扇贝多糖抗鸭乙型肝炎病毒作用

扇贝有什么功效与作用扇贝（Pectinidae），属于软体动物门双壳纲，是一种被广泛食用的贝类。

扇贝味美，营养丰富，被誉为海洋之宝。

它含有丰富的蛋白质、维生素和矿物质，具有多种保健功效和作用。

在中医学中，扇贝也被称为“滋阴之品”，被用来治疗多种疾病。

下面，我们来详细介绍一下扇贝的功效与作用。

一、提供丰富的蛋白质和营养物质扇贝是一种蛋白质含量非常丰富的食物，蛋白质是构成人体细胞的基本成分，对于细胞的修复和再生非常重要。

另外，扇贝中还富含铁、锌、硒、钙等矿物质，这些矿物质对于人体的生长发育、身体的健康维护至关重要。

二、增强免疫力和抗疲劳扇贝中富含的多种维生素和矿物质，可以增强人体的免疫力，提高身体抵抗疾病的能力。

同时，扇贝中还含有一种叫做辅酶Q10的物质，它可以帮助人体合成能量，增强体力，减少疲劳感。

三、调节血脂和血糖扇贝富含的不饱和脂肪酸，可以降低血液中的胆固醇和甘油三酯含量，减少心脑血管疾病的发生。

此外，扇贝中的天冬氨酸和硒等成分，还可以帮助调节血糖水平，减少糖尿病的风险。

四、促进肠道健康和消化扇贝中含有丰富的膳食纤维，可以促进肠道蠕动，改善便秘问题。

膳食纤维还可以提供益生菌的生长环境，维持肠道菌群的平衡，促进营养吸收和排泄。

此外，扇贝中的维生素B12可以帮助消化系统正常运作，促进食物的消化和吸收。

五、改善贫血和调节月经扇贝中的铁和维生素B12是造血的关键成分，可以帮助人体合成红细胞，预防贫血的发生。

对于女性来说，扇贝还具有调节月经的作用，可以缓解痛经和月经不调等问题。

在中医学中，扇贝被认为是一种滋阴的食物，有清热解毒、补血养颜、滋阴润燥等功效。

扇贝还可以解毒清热，对于中暑、痈肿、口腔溃疡等疾病有一定的治疗作用。

总结起来，扇贝具有多种保健功效和作用。

它能够提供丰富的蛋白质和营养物质，增强免疫力和抗疲劳能力，调节血脂和血糖，促进肠道健康和消化，改善贫血和调节月经等。

此外，扇贝还具有滋阴、清热解毒和补血养颜的中医功效。

扇贝的功效与作用扇贝是一种珍贵的海产品，具有丰富的营养成分，不仅美味可口，而且对于人体健康也有许多功效和作用。

以下是关于扇贝的功效与作用的详细介绍。

一、营养价值：扇贝富含蛋白质、碳水化合物、脂肪、维生素（特别是维生素B12和叶酸）、矿物质（特别是锌、铁、硒等必需的微量元素）、多种氨基酸以及丰富的牛磺酸和肽类物质。

其中，牛磺酸和牛磺酸肽具有调节血脂、保护心血管和提高免疫力的作用，对于减少心血管疾病的发生具有重要意义。

二、抗癌作用：扇贝富含丰富的硒，硒元素是一种重要的抗氧化剂，可以阻止自由基对细胞的损害，起到抗癌作用。

研究表明，扇贝中的效SOD活力的一项指标可达到高水平，该指标可以协助人体处理自身产生的有毒物质，减少患癌症的风险。

三、滋补强身：扇贝的肉质鲜嫩且易于消化吸收，是一种高蛋白、低脂肪、低胆固醇的食品。

长期食用扇贝可以补充人体需要的多种营养素，增强身体的免疫力。

同时，扇贝还含有丰富的铁元素，对缺铁性贫血有很好的治疗效果。

四、养颜美容：扇贝中含有丰富的胶原蛋白，胶原蛋白是一种重要的结缔组织蛋白，对皮肤的弹性和光泽有着重要的作用。

经常食用扇贝可以增加胶原蛋白的合成，使皮肤更加紧致光滑，具有养颜美容的作用。

五、提高智力：扇贝中含有多种矿物质，特别是锌元素，锌是大脑活性酶的重要成分之一，对大脑功能的发育和活动有着重要的作用。

适量摄入扇贝可以增加锌的摄入量，有助于提高智力水平，促进大脑发育。

六、强健骨骼：扇贝中含有丰富的钙元素，钙是构成人体骨骼和牙齿的重要成分，对于骨骼的发育和健康有着重要的作用。

适量摄入扇贝可以提供人体所需的钙元素，有助于增加骨密度，预防骨质疏松症的发生。

七、降低胆固醇：扇贝中富含Omega-3脂肪酸，Omega-3脂肪酸是一种不饱和脂肪酸，可以降低胆固醇、减少血小板凝聚和改善血液循环。

长期食用扇贝可以降低血脂，预防心脑血管疾病的发生。

综上所述，扇贝具有丰富的营养成分和多种功效与作用。

蜗牛多糖的提取和体外抗乙型肝炎病毒作用研究的开题报告一、研究背景及意义乙型肝炎病毒（HBV）是一种常见的病毒性疾病，全球范围内仍然是一个健康问题，造成了严重的健康危害。

