注射用头孢唑肟钠的无菌检查验证方法研究

注射用头孢曲松钠无菌检查法验证研究摘要：目的临床对患者注射头孢曲松钠进行治疗前，需对药物展开无菌检查，对患者的健康和安全进行保证，本文在此基础上分析此药物无菌检查的验证方法。

方法研究按照无菌检查法的相关操作规范，展开无菌检查时使用薄膜过滤法对注射用头孢曲松钠展开相关无菌检查，同时在此基础上对方法进行验证。

结果临床中对可溶性药物展开无菌检查时，薄膜过滤法是其中十分重要的方法，但是针对于具有不同性质的药物来说，其具体的操作过程需进行相应的调整。

结论在薄膜过滤法中应用分次冲洗和分次过滤是注射用头孢曲松钠无菌检查的一种重要方式，同时也是首选方法。

关键词：无菌检查法；薄膜过滤法；注射用头孢曲松钠对于无菌检查法来说，此方式主要是检查无菌和药品和原料以及医疗器具还有各种敷料等是否无菌的一种方法。

在整个药品的安全性检查方面是其中十分重要的一个项目。

中国药典早在多年前就已经开始强调检验方法展开必要的方法验证，对无菌检查时药品的应用方式进行验证，通过对其方法展开验证，对供试品的检验方式和检验人条件进行确定，以此对无菌检查方法检验结果的准确性和检查方法的科学性进行保证。

对于注射用头孢曲松钠来说，其属于第三代的头孢菌素，耐酶是其最为重要的特点，可以对多种β内酰胺酶的降解作用进行抗制，所以此药物对第一代和第二代的头孢菌素耐药的某些菌株依然十分有效。

1.资料和方法1.1 一般资料和仪器此次研究所需应用的仪器主要有：全自动数显生化培养箱、灭菌刻度吸管、全自动数显恒温鼓风干燥箱和试管以及培养皿还有全封闭集菌培养器还有全自动数显立式蒸汽灭菌器等。

研究中的供试品为注射用头孢曲松钠。

此次研究的培养基及试剂主要为：0.1%蛋白胨水溶液和营养肉汤培养基(以及胰酪大豆胨液体培养基还有硫乙醇酸盐流体培养基，所有稀释液和培养基全部按照中国药典的灭菌法进行相关操作，并在121℃的环境下展开为期15min的灭菌操作。

对于验证的试验用菌种来说主要为：枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌、生孢梭菌和金黄色葡萄球菌以及大肠埃希菌还有黑曲霉菌等，这些使用需要使用的菌种全部为第四代菌种。

注射用头孢噻肟钠细菌内毒素检查方法的研究摘要目的：研究注射用头孢噻肟钠的细菌内毒素检查方法。

方法：通过干扰试验证明注射用头孢噻肟钠对细菌内毒素检查有抑制作用。

结果：使用λ=0.5或0.25Eu/ml的鲎试剂将样品稀释至浓度为2.5或1.25mg/ml,可消除其对检查的干扰。

结论：注射用头孢噻肟钠可以用细菌内毒素检查法取代热原检查法。

头孢噻肟钠(Cefotaxime)是第3代头孢菌素类药物，疗效较好，其临床应用广泛，且多为静脉给药。

该注射剂中国药典95版规定的检查项是用家兔法做热原检查，文献迄今未见有用细菌内毒素检查的报道。

本文通过实验探讨以细菌内毒素检查法取代热原检查法检测注射用头孢噻肟钠的可行性。

1材料注射用头孢噻肟钠(哈尔滨制药厂,1g/瓶)；鲎试剂：0.1ml/支,λ=0.5Eu/ml,批号:980421;λ= 0.25Eu/ml,批号:980409;λ=0.125Eu/ml,批号:980123;λ=0.06Eu/ml,批号:980109;λ=0.03Eu/ml,批号:980109(湛江安度斯生物有限公司);0.1ml/支,λ=0.5Eu/ml(厦门东方鲎试剂厂,批号:980421)；细菌内毒素工作标准品(厦门东方鲎试剂厂，批号:980105,效价10Eu/支；湛江安度斯生物有限公司，批号:980227，效价12Eu/支)；细菌内毒素检查用水(中国药品生物制品检定所，批号:960125,10ml/支)。

