双波长HPLC法测定痢泻灵片中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量

Ｓｔｒａｉｔ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ　Ｖｏｌ　３０　Ｎｏ．７　２０　ｌ　８　

·ｊ　：＝．；　：：　．：　：。：　：　：：．：　

］　；：　．；　：　：　：：．；：；：　：　：：　

Ｌ　．　一～＝二　

ｊ．：；；；：＝ｌ　：　．：＝　．：＝：　：：　

ｊ：；；　；　：　ｌ　．：：．　：　：：二　Ｌ．．Ｌ　：　二一　

］　上一二：：　’　

ｌ　：：　：　ｉ：　ｌ　：：；＝：　：＿二　’　

ｌ　：；！；：＝Ｉ　；：　．：　；；；：　：：　”　

ｊ：　；：　．：　ｌ　．：　；．：　：：：二　

图１　混合对照品溶液和供试品溶液中。淫羊藿苷、　

黄芪甲苷、人参皂苷Ｒｂ。、Ｒｅ和Ｒｇ。的提取离子流图　１．淫羊藿背；２．人参皂苷Ｒｂ．；３．人参皂苷Ｒｅ；４．人参皂苷　

Ｒｇ．；５．黄健甲苷；６．人参皂苷Ｒｄ　

３讨论　

３．１检测方法的选择实验过程中曾尝试使用ＨＰＬＣ—ＵＶ法　测定古汉养生精口服液中淫羊藿苷、黄芪甲苷、人参皂苷　

Ｒｂ。、Ｒｅ和Ｒｇ　的含量，由于黄芪甲苷、人参皂苷Ｒｂ。、和Ｒｇ．　紫外区２０３ｎｍ末端吸收，梯度洗脱过程中基线漂移对其干扰　

大，而质谱具有灵敏度高、干扰少等优点，且ＵＰＬＣ分析速度　

更快，能够在５ｍｉｎ内完全分离五种目标物，故选用超高效液　

相色谱一串联质谱法。　

３．２流动相的选择　流动相的选择参考文献　，分别考察　

了乙腈一醋酸水溶液；乙腈一甲酸铵缓冲液的梯度洗脱，结果显　

示，乙ｔ１￣－ｏ．１％甲酸水溶液（１５：８５）等度洗脱下，五种成分的　

色谱峰良好，无前沿和拖尾现象，且能使供试品溶液中人参皂　苷Ｒｅ与其同分异构体Ｒｄ有效分离，故选定其为流动相。　

３．３样品提取方法的优化本实验对提取样品的溶剂及提　

取时间进行了优化筛选：分别以甲醇、５０％甲醇、水为溶剂　，　

超声提取ｌ０、３０、６０ｍｉｎ古汉养生精口服液；结果以甲醇为溶　

剂超声提取３０ｍｉｎ样品，以ＨＰＬＣ—ＭＳ检测五种待测成分的总　

量计，提取完全，且无杂质干扰，故选用此方法提取样品。　

本实验建立的ＨＰＬＣ—ＭＳ方法可在短时间内快速分离检　测古汉养生精口服液中的淫羊藿苷、黄芪甲苷、人参皂苷　

Ｒｂ。、Ｒｅ和Ｒｇ。的含量＇钡４定结果稳定可靠，重复性好，实用性　强，为该药的全面质量控制提供依据。　

参考文献　［Ｉ］王钰．ＨＰＬＣ法测定古汉养生精片（口服液）中淫羊藿苷的含量　［Ｊ］．甘肃医药，２０１６，３５（１　１）：８１２－８１５．　［２］国家药典委员会编．中国药典：２０１５年版（一部）［Ｓ］．北京：中国　医药科技出版社，２０１５：６．　［３］余健．高效液相色谱一串联质谱法同时测定参麦注射液中９种皂　苷［Ｊ］．中华中医药学刊，２０１４，３２（１）：７１．７４．　［４］傅俊曾．液相色谱－质谱联用同时测定芪参益气滴丸中黄芪甲苷、　丹参素、原儿茶醛、人参皂苷Ｒｇｌ和Ｒｂｌ的含量［Ｊ］．