HBV感染会导致急性和慢性肝炎、肝硬化和肝癌。

目前，临床上用于乙型肝炎的治疗主要是抗病毒药物，这些药物具有明显的副作用和药物抗性问题，因此需要寻找更为有效的治疗方法。

蜗牛多糖是一种天然多糖，由于其天然、无毒副作用、具有多种生物活性等优点，因此倍受科学家们的关注。

以往的研究表明，蜗牛多糖具有多种生物活性，如抗菌、抗肿瘤、抗氧化等，但其在抗HBV领域的研究还比较有限，因此有必要对其进行深入研究。

目前发现蜗牛多糖对HBV的抑制作用较好，但其具体的体外抗HBV 机制尚未明确，需要进一步研究。

因此，本研究旨在探讨蜗牛多糖的提取方法和体外抗HBV作用机制，为其开发新型的抗病毒药物提供实验依据。

二、研究内容及方法1、蜗牛多糖的提取方法研究本研究将通过改进传统提取方法，优化提取蜗牛多糖的方法。

提取后对提取物进行组分分析，包括多糖、蛋白质、多酚等组分的定性和定量分析。

2、体外抗HBV作用研究采用HBV-3.5 稳定细胞株和HBV小鼠模型进行实验验证。

实验中采用不同浓度的蜗牛多糖对HBV抑制效果进行评估，通过检测细胞凋亡、HBV-DNA、HBsAg、HBeAg等指标来评估其抗HBV作用机制。

三、预期研究结果本研究预期找到一个高效的蜗牛多糖提取方法，进一步深入探讨其抗HBV作用机制，确定其体外抗HBV作用的有效浓度及最佳剂量，为蜗牛多糖开发新型抗病毒药物提供实验依据。

同时，对于深入探究多糖与HBV之间的作用机制、了解蜗牛多糖化学成分与其体外抗HBV作用机理有助于未来更深入的研究。

四、研究难点与解决方法1. 难点：蜗牛多糖体外抗HBV作用机制尚未明确。

解决方法：结合现有文献及前期实验发现，通过多角度分析不同指标进行研究，以期达到完善的研究结果。

2. 难点：优化蜗牛多糖提取方法。

鸭乙型肝炎病毒DHBV的流行病学调查鸭乙型肝炎病毒（DHBV）是一种主要感染家禽鸭类的病毒，引起鸭的肝炎。

DHBV与人类乙型肝炎病毒（HBV）有着相似的结构和生物学特性，因此被广泛用作动物模型来研究乙型肝炎病毒感染和预防。

对DHBV的流行病学调查能够为预防和控制该病毒的传播提供重要数据，下面我们就对DHBV的流行病学调查展开详细的介绍。

一、病毒概况DHBV是一种双链DNA病毒，属于鸭肝炎病毒科（Hepadnaviridae），主要感染鸭和鹅等禽类动物。

DHBV感染后会引起鸭的肝炎和其他严重的肝脏疾病，对禽类养殖业造成了严重的经济损失。

DHBV与HBV之间在病毒结构、传播途径和致病机制等方面存在很多相似之处，因此在研究HBV感染的治疗和疫苗研发方面具有很高的参考价值。

二、传播途径DHBV主要通过接触受感染动物的体液、粪便和污染的饲料等途径进行传播。

受感染的鸭子在疾病潜伏期内会分泌大量的病毒，导致周围环境的污染。

孵化的鸭宝宝也能够通过卵母传播病毒。

饲养环境卫生条件差、饲料和饮水受污染、禽类密集饲养等因素也是导致DHBV传播的重要原因。

三、临床表现DHBV感染后，受感染的鸭子会出现明显的症状，主要表现为食欲下降、体重减轻、腹水积聚、乏力和肝脏肿大等症状。

部分鸭子还会出现肝功能异常和黄疸等临床表现。

在临床症状方面，DHBV感染与HBV感染有很多相似之处，具有很高的临床诊断价值。

四、流行病学调查为了了解DHBV的传播规律和危害程度，开展DHBV的流行病学调查具有非常重要的意义。

流行病学调查主要包括对患病率、死亡率、年龄分布、性别差异、季节性分布以及传播途径等方面的调查。

通过详细的流行病学调查，可以为进一步的病毒防控提供参考依据。

1.患病率调查通过对不同地区、不同禽类养殖场的鸭群进行抽样调查，了解DHBV的患病率情况。

调查过程中需收集样本进行实验室检测，确诊患病的鸭子，并通过统计分析计算出不同区域、不同养殖场的患病率，为进一步的防控工作提供依据。

鸭病毒性肝炎（Duck Viral Hepatitis，DVH）是由鸭肝炎病毒（Duck Hepatitis Virus，DHV）引起的一种急性、致死性传染病。

本病主要感染1月龄以内的雏鸭，尤其以2周龄及21日龄左右的雏鸭易感染，给养鸭业造成巨大经济损失。

免疫接种是目前预防和控制鸭肝病毒性炎的主要手段，免疫接种可以通过接种卵黄抗体、弱毒苗的方式进行免疫，免疫接种的时间一般1日龄。

本试验通过接种弱毒苗的方式进行免疫。

雏鸭抗应激能力差，免疫接种鸭病毒性肝炎疫苗后易引起鸭应激，影响肉鸭的生长性能。

黄芪多糖（Astragalus polysaccharides，APS）是中药黄芪的主要成分之一。

柳志余（2013）研究表明，黄芪多糖具有调节机体免疫功能的作用。

有研究证明，黄芪多糖能显著提高机体的细胞免疫和体液免疫，体液免疫作用是通过作用于特异性体液免疫和非特异性体液免疫途径中的某些环节（郑嫩珠等，2016）。

肖娅楠（2013）试验表明，饲粮中添加黄芪多糖可促进肉鸡生长，提高免疫器官指数。

本试验旨在研究在日粮中添加黄芪多糖对肉鸭免疫病毒性肝炎疫苗后的影响，为其在肉鸭养殖中的应用提供参考。

1　材料与方法1.1　试验药品与试剂　鸭病毒性肝炎二价（1+3型）灭活疫苗（YB3株十GD株）来自广东永顺生物制药股份有限公司；黄芪多糖，购自石家庄制药集团河北制药公司（纯度≥98%）。

