铜绿假单胞菌阳性对照试验
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水中铜绿假单胞菌盲样考核结果与分析唐轶君;张建军;李晶;宁鑫思;蒋丽娜【摘要】为客观反映包装饮用水中铜绿假单胞菌的检测能力,保证检测结果的准确性,本文依据国家标准GB/T 8538-2008和盲样考核作业指导书,对某包装饮用水样品进行处理和铜绿假单胞菌检验,用基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱仪(MALDI-TOF-MS)和API 20NE对检验结果进行鉴定。
结果表明:编号为5664、5663、5676、5679和5671的样品未检出铜绿假单胞菌,编号为5683、5669、5675、5696和5682的样品检出铜绿假单胞菌。
总的来看,10个样品的检测结果均为满意。
【期刊名称】《生物化工》【年(卷),期】2017(000)003【总页数】4页(P46-49)【关键词】包装饮用水;铜绿假单胞菌;盲样考核【作者】唐轶君;张建军;李晶;宁鑫思;蒋丽娜【作者单位】四川省食品药品检验检测院;四川省食品药品检验检测院;四川省食品药品检验检测院;四川省食品药品检验检测院;四川省食品药品检验检测院【正文语种】中文【中图分类】R123铜绿假单胞菌俗称绿脓杆菌,在自然界中分布广泛,为淡水和土壤中最常见的细菌种类之一,空气、动物皮肤、肠道、呼吸道等处均可有该菌的存在。
铜绿假单胞菌可通过水源、土壤、工器具、接触等多种途径传播,并对消毒剂、干燥、紫外线等理化因素及不良环境有极强的抵抗力[1]。
研究表明,铜绿假单胞菌可以产生多种外毒素、内毒素等致病因子,是导致人类急性肠道疾病和皮肤炎症的完全致病菌。
老弱病幼孕等抵抗力较差的人群,饮用或使用铜绿假单胞菌污染的包装饮用水存在健康风险[2]。
现阶段,我国国家标准GB 19298-2014《食品安全国家标准包装饮用水》、GB 8537-2008《饮用天然矿泉水》中,均明确规定每250mL水样中铜绿假单胞菌不得检出[3,4]。
为了解和证明四川省食品药品检验检测院实验室对包装饮用水中铜绿假单胞菌的检测水平和检测能力,为实验室对水中铜绿假单胞菌的检测提供外部质量保证,增强客户及相关委托方对实验室出具可靠数据的信心,四川省食品药品检验检测院参加了由中国食品药品检定研究院组织的包装饮用水中铜绿假单胞菌盲样考核定性检验,并取得了满意的成绩。
无菌药品包装容器密封性试验报告试验日期:试验人员:审核:批准:报告人:日期:1.概述本验证由生产部及质量部共同完成,并在质量部的全过程监控下按已批准的方案实施。
验证实施日期为年月日至年月日。
2.结果报告:2.1试验样品制备情况:所用样品为无菌灌装模拟试验后合格的样品。
2.1制备微生物菌悬液:从铜绿假单胞菌(ATCC 9027)的新鲜斜面上取培养物,接入含6ml无菌胆盐乳糖培养基的试管中,在30~35℃下培养了约24h,将此培养物分别转入含600ml无菌胆盐乳糖培养基的三角瓶内,于30~35℃下培养了约24h,现将菌落计数如下:结论:可用于试验用菌液。
2.2营养试验:每个试验样品内接种了多少个CFU(约100)铜绿假单胞菌。
在30~35℃下培养了7天,附:培养记录第一次试验试验开始时间:第二次试验试验开始时间:第三次试验试验开始时间:结果:结果所有试样品都呈阳性结果,符合试验预订的目标。
2.3微生物浸入试验:①将2.1的铜绿假单胞菌(ATCC 9027)的菌悬液倒入不锈钢桶内,密闭,从试验中取100只试验样品倒置于菌悬液中,将试验样品在菌悬液中持续浸泡约4h后,取出试验样品,擦干容器外残余的菌悬液,其外表用含0.5%过乙酸的70%异丙醇消毒五分钟(注意不要破坏其密封口),放入塑料袋中,置30~35℃下培养7天。
检查试验样品内微生物生长情况,有生长记作“﹢”,无生长记作“﹣”。
②阳性对照:阳性对照试验样品不经菌悬液浸泡,其外表用含0.5%过乙酸的70%异丙醇消毒五分钟后,接种10~100CFU铜绿假单胞菌,进行阳性对照试验。
现将试验记录如下:第一次试验第二次试验第三次试验结果:3.评价:冻干粉针剂轧盖密封完好性验证合格,表明各项工艺卫生管理规程及轧盖、无菌操作程序、净化空调、灌装机、人员符合GMP及无菌制剂生产要求,可进行产品的正式生产。
附:西林瓶,胶塞及铝盖规格尺寸,来源。
①.当轧盖设备发生变化时应进行再验证。
非无菌产品微生物检查:控制菌检查法控制菌检查法系用于在规定的试验条件下,检查供试品中是否存在特定的微生物。
当本法用于检查非无菌制剂及其原、辅料是否符合相应的微生物标准时,应按下列规定进行检验,包括样品取样量和结果判断等。
本检查法可采用替代的微生物检查法,包括自动检测方法,但必须证明替代方法等效于药典规定的检查方法。
供试液制备及实验环境要求同《非无菌产品微生物检查:微生物计数法》。
如果供试品具有抗菌活性,应尽可能去除或中和。
供试品检查时, 若使用了中和剂或灭活剂,应确认有效性及对微生物的无毒性。
供试液制备时如果使用了表面活性剂,应确认其对微生物无毒性以及与所使用的中和剂或灭活剂的相容性。
培养基适用性检查和方法适用性试验供试品控制菌检查中所使用的培养基应进行适用性检查。
供试品的控制菌检查方法应进行方法适用性试验,以确认所采用的方法适合于该产品的控制菌检查。
若检验程序或产品发生变化可能影响检验结果时,控制菌检查方法应重新进行适用性试验。
菌种及菌液制备菌种试验用菌株的传代次数不得超过5代(从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第0代),并采用适宜的菌种保藏技术进行保存,以保证试验菌株的生物学特性。