2方法与结果2.1鲎试剂灵敏度(λb)复核按中国药典1995年版二部方法进行操作［1］，结果见表1。

2.2初筛试验2.2.1内毒素限值(L)的确定采用公式L=K/M(M值是以成人每公斤体重每小时给药的最大剂量来计算)，本品人用最大剂量为12g/日，分3次静脉滴注［2］,4g/次，滴注500ml 按2.5h计算，中国人平均体重按60kg计算，则M=4×1000/(2.5×60)=26.7mg/kg.h-1,故本品的细菌内毒素的理论限值为L=5/26.7=0.19Eu/mg。

注射用头孢曲松钠无菌检查方法的试验作者：刘兰来源：《科学与财富》2016年第16期摘要：文章首先介绍了注射用头炮曲松钠菌素无菌检查使用到的试验环境与材料，整理所用到的物质成分。

其次重点介绍检查方法以及结果验证的要点技术，总结验证的整体流程。

最后根据文章中列举的方法进行详细探讨，帮助提升工作任务完成质量。

关键词：头炮菌素；无菌检查；方法学验证一、实验环境与材料1、实验环境注射用头孢菌素的无菌检验要求在环节洁净度为万级，并且局部的洁净度在百级的单向流空气的无菌室中进行。

2、仪器对抗生素类药物的纯度进行检验时，需要借助仪器设备来完成，观察其中是否存在影响药物作用细菌，头孢曲松钠菌素中杂质检验需要达到一定量才会有结果显示。

在工作任务开展期间，会选择部分药物原料，对其进行培养，如果其中存在其他物质也更方便观察。

需要注意的是仪器与材料的选择。

仪器选择合理是提升质量的关键，能够为培养环节提供合理的温度，除此之外技术人员也要及时记录指标的变化情况，以免出现最终数据结果的丢失，无法对检验环节进行评估。

常用设备如下。

3、材料JT 智能集菌仪（武汉奥斯特科技有限公司）、NKF330 一次性全封闭集菌培养器（杭州泰林生物技术设备有限公司）、生化培养箱（SHP -250 型，上海精宏试验设备有限公司）、霉菌培养箱（MJX -250B-Z 型，上海博迅实业有限公司）、注射用头孢曲松钠（珠海联邦制药股份有限公司、规格：1. 0 g、批号：80401910）。

4、培养基、稀释液及缓冲液第一，干粉培养基：硫乙醇酸盐培养基（批号：071122）、改良马丁培养基（批号：080311）、改良马丁琼脂培养基（批号：090603）、营养琼脂培养基（批号：080304）、玫瑰红钠琼脂培养基（批号：071217），均由北京三药科技开发公司生产。

第二，细菌稀释液：0.9%灭菌氯化钠溶液（批号：090609），由福州市药品检验所菌检室配制。

第三，冲洗用缓冲液：pH 7.0 氯化钠―蛋白胨缓冲液（批号：090611），由福州市药品检验所菌检室配制。

注射液无菌检查方法（中国药典2010版）验证方案验证方案编号：2010•MEF•041•05•004起草单位(Composed by)：质检部(QC Department)起草人(Composer)：日期(Date)：审核人(Reviewed by QC)：日期(Date)：审核人(Reviewed by QA)：日期(Date)：批准人(Approved by)：日期(Date)：目录1. 验证目的2. 验证人员3. 验证依据及参考文件4. 仪器与设备5. 验证过程5.1 培养基及稀释液5.2 菌液的培养与制备5.3 方法验证试验6. 验证总结1. 验证目的：本试验是注射液的抑细菌、抑真菌活性及所用的无菌检查方法的可靠性进行验证，以确认该产品在该检验量、该检验条件下无抑菌活性或其抑菌活性已被充分消除至可以忽略。

即：保证所用的无菌检验方法能对该产品进行准确、可靠的检验。

2. 验证人员：验证小组组长：刘长宏验证小组副组长：宋芳良验证小组成员：曲晓燕、常西胜3. 验证依据及参考文件：验证依据：中华人民共和国药典2010版二部参考文件：2010年版中国药典无菌检查方法、验证操作学习班讲稿汇编（中国药品检验所）4. 仪器与设备XG1.DM-0.36B型机动门脉冲真空灭菌器细菌培养箱霉菌培养箱净化工作台5. 验证过程：5.1 培养基及稀释液5.1.1 培养基及稀释液的配制按“中国药典2010版二部附录Ⅺ H无菌检查法”中，有关规定配制本验证所需培养基:5.1.2培养基的适用性检验5.1.2.1 培养基无菌性检查从以上培养基及稀释液中，每批随机取5支（瓶），培养14天，应无菌生长。