鸭皮质醇（Cortisol）ELISA试剂盒，购自上海仁捷生物科技有限公司；鸭促肾上腺皮质激素（ACTH）ELISA 试剂盒，购自上海仁捷生物科技有限公司。

1.2　试验动物　1日龄的健康樱桃谷肉鸭。

1.3　试验设计与管理　试验选取1日龄健康樱桃谷鸭300只，随机分成3组，空白对照组、免疫组、免疫+黄芪多糖组，每组5个重复，每个重复20只鸭。

对照组饲喂基础日粮，不进行病毒性肝黄芪多糖对肉鸭病毒性肝炎免疫应激及生长性能的影响李桂芹1*，肖丰庆2，宗玉东3（1.滨州职业学院生物工程学院，山东滨州 256603；2.南平市动物疫病预防控制中心，福建南平 353000；3.广饶县畜牧局，山东广饶 257300）[摘要]文章旨在研究黄芪多糖对肉鸭病毒性肝炎免疫应激的缓解作用及生长性能的影响。

海湾扇贝多糖的提取、纯化及抗肿瘤活性研究癌症是当前严重危害人类健康、威胁人类生命的主要常见病之一, 并且逐渐全球化。

天然生物来源的抗肿瘤活性药物具有广谱、高效、毒副作用小的特点, 在抗癌药物的研发中占有非常重要的地位, 其中, 多糖类物质因生物活性广泛,而成为了医学领域国内外专家学者普遍关注的焦点之一。

海洋是生命的起源地, 高盐、高压、低温、光照不足的特殊环境使海洋生物体内的多糖与陆生生物相比具有很大的差别, 因此, 海洋抗肿瘤活性多糖的研究尤其引人瞩目。

扇贝是重要的海洋生物资源之一, 营养价值高且含有多种生物活性成分, 在海洋抗癌药物研究中具有很好的应用和开发前景。

本研究以海湾扇贝为原料, 进行扇贝多糖的提取和纯化, 并对其抗肿瘤活性进行研究, 为扇贝多糖的进一步研究及应用奠定基础。

主要研究结果如下: （1）海湾扇贝粗多糖的提取工艺研究: 采用热水、二次浸提法提取海湾扇贝粗多糖, 通过单因素试验和响应曲面法试验设计对海湾扇贝粗多糖提取工艺进行优化,确定了最佳提取工艺条件为浸提温度90℃、液固比50.0mL/g、浸提时间180min, 在此条件下海湾扇贝粗多糖的平均提取率约为57.7mg/g。

（2）海湾扇贝粗多糖纯化和分离技术研究: 对海湾扇贝多糖的蛋白质脱除方法进行比较, 结果表明75%乙醇沉淀结合TCA法处理能较好地去除多糖中的蛋白质, 脱除率可以达到91.80%。

DEAE-52纤维素离子交换层析分离结果表明海湾扇贝多糖由中性多糖和酸性多糖两部分组成, 其中, 酸性多糖为其主要成分,但酸性多糖的具体组成和结构还需要进一步研究。

（3）海湾扇贝多糖体外抗肿瘤效果及机制研究: 采用MTT比色法检测海湾扇贝多糖对体外培养的不同肿瘤细胞的增殖抑制作用, 利用光学显微镜、扫描电子显微镜、透射电子显微镜及流式细胞仪观察、分析其对不同肿瘤细胞的细胞形态、显微结构、超微结构及细胞周期的影响。

结果表明, 海湾扇贝多糖对体外培养的肿瘤细胞具有直接的细胞毒性作用, 能够抑制体外培养的小鼠黑色素瘤细胞株B16F10、人卵巢上皮癌细胞株SKOV3和人肝癌细胞株HepG2的生长；经20.0mg/mL海湾扇贝多糖处理后, 三种肿瘤细胞的细胞形态、显微结构和超微结构均发生了改变, 表现为细胞皱缩、透明度降低、细胞密度降低、膜结构改变、核结构改变、核内染色质固缩等, 并可对细胞周期产生不同程度的阻抑作用, 说明海湾扇贝多糖可通过对肿瘤细胞的直接作用而发挥抗肿瘤的效果。