金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)〔CMCC(B)26 003〕铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)〔CMCC(B)10 104〕大肠埃希菌(Escherichia coli)〔CMCC(B)44 102〕乙型副伤寒沙门菌(Salmonella paratyphi B)〔CMCC(B)50 094〕白色念珠菌(Candida albicans)〔CMCC(F)98 001〕生孢梭菌(Clostridium sporogenes)〔CMCC(B)64 941〕菌液制备将金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、沙门菌分别接种于胰酪大豆胨肉汤培养基中或在胰酪大豆胨琼脂培养基上,30~35℃培养18~24小时;将白色念珠菌接种于沙氏葡萄糖琼脂培养基上或沙氏葡萄糖肉汤培养基中,20~25℃培养2~3天;将生孢梭菌接种于梭菌增菌培养基中置厌氧条件下30~35℃培养24~48小时。
铜绿假单胞菌快速检测方法的优化研究作者:单萌周婀马瑜来源:《食品安全导刊》2021年第11期摘要:為优化铜绿假单胞菌检测方法,本研究对不同选择性培养基的筛选效力及选择性进行了评价,并按照GB 8538—2016对人工污染样品进行了检验;进而,将选择性培养基鉴定结果与VITEK 2 Compact全自动细菌鉴定系统和基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术(MALDI-TOF-MS)结合,对不同检测技术、方法的有效性、适用性及相互之间的融合性进行了比较和分析,以期提升铜绿假单胞菌的检测效率及准确度。
结果表明,乙酰胺琼脂上铜绿假单胞菌的特异性较差,会出现假阳性或假阴性结果;而铜绿假单胞菌显色培养基(RAPID’s P.aeruginosa Agar)则具有典型的菌落特征以及较短的增菌时间,因此,将该培养基与VITEK 2 Compact系统结合使用可有效提高检测的灵敏度、特异性及时效性,适用于对大批量样品进行快速判定。
关键词:铜绿假单胞菌;快速检测方法;优化Comparison and Optimization of the Rapid Detection Method for Pseudomonas AeruginosaSHAN Meng1, ZHOU E1, MA Yu2*(1.MasterKong CO., Ltd., Beverage IRD Center,Shanghai 201101,China;2.Shaanxi Institute of Microbiology, Xi'an 710043, China)Abstract: In order to optimize the detection method for Pseudomonas aeruginosa, comparison of the effectiveness and selectivity of different selective media was performed, and the artificially contaminated samples were tested according to the GB 8538—2016. Finally, for the purpose of improving the detection efficiency and accuracy of P.aeruginosa, the results obtained above were combined with the VITEK 2 Compact and MALDI-TOF MS Biotyper System. The effectiveness,applicability and integration of the three detection methods were compared and analyzed. The results showed that the specificity of acetamide agar for Pseudomonas aeruginosa was poor, and accompanied with false positive/negative results occasionally. However,the RAPID’s P.aeruginosa Agar was notable for its typical colony characteristics and short incubation time. Therefore, the combination of RAPID’s P.aeruginosa Agar with the technique of VITEK 2 Compact System was suitable for rapid determination of large quantities of samples with the , which can improve the sensitivity, specificity and timeliness of the detection remarkably.Keywords: Pseudomonas aeruginosa; rapid detection method; optimization铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa),属假单胞菌属,广泛分布于水、土壤、空气、植物、污水、医院、动物及人体内等各类环境中,是一种常见的水源性和食源性条件致病菌[1-3]。
227科研与教育2020年第3期包装饮用水中铜绿假单胞菌检测钟 杰(深圳市计量质量检测研究院,广东 深圳 518000)摘 要:随着现代生活水平的提高,饮用水安全问题越来越受到关注。
铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)是一种极具危害性的致病菌,检测其在饮用水中是否符合规定,对提高包装饮用水品质、普及健康用水理念有很大帮助。
检测方法参考新标准《食品安全国家标准包装饮用水生产卫生规范》(GB 19304—2018)中的铜绿假单胞菌滤膜-过滤法,并将检测出铜绿假单胞菌的水质通过PCR法扩增进行验证实验。
