

•优势：高灵敏度，可以检测极小数量的MRD。

•缺点：技术要求较高，实验条件较为复杂。

多重肽核酸聚合酶链反应（MPCR）•多重肽核酸聚合酶链反应是一种能够同时检测多个序列的方法。

•通过设计具有高特异性的引物和探针，可以同时检测多个与MRD 相关的序列。

•优势：高通量，可以同时检测多个目标序列。

•缺点：需要已知的特异性引物和标准品。

以上是一些常用的MRD检测方法，每种方法都具有不同的优势和限制。

2022年欧洲白血病网络急性髓系白血病诊治指南更新要点解读（全文）2010年以及2017年版欧洲白血病网络（ELN）急性髓系白血病（AML）诊治指南（ELN AML指南）在临床上得到了广泛的应用。

近年来，随着对AML分子生物学发病机制的深入探索，AML在诊断、危险度分层、微小残留病（MRD）评估以及分子靶向药物应用等方面取得了巨大的进步，故有必要对之前版本的ELN AML指南进行修订。

2022年ELN AML指南近期在Blood杂志在线发表，来自10个国家的23位专家对ELN AML 指南进行了修订。

本文就AML诊断与危险度分层、疗效标准以及治疗推荐的更新要点进行相关解读。

1 基于分子生物学的精准诊断2022年ELN AML指南中，分型诊断采用AML国际共识分类标准（ICC），对AML原始细胞的诊断阈值以及新的基因突变诊断意义进行了明确。

强调在定义AML分类时优先考虑基因突变。

根据最新ICC诊断要求，存在重现性基因异常（PML-RARA、CBFB-MYH11、RUNX1-RUNX1T1融合基因等）时，诊断AML要求骨髓或外周血原始细胞比例≥0.10的临界值，并且这一诊断标准可扩展应用于伴有RARA、KMT2A、MECOM等基因重现性改变的患者。

为与慢性粒细胞白血病（CML）加速期相鉴别，对伴有BCR-ABL1融合基因的AML仍要求原始细胞比例≥0.20。

这与既往只要伴有特定重现性基因异常而无论骨髓原始细胞比例如何均可诊断AML有所区别。

2022年ELN AML指南分型首次提出一种新的诊断类型——骨髓增生异常综合征（MDS）/AML，即骨髓或外周血原始细胞比例在0.10~0.19，而之前这类患者被诊断为MDS伴原始细胞增多2（MDS-EB-2）型（2016年版世界卫生组织分类）。

2022年ELN AML指南分型诊断非常强调分子生物学检测在AML诊断中的临床意义。

对于骨髓或外周血髓系原始细胞比例≥0.10的患者，首先要明确是否存在重现性基因异常，之后依次判定是否存在TP53基因突变[变异等位基因频率（VAF）≥10%]、是否伴有髓系发育不良相关基因改变（如ASXL1、BCOR、EZH2等突变）、是否存在髓系发育不良相关细胞遗传学异常[如复杂核型、-7/del（7q）、del（5q）、-17等]，如果不伴有上述分子生物学异常，则可诊断为AML（MDS/AML）非特指型。