海洋生物多糖在免疫增强中的应用研究近年来，随着人们对健康意识的提高和科学技术的发展，寻找天然资源来提高免疫力成为一种热门研究方向。

海洋生物多糖，作为一种具有潜在药用价值的生物活性物质，引起了广泛的关注。

本文将探讨海洋生物多糖在免疫增强中的应用研究。

一、海洋生物多糖的概述海洋生物多糖是指从海洋生物体中提取得到的具有多糖结构的化合物。

它们主要包括藻类、甲壳动物、软体动物和鱼类等海洋生物所含有的多糖物质。

这些多糖物质的结构和功能十分复杂多样，具有很高的潜在生物活性。

二、海洋生物多糖在免疫增强中的作用机制海洋生物多糖在免疫增强中起到了十分重要的作用。

它们可以通过多种途径来调节免疫系统的功能，增强机体的免疫力。

海洋生物多糖可以通过激活免疫细胞，增加细胞因子的分泌，促进单核细胞和巨噬细胞的活性，从而提高机体的抗病能力。

此外，海洋生物多糖还可以增加抗体的生成，改善免疫球蛋白的功能，从而增强机体的免疫应答。

三、海洋生物多糖在免疫增强中的应用研究为了更好地利用海洋生物多糖的免疫增强作用，科研人员们进行了大量的应用研究。

他们通过对海洋生物多糖的提取和纯化，以及对其免疫增强机制的深入研究，探索了其在医学领域的应用潜力。

研究表明，海洋生物多糖可以用于制备免疫增强药物、抗肿瘤药物和抗感染药物等。

在实验室和临床研究中，海洋生物多糖表现出了明显的免疫增强效果，并且对许多疾病具有一定的治疗作用。

四、海洋生物多糖在免疫增强中的前景展望海洋生物多糖在免疫增强中的应用前景广阔。

随着对海洋资源的深入开发和利用，越来越多的海洋生物多糖将被发现并应用于免疫学领域。

未来，海洋生物多糖可能成为一种具有广泛临床应用前景的天然免疫增强物质。

同时，对于海洋生物多糖的研究仍然存在许多挑战，如纯化技术的改进、安全性评价以及合理用药的研究等。

只有克服这些挑战，才能更好地实现海洋生物多糖在免疫增强中的应用。

总结：海洋生物多糖作为一种有着重要研究价值的生物活性物质，其在免疫增强中的应用研究具有广阔的前景。

蜗牛多糖体外抗乙型肝炎病毒作用研究
湛孝东;王克霞;李朝品
【期刊名称】《中国实验方剂学杂志》
【年(卷),期】2008(14)3
【摘要】目的:探讨蜗牛多糖抗乙肝病毒活性。

方法:将不同浓度蜗牛多糖与HepG2.2.15细胞株共培养,以拉米夫定为阳性对照药,用ELISA法检测HBsAg和HBeAg分泌水平,实时荧光定量PCR检测HBV DNA含量,计算抑制率。

结果:蜗牛多糖在体外能有效抑制HepG2.2.15细胞HBsAg和HBeAg分泌,最大抑制率分别为42.8%和52.1%;对HBV DNA的复制有一定抑制作用(P<0.05)。

结论:蜗牛多糖在体外具有显著的抗乙型肝炎病毒作用,且毒性较小,具有良好应用前景。

【总页数】4页(P66-68)
【关键词】蜗牛多糖;HepG2.2.15细胞;乙型肝炎病毒
【作者】湛孝东;王克霞;李朝品
【作者单位】皖南医学院,安徽芜湖241002;安徽理工大学医学院,安徽淮南232001
【正文语种】中文
【中图分类】R285.5
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3.琐琐葡萄多糖体外抗乙型肝炎病毒作用的实验研究 [J], 刘涛;赵军;李海波;马龙
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5种中药提取物对鸭乙型肝炎病毒逆转录酶和DNA聚合酶的抑制作用黄正明;杨新波;曹文斌;绍兴无;陈鸿珊【期刊名称】《解放军药学学报》【年(卷),期】1997(000)002【摘要】本文试验水芹、龙胆、旋复花、人黄、黄芪5种中药粗提物对鸭乙型肝炎病毒逆转酶(DHBV-RT)和DNA聚合酶(DHBV-DNAP)的抑制作用。

结果表明,药物对DHBV-RT和DHBV-DNAP的抑制特性类似。

5种中药粗提物对上述两种酶都有不同程度的抑制作用,按强弱顺序依次为水芹、旋复花、龙胆、大黄和黄芪。

阳性对照药-膦羧基甲酸钠(PFA)对DHBV-RT和DHBV-DNAP的抑制作用均较强。

提示,水芹等5种中药可能有抗乙肝病毒作用。

【总页数】3页(P71-73)【作者】黄正明;杨新波;曹文斌;绍兴无;陈鸿珊【作者单位】[1]解放军北京医学高等专科学校药理教研室;[2]中国医学科学院医药生物技术研究所病毒室;[3]解放军北京医学高等专科学校药理教研室北京100071;[4]北京100071;[5]北京100071【正文语种】中文【中图分类】R285.5【相关文献】1.疏肝利胆冲剂对鸭乙型肝炎病毒DNA聚合酶和逆转录酶活性抑制作用的… [J], 吕亚滨;唐蕙兰2.六月青乙醇提取物对鸭乙型肝炎病毒DNA的抑制作用 [J], 张士军;陈兆霓;林兴;黄春喜;黄仁彬3.儿茶素衍生物对人免疫缺陷病毒逆转录酶及DNA聚合酶的抑制作用 [J], 陶佩珍;程书钧4.鸭乙型肝炎病毒DNA聚合酶和逆转录酶在抗乙型肝炎病毒药物研究中的应用[J], 郭巨涛;陈鸿珊;唐小山;康淑卿5.羊开口提取物的分离及对艾滋病毒逆转录酶和DNA多聚酶活性的抑制作用 [J], 孟正木;小野克彦;中根英雄;小濑洋喜;坂井至通因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