分析实验条件对结果的影响,并将结果与标准规定比对,判断抽取包装饮用水的质量,为消费者生产商提供可靠数据,为相关质量卫生部门加强监督管理提供依据。
关键词:包装饮用水;铜绿假单胞菌;滤膜-过滤法;PCR法中图分类号:R123.1 文献标志码:A 文章编号:2096-3092(2020)03-0227-02随着生活水平的提高,包装饮用水已在人们的日常生活中得到普及。
矿泉水方便易携带且口感好,桶装水便于家庭饮用且健康、安全,这些改变了人们长期以来的饮水习惯。
近年曝光的包装饮用水企业,很多是因为不合乎标准,微生物(铜绿假单胞菌)超标引起水质污染。
造成包装饮用水中铜绿假单胞菌超标的主要原因为水源遭受铜绿假单胞菌污染或生产过程中卫生控制不严格没有及时杀灭病菌,这对抵抗力较弱的人群存在较大健康风险。
因此,及时检测避免其带来经济损失是非常重要的。
为了进一步了解广东省包装饮用水的卫生状况,现随机从市面抽检包装饮用天然矿泉水和饮用纯净水进行检测。
机选取在2017年55批、2018年90批和220批。
1.2 菌株菌体有1~3根鞭毛,运动活泼。
/CN琼脂,乙酰胺肉试剂:萘啶酮酸(CN琼脂配套试剂),甘油,钠氏试剂(乙酰胺肉汤配套试剂),氧化酶试纸。
1.4 评价标准包装饮用矿泉水和饮用纯净水测定方法和标准参考新发行的标准《食品安全国家标准包装饮用水生产卫生规范》(GB 19304—2018)进行。
菌种鉴定标准操作规程目的:建立菌种鉴定标准操作规程范围:适用于******鉴定标准操作职责:内容:1整体操作步骤1.1纯化、分离待鉴定菌用接种环挑取待鉴定菌落或少许含菌溶液到相应的培养基上(如TSA),划线分离,以出现微生物单菌落为止。
1.2挑取纯化后的单菌落,进行革兰染色、镜检,以确定待鉴定菌的革兰属性。
1.3如镜检结果为革兰阴性杆菌,则先进行发酵实验。
如发酵实验结果为阴性,则选用API20NE试剂条进行鉴定;如发酵实验结果为阳性,则在经过细胞色素氧化酶实验后选用API20E试剂条进行鉴定。
1.4如镜检结果为革兰阳性球菌,则先进行过氧化氢酶实验。
如实验结果为阴性则选用API Strep试剂条进行鉴定,如实验结果为阳性则选用API Staph试剂条进行鉴定。
1.5假如镜检结果为革兰阳性杆菌并且有内生芽胞,则选用API 50CHB试剂条进行鉴定;否则,根据运动性实验和过氧化氢酶实验结果选用API Coryne或其他试剂条进行鉴定。
1.6选定正确的试剂条以后,根据不同的API试剂条的标准操作规程准备接种物,进行接种、培养等操作并将结果形成数码,用API鉴定软件鉴定或查询待检菌的名称均可。
鉴定结果应记录,必要时,给出相应解释。
2革兰氏染色2.1染色剂的配制2.1.1结晶紫染色液:甲液:结晶紫 1.0g95%的酒精20ml乙液:草酸铵0.8g水80ml将甲液和乙液混合均匀,静置48h使用,置密闭棕色瓶中储存。
2.1.2碘液:碘 1.0g碘化钾 2.0g水300ml配制时先用3~5ml水将碘化钾溶解,再加入碘,用力摇匀,使之全部溶解后,再加水稀释至300ml,摇匀,分装在棕色瓶中储存。
2.1.3稀石碳酸红溶液:碱性品红 1.0g石碳酸 5.0ml95%乙醇10.0ml配制时用乙醇溶解碱性品红,然后加入石碳酸溶液,使用时加水稀释至100ml,摇匀。
2.2操作:2.2.1涂片:用接种环挑取液体培养物中菌体在载玻片上涂成薄层,固体培养物则先在载玻片上滴一滴蒸馏水或生理盐水,用接种环挑取少量菌体在载玻片上涂成薄层。
细菌常见的生化反应试验(一)什么是生化试验?指通过利用生物化学的方法来测定微生物的代谢产物、代谢方式和条件等来鉴别细菌的类别、属种的试验。
生化试验或称生化反应:细菌的酶不完全相同,对营养物质的分解能力不一致,因此其代谢产物各异。
在培养基中加入可与被测终产物反应的指示剂,产生肉眼可见的变化,如颜色的改变等,利用生化方法来鉴定细菌的试验,统称为细菌的生化试验或称生化反应(二)生化试验的方法:1在培养物中加入某种底物与指示剂,经接种、培养后,观察培养基的pH值变化。
2在培养物中加入试剂,观察它们同细菌代谢产物所生成的颜色反应。
3根据酶作用的反应特性,测定酶的存在。
4根据细菌对理化条件和药品的敏感性,观察细菌的生长情况。
(三)生化试验的注意事项1.待检菌应是新鲜培养物,培养18~24h。
2.待检菌应是纯种培养物。
3.遵守观察反应的时间。
观察结果的时间,多为24或48小时。
4.应做必要的对照试验。
5.提高阳性检出率,至少挑取2~3待检的疑似菌落分别进行试验。
(四)检验细菌的生化试验范围:1、糖(醇)类代谢试验 2、氨基酸和蛋白质代谢试验3、有机酸盐和铵盐的利用试验 4、呼吸酶类试验 5、毒性酶类试验二、糖醇类代谢试验(一)糖醇类发酵试验(二)葡萄糖氧化发酵(O/F)试验(三)V-P试验(四)甲基红(Methyl Red)试验MR(五)七叶苷水解试验(六)甘油品红试验(一)糖醇类发酵试验1、原理:不同的细菌对各种糖醇的分解能力及所产生的代谢产物各不同,有的能分解多种糖(醇),有的只能分解1~2种糖(醇) ,有的分解糖(醇)能产酸产气,有的分解糖(醇)只产酸不产气,根据这些特点,可鉴别细菌。
常用的糖醇单糖:葡萄糖、甘露糖醇、木糖、半乳糖鼠李糖双糖:乳糖、蔗糖、麦芽糖、蕈糖三糖:棉子糖多糖:菊糖、肝糖、淀粉醇类:甘露醇、山梨醇、肌醇、卫茅醇2试验方法:用接种针或环移取纯培养物少许,接种于糖发酵管中,若为半固体培养基,则用接种针作穿刺接种。