中国药学杂　志，２０１２，４７（１）：６１　［５］唐蕾．液相色谱－质谱联用同时测定芪胶升白胶囊中黄芪甲苷、淫　羊藿苷、阿魏酸的含量［Ｊ］．药物分析杂志，２０１６。３６（１２）：２１９９．　２２０３．　［６］马浩然．ＨＰＬＣ—ＭＳ／ＭＳ法测定１Ｏ批参须中人参皂苷Ｒｇｌ、Ｒｅ、Ｒｂｌ　的含量［Ｊ］．中南药学，２０１７，１５（６）：１０９－１１２．　［７］张金秋．ＲＰ—ＨＰＬＣ法测定人参花中１１个人参皂苷含量［Ｊ］．药物　分析杂志，２０１５。３５（９）：１５９６—１６００．　

双波长ＨＰＬＣ法测定痢泻灵片中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量　

丁　茹（安徽省马鞍山市食品药品检验中心中药室马鞍山２４３０００）　

摘要：目的建立用双波长ＨＰＬＣ法测定痢泻灵片中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯含量的方法。方法采用双波长高效液相色谱法，色谱柱：　

ｃｌ８反相色谱柱，流动相：甲醇一水（５５：４５），检测波长：穿心莲内酯２２５ｎｍ，脱水穿心莲内酯２５４ｎｍ。结果　穿心莲内酯在Ｏ．０４～０．８１Ｉｘｇ范围内，　

其峰面积与浓度呈良好的线形关系Ｙ＝２．２３０２　ｘ　１０　ｘ一１０４４６（相关系数ｒ＝０．９９９９），平均回收率为１００．Ｏ％．ＲＳＤ为１．４％（ｎ：６）。脱水穿心　莲内酯在０．０４～０．８０ｔｒｇ范围内，其峰面积与浓度呈良好的线形关系Ｙ＝１．７７１６×１０　Ｘ一７６４３（其中相关系数ｒ＝０．９９９９），平均回收率为　

１００．７％，ＲＳＤ为１．５％（ｎ＝６）结论本方法快速、准确、重复性好，可用于测定痢泻灵片中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量。　关键词：高效液相色谱法；痢泻灵片；穿心莲内酯；脱水穿心莲内酯　中图分类号：Ｒ９２７文献标识码：Ａ文章编号：１００６－３７６５（２０１８）－０７－０８２０８－００７７－０３　

Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ａｎｑｒｏｇｒａｐｈｏｌｉｄｅ　ａｎｄ　Ｄｅｈｙａｎｄｒｏｇｒａｐｈｏｌｉｄｅ　ｉｎ　ＬｉＸｉｅＬｉｎｇ　

Ｔａｂｌｅｔｓ　ｂｙ　Ｈ　ＰＬＣ　Ｗｉｔｈ　Ｄｕａｌ—ｗａｖｅｌｅｎｑｔｈ　一　一　ＤＩＮＧ　Ｒｕ（Ｍａａｎｓｈａｎ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｆｏｒ　Ｆｏｏｄ　ａｎｄ　Ｄｒｕｇ　Ｃｏｎｔｒｏｌ，Ｍａａｎｓｈａｎ　２４３０００，Ｃｈｉｎａ）　

作者简介：丁茹。联系电话：０５５５．３５５６６９２　

·７７·

　海峡药学２０１８年第３０卷第７期　

ＡＢＳＴＲＡＣＴ：ＯＢＪＥＣＴＩＶＥ　Ｔｏ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈ　ａ　ＨＰＬＣ　ｗｉｔｈ　ｄｕａ１．ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｎｄｒｏｇｒａｐｈｏ１．　

