T淋巴细胞斑点试验在结核性胸膜炎临床诊断研究

T淋巴细胞斑点试验在结核性胸膜炎临床诊断研究

黄国华;古辉;杜燕芳

【摘 要】选择2014年8月~2015年8月收治的结核性胸腔积液患者与肿瘤性胸腔积液患者共80例，根据患者的病症类型分为结核性胸腔积液组及肿瘤性胸腔积液组各40例。应用Elispot技术检测两组患者血清和胸液中ESAT-6特异性T淋巴细胞，并根据检测结果进行诊断。将诊断结果与皮肤结核菌素试验的诊断结果进行对比分析，判断T-SPOT.TB诊断的灵敏度、特异度及准确度。血液样本及胸液样本的T-SPOT.TB诊断准确度均明显高于PPD的诊断准确度（P<0.05）；胸液样本的T-SPOT.TB诊断灵敏度明显高于血液样本（P<0.05）。 T淋巴细胞斑点试验在结核性胸膜炎临床诊断中具有较高的应用价值，且以胸水为样本准确性更高。

【期刊名称】《现代诊断与治疗》

【年(卷),期】2016(027)009

【总页数】3页(P1630-1632)

【关键词】EAST-6;酶联免疫斑点技术;结核性胸膜炎

【作 者】黄国华;古辉;杜燕芳

【作者单位】佛山市高明区人民医院，广东 佛山 528500;佛山市高明区人民医院，广东 佛山 528500;佛山市高明区人民医院，广东 佛山 528500

【正文语种】中 文

【中图分类】R521.7 结合菌诱发疾病的概率极高，但临床上对结核菌感染的诊断仍具有一定的局限性，特别是对结核杆菌潜伏性感染者的诊断十分匮乏［1］。免疫学诊断与现有的诊断方法相比具有简单、快速、敏感等优势，具有良好的发展前景，而结核病特异性抗原的研究则成为了免疫学诊断发展的关键［2］。现以80例结核性胸腔积液及肿瘤性胸腔积液患者为对象，探究T淋巴细胞斑点试验在结核性胸膜炎患者中的诊断价值。报道如下。

1.1 一般资料选择2014年8月～2015年8月收治的结核性胸腔积液患者与肿瘤性胸腔积液患者共80例，根据患者的病症类型分为结核性胸腔积液组及肿瘤性胸腔积液组各40例。结核性胸腔积液组患者年龄（42.7±13.6）岁，男22例，女18例。肿瘤性胸腔积液患者年龄（43.4±14.7）岁，男23例，女17例。两组患者年龄、性别等一般资料比较，无显著差异（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 T淋巴细胞分离所有患者抽取静脉血及胸液样本各5ml，肝素钠抗凝管储存；将样本摇匀后加入含5ml淋巴细胞分离液的离心管内，1600G条件下离心30min；可见单个核细胞悬于云雾层，无菌滴管吸出淋巴细胞层至离心管；以1640为培养液进行洗涤后离心，重复操作两次；光学显微镜下统计细胞数。

1.2.2 T淋巴细胞斑点试验以4孔微孔板进行样本测试，将T淋巴细胞用完全细胞培养液调至等浓度；细胞培养液滴入微孔板的阴性对照孔内，以PHA作为阳性对照滴入阳性对照孔；将结核杆菌抗原ESAT-6分别加入微孔板的各个测试孔内，加入相同浓度的含有外周单个核细胞的测试样本；将处理后的4孔微孔板放置于浓度为5%的二氧化碳培养箱中进行孵育，温度设置在36℃，孵育时间为18h；孵育后洗板，将新鲜配置的标记抗体工作液加入微孔板，放置培养箱中孵育，温度设置为5℃，时间为60min；孵育后洗板，添加底物溶液，室内常温下进行避光显色反应，双蒸水终止反应；若孔内显深紫色斑点，避光干燥微孔板，统计着色斑点数。

1.2.3 皮肤结核菌素试验将PPD用无菌生理盐水注射液稀释，在左前臂掌侧前1/3中央处取0.1ml稀释后的PPD注射液进行皮内注射，72h后观察注射区域反应情况。

1.3 统计学处理所有数据应用统计学软件SPSS 17.0进行处理，绘制受试者工作特性曲线，计数资料采用%表示，资料采用卡方检验，计量资料采用±s表示，资料采用t值检验，P＜0.05差异具有统计学意义。

结核性胸腔积液组血液T-SPOT.TB诊断阳性37例，肿瘤性胸腔积液组血液T-SPOT.TB诊断阴性36例，血液TSPOT.TB诊断的灵敏度为92.5%，特异度为90.0%，准确度为91.25%；结核性胸腔积液组胸液T-SPOT.TB诊断阳性40例，肿瘤性胸腔积液组胸液T-SPOT.TB诊断阴性35例，胸液TSPOT.TB诊断的灵敏度为100.0%，特异度为87.5%，准确度为93.75%；结核性胸腔积液组PPD诊断阳性24例，肿瘤性胸腔积液组PPD诊断阴性31例，PPD诊断的灵敏度为60.0%，特异度为77.5%，准确度为68.75%。血液样本的TSPOT.TB诊断灵敏度明显低于胸液样本，χ2=7.79，P＜0.05；血液样本及胸液样本的T-SPOT.TB诊断准确度均明显高于PPD，对比结果分别为χ2=15.82，P＜0.05；χ2=20.51，P＜0.05。见附表。