验证文件大豆磷脂微生物限度检测方法验证起草人起草日期审核人审核日期批准人批准日期文件编号目录1适用范围 ....................................................................................................................... - 1 - 2目的 ............................................................................................................................... - 1 - 3概述 ............................................................................................................................... - 1 - 4验证所需要的仪器设备及文件 ................................................................................... - 1 - 5可接受的限度范围标准 ............................................................................................... - 2 - 6测试方法 ....................................................................................................................... - 5 - 7异常情况处理 ............................................................................................................. - 15 - 8测试结果 ..................................................................................................................... - 15 - 9结论 ............................................................................................................................. - 15 - 10再验证周期 ............................................................................................................... - 16 - 11附表 ........................................................................................................................... - 16 -1适用范围本验证方案适用于大豆磷脂微生物限度检查法的验证。
高级卫生专业资格(正高副高)临床医学检验临床化学技术专业资格(正高副高)模拟题2021年(103)(总分97.63, 做题时间120分钟)A1/A2题型1.肺炎链球菌由光滑型(s)转变为粗糙型(R),主要是由于下列何种结构发生变化()SSS_SINGLE_SELA外膜蛋白B荚膜C脂多糖D溶血素EM抗原2.卡他布兰汉菌在形态方面与下列哪种细菌相似SSS_SINGLE_SELA流感嗜血杆菌B淋病奈瑟菌C军团菌D放线菌E支原体3.药敏试验筛选耐甲氧苯青霉素葡萄球菌(MRS),其筛选率最高的方法:SSS_SINGLE_SELA试管稀释法B微量稀释法C琼脂稀释法D纸片扩散法E肉汤稀释法4.引起猩红热的主要病菌为SSS_SINGLE_SELAB群链球菌B草绿色链球菌C肠球菌DA群链球菌E肺炎链球菌5.最低药物浓度能杀死99.9%原始种入的细菌即为该菌的SSS_SINGLE_SELAMICBMBCCICDMPCEBC6.肺炎链球菌在血平板上生长,菌落周围的颜色是SSS_SINGLE_SELA红色B褐色C绿色黑色E金黄色7.以下患者中,不需要进行体液内抗生素浓度测定的是SSS_SINGLE_SELA肝功能不全患者B长期使用庆大霉素C肾功能不全患者D严重感染,需加大剂量用药者E以上都不是8.溶菌酶溶菌作用的机制是SSS_SINGLE_SELA破坏肽聚糖的β1.4糖苷键B抑制四肽侧链与五肽交联桥的联结C干扰细菌DNA的复制D干扰细菌蛋白质的合成E损害细胞膜9.测定细菌DNA中G+C的含量百分比可作为SSS_SINGLE_SELA判断细菌致病力强弱的依据之一B细菌分类的重要依据之一C区分死菌和活菌的依据之一判断细菌对热抵抗力强弱的依据之一E判断细菌繁殖速度的依据之一10.PRP应检测MIC的药物是SSS_SINGLE_SELA氨苄西林B氨苄西林/舒巴坦C头孢唑肟D头孢噻肟E头孢克肟11.血浆凝固酶试验的阳性质控菌为SSS_SINGLE_SELA肠球菌B肺炎链球菌C表皮葡萄球菌D草绿色链球菌E金黄色葡萄球菌12.对于培养基的质控,以下说法不正确的是SSS_SINGLE_SELA自制培养基每批次需进行性能验证B包括生长试验C包括无菌试验部分培养基需进行生长抑制试验E市售商品化培养基完全不必做性能验证试验13.铜绿假单胞菌所引起医院性感染最常见于SSS_SINGLE_SELA肾结石患者B脑膜炎患者C烧伤患者D肾炎患者E糖尿病患者14.有关热源质叙述错误的是SSS_SINGLE_SELA是多数革兰阴性菌少数革兰阳性菌合成代谢产物B是革兰阴性菌细胞壁中脂多糖C注入人、动物体可引起发热D121℃20分钟可被处理破坏E可经吸附剂、石棉滤板除掉15.怀疑化脓性脑膜炎的患者的脑脊液标本处理不正确的是SSS_SINGLE_SELA尽快送检B保持常温运输C冷藏实验室收到标本应优先处理E涂片应离心16.细菌学名的中文译名,正确的是SSS_SINGLE_SELA属名在前,种名在后B种名在前,属名在后C科名在前,属名在后D科名在前,种名在后E属名在前,科名在后17.关于稀释法药敏试验中使用的母液叙述正确的是SSS_SINGLE_SELA用滤纸过滤除菌B用多孔玻璃滤器除菌C少量室温保存D用滤膜过滤除菌E-10℃长期保存18.