扇贝多糖口服液制备工艺研究蔡坤; 李文婷; 梁志坚; 史福林; 刘杨【期刊名称】《《汕头大学学报（自然科学版）》》【年(卷),期】2019(034)004【总页数】10页(P3-12)【关键词】扇贝; 多糖; 微波辅助提取; 免疫活性; 口服液; 制备工艺【作者】蔡坤; 李文婷; 梁志坚; 史福林; 刘杨【作者单位】汕头大学理学院广东汕头515000【正文语种】中文【中图分类】TS218栉孔扇贝（Chlamys farreri）为海洋软体动物瓣鳃纲贝类，又名海扇，其营养丰富，肉质鲜美可口，具有很高的食用价值.有资料表明扇贝含有丰富的蛋白质、糖类脂肪、维生素、微量元素等营养成分[1-5]，每100 g 扇贝瑶柱中含蛋白质63.7 g、脂肪3 g、糖类15 g、钙47 mg、磷886 mg 和铁2.9 mg 等[6]，其中糖类含量丰富，仅次于蛋白质含量.研究还发现，扇贝中的多种生物活性成分，具有很高的药用和保健价值.其中多糖是扇贝生理活性物质的主要组成部分，具有抗肿瘤、抗氧化、增强机体免疫能力、抗病毒等多种生理功能[7-13]，对扇贝多糖的研究将为扇贝的高值化利用提供依据，因此扇贝多糖口服液开发具有十分广阔的商业应用前景.本研究主要通过微波辅助热水浸提法提取扇贝粗多糖，利用双水相体系、透析技术纯化，真空干燥后得粗多糖干粉.利用所得的多糖进行吞噬细胞吞噬和活化实验，以探究其免疫活性.再将提取所得多糖与白砂糖、柠檬酸、蜂蜜共同调配成口服液.制备过程中以多糖得率和感官评定分数为指标，分别考查扇贝多糖的提取方法和口服液配方组成等因素，优选扇贝多糖提取工艺及口服液制备配方，为扇贝的进一步开发和利用提供参考.1 材料与方法1.1 实验材料与仪器1.1.1 实验材料实验用扇贝瑶柱由江苏连云港洋溢海鲜馆提供，取自栉孔扇贝（Chlamys farreri）.在50°C下烘干，研磨成扇贝干粉后备用.扇贝粗多糖（CFP）：按微波功率650 W、微波提取时间15 min、微波温度50℃及液料比60∶1 的条件处理扇贝干粉，提取液经双水相体系、透析技术纯化后冷冻干燥后备用.用于细胞试验的试样溶液均在临用前用细胞培养液配制，经0.22μm 滤膜过滤除菌，备用.RAW 264.7 细胞株来自武汉普诺赛科技有限公司，磷酸缓冲盐溶液（PBS）、脂多糖（LPS）购于北京索莱宝科技有限公司，DMEM 高糖培养基、胎牛血清（FBS）、胰酶消化液、青-链霉素双抗均购于Gibco 公司，二甲基亚砜（DMSO）购于麦克林公司，硫酸铵、无水乙醇为分析纯，均购于国药集团化学试剂有限公司；透析袋（截留分子量：2000 g/mol）购于美国Spectrum laboratories 股份有限公司；柠檬酸、白砂糖、蜂蜜均为食用级.1.1.2 实验仪器CW-2000 型超声-微波协同萃取仪（上海新拓分析仪器科技有限公司）；RE-52AA型旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；DK-S12 型电热恒温水浴锅（上海森信实验仪器有限公司）；二氧化碳培养箱（美国Thermo Fisher Scientific 公司）；M200 Pro 光栅型多功能酶标仪（瑞士Tecan 公司）；37XC 型倒置显微镜（上海光学仪器厂）；BCM-1300 生物洁净工作台（安泰空气技术有限公司）；MLS-3750 高压蒸汽灭菌锅（三洋电机株式会社）；DK-S12 型电热恒温水浴锅（上海森信实验仪器有限公司）；BCD-196T 冰箱（青岛海尔股份有限公司）.1.2 方法1.2.1 扇贝粗多糖的制备1.2.1.1 超声微波辅助热水浸提扇贝粗多糖的条件优化超声-微波协同萃取仪主要由加热装置、超声发生装置、微波发生装置、冷凝装置、反应器（球型玻璃烧瓶）组成.反应器体积可达1000 mL.将样品粉末与蒸馏水按一定液料比配置于反应器中，然后将反应器置入萃取仪中，调节好萃取仪微波功率、微波时间、微波温度的参数后，运行萃取仪.待萃取过程完成后取出萃取液，待进一步操作.具体工艺参数设置如下：（1）固定液料比为60∶1、微波时间为15 min 及微波温度为50°C，考察不同微波功率（350、450、550、650 和750 W）对扇贝多糖得率的影响；（2）固定液料比为60∶1、微波功率为650 W 及微波温度为50°C，考察不同微波时间（5、10、15、20 和25 min）对扇贝多糖得率的影响；（3）固定液料比为60∶1、微波功率为650 W 及微波时间为15 min，考察不同微波温度（40、50、60、70 和80°C）对扇贝多糖得率的影响；（4）固定微波功率为650 W、微波时间为15 min 及微波温度为50°C，考察不同液料比（40∶1、50∶1、60∶1、70∶1 和80∶1）对扇贝多糖得率的影响.