ｉｄｅ　ａｎｄ　ｄｅｈｙａｎｄｒｏｇｒａｐｈｏｌｉｄｅ　ｉｎ　ＬｉＸｉｅＬｉｎｇ　ｔａｂｌｅｔｓ．ＭＥＴＨＯＤＳ　Ｂｙ　ｈｉｇｈ　ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ　ｌｉｑｕｉｄ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　ｗｉｔｈ　

ｄｕａｌ—ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ，ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　ｃｏｌｕｍｎ　ｗａｓ　Ｃ　ｌ８，ｍｏｂｉｌｅ　ｐｈａｓｅ　ｗａｓ　ｍｅｔｈａｎｏｌ—ｗａｔｅｒ（５５：４５），ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ　

ｗａｓ　２２５　ｎｍ　ｏｆ　ａｎｄｒｏｇｒａｐｈｏｌｉｄｅ　ａｎｄ　２５４ｎｍ　ｏｆ　ｄｅｈｙａｎｄｒｏｇｒａｐｈｏｌｉｄｅ．ＲＥＳＵＬＴＳ　Ｔｈｅ　ａｎｄｒｏｇｒａｐｈｏｌｉｄｅ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｒａｎｇｅ　ｏｆ　

０．１～１．６ｕｇ，ｔｈｅ　ｐｅａｋ　ａｒｅａ　ａｎｄ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｈａｄ　ｇｏｏｄ　ｌｉｎｅａｒ　ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ　ｗｉｔｈ　Ｙ＝５．０９５８×１０　Ｘ一４３４７（ｒ＝　

０．９９９９），ｔｈｅ　ａｖｅｒａｇｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｗａｓ　１００．Ｏ％，ＲＳＤ　ｗａｓ　１．４％（ｎ＝６）．Ｔｈｅ　ｄｅｈｙａｎｄｒｏｇｒａｐｈｏｌｉｄｅ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｒａｎｇｅ　ｏｆ　０．２～　

２．４　，ｔｈｅ　ｐｅａｋ　ａｒｅａ　ａｎｄ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｈａｄ　ｇｏｏｄ　ｌｉｎｅａｒ　ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ　ｗｉｔｈ　Ｙ＝５．３６８１　Ｘ　１０　Ｘ＋２４９１８（ｒ＝０．９９９９），ｔｈｅ　

ａｖｅｒａｇｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｗａｓ　１００．７％，ＲＳＤ　ｗａｓ　１．５％（ｎ＝６）ＣＯＮＣＬＵＳＩＯＮ　Ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｉｓ　ｒａｐｉｄ，ａｃｃｕｒａｔｅ　ａｎｄ　ｒｅｐｒｏｄｕｃｉ－　

ｂｌｅ．Ｉｔ　ｃａｎ　ｂｅ　ｕｓｅｄ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｎｄｒｏｇｒａｐｈｏｌｉｄｅ　ａｎｄ　ｄｅｈｙａｎｄｍｇｒａｐｈｏｌｉｄｅ　ｉｎ　ＬｉＸｉｅＬｉｎｇ　ｔａｂｌｅｔｓ．　

ＫＥＹ　ＷＯＲＤＳ：Ｈｉｇｈ　ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ　ｌｉｑｕｉｄ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ；ＬｉＸｉｅＬｉｎｇ　ｔａｂｌｅｔｓ；Ａｎｄｒｏｇｒａｐｈｏｌｉｄｅ；Ｄｅｈｙａｎｄｒｏｇｒａｐｈｏｌｉｄｅ　