关于E试验叙述错误的是SSS_SINGLE_SELA采用内含干化、稳定、浓度由高至低呈指数梯度分布的抗菌药物的塑料试条B90mm平板通常能放2~3根试条C可直接定量测出药物的MIC孵育后可围绕试条形成椭圆形抑菌圈E140mm平板内可放6根试条19.纸片扩散法药敏试验中,抗菌药物纸片的直径应为SSS_SINGLE_SELA**B**C**D**E**20.天花是通过下列哪一种疫苗的应用而被消灭的SSS_SINGLE_SELA天花病毒疫苗B灭活疫苗C痘苗病毒疫苗D减毒活疫苗E传代细胞疫苗21.初步鉴定A群链球菌的试验是SSS_SINGLE_SELA马尿酸钠水解试验BcAMP试验COptochin敏感试验杆菌肽敏感试验E胆汁七叶苷水解试验22.关于条件致病菌的致病条件,下列叙述错误的是SSS_SINGLE_SELA机体免疫力下降B细菌寄居机体的部位发生改变C机体抵抗力降低D长期使用广谱抗生素引起菌群失调症E破伤风杆菌感染23.有关肉汤稀释法中药物原液的描述,叙述错误的是SSS_SINGLE_SELA原液浓度不低于1000μg/mlB原液浓度10倍高于最高测试浓度C原液浓度10倍高于最低测试浓度D原液应贮存于-60℃以下E保存期不超过6个月24.有关鞭毛的叙述不正确的是SSS_SINGLE_SELA化学成分是蛋白质B是细菌的运动器官C某些细菌鞭毛与其致病性有关具有抗原性E必须在电镜下才可见25.大多数荚膜的化学组成是SSS_SINGLE_SELA脂多糖B蛋白质C多糖D磷壁酸E脂蛋白26.对肠球菌筛选氨基糖苷类高水平耐药性可预测SSS_SINGLE_SELA哌拉西林和一种氨基糖苷类的协同效应B氨苄西林和一种氨基糖苷累类的协同效应C青霉素和一种氨基糖苷类的相加效应D氨苄西林和一种氨基糖苷类的相加效应E万古霉素和一种氨基糖苷类的相加效应27.关于微生物检验的质量控制不正确的是SSS_SINGLE_SELA包括室内质量控制和室间质量评价B包括培养基、试剂、标本、标本接种、培养鉴定等细菌检验全过程的质量控制C包括仪器设备的操作及人员培训标本指南保留在实验室,不须发给临床医护人员E标本的收集、运送和贮存要符合一定的要求,否则影响细菌检验结果28.对于缺乏能力验证的检验项目,试验准确性性能评估的方法不包括SSS_SINGLE_SELA与参考实验室分割标本检测B与其他实验室分割标本检测C分析纯物质、分析数据、查阅临床资料D与本实验室已建立的方法分割标本检测E进行室内质控29.为明确诊断,抽血培养的最佳时间是SSS_SINGLE_SELA先用抗生素3天,体温不退再抽血B停用抗生素2天后,抽取3次血培养,每次间隔1小时C在抗生素使用前,24小时内于畏寒发热时抽3次血培养D抽血时间与抗生素使用无关E停用抗生素1~2周后再抽血30.需氧培养法培养细菌一般需多少时间SSS_SINGLE_SELA4~8小时B8~12小时C12~18小时18~24小时E24~30小时31.铁锈色小孢子菌药物敏感试验方法是SSS_SINGLE_SELA液体稀释法B琼脂斜面法C纸片琼脂扩散法DE试验E以上都不是32.MBC的含义SSS_SINGLE_SELA最低抑菌浓度B最低杀菌浓度C最高抑菌浓度D最高杀菌浓度E最低稀释浓度33.对青霉素不敏感的微生物是SSS_SINGLE_SELA梅毒螺旋体B钩端螺旋体C回归热螺旋体肺炎支原体E淋病奈瑟菌34.配制的M-H琼脂平皿置2~8℃冰箱保存,需在几日内用完SSS_SINGLE_SELA5日B6日C7日D8日E9日35.乙型溶血性链球菌的致病物质不包括SSS_SINGLE_SELA溶血素OB肠毒素C致热外毒素D溶血素SEM蛋白36.下列关于FIC(联合抑菌分数)指数计算公式正确的是SSS_SINGLE_SELAFIC指数=甲药联合时的MIC/甲药单独时的MIC+乙药联合时的MIC/乙药单独时的MICBFIC指数=甲药联合时的MIC/乙药联合时的MIC+甲药单独时的MIC/乙药单独时的MICCFIC指数=甲药联合时的MIC/乙药单独时的MIC+乙药联合时的MIC/甲药单独时的MICDFIC指数=甲药单独时的MIC/甲药联合时的MIC+乙药单独时的MIC/乙药联合时的MICEFIC指数=乙药单独时的MIC/甲药联合时的MIC+乙药联合时的MIC/甲药单独时的MIC37.不属于选择性培养基的是SSS_SINGLE_SELA巧克力平板BSS平板C麦康凯平板D碱性蛋白胨水E伊红-亚甲蓝琼脂38.液体稀释法中配制药物原液时如果不清楚该抗生素有效力,可以拟定此抗生素粉剂是纯品,可用以下哪个公式计算标准粉剂的用量(其中A:称量标准粉剂的mg数,B:稀释剂的ml数,C:贮存液浓度,D:标准粉剂的有效力)SSS_SINGLE_SELAA=B×C/DBA=B×D/CCB=A×C/DDA=D×C/BEB=D×C/A39.接种牛痘后产生对天花的抵抗力,这表明SSS_SINGLE_SELAAg特异性BAg的交叉反应C先天免疫D过继免疫E被动免疫40.可用于鉴别细菌的细胞质内的颗粒SSS_SINGLE_SELA核蛋白体B核质C糖原D异染颗粒E脂肪颗粒41.肺炎链球菌对青霉素的耐药机制是SSS_SINGLE_SELA青霉素结合蛋白的改变B产生钝化酶C药物作用靶位改变D药物外排作用E外膜蛋白减少42.关于培养基的质量控制不正确的是SSS_SINGLE_SELA一般平板培养基2~8℃可保存1~2周培养基制作完成后应进行灭菌效果检测CMH平板的厚度应为4mm,其他平板厚度一般为3mm,斜面培养基长度不超过试管2/3D第一批新配制(或新购入)的培养基均应用已知标准菌株进行预测E一般市售培养基的配制可不测其pH43.不属于血清学反应的试验是SSS_SINGLE_SELA协同凝集试验B对流免疫电泳C血凝抑制试验DO/129抑菌试验E补体结合试验44.关于直接涂片镜检的叙述,下列哪项是正确的SSS_SINGLE_SELA适用于所有细菌感染疾病的初步检查B方法简便易行,但均不能快速鉴定细菌C只适用于形态和染色性上具有特征的病原菌D其结果必须结合临床表现方有诊断价值E以上都不是45.关于微生物学标本的采集和运送,应注意的事项包括SSS_SINGLE_SELA用无菌容器盛标本标本采集后应立即送检C采集标本时应采用无菌操作,防止杂菌污染D做厌氧培养的标本应尽可能在厌氧条件下采集与送检E以上都是46.