用葡萄糖制备标准溶液，通过苯酚-硫酸法[14]测定吸光值后绘制标准曲线，得到线性回归方程，再利用线性回归方程计算提取的扇贝溶液中的多糖得率.以扇贝多糖得率为指标，绘制关于微波功率、提取时间、提取温度和液料比的单因素实验图，优选出多糖提取条件.1.2.1.2 获取脱蛋白的扇贝多糖干粉将经不同微波辅助热水浸提后的样品液倒入旋转蒸发器的烧瓶中，蒸发浓缩至40 g，然后配置乙醇-硫酸铵双水相体系（400 g 体系：硫酸铵177.0 g、乙醇：109.2 g、蒸馏水73.8 g、样品液40 g），将配置好的溶液混匀后倒入分液漏斗静置分层，取下层清液，经透析后再进行冷冻干燥.1.2.2 扇贝多糖的体外免疫活性研究1.2.2.1 中性红法测定RAW 264.7 巨噬细胞的吞噬能力取生长良好、对数生长期的RAW 264.7 巨噬细胞，吸去培养液，加入2 mL 预热的PBS 清洗残留的培养液，重复两次，然后用冷的PBS 进行处理，2 min 后进行吹打，制成浓度为1×105 个/mL 的细胞悬液，接种在无菌的96 孔细胞培养板中，每孔加入100 μL，在5%CO2、37 ℃的培养箱中贴壁培养12 h，待细胞贴壁后，吸弃培养液，用预热的PBS 洗去未贴壁的细胞，分别加入100 μL 培养液（含10% FBS）和不同浓度CFP（125-2000 μg/mL），以 LPS（5 μg/mL）为阳性对照.细胞培养24 h 后，在无菌环境下，吸弃细胞培养液，每孔加入无菌0.075%的中性红生理盐水溶液100 μL，继续培养20 min，吸去中性红溶液，每孔用PBS 小心洗涤两次，吸去PBS 后每孔加入200 μL 的细胞裂解液体积比φ（冰醋酸：无水乙醇）=1∶1，提取出细胞内的中性红，室温静置过夜，用酶标仪在540 nm 处检测吸光值.每次实验重复三次.1.2.2.2 Griess 法测定RAW 264.7 巨噬细胞的NO 分泌量NO 在体内或者在水溶液中极易氧化成NO2-，在酸性条件下，NO2- 与重氮盐磺胺发生重氮反应，后者进一步与萘基乙烯己二胺发生偶合反应，该反应的终产物浓度与NO2- 浓度具有线性关系，在540～570 nm 处具有最大吸收峰.细胞浓度和加药方式同1.2.2.1（但将加药体积改为200 μL）.细胞分别培养24 h 后，离心（170xg，10 min），收集培养液上清，按试剂盒说明书（Griess 法）制作标准曲线，测定NO 含量.1.2.3 优选扇贝多糖口服液配方1.2.3.1 口服液制备单因素实验按1.2.1 实验操作中筛选的提取条件提取出扇贝多糖，与白砂糖、柠檬酸和蜂蜜加水混合制备成口服液，并进行感官评定.以感官评定分数为指标，优选出扇贝多糖口服液的配方.具体调配操作如下：（1）取扇贝多糖粉，配制成质量分数为0.1%、0.6%、1.1%、1.6%和2.1%扇贝多糖溶液各100 mL，分别向溶液中加入质量分数达到2%白砂糖、0.12%柠檬酸、1.5%蜂蜜，配置成扇贝多糖口服液，对其进行感官评价（选用百分制），确定最佳扇贝多糖用量；（2）在最佳扇贝多糖用量的基础上，添加白砂糖，质量分数分别达到1%、2%、3%、4%和5%，随后添加质量分数为0.12%柠檬酸、1.5%蜂蜜，配置成扇贝多糖口服液，对其进行感官评价，确定最佳白砂糖用量；（3）在最佳扇贝多糖和白砂糖的基础上，柠檬酸质量分数达到0.02%、0.07%、0.12%、0.17%和0.22%，然后各加入蜂蜜，质量分数达到1.5%，配置成扇贝多糖口服液，对其进行感官评价，确定最佳柠檬酸用量；（4）在上述单因素实验的基础上，扇贝多糖，白砂糖，柠檬酸都分别选用其最佳用量.添加蜂蜜，质量分数达到0.5%、1%、1.5%、2%和2.5%，配置成扇贝多糖口服液，对其进行感官评价，确定最佳蜂蜜用量.1.2.3.2 评分标准为使制得的口服液具有较好的感官品质，将制备好的扇贝多糖口服液分别请10 名具有一定经验及鉴别能力的不同品尝者进行感官评定.总得分选用百分制，每个指标最高25 分，评分标准见表1（总分计算方法：去除一个最高分和一个最低分后，计算剩余得分的平均值，结果保留整数）.表1 口服液评分标准项目品质要求得分色泽浅黄色 1～25香味浓郁蜂蜜香味1～25口感酸甜适中 1～25状态半透明 1～252 结果与分析2.1 优选微波辅助热水浸提法条件利用超声-微波协同萃取仪进行微波辅助热水浸提时有4 个重要的工艺参数：微波功率、微波提取时间、微波温度及液料比.因此本实验以多糖得率为依据，对这4个参数分别进行单因素实验，以期寻找到最佳的提取条件.实验结果如图1.