痢泻灵片由苦参、穿心莲、拳参三味中药组成，具有止痢　止泻、清热解毒的功效，用于热泻、湿热痢疾等症…。原标准　

收载于卫生部药品标准中药成方制剂第二册，仅有检查项目。　

本文通过建立用双波长高效液相色谱法测定穿心莲内酯和脱　

水穿心莲内酯含量的方法来控制痢泻灵片中穿心莲的质量，　

此方法能同时测定两个组分的含量，具有较高的分离度和理　

论板数，且快速、准确，重复性好，可用于此药的质量控制。　

１仪器与试药　Ｗａｔｅｒｓ２６９５－２４８９高效液相色谱仪（美国ｗａｔｅｒｓ公司）；　

ＫＱ－５００Ｂ超声波清洗机（昆山市超声仪器有限公司）；ＨＨ４　

恒温数显水浴锅（国华电器有限公司）；ＮｅｗＣｌａｓｓｉｃＭＳ电子天　平（梅特勒０．０１ｍｇ）；穿心莲内酯对照品（１１０７９７—２０１６０９供含　

量测定用，含铤以９９．７％计，冷处保存，使用前无需干燥处　

理），购于中国食品药品检定研究院；脱水穿心莲内酯对照品　

（供含量测定用，批号１１０８５４－２０１５０９，含量以９９．４％计，冷处　

保存，使用前无需干燥处理），购于中国食品药品检定研究　

院；所用甲醇为色谱纯，其余为分析纯。痢泻灵片（批号为　

２０１６０５０２）为马鞍山市食品药品检验中心中药室提供，痢泻灵　

片（批号为２０１６０５０３、２０１６０２０２）自购于马鞍山市健康大药　

房。标示片重均为０．４ｇ／片。　

２方法与结果　２．１色谱条件色谱柱：ＣＩ８反相色谱柱（Ａｇｉｌｅｎｔ　５１．Ｌｍ　４．６×　

１５０ｍｍ）　；柱温３０℃；甲醇·水（５５：４５）　；流速：１．０ｍＬ·　

ｍｉｎ～；检测波长：穿心莲内酯２２５ｎｍ，脱水穿心莲内酯　

２５４ｎｍＨ　；进样量：ＩＯＩ￣Ｌ。理论板数：按穿心莲内酯峰计算不　

得少于２０００。　２．２溶液制备　２。２．１对照品溶液的制备：取穿心莲内酯对照品及脱水穿心　

莲内酯对照品适量，精密称定，用甲醇制成每１ｍＬ分别含　

０．０４０６４ｍｇ穿心莲内酯和０．０４０１２ｍｇ脱水穿心莲内酯的混合　

溶液，即得。　２．２．２供试品溶液的制备：取本品２０片，精密称定，研细，取　

１．６ｇ（约４片量），置具塞锥形瓶中，密塞，称定重量，精密加入　

４０％甲醇２５ｍＬ，浸渍１ｈ，超声处理３０ｍｉｎ　］，放冷，再称定重　

量。用４０％甲醇补足减失的重量，滤过，精密量取续滤液　

１０ｍＬ，置中性氧化铝柱（２００—３００目，５ｇ，内径为１．５ｃｍ）上，　

·７８·　用甲醇１５ｍＬ洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用甲醇适量溶解，　

转移至１０ｍＬ容量瓶中，定容，滤过（０．２２１￣ｍ），即得。　２．２．３阴性对照溶液的制备：按照处方，除去穿心莲，取其余　

药味制成痢泻灵片，再根据供试品溶液制备方法，制成阴性对　

照溶液。　

２．３系统适用性试验　

２．３．１理论板数的测定：取混合对照品溶液，按上述色谱方　法进样，测得理论板数：穿心莲内酯为３１８３；脱水穿心莲内酯　为６７２６，由于不同色谱柱的理论板数有差异，因此选择按穿　

心莲内酯峰计算不少于２０００。　

２．３．２分离度测定：取供试品溶液，按照上述色谱方法进样，　

测得穿心莲内酯与相邻杂质峰分离度为３．１，脱水穿心莲内　

酯与相邻杂质峰分离度为１２．５，均大于１．５。　

２．４专属性试验取以上对照品溶液、供试品溶液和阴性对　

照溶液，按照上述色谱条件进样，记录色谱图（见图１）。　

■　Ａ对照品（２２５ｎｍ）　

ｃ供试品（２２５ｒａｎ）　Ｄ供试品（２５４ｎｍ）