细菌核质的特点是SSS_SINGLE_SELA含两条染色体B含组蛋白C无核膜,有核仁DDNA呈线状E基因组内无内含子47.含有万古霉素和多粘菌素B的巧克力琼脂培养基常用于分离SSS_SINGLE_SELA淋病奈瑟菌B肺炎链球菌C流感嗜血杆菌D白喉棒状杆菌E军团菌48.各型链球菌中,致病力最强的是SSS_SINGLE_SELA甲型溶血性链球菌乙型溶血性链球菌C丙型链球菌D草绿色链球菌EB群链球菌49.有关微生物的描述哪一项是错误的SSS_SINGLE_SELA病毒属于非细胞型微生物B细菌属于真核细胞型微生物C支原体属于原核细胞型微生物D衣原体属于原核细胞型微生物E立克次体属于原核细胞型微生物50.细菌中体积最小的是()SSS_SINGLE_SELA粘质沙雷菌B液化沙雷菌C深红沙雷菌D臭味沙雷菌E阴沟肠杆菌51.原核细胞型微生物和真核细胞型微生物的不同主要是SSS_SINGLE_SELA单细胞原始核、细胞器不完善C在人工培养基上生长D有细胞壁E对抗微生物药物敏感52.关于细菌荚膜的叙述,下列正确的是SSS_SINGLE_SELA与致病性有关B与分裂有关C与运动有关D与接合有关E与染色性有关53.抗链“O”试验可以辅助诊断SSS_SINGLE_SELA结核病B肺炎C流脑D百日咳E急性肾小球肾炎54.关于体外药物敏感试验的稀释法,以下叙述错误的是SSS_SINGLE_SELA稀释法所稀释的是某抗菌药物的浓度稀释法测定的是某抗菌药物对细菌的最大抑菌浓度C该法测定的是抗菌药物对细菌的MIC值DMIC即为能抑制细菌肉眼可见生长的最小药物浓度E稀释法包括肉汤稀释法和琼脂稀释法55.液体稀释法不适何做药敏试验的是SSS_SINGLE_SELA头孢噻肟B氧氟沙星C磺胺D万古霉素E红霉素56.某患者痰中分离到嗜麦芽窄食单胞菌,对该菌天然耐药的药物是SSS_SINGLE_SELA舒普深B头孢吡肟C左旋氧氟沙星D亚胺培南E复方新诺明57.如果金黄色葡萄球菌对头孢西丁耐药,则该菌株对亚胺培南SSS_SINGLE_SELA敏感中介C耐药D剂量依赖性敏感E不报告58.关于试剂质量控制错误的是SSS_SINGLE_SELA新鲜血浆(凝固酶测定)每天用金黄色葡萄球菌做阳性对照B每批氧化酶试剂用铜绿假单胞菌做阳性对照C革兰染液应每天用金黄色葡萄球菌做阳性对照D3%过氧化氢每天用金黄色葡萄球菌做阳性对照E10%去氧胆酸钠每周可用A链球菌做阳性对照59.下列哪个是选择性培养基SSS_SINGLE_SELASS平板B血琼脂平板C肉膏汤培养基D蛋白胨水E巧克力平板60.检查菌体的不同结构成分及抗原与特异性抗体结合形成复合物时须用SSS_SINGLE_SELA普通显微镜荧光显微镜C暗视野显微镜D倒置显微镜E照相显微镜61.细菌检验标本需离心处理,通常采用的速度是多少rpmSSS_SINGLE_SELA1000B2000C3000D4000E500062.男孩患咽炎4周后,又患急性肾小球肾炎,最可能是SSS_SINGLE_SELAA群链球菌感染后引起的Ⅲ型变态反应B结核菌引起的肾结核C伤寒沙门菌在菌血症期侵入肾脏所致炎症D大肠埃希菌感染肾脏EB群链球菌感染后引起的Ⅲ型变态反应63.链球菌分类的根据是SSS_SINGLE_SELA在血液琼脂培养基中溶血的情况产生色素的颜色C细菌的致病作用D鞭毛抗原的特异性E对营养的要求64.与β-内酰胺类抗生素联用能增加其抗菌活性的是SSS_SINGLE_SELA亚胺培南B甲氧西林C红霉素D舒巴坦E克林霉素65.可用琼脂扩散法测定其药敏试验的细菌是SSS_SINGLE_SELA屎肠球菌B鸟分枝杆菌C洋葱假单胞菌D普通变形杆菌E曼不动杆菌66.脑膜炎奈瑟菌属于SSS_SINGLE_SELA革兰阳性球菌革兰阴性球菌C有芽胞D革兰阳性杆菌E革兰阴性杆菌67.脑膜炎奈瑟菌需要在二氧化碳环境中生长,其浓度为SSS_SINGLE_SELA3%~7%B5%~10%C10%~15%D15%~20%E20%~25%68.纸片扩散法药敏试验中,MH平板的厚度应为SSS_SINGLE_SELA1mmB2mmC3mmD4mmE5mm69.能形成“脐”状菌落的细菌是SSS_SINGLE_SELA炭疽芽孢杆菌大肠埃希菌C伤寒沙门菌D肺炎链球菌E破伤风梭菌70.革兰阳性菌和革兰阴性菌细胞壁的共同成分是SSS_SINGLE_SELA磷壁酸B脂多糖C脂蛋白D脂质E肽聚糖71.细菌鞭毛的作用主要是SSS_SINGLE_SELA与抵抗力有关B与分裂繁殖有关C与运动有关D与粘附有关E与变异有关72.在琼脂稀释法中关于含药琼脂制备正确的是SSS_SINGLE_SELA将已稀释的抗菌药物按1:5(配置的药物溶液:琼脂培养基)加入在55~60℃水浴中平衡融化的MH琼脂C室温凝固后的平皿装入密闭塑料袋中,置2~8℃,贮存日期为1个月D对易降解药物,在使用48小时之内制备平板E琼脂厚度为2mm73.运用API系统进行细菌的鉴定,下列哪一项是不需要的SSS_SINGLE_SELAAPI反应试条B添加试剂C操作规程D编码本或电脑软件E微量发酵管74.可疑肉毒毒素中毒的患者,分离病原菌主要的标本是SSS_SINGLE_SELA患者吃剩的食物B伤口的渗出液C患者的脑脊液D患者的血液E患者的粪便75.血培养的抗凝剂为SSS_SINGLE_SELASPSEDTAC肝素D枸橼酸钠E都可以76.临床血液标本采集后首先应该做什么处理SSS_SINGLE_SELA转种血平板B增菌培养C离心沉淀D转种选择性平板E分离培养77.初步鉴定B群链球菌的试验是SSS_SINGLE_SELA杆菌肽敏感试验B胆汁七叶苷水解试验CcAMP试验D山梨醇发酵试验EOptochin敏感试验78.能代表患者血清杀菌力的是SSS_SINGLE_SELA无肉眼可见菌生长的血清最高稀释管菌落计数等于或小于0.1%最初接种菌量的血清最高稀释管C菌落计数等于或小于0.2%最初接种菌量的血清最高稀释管D菌落计数等于或小于0.3%最初接种菌量的血清最高稀释管E菌落计数等于或小于0.5%最初接种菌量的血清最高稀释管79.临床上不需进行TDM的抗生素药物有()SSS_SINGLE_SELA丁胺卡那霉素B青霉素C链霉素D氯霉素E妥布拉霉素80.