结果记录：结论：5.1.2.2 培养基灵敏度检查取每管装量为12ml的硫乙醇酸盐流体培养基9支，分别接种小于100cfu的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌各2支，另1支不接种作为空白对照，培养3天，逐日观察结果。

注射用头孢唑肟钠细菌内毒素检查方法验证摘要：细菌内毒素检查法系利用鲎试剂来检测或量化由革兰阴性菌产生的细菌内毒素，以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。

细菌内毒素检查包括两种方法，即凝胶法和光度测定法，后者包括浊度法和显色基质法，本次试验采用凝胶法。

本次试验按照《中国药典》2020版和质量标准要求，通过注射用头孢唑肟钠（0.5g）细菌内毒素验证试验来确定该产品的细菌内毒素检查方法。

关键词：薄膜过滤法；细菌内毒素检查；引言：本次试验通过鲎试剂灵敏度复核试验、干扰初筛试验、干扰试验来分别确定适用于注射用头孢唑肟钠（0.5g）细菌内毒素的质量标准。

故此验证为该药品细菌内毒素检验提供一定参考，具体报告如下：1 仪器、试药试剂1.1仪器及器材及试药试剂2 方法试验试验样品样品名：注射用头孢唑肟钠（0.5g）细菌内毒素限值的确定：每1mg头孢唑肟中含内毒素的量应小于0.10EU。

确定最小有效稀释浓度：按照《中国药典》2020年版四部通则1143细菌内毒素检查法中最低有效浓度（MVC）的计算公式：0.25EU/ml0.10EU/mgc=λ/L= 2.5mg/ml2.1 鲎试剂灵敏度复核试验（1）检测步骤取细菌内毒素国家标准品1支用细菌内毒素检查用水溶解，将瓶口封严，置于旋涡混合仪上混合15min，然后进行稀释，制备成2λ 、1λ 、0.5λ和0.25λ，每一步均应在旋涡混合仪上混合30s，取规格为0.1ml/支的鲎试剂18支，每支加入0.1ml细菌内毒素检查用水复溶，其中16支分别加入0.1ml不同浓度的内毒素标准溶液，每一个内毒素浓度平行做4支；另外两支加入0.1ml细菌内毒素检查用水作为阴性对照。

将试管中溶液轻轻混匀后，垂直放入37±1℃电热恒温水浴锅中，保温60±2min。

（2）判定标准当最大浓度2λ管均为阳性，最低浓度0.25λ管均为阴性，阴性对照管为阴性，试验方有效。

西南药业股份有限公司成品检验报告报告书编号 12320073 样品名称 注射用头孢唑肟钠产品批号 12020008 产品数量10.313万瓶规 格 0.5g 有效期至2014年01月包 装 管制瓶 取样日期2012年02月07日请验单位 冻干粉针剂车间 化验日期2012年02月07日检验项目 全检 报告日期2012年02月21日检验依据 《中国药典》2010年版二部P205检验项目标准规定检验结果［性状］应为白色至淡黄色结晶、结晶性或颗粒状粉末为淡黄色结晶性粉末［鉴别］（2）主峰保留时间应与对照品一致（3）红外光吸收图谱应与对照图谱一致（4）应呈正反应主峰保留时间一致与对照图谱一致呈正反应［检查］溶液的澄清度与颜色溶液应澄清无色；如显浑浊，与1号浊度标准液比较，均不得更浓；如显色，与黄色或黄绿色6号标准比色液比较，均不得更深符合规定符合规定可见异物应符合规定符合规定水分不得过8.5% 7.1%酸碱度 pH应为6.0～8.0 7.3细菌内毒素应符合规定符合规定 无菌应符合规定符合规定大于10um不得过6000粒/ g120粒/g 不溶性微粒大于25um不得过600粒/ g8粒/g装量差异应符合规定符合规定有关物质（1）单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的0.5倍（0.5%）（2）各杂质峰面积的和不得大于对照溶液的主峰面积（1.0%）0.03%0.08%头孢唑肟聚合物不得过0.10% 0.001%［含量测定］按无水物计算，含头孢唑肟不得少于90.0%，按平均装量计算，应为标示量的90.0～110.0%95.7% 101.1%检验结论：本品按《中国药典》2010年版二部P205检验，结果符合规定。