图1（A）图是固定液料比为60∶1、微波时间为15 min 及微波温度为50°C，考察不同微波功率（350、450、550、650 和750 W）对扇贝多糖得率的影响.从图中可以明显观察到，当功率在350～650 W 之间时，多糖得率随功率增加而增大，但功率超过650 W 后多糖得率开始明显下降.因此，得出扇贝多糖微波辅助热水浸提的最佳微波功率应为650 W.图1（B）图是固定液料比为60∶1、微波功率为650 W 及微波时间为15 min，考察不同微波时间（5、10、15、20 和25 min）对扇贝多糖得率的影响.从图中可以看出在5～15 min 间，多糖得率随提取时间增长而增加，但15～20 min 多糖得率却开始缓慢下降，超过20 min 多糖得率下降明显.因此，扇贝多糖微波辅助热水浸提的最佳微波提取时间应为15 min.图1（C）图是固定液料比为60∶1、微波功率为650 W 及微波时间为15 min，考察不同微波温度（40、50、60、70 和80 ℃）对扇贝多糖得率的影响.从图中可以看出40～50 ℃时，多糖得率随温度上升而增加；但50～60 ℃之间，多糖得率随温度上升而逐渐降低；当温度在60～70 ℃之间时，多糖得率又有小幅度增高；而随着温度继续上升，多糖得率开始大幅度下降.因此，扇贝多糖微波辅助热水浸提的最佳微波温度应为50 ℃.图1（D）图是固定微波功率为650 W、微波时间为15 min 及微波温度为50℃，考察不同液料比（40∶1、50∶1、60∶1、70∶1 和80∶1）对扇贝多糖得率的影响.从图中看，当液料比为60∶1 时，多糖得率明显高于其他条件下的多糖得率.因此，扇贝多糖微波辅助热水浸提的最佳液料比应为60∶1.综上所述，要想利用微波辅助热水浸提法获得较高的多糖得率，应对工艺参数进行如下选择：微波功率650 W、微波提取时间15 min、微波温度50℃及液料比60∶1.图1 微波功率、微波提取时间、微波温度和液料比对扇贝多糖得率的影响2.2 扇贝多糖的体外免疫活性研究2.2.1 中性红法测定RAW 264.7 巨噬细胞的吞噬能力作为机体非特异性免疫系统的重要组成细胞，巨噬细胞承担着吞噬、消除细胞内寄生菌、真菌，和清除衰老的自身细胞的职能，所以巨噬细胞的吞噬功能，在一定程度上可以反映机体的免疫状态.本实验中采用巨噬细胞吞噬中性红的方法对RAW 264.7 巨噬细胞的吞噬能力进行测定，结果如图2所示.由图可知，当作用时间为24 h 时，LPS 组和粗多糖组的吸光值较空白对照组均有着不同程度的升高，表明经过LPS 和粗多糖处理后，巨噬细胞RAW 264.7 吞噬中性红的能力得到了提高.图2 扇贝粗多糖（CFP）对RAW264.7 细胞吞噬中性红的影响（24 h）与对照组比较：*p＜0.05，**p＜0.01.2.2.2 Griess 法测定RAW 264.7 巨噬细胞的NO 分泌量NO 作为信使分子和细胞毒性分子，广泛的参与集体免疫应答相关的各种生理过程，是活化的巨噬细胞杀伤肿瘤细胞和病原微生物的主要效应分子，所以NO 的分泌量可以作为检测巨噬细胞活化状态的一个指标[15].本实验选用 5 个质量浓度梯度（125 μg/mL，250 μg/mL，500 μg/mL，1000 μg/mL，2000 μg/mL）的三种多糖对巨噬细胞RAW 264.7 刺激24 h，收集细胞培养上清，以PBS 组为空白对照，LPS（5 μg/mL）为阳性对照.以NaNO2 为标准品制作标准曲线，得到图3，并从图中计算得NO 标准曲线线性回归方程为y=0.0058x，R2=0.9993，再根据线性回归方程计算得各实验组的NO 浓度，结果如图4（24 h）.如图4所示，在粗多糖处理组中，多糖质量浓度在250～2000 μg/mL 范围内显著的促进了巨噬细胞RAW 264.7 分泌NO，而且呈现了浓度依赖性.图3 NO 标准曲线图4 扇贝粗多糖（CFP）对 RAW 264.7 细胞分泌 NO 的影响（24 h）与对照组比较：*p＜0.05，**p＜0.01.2.3 优选扇贝多糖口服液配方2.3.1 多糖用量对口服液品质的影响如表2所示，制备口服液时，随着扇贝多糖添加量的增多，口服液的色泽由无色变为浅黄色，状态也由透明澄清变成半透明，但对于口服液的香味和口感不会产生明显影响.从色泽和状态角度，多糖含量为1.6%和2.1%呈浅黄色半透明的口服液给人的感官感受优于多糖含量为0.1%～1.1%无色透明的口服液，又因为多糖含量为1.6%和2.1%的口服液在香味和口感上无明显差异，基于成本考虑，扇贝多糖含量1.6%为最适用量.