U251人神经胶质瘤细胞

微小核糖核酸592调控神经胶质瘤细胞株U251细胞凋亡陈照亮;刘红;杨会利;高玉凯;张娟;吉文玉【摘要】目的研究微小核糖核酸592(miR-592)对神经胶质瘤细胞株U251凋亡的影响.方法首先通过定量聚合酶链反应分析miR-592在神经胶质瘤组织和癌旁组织中的表达变化;随后向U251细胞转染miR-592的拟合物,并通过流式细胞技术分析miR-592过表达对U251细胞凋亡的影响;通过生物信息学分析,找到miR-592的潜在靶分子,并通过荧光素酶双报告实验以及蛋白免疫印迹法等进行验证;进一步,转染U251细胞Runx2的下调siRNA,绘制细胞的生长曲线,并对U251细胞的凋亡进行分析.结果定量PCR结果分析发现,miR-592在肿瘤组织中明显低表达(t=2.752,P=0.013);miR-592过表达能明显抑制U251细胞的生长,与对照组比较,培养36 h、48 h后存在统计学差异(t=2.127,P=-0.031;t=2.284,P=0.026);流式细胞分析结果显示,miR-592显著促进U251细胞凋亡:对照组晚期凋亡率为7.2％±0.68％,而转染miR-592组晚期凋亡率为17.47％±1.45％,存在统计学差异(t=3.294,P=0.007);荧光素酶双报告实验以及蛋白免疫印迹法实验结果发现miR-592直接靶向Runx2的3'-UTR来抑制Runx2蛋白的水平;检测下调Runx2对U251细胞生长的影响,结果显示转染了Runx2 siRNA的细胞生长明显比对照组低(t=3.124,P=0.011),流式细胞技术对周期的检测显示,Runx2下调表达上调U251细胞的凋亡率.通过绘制肿瘤生长曲线,发现miR-592过表达明显抑制肿瘤的生长.同时,Runx2的下调表达也明显抑制肿瘤的生长.结论 miR-592通过直接靶向Runx2来诱导神经胶质瘤细胞凋亡,进而抑制细胞的生长.%Objective To investigate the role of miR-592 in the Glioma.Methods We first analyzed the expression of miR-592 in Glioma tissues from patients by quantitative PCR.We transfected U251 cells with miR-592 mimics and then detected thegrowth of cells by MTT assay.We performed dual-luciferase reporter assay and western blot assay to examine whether Runx2 was the direct target of miR-592 in U251 cells.In order to test whether Runx2 was the functional target of miR-592,we determined the cell growth curve by down-regulating the level of Runx2.Moreover,we also detected the apoptosis ofU251 after Runx2 knockdown.Results The expression of miR-592 was significantly reduced in glioma tissues (t=2.752,P--0.013).Over-expression miR-592 remarkably increased the apoptotic rate of U251 cells compared with the control group (t=2.127,P=0.031;t=2.284,P=0.026).Flow cytometry analysis showed that MiR-592 significantly promoted apoptotic cell deathof U251 cells Apoptosis rate was 7.2％±0.68％ in miR-592 group and 17.47％±1.45％ in control group (t=3.294,P=0.007).The results of double luciferase assay and Western blot assay showed that miR-592 directly targeted the3'Runx2 of-UTR to inhibit the level of Runx2 protein.The effect of down-regulation of Runx2 on the growth of U251 cells was detected,the results showed that growth was significantly slower in the cells transfected with Runx2 siRNA than in those without Runx2 siRNA(t=3.124,P=0.O11).Detection of cycle by flow cytometry showed that runx2 down-regulated the apoptosis rate of U251 cells.Tumor growth curve showed that overexpression of miR-592 significantly inhibited tumor growth and the down regulation of Runx2 expresssion also significantly inhibited tumor growth.Conclusion miR-592 suppresses the growth and promotes the apoptotic rate of U251 cells by targeting Runx2.【期刊名称】《中国神经精神疾病杂志》【年(卷),期】2017(043)004【总页数】5页(P234-238)【关键词】神经胶质瘤;U251;miR-592;凋亡;Runx2【作者】陈照亮;刘红;杨会利;高玉凯;张娟;吉文玉【作者单位】滨州市中心医院肿瘤科滨州251700;滨州市中心医院肿瘤科滨州251700;滨州市中心医院肿瘤科滨州251700;滨州市中心医院肿瘤科滨州251700;滨州市中心医院肿瘤科滨州251700;新疆医科大学第一附属医院儿外一科【正文语种】中文【中图分类】R651神经胶质瘤是最为常见的原发性中枢神经系统肿瘤。