关于药敏纸片的说法,下列哪项是错误的SSS_SINGLE_SELA影响抑菌环大小的重要因素是纸片含药量的高低B含药纸片在-20℃可保存一年C使用前应置室温平衡1~2小时D新购入的含药纸片可直接使用E含药纸片保存中应保持干燥81.下列哪种情况无需进行联合药敏试验SSS_SINGLE_SELA对单一抗菌药物不敏感对某抗菌药仅轻度敏感,该药有毒性不能大量应用C某抗菌药大量使用,但在血中无法达到有效浓度D延长耐药菌株的产生E对某抗菌药敏感82.非细胞型微生物是SSS_SINGLE_SELA支原体B放线菌C衣原体D细菌E以上都不是83.在一腹膜炎患者腹腔引流液中分离出阴沟肠杆菌,药敏试验对头孢他啶敏感,用头孢他啶治疗4d后,仍高热,经培养仍为阴沟肠杆菌,但对头孢他啶耐药,最大可能是细菌产生了SSS_SINGLE_SELAAmpC酶BESBL酶CDNA酶D氧化酶E凝固酶84.下列微生物哪种为真核细胞型微生物SSS_SINGLE_SELA细菌B真菌C立克次体D衣原体E支原体85.用以观察细菌内部结构的最好仪器是SSS_SINGLE_SELA相差显微镜B荧光显微镜C暗视野显微镜D电子显微镜E光学显微镜86.1岁男孩,临床诊断为细菌性脑膜炎,细菌培养时发现在预加的金黄色葡萄球菌菌落周围细菌生长旺盛,出现卫星现象,关于该菌做药敏试验时叙述正确的是SSS_SINGLE_SELAM-H琼脂培养基B空气中孵育C平板倒置放入35℃孵箱D孵育8小时后看结果E培养基pH为6.087.介导转导的物质是SSS_SINGLE_SELA性菌毛B噬菌体CR质粒DF质粒EVi质粒88.下列血培养系统中哪一种既可检测普通细菌又可以检测分枝杆菌SSS_SINGLE_SELABACTEC9240BBact/Alert3DCBACTEC960DVITEKEMiccroscan89.关于危急值,不正确的是SSS_SINGLE_SELA及时发送分级报告B立即通知临床医生或相关人员C未及时通知相关人员时,无需记录此事件及其原因D经与临床讨论建立检测重要指标及其”警告/危急”范围E危急值报告记录包括日期、时间、报告者、报告接受者及检测结果90.下列细菌中可进行“冷增菌”的是SSS_SINGLE_SEL炭疽芽孢杆菌B红斑丹毒丝菌C产单核李斯特菌D破伤风芽孢杆菌E蜡样芽孢杆菌91.有关临床标本采集与处理的叙述,错误的是SSS_SINGLE_SELA生殖道标本进行淋球菌培养时,如未能及时接种,可将标本于4℃的环境下保存B脓汁厌氧培养时,注射器取材后须将空气排空,针头插在灭菌橡皮塞内C粪便标本不能及时分离培养,应接种卡一布运送培养基送检D尿液厌氧菌培养采用膀胱穿刺法收集标本E血培养一般应在患者发热初期或高峰时采集标本92.在含6.5%NaCl的培养基中能生长的细菌是SSS_SINGLE_SELAA群链球菌B肺炎链球菌C草绿色链球菌D肠球菌EB群链球菌93.下列各群链球菌中,最常引起新生儿败血症的是SSS_SINGLE_SELF群链球菌B群链球菌是新生儿肺炎、脑膜炎和败血症的病原体。
述:无菌药品的容器应能在整个有效期内有完好的密封性,防止微生物的浸入。
药品包材的设计及选择要考察相互的配合情况。
无菌容器/密封件系统的完整性测试可以在培养基灌装时进行。
2.目的:评估产品包装的密封性,以充分保护产品在储存期的无菌状态。
3.依据:《药品生产质量管理规范》2010修订版:附录1:第九十五条无菌药品包装容器的密封性应经过验证,以避免产品遭受污染。
4.责任:质量部、生产部对本验证负责。
5.微生物浸入试验法验证密封完整性:往产品容器内灌入培养基并按照常规方式压塞封盖,灭菌后冷却备用。
将冷却后的容器倒置并将瓶口完全浸没于高浓度(108CFU/ml)的运动性菌液中,4小时后,将容器外表面消毒并培养,看是否有挑战性细菌在容器内生长。
多准备一些灌装培养基的样品,在与产品相同地的贮存条件下贮存。
在贮存的一定时间间隔(12,24,36和48个月等),取出部分样品,进行微生物浸入试验,以确定密封系统在贮存期内的有效性。
6.范围:西林瓶、胶塞及铝盖的密封性验证,共有10ml及2ml两种规格。
7.用品:胆盐乳糖培养基铜绿假单胞菌(ATCC 9027)乙酸异丙醇8.实施:8.1制备样品:取已经按相应清洗灭菌操作规程制备好的西林瓶、胶塞及铝塑组合盖150套,西林瓶内灌装入已灭菌的胆盐乳糖培养基,在正常生产线上抽真空、压塞、轧盖。
将每一试样品倒转,使培养基与西林瓶内表面及胶塞充分接触,在30~35℃竖立倒置培养14天,培养基应澄清,无菌落生长。
8.2制备微生物菌悬液:从铜绿假单胞菌(ATCC 9027)的新鲜斜面上取培养物,分别接入含6ml无菌胆盐乳糖培养基的试管中,在30~35℃下培养18~24h;将每管的培养物分别转入含600ml相同培养基的容器内,于30~35℃下培养(约24小时),在培养结束时,能明显见容器内培养基出现浑浊,计数,当菌落数大于108CFU/ml时,停止培养,待用(在微生物侵入试验开始,所用菌悬液浓度(活菌数)必须达到1×108CFU/ml。
铜绿假单胞菌在医院环境中的检测方法及它的后果分析在医院环境中,铜绿假单胞菌是一种常见的致病菌。
它广泛存在于水、土壤、动物和人体等多种环境中,特别是在医疗设施和医院环境中,铜绿假单胞菌非常易于传播和繁殖。
因此,开展对铜绿假单胞菌的检测方法及其后果分析具有重要的意义。
首先,关于铜绿假单胞菌的检测方法,主要有以下几种实验室技术可供选择。
其中,首要的方法是传统的细菌培养技术。
这种方法通过将采集到的样本在含有适当培养基的培养皿上进行培养,然后观察是否出现铜绿色的菌落形成。
此外,还可以使用分子生物学技术,如PCR(聚合酶链反应)和实时定量PCR。
利用这些方法,可以通过检测铜绿假单胞菌的特定基因序列来确定其存在与否。
除此之外,还可以应用质谱技术(MALDI-TOF MS)对菌落进行鉴定和分析。
其次,我们需要认识到铜绿假单胞菌在医院环境中散播的重要后果。
首先,铜绿假单胞菌是导致医院感染的主要致病菌之一。
它能够引起众多感染,尤其是对免疫功能较弱的患者,如长期住院的老年人和重症患者造成严重威胁。
其次,铜绿假单胞菌对多种抗生素具有耐药性。
这使得治疗感染变得复杂和困难,有效抗菌药物的选择变得极为有限。