表2 扇贝多糖对口服液品质的影响多糖含量色泽香味口感状态总分0.1% 无色蜂蜜香味浓郁稍酸透明 74 0.6% 无色蜂蜜香味浓郁稍酸透明 76 1.1% 无色蜂蜜香味浓郁稍酸透明 75 1.6% 浅黄色蜂蜜香味浓郁稍酸半透明 80 2.1% 浅黄色蜂蜜香味浓郁稍酸半透明 802.3.2 白砂糖和柠檬酸用量对口服液品质的影响口服液的酸甜度主要有白砂糖和柠檬酸比例决定，白砂糖含量偏低的话，柠檬酸的涩味就会凸显，影响口感；白砂糖含量偏高，甜味过重，会降低服用者的食欲.同样，过多的添加柠檬酸，则涩味偏重，影响口感.添加柠檬酸不仅打破口服液滋味单一的状况，还能起到防腐的作用，避免了使用食品防腐剂，为开发出天然安全的扇贝多糖口服液提供保障[16].如表3和表4所示，综合考虑选择白砂糖质量分数3%，柠檬酸质量分数为0.07%.表3 白砂糖对口服液品质的影响白砂糖含量色泽香味口感状态总分1% 浅黄色蜂蜜香味浓郁有涩味半透明 70 2% 浅黄色蜂蜜香味浓郁稍酸半透明 80 3% 浅黄色蜂蜜香味浓郁酸甜适中半透明 81 4% 浅黄色甜味香气偏甜半透明 78 5% 浅黄色甜味香味浓郁甜味重半透明 75表4 柠檬酸对多糖口服液品质的影响柠檬酸含量色泽香味口感状态总分0.02% 浅黄色蜂蜜香味浓郁偏甜半透明 75 0.07% 浅黄色蜂蜜香味浓郁稍甜半透明83 0.12% 浅黄色蜂蜜香味浓郁酸甜适中半透明 81 0.17% 浅黄色蜂蜜香味浓郁稍酸半透明 76 0.22% 浅黄色蜂蜜香味浓郁酸涩半透明 652.3.3 蜂蜜用量对口服液品质的影响蜂蜜的添加使扇贝多糖口服液滋味更丰富，营养价值也有所提高.但蜂蜜的用量对口服液的组织状态，口感，香味等指标影响较大，因此，筛选蜂蜜用量应更加谨慎. 如表5所示，当蜂蜜含量为1%时，多糖口服液酸甜适中，清新爽口；当蜂蜜含量超过2%时，口服液组织状态受蜂蜜影响开始变浓稠，口感偏甜，因此，选用蜂蜜质量分数为1%为佳.表5 蜂蜜对多糖口服液品质的影响蜂蜜含量色泽香味口感状态总分0.5% 浅黄色蜂蜜香味淡稍酸半透明 80 1% 浅黄色蜂蜜香味稍浓酸甜适中半透明 85 1.5% 浅黄色蜂蜜香味浓郁稍甜半透明 83 2% 黄色变浓蜂蜜香味更浓偏甜半透明，质感粘稠 79 2.5% 金黄色蜂蜜香味很浓甜味重半透明，质感粘稠 752.3.4 小结根据上述成分的最佳用量（即以质量分数记，扇贝多糖为1.6%、白砂糖为3%、蜂蜜为1%、柠檬酸为0.07%）配置扇贝多糖口服液，蜂蜜香味浓郁，酸甜适中，呈浅黄色半透明状，经感官评分为85，因此适合作为制备口服液的配方.3 结论本实验采用微波辅助热水浸提的方法提取扇贝多糖，研究了不同提取条件对扇贝多糖得率的影响，并在此基础上选择合适的提取条件.通过对微波功率、提取时间、提取温度及液料比进行的单因素实验的结果分析，最终选择在微波功率650 W、微波提取时间15 min、微波温度50℃及液料比60∶1 的条件下对本实验所用的扇贝瑶柱材料进行提取.根据细胞实验的结果可知，扇贝多糖浓度在125-2000 μg/mL 范围内可以促进巨噬细胞RAW 264.7 吞噬中性红的能力，浓度在250-2000 μg/mL 范围内能促进巨噬细胞RAW 264.7 分泌NO 且呈浓度依赖性.在调配扇贝多糖口服液的过程中，通过对扇贝多糖、白砂糖、蜂蜜和柠檬酸4 种成分的单因素实验的研究，得出适宜的口服液配方（以质量分数记）：扇贝多糖为1.6%、白砂糖为3%、蜂蜜为1%、柠檬酸为0.07%.本试验制备的扇贝多糖口服液清香爽口、食用方便，但还需通过动物实验及临床实验来验证其药用价值，这也是下一步需要研究的方向.参考文献【相关文献】[1]任红，黄海，杨宁，等.华贵栉孔扇贝软体部营养成分分析及评价[J].食品工业，2015，36（6）：279-282.[2]王昊.岩扇贝与深海扇贝营养成分分析及与三种养殖扇贝的比较[D].大连：大连海洋大学，2016.[3]曹善茂，王昊，陈炜，等.岩扇贝闭壳肌营养成分的分析及与中国3 种扇贝的比较[J].大连海洋大学学报，2016，31（5）：544-550.[4]陈炜.网箱养殖与野生岩扇贝营养成分的分析与评价[C]//中国水产学会、四川省水产学会.2016年中国水产学会学术年会论文摘要集，2016：1.[5]陈炜，曹善茂，肖逸啸，等.浮筏养殖与底栖野生岩扇贝营养成分的分析与比较[J].大连海洋大学学报，2018，33（1）：45-51.[6]王光亚.中国食物成分表[M].北京：北京大学医学出版社，2009：150-151.[7]ZHAO L Y，LAN Q J，HUANG Z C，et al.Antidiabetic effect a newly 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