ATP1A1基因沉默抑制人胶质瘤细胞U251侵袭陈鸿;陈松;霍钢【摘要】目的探讨沉默Na+/K+ATP酶A1亚基(ATP1A1)对人U251胶质瘤细胞系侵袭能力的影响及其机制.方法用shRNA-ATP1A1慢病毒感染人U251胶质瘤细胞,RT-qPCR及Western blot分别检测ATP1A1 mRNA和蛋白的表达;MTT法检测细胞体外的增殖;细胞划痕实验及Transwell小室检测细胞的迁移及侵袭能力;Western blot检测基质金属蛋白酶2/9(MMP-2/9)的表达.结果沉默ATP1A1细胞的ATP1A1 mRNA和蛋白表达均受到了明显抑制;细胞的增殖和迁移、侵袭能力也显著受抑(P<0.05);MMP-2和MMP-9的表达也明显降低(P<0.05).结论靶向ATP1A1干扰能够明显抑制胶质瘤U251细胞的体外增殖、迁移及侵袭,其机制可能与MMP-2、MMP-9的下调相关,ATP1A1可能作为胶质瘤治疗的一个潜在靶点.%Objective To investigate the effect and mechanism of silencingATP1A1 gene on invasion ability of human U251 glioma cells.Methods The human U251 glioma cells were infected with lentivirus expressing shRNA-ATP1A1.The mRNA and protein expression of ATP1A1 in U251 glioma cells was detected by RT-qPCR and Western blot,respectively.The proliferation of U251 glioma cells was determined by MTT assay.The migration and invasion ability were detected by cell scratch test and Transwell chamber.The protein expression of matrix metallo proteinase 2 (MMP-2) and MMP-9 in U251 glioma cells were detected by Western blot.Results The mRNA and protein expression of ATP1A1 in the silence group were significantly inhibited,The ability of proliferation, migration and invasion were also significantly inhibited (P<0.05),The expression of MMP-2 andMMP-9 were also significantly reduced,there was a significant difference(P<0.05).Conclusions RNA interference targeting ATP1A1 gene can significantly inhibit the proliferation, migration and invasion of glioma U251 cells.The mechanism might be related to the down-reguLation of MMP-9 and MMP-2.ATP1A1 can be used as a potential target for the treatment of glioma.【期刊名称】《基础医学与临床》【年(卷),期】2017(037)004【总页数】6页(P506-511)【关键词】ATP1A1;RNA干扰;胶质瘤;侵袭【作者】陈鸿;陈松;霍钢【作者单位】重庆医科大学附属第一医院神经外科,重庆 400016;重庆医科大学附属第一医院神经外科,重庆 400016;重庆医科大学附属第一医院神经外科,重庆400016【正文语种】中文【中图分类】R739.41恶性胶质瘤是中枢神经系统最常见的原发性肿瘤，早期侵袭是其最重要的生物学特征[1]。

关于基因敲除U251细胞系的应用U251细胞系是通过外植技术从恶性胶质母细胞肿瘤中衍生而来的，U251细胞系通常用作胶质母细胞瘤研究的实验模型。

U-251 MG细胞系人类已用于研究Pax6（配对盒蛋白）相关的Dkk3（Dickkopf 3）表达增加的机制，通过CRISPR/Cas9敲除PAX6的U251细胞系是常用的工具分子研究PAX6在减轻胶质母细胞肿瘤进程中的作用。

而且，U251细胞系可用于从U-251人胶质母细胞瘤细胞系中提取癌干细胞，这使其在基因编辑领域成为受欢迎的细胞系。

此外，它经常用于研究胶质母细胞瘤模型中JARID1B（富含Jumanji AT的交互式区域1B）在神经胶质瘤的发病机理中的作用以及艾力诺弗C联合替莫唑胺的治疗效果。