质检负责人：复核人：李贵香检验人：杨丽莎 钟小红 宋绍雄。

头孢噻肟钠无菌原料的无菌实验方法验证1. 样品：头孢噻肟钠无菌原料，规格：0.5g/瓶；批号：40807001；生产单位：A ventis P harma Deutschland GmbH2. 培养基：硫乙醇酸盐流体培养基、真菌培养基、营养肉汤、普通斜面、真菌斜面(均由中国药品生物制品检定所培养基室提供)；营养琼脂、虎红琼脂(另由本室自行配制) 。

3.β-内酰胺酶：2ml大于300单位/毫升（批号：20030630）4. 验证试验用菌种：(1) 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)[CMCC(B) 26003]；(2)枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）[CMCC(B) 63501]；(3) 大肠埃希菌（Escherichia coli）[CMCC(B) 44102]；(4) 铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa) [CMCC(B) 10104]；（5) 生孢梭菌(Clostridium sporogenes)[CMCC(B) 64941]；(6) 白色念珠菌(Candida albicans)[CMCC(F) 98001]；(7) 黑曲霉(Aspergillus niger) [CMCC(F)98003]。

5. 仪器和滤器：HTY-2000A集菌仪，全封闭无菌试验过滤培养器（批号20050105）北京牛牛基因有限公司。

6 方法：中国药典2005年版无菌检查的验证实验。

7. 操作方法7.1 菌液制备：取金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌的新鲜培养物少许接种至营养肉汤培养基中, 生孢梭菌的新鲜培养物少许接种至硫乙醇酸盐流体培养基中, 32.5±2. 5℃培养18～24小时；取经32.5±2.5℃培养19~21h小时的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单孢菌肉汤培养物1ml，加9ml生理盐水，10倍稀释至约10-5~10-8之间。

注射用头孢曲松钠无菌检查方法验证试验【摘要】头孢曲松钠属第三代头孢菌素，具广谱抗菌作用.本实验对注射用头孢曲松钠无菌检查方法进行验证验证。

方法：采用薄膜过滤法以500ml/筒缓冲液冲洗量检查，结果：头孢曲松钠对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌的抑菌活性已完全消除。

【关键词】注射用头孢曲松钠；无菌检查；验证头孢曲松钠属第三代头孢菌素，具广谱抗菌作用，对流感嗜血杆菌、肠杆菌科细菌、淋病奈瑟菌和脑膜炎奈瑟菌有较强抗菌作用，对阴沟肠杆菌、不动杆菌属和铜绿假单胞菌作用较差[1-5]。

头孢曲松钠化学名为[6R-[6a，7b（Z）]]-7[[2，3-二氢-2-亚氨基-4-噻唑基）（甲氧亚氨基）乙酰基]氨基]-8-氧代-5-硫杂-1-氮杂二环[4.2.0]辛-2-烯-2-羧酸钠盐[6-8]。

头孢曲松钠常用于肺炎、烧伤感染、腹膜炎、支气管炎、尿道感染、败血症、脑膜炎、皮肤及伤口的感染、胃肠道感染、肺化脓症、肾脏感染、生殖器感染等[9-10]。

无菌检查采用薄膜过滤法是取样量较大的集菌方法，具有代表性，不易漏检等特点[11-13]。

本实验对注射用头孢曲松钠无菌检查方法进行验证验证。

1.试验环境与材料1.1试验环境在环境洁净度为B+A的无菌室中进行。

1.2仪器NKF330一次性全封闭集菌培养器（杭州泰林生物技术设备有限公司）、HTY-601智能集菌仪（杭州泰林生物技术设备有限公司）、HY-2（A）调速多用振荡器（常州华冠仪器制造有限公司）、SPX-250智能生化培养箱（常州华冠仪器制造有限公司）、MJX-150B智能霉菌培养箱（常州华冠仪器制造有限公司）、YXQ-LS-30SII高压灭菌锅（西安常仪仪器设备有限公司）、FB224电子分析天平（江苏淮安翔宇电子衡器公司）。

1.3试验用菌株生孢梭菌[CMCC（B）64 941]（第4代）、白色念珠菌[CMCC（B）98 001]（第4代）、金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26 003]（第4代）、枯草芽孢杆菌[CMCC （B）63 501]（第4代）、大肠埃希菌ECMCC（B）44lO23（第3代）、黑曲霉[CMCC （B）98 003]（第3代）。