再者,它还可能在医疗设施管道、水龙头、洗手台等地方形成生物被膜,给设备和环境带来难以清除的感染源。
针对铜绿假单胞菌在医院环境中的后果,我们需要采取一些措施来预防和控制其散播。
首先,建立和加强医院感染控制政策和规范流程,明确责任和义务,确保医务人员正确执行感染防控措施,如手卫生和环境清洁消毒。
其次,严格执行医院的水质管理,确保水源的安全、干燥和通风的医疗环境。
此外,实施有效的感染监测,定期对医院内不同区域、设备和患者进行铜绿假单胞菌的检测,及时发现和隔离感染源。
最后,加强医务人员的培训和教育,提高他们对感染防控的认识和理解,增强对患者和环境的保护意识。
综上所述,铜绿假单胞菌在医院环境中的检测方法和其后果分析对于确保医院环境安全和患者健康具有重要的作用。
保健用品微生物检验方法 第3部分:铜绿假单胞菌测定警示——使用本标准的人员应有正规实验室工作的实践经验。
本标准并未指出所有可能的安全问题。
使用者有责任采取适当的安全和健康措施,并保证符合国家有关法规规定的条件。
1 范围本标准规定了保健用品中微生物中铜绿假单胞菌的测定方法。
本标准适用于生产和经营的保健用品中的铜绿假单胞菌测定。
2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。
凡是注日期的引用文件,仅所注日期的版本适用于本文件。
凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法GB 19489 实验室生物安全通用要求3 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。
3.1铜绿假单胞菌 Pseudomonas aeruginosa属于假单胞菌属,为革兰氏阴性杆菌,氧化酶阳性,能产生绿脓菌素。
此外还能液化明胶,还原硝酸盐为亚硝酸盐,在42 ℃±1 ℃条件下能生长。
4 试剂和材料除另有规定外,所有试剂均为分析纯 。
实验用水符合GB/T 6682中二级水的要求。
4.1 灭菌生理盐水:详见附录A.1。
4.2 灭菌液体石蜡:详见附录A.2。
4.3 灭菌吐温-80:详见附录A.3。
4.4 SCDLP:详见附录A.4。
4.5 十六烷基三甲基溴化铵:详见附录A.5。
4.6 乙酰胺:详见附录A.6。
4.7 革兰氏染液:详见附录A.7。
4.8 绿脓菌素测定培养基:详见附录A.8。
4.9 硝酸盐蛋白胨水:详见附录A.9。
4.10 明胶液化培养基:详见附录A.10。
5 仪器和设备5.1 天平:感量0.1 g。
5.2 灭菌刻度吸管:10 mL、5 mL、1 mL。
5.3 高压灭菌器。
5.4 量筒:100 mL、200 mL、2000 mL。
5.5 恒温水浴箱或隔水式恒温箱:44.5 ℃±0.5 ℃。
5.6 无菌锥形瓶:100 mL、200 mL、250 mL、2000 mL。
GB 8538—2016铜绿假单胞菌方法学验证报告一、验证目的验证《食品安全国家标准饮用天然矿泉水检验法GB 8538-2016》-铜绿假单胞菌检验在本实验室的适用性。
二、验证方法样品采样方案依据GB4789.1-2016 《食品微生物学检验总则》的要求进行,本实验样品取三个不同品牌的饮用天然矿泉水的典型样品进行实验,严格按照GB8538-2016进行。
除上述实验程序外,为保证本次验证的科学性和准确性,本次实验添加阳性对照组,对照组由标准菌株铜绿假单胞菌(CMCC(B)10104)接种培养而成,与样品实验程序同时进行。
三、验证设备和试剂1.冰箱:SC-322 青岛海尔电器2.生化培养箱:SPX-150B-Z 上海博迅实业3.电位pH计:PHS-3C+(精确度0.01)成都世纪方舟科技有限公司4.恒温振荡器:SHA-A 江苏金坛环宇科学仪器厂5.菌落计数仪:Scan-500 北京五洲东方科技发展有限公司6.天平:JE-502 上海浦春计量仪器有限公司7.六联不锈钢过滤器北京中兴伟业仪器有限公司8.三用紫外分析仪:ZF-2 上海安亭电子仪器厂培养基和试剂:1.假单胞菌琼脂基础培养基北京陆桥技术股份有限公司2.绿脓菌素测定用培养基北京陆桥技术股份有限公司3.金氏B培养基北京陆桥技术股份有限公司4.营养琼脂北京陆桥技术股份有限公司5.氧化酶试剂北京陆桥技术股份有限公司6.乙酰胺肉汤北京陆桥技术股份有限公司7.三氯甲烷国药集团有限公司8.纳氏试剂北京陆桥技术股份有限公司四、验证环境1.依据《消毒与灭菌效果的评价方法与标准GB15981-1995》定期对高压蒸汽灭菌锅的灭菌效果进行检测评价并记录;2.依据《无菌室消毒灭菌操作规程》定期对对无菌室、生物安全柜进行清洁消毒灭菌并记录;3.依据《实验室质量控制规范食品微生物检测GB/T27405-2008》定期对对无菌室及生物安全柜进行沉降菌检测并记录;4.无菌室检验:详见《XXXX》;五、验证步骤1.操作步骤1. 1水样过滤在100级的洁净工作台进行过滤操作。
铜绿假单胞菌的菌种鉴定
铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)是一种革兰氏阴性细菌,通常是一种耐药性很强的致病菌。
对于铜绿假单胞菌的鉴定可以从多个角度进行:
1. 形态特征,铜绿假单胞菌是一种革兰氏阴性杆菌,通常呈杆状。
在培养基上形成圆形、平滑、有金属光泽的绿色或蓝绿色细菌落。
2. 生理生化特征,铜绿假单胞菌对氧的需求较高,是一种好氧菌。
它能够利用多种碳源和氮源进行代谢,产生酶类如氧化酶和蛋白酶。
此外,铜绿假单胞菌还能产生金属螯合物和溶解磷酸盐等特性。
3. 生化试验,进行一系列生化试验,如氧化/发酵葡萄糖、产气、利用麦尔刻姆盐基本培养基等试验,可以帮助鉴定铜绿假单胞菌。
4. 分子生物学鉴定,利用PCR技术对细菌的16S rRNA基因进行扩增和测序,然后与已知的铜绿假单胞菌的序列比对,可以准确
鉴定出细菌的种属。
总的来说,铜绿假单胞菌的鉴定需要结合形态特征、生理生化
特征、生化试验和分子生物学方法,综合分析才能做出准确的鉴定。
这些方法的综合运用可以帮助科研人员和临床医生准确诊断和治疗
相关感染。