因此U251细胞是用于基因敲除，稳转细胞株等的合适细胞。

应用：发现PAX6-敲除的U251细胞系具有增强的增殖和集落形成能力转录因子PAX6在包括U251细胞系在内的各种癌细胞系中表达。

在间变性星形细胞胶质瘤中，PAX6表达与肿瘤级别成反比，从而导致胶质母细胞瘤（最高级别的星形细胞胶质瘤）中PAX6表达低。

U251细胞系通常用作胶质母细胞瘤研究的实验模型。

因此，一些科学家开发了PAX6基因敲除的U251细胞系，作为分子研究工具来研究PAX6在减轻胶质母细胞肿瘤进程中的作用。

CRISPR-Cas9技术用于敲除U251 N胶质母细胞瘤细胞中的PAX6。

指导RNA 被设计成在相对于转录起始位点（TSS）在+25至+58位之间的PAX6基因5'端附近产生突变。

强力霉素诱导的EGFP-PAX6表达载体的病毒转导用于在PAX6基因敲除的U251细胞中重新引入（拯救）PAX6表达。

通过分析形态，增殖，集落形成能力以及对氧化应激和化学治疗剂的反应，对敲除的U251细胞进行了严格表征。

结果表明，与WT细胞相比，敲除的U251细胞具有增强的增殖和集落形成能力，这与临床观察结果一致，表明PAX6可以起到抑癌作用。

咖啡因对体外培养U251人胶质瘤细胞的影响范耀东;边慧;瞿家桂;余化霖;陈芸【摘要】目的观察咖啡因对体外培养U251神经胶质瘤细胞存活及凋亡的影响.方法采用MTT和Annexin V/PI流式细胞法观察不同浓度和作用时间的咖啡因对U251神经胶质瘤细胞的影响.结果 (1)咖啡因在体外可以抑制U251人胶质瘤细胞的存活;(2)咖啡因在体外使U251细胞早期凋亡发生的时间较晚,且在1～ 10 mmol/L浓度范围内,出现浓度依赖性瘤细胞早期凋亡增加,大于10 mmol/L时,瘤细胞迅速出现大量坏死.结论实验初步证明了咖啡因在体外可以抑制U251人胶质瘤细胞的增殖活性并在一定浓度范围内(1～ 10 mmol/L)可促使其凋亡,为进一步的动物实验及新药开发提供实验依据.【期刊名称】《临床与实验病理学杂志》【年(卷),期】2016(032)005【总页数】4页(P544-547)【关键词】神经胶质瘤;咖啡因;凋亡;细胞存活【作者】范耀东;边慧;瞿家桂;余化霖;陈芸【作者单位】昆明医科大学第三附属医院(云南省肿瘤医院)神经外科,昆明650118;昆明医科大学生理教研室,昆明650031;中国科学技术大学生命科学学院,合肥230026;昆明医科大学第一附属医院微创神经外科,昆明650032;昆明医科大学第三附属医院(云南省肿瘤医院)病理科,昆明650118【正文语种】中文【中图分类】R739.4胶质瘤是中枢神经系统最常见的恶性肿瘤，尽管现在采取手术、放疗、化疗等综合治疗，但疗效仍不理想，尤其是高级别胶质瘤，预后较差。

化疗是治疗恶性肿瘤一个重要手段，但中枢神经系统因其血脑屏障的特殊结构，导致很多化疗药物无法有效透过血脑屏障，从而使很多化疗药物对中枢神经系统胶质瘤效果欠佳。

咖啡因是茶、咖啡及许多日常饮料的有效成分，具有广泛的药理效应。

近年有研究表明［1-3］，咖啡因对多种癌细胞具有一定的抗癌效果，甚至作为临床的化疗辅助用药以增强化疗疗效。

敲低IFI30通过激活STAT1抑制U251人胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移并促进其凋亡叶静静;徐文琴;陈天兵【期刊名称】《细胞与分子免疫学杂志》【年(卷),期】2024(40)1【摘要】目的构建γ干扰素诱导蛋白30(IFI30)表达抑制的U251细胞,探讨IFI30表达受到抑制后对细胞生物学功能的影响及机制。

方法在线设计敲低靶点并合成3条小干扰RNA(siRNA),转染后通过实时定量PCR技术检测抑制效率,选取抑制效率最高的siRNA序列构建短发夹RNA (shRNA)质粒。

重组质粒与包装质粒共转染HEK293T细胞制备慢病毒。

用慢病毒感染胶质瘤U251细胞,经嘌呤霉素筛选得到阳性细胞。

采用CCK-8实验、5-乙炔基-2′-脱氧尿苷(EdU)实验和集落形成实验分析细胞增殖活性,流式细胞术分析细胞周期和细胞凋亡,Transwell^(TM)实验检测细胞侵袭、划痕实验检测细胞迁移。

Western blot法检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、B细胞淋巴瘤因子2(Bcl2)、上皮钙黏蛋白(E-cadherin)和神经钙黏蛋白(N-cadherin)、信号转导子与转录激活子1(STAT1)。

结果筛选到有效的靶点序列并成功建立IFI30表达抑制的U251细胞。

敲低IFI30的表达抑制U251细胞增殖,G0/G1期细胞比例增加,S期减少,细胞凋亡明显增加,细胞的侵袭和迁移能力降低。

同时,U251细胞cyclin D1、Bcl2和N-cadherin的表达降低,E-cadherin, STAT1磷酸化表达增加。

结论敲低IFI30通过促进STAT1活化抑制U251细胞增殖、侵袭和迁移并促进其凋亡。

【总页数】10页(P33-42)【作者】叶静静;徐文琴;陈天兵【作者单位】皖南医学院重大疾病非编码RNA转化研究安徽普通高校重点实验室;皖南医学院弋矶山医院中心实验室【正文语种】中文【中图分类】R739.4;R392-33;Q81【相关文献】1.shRNA敲低ILK后对人脑胶质瘤细胞U251增殖、迁移及侵袭的影响2.丙泊酚通过上调microRNA-218的表达抑制人胶质瘤细胞U251的增殖、侵袭、迁移和凋亡3.松油烯-4-醇抑制神经胶质瘤U87和U251细胞增殖、迁移与侵袭并促进其凋亡4.敲低胆碱激酶α(CHKA)抑制U87MG人胶质瘤细胞增殖和侵袭及迁移5.敲低RBX1通过下调PHF5A抑制胰腺癌细胞增殖,迁移和侵袭并促进凋亡因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。