结核病传统的诊断方法包括皮肤结核菌素试验、细菌检查及病理检查，如胸水常规生化、胸水结核菌培养等，但是各类诊断方法的特异性、敏感性不同，且对于检查创伤也不同。皮肤结核菌素试验诊断的灵敏度及特异性较低，虽然检查创伤较小，但是细菌检查耗费时间较长，受干扰因素较多，如非活动期准确性低，易受其他肺部感染性疾病干扰等。病理检查属于创伤性检查且样本要求较高，均不利于结核病的早期诊断，因而必须探索一种安全、高效、高灵敏度，高特异度，高准确度的检查方式［3，4］。近年来，T淋巴细胞斑点试验在结核病临床诊断中的价值受到了广泛关注。T淋巴细胞斑点试验是一种免疫学检查方法，仅需要采集外周静脉血就可以完成实验，对于患者身体创伤几乎忽略不计，是一种简单、安全的检测方法。较多文献报道显示，T淋巴细胞斑点试验是一种可靠的结核性胸膜炎诊断方式，其准确度可达到89%～92%，诊断价值极高［5］。本次研究中对T淋巴细胞斑点试验（血液样本及胸液样本）与PPD检测结果进行了比对，结果显示：血液T -SPOT.TB诊断准确度为91.25%，而胸液T-SPOT.TB诊断93.75%；而PPD诊断准确度为68.75%，可知血液样本及胸液样本的T-SPOT.TB诊断准确度均明显高于PPD，与文献研究一致，血液样本准确度也较高，提示可作为血液T-SPOT.TB诊断首选结核性胸膜炎检查方法。

胸腔积液是胸膜炎的主要症状之一，但是造成胸腔积液的原因较多，由于胸膜炎病因的复杂性，较容易造成误诊或漏诊。恶性肿瘤、结核感染是导致胸腔积液的重要原因，两者治疗方式差异较大，因而需明确诊断区别病因，为临床治疗提供可靠依据［6］。T淋巴细胞斑点试验检测对象为T细胞介导的免疫反应，结核杆菌感染引起的免疫主要是细胞介导的免疫应答，患者感染结核菌后，无论临床症状是否显现，患者体内均会生成致敏淋巴细胞［7］。当以ESAT-6作为特异性抗原刺激血液或胸液样本中单个核细胞后会生成大量的效应T细胞，计算Esat-6特异淋巴细胞数目，可对体内是否存在对结核杆菌反应的效应T淋巴细胞进行推断，进而对是否具有结核杆菌感染进行辅助诊断［8］。本次研究中发现，血液T-SPOT.TB诊断灵敏度为92.5%，特异度为90.0%，结核性胸腔积液组胸液T-SPOT.TB诊断的灵敏度为100.0%，特异度为87.5%，而PPD诊断灵敏度仅为60.0%，特异度为77.5%，可知血液样本的T-SPOT.TB诊断灵敏度、特异度明显低于胸液样本，但胸液、血液样本的T-SPOT.TB诊断灵敏度则明显高于血均明显高于PPD，证明T-SPOT.TB诊断对结核性胸膜炎具有较高的准确性、灵敏性和特异性，能够为结核病的防控与治疗提供更加准确的临床依据，且胸液样本的应用价值更高。事实上，目前临床检查结核性疾病的标本多以血液样本为主，主要原因是结核性胸膜炎是由结核菌直接侵犯胸膜所致，因此胸液的诊断价值会更高，在T-SPOT.TB诊断中应根据患者情况选择血液或胸腔积液取样检测［9］。综合考虑PPD诊断模式，其诊断灵敏度、特异度、准确度均偏低，应联合TSPOT.TB诊断检测，以提高临床诊断准确性［10］。

总之，无论是以血液还是胸液为样本，T淋巴细胞斑点试验在结核性胸膜炎临床诊断中均具有较高价值，但胸液样本的灵敏度会更高。

【相关文献】

［1］杜岩青，冯爽，冯冉冉，等.T细胞斑点试验技术在结核性胸膜炎诊断中的价值［J］.检验医学，2012，5（12）：1070-1073.

［2］石慧，崔丽英.结核感染T细胞斑点试验诊断结核性胸膜炎的应用价值［J］.中华肺部疾病杂志（电子版），2015，10（2）：195-199.

［3］汪敏，张琦，张清林.结核感染T细胞斑点试验对结核性胸膜炎的诊断价值［J］.当代医学，2015，11（15）：35-36.

［4］刘波，齐凤娥，张建华，等.T细胞酶联免疫斑点试验在结核性胸膜炎鉴别诊断中的应用价值［J］.兵团医学，2015，4（2）：14-16.

［5］高亮，郑建，欧勤芳，等.结核感染T细胞斑点试验对结核性胸膜炎的诊断价值分析［J］.实用医学杂志，2015，8（17）：2833-2835.

［6］孟祥爱，赵静，王海英，等.结核感染T淋巴细胞斑点试验筛查活动性肺结核病人密切接触者结果分析［J］.预防医学论坛，2011，8（1）：3-5.

［7］阚威.T细胞斑点试验技术在结核性胸膜炎诊断中的临床价值［J］.中国卫生标准管理，2015，8（29）：153-154.

［8］刘珍琼，段永和，张齐龙，等.T-SPOT.TB技术检测胸腔积液在结核性胸膜炎诊断中的应用［J］.实验与检验医学，2013，22（4）：306-308.

［9］王强，徐柳，单宝珍，等.T淋巴细胞斑点试验在结核性腹膜炎诊断中的临床应用价值［J］.临床消化病杂志，2014，5（1）：9-10.

［10］万荣，李明武，赖明红，等.结核感染T细胞斑点试验在结核性胸膜炎中的诊断价值［J］.昆明医科大学学报，2013，33（9）：134-136.