血液科常见疾病复发指标在血液科领域，复发是患者及医生都非常关注的问题。

许多血液疾病都有可能在治疗后出现复发，因此对于复发指标的研究和监测显得尤为重要。

本文将探讨血液科常见疾病的复发指标，希望能对相关领域的医生和患者提供一些参考和启示。

一、急性白血病（AML）复发指标急性白血病是一种造血干细胞恶性克隆疾病，治疗往往需要化疗和造血干细胞移植。

在AML患者中，复发是一种常见现象。

以下是一些常见的AML复发指标：1. 微小残余病（MRD）检测：MRD检测通过分析骨髓或外周血样本中残留的白血病细胞，可以判断患者的治疗效果和复发风险。

目前，流式细胞术和聚合酶链反应（PCR）是常用的MRD检测方法。

2. 骨髓形态学检查：骨髓形态学检查是诊断和判断AML患者复发的重要手段。

通过分析骨髓细胞的形态结构和染色情况，可以确定是否存在白血病细胞的复发。

3. 染色体和基因异常：AML患者中常见的染色体和基因异常可以被用作判断复发的指标。

例如，染色体异常t(8;21)和inv(16)与AML复发的风险增加相关。

4. 患者症状和体征：除了实验室指标，患者的症状和体征也是判断AML复发的重要依据。

例如，骨髓抑制、疲劳、发热等都可能是AML复发的表现。

二、慢性骨髓增殖性肿瘤（MPN）复发指标MPN是一组造血干细胞克隆性疾病，包括骨髓纤维化、原发性骨髓增生异常和冷凝集性红细胞增多症等。

以下是一些常见的MPN复发指标：1. 血液学指标：血红蛋白、白细胞计数和血小板计数等血液学指标的变化可以反映MPN患者的复发情况。

例如，血小板计数的持续上升可能是骨髓纤维化的复发表现。

2. 骨髓活检：骨髓活检是判断MPN患者复发的可靠方法。

通过分析骨髓细胞的形态结构和增殖情况，可以确定是否存在肿瘤细胞的复发。

3. JAK2突变检测：JAK2突变是MPN患者中常见的基因异常。

监测JAK2突变的存在和变化可以帮助判断患者的复发风险。

4. 脾脏大小变化：MPN患者在复发时常常出现脾脏肿大。

多参数流式细胞仪检测急性髓细胞白血病微小残留病：挑战与对策常英军;赵晓甦【摘要】多参数流式细胞仪(FCM)是急性白血病微小残留病(MRD)检测的重要手段之一,但在检测急性髓细胞白血病(AML) MRD方面还存在诸多问题.本文讨论了FCM检测AML MRD面临的挑战,并提出相应的对策.【期刊名称】《临床荟萃》【年(卷),期】2016(031)006【总页数】4页(P581-584)【关键词】白血病,髓样,急性;微小残留病;流式细胞术【作者】常英军;赵晓甦【作者单位】北京大学人民医院北京大学血液病研究所造血干细胞移植治疗血液病北京市重点实验室,北京100044;北京大学血液协同创新中心,北京100044;北京大学人民医院北京大学血液病研究所造血干细胞移植治疗血液病北京市重点实验室,北京100044【正文语种】中文【中图分类】R733.72常英军，北京大学人民医院、北京大学血液病研究所、北京市造血干细胞移植重点实验室主任医师，教授，硕士研究生导师。

北京大学血液学系副主任，中华医学会血液学分会第九届青年委员会副主任委员，美国免疫学会国际会员，中国病理生理学会实验血液学会委员，中华医学会细胞生物学分会青年委员等。

长期从事恶性血液病诊治及造血干细胞移植临床及基础研究工作。

目前承担“863”项目、国家自然科学基金面上项目、北京市自然科学基金、首都特色项目及国际合作项目等课题。

获国家科技进步二等奖1项，中华医学科技一、二等奖各1项及中国抗癌协会科技二等奖1项。

现为《New England Journal of Medicine》、《Oncotarget》、《J Hematol & Oncol》、《Clinical and Experimental Immunology》、《Immunobiology》、《Annals of Hematology》、《Human Immunolgy》以及《BMC Hematology》等杂志审稿专家；《中华血液学杂志》、《临床荟萃》等杂志编委。

AM1和MDS的抗体靶向治疗急性髓系白血病(AM1)和骨髓增生异常综合征(MDS)仍然是一种未得到满足的临床需求。

根据修订的国际预后评分量表(IPSS-R),高风险的MDS和具有不利特征的AM1的预后仍然令人沮丧，这些不利特征包括年龄、既往髓系疾病、不良遗传风险和并发基因突变。

事实上，具有极高IPSS-R风险的MDS患者的中位总生存期(OS)仅为0.8年，而年轻患者的新发AM1患者的五年生存率为40%,大于70岁患者的5年生存率不到5%,这突显了亟需新的治疗策略的迫切性。

免疫反应的改变在AM1/MDS发病机制中起着重要作用，这为免疫治疗提供了新的选择。

当前，在免疫系统调节因子中，CD47、免疫检查点和to11样受体2(T1R2)是AM1和MDS的主要靶点。

其他几种表面分子(即CD33、CDI23、CD45和CD70)的多种抗体药物形式，包括裸抗、双特异性T细胞结合器、三特异性抗体以及ADC正在研究中，作为单一疗法或与其它药物联合使用。

它们代表着AM1和高风险MDS治疗的未来。

AM1/MDS的免疫系统功能障碍免疫系统的失调可能通过多种途径影响AM1和MDS的发病机制。

MDS的骨髓微环境以适应性和先天性免疫效应细胞的扰动为特征，一些细胞亚型，如1型先天性淋巴细胞(I1C1)减少以及其他细胞类型，如髓源性抑制细胞(MDSC)增加。

MDSCs增强了caspase-1的危险相关分子模式刺激，其通过分泌颗粒酶B和I1-IO以及通过促进to11样受体(T1R)、CD33和CXCR2的信号传导来促进细胞死亡。

在AM1中也观察到I1C1的功能障碍。

AM1细胞通过多种机制改变免疫微环境，包括免疫检查点上调和人类白细胞抗原(H1A)I类和II类下调，从而逃避免疫监控。

总之，这些证据表明，先天性和适应性免疫应答的改变在AM1和MDS的发病机制中起着重要作用，这也为我们提供了潜在的免疫治疗新靶点。

AM1/MDS的潜在治疗靶点免疫系统调节剂正在成为血液系统恶性肿瘤免疫治疗的主要靶点,包括CD47、免疫检查点和T1R2。