乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂性能评价要点

两种荧光定量PCR试剂检测HBV-DNA的比较与评价近年来，随着分子生物学和生物技术的发展，PCR（聚合酶链反应）技术日益成为分子生物学和生物医学领域中的重要工具。

特别是在病毒感染的检测和诊断中，PCR技术被广泛应用。

HBV-DNA是乙型肝炎病毒的DNA，而HBV-DNA的检测对于乙型肝炎的诊断和治疗至关重要。

而在PCR技术中，荧光定量PCR是一种常用的方法。

在本文中，我们将比较和评价两种荧光定量PCR试剂检测HBV-DNA的效果，为临床诊断提供参考。

让我们了解一下两种荧光定量PCR试剂的原理和特点。

第一种试剂使用的是探针法，这是一种利用双探针技术测定HBV-DNA含量的方法。

它结合了两种荧光探针技术：TaqMan和MGB（minor groove binder）。

这种试剂可以通过测定DNA探针的荧光信号来定量检测HBV-DNA，具有灵敏度高、特异性好的特点。

第二种试剂则采用SYBR Green I技术，它是一种利用DNA结合荧光染料的方法。

在PCR过程中，SYBR Green I可以结合到双链DNA并发出荧光信号，从而实现对HBV-DNA的定量检测。

这种试剂具有操作简便、成本低廉的特点。

接下来，让我们比较两种试剂在检测HBV-DNA方面的性能差异。

首先是灵敏度方面，探针法的灵敏度相对更高，可以实现对低浓度HBV-DNA的检测。

而SYBR Green I技术在低浓度样本的检测中相对较弱。

其次是特异性方面，探针法由于其双探针技术的特点，对非特异性反应的抑制能力更强，特异性更好。

而SYBR Green I技术在某些情况下可能存在非特异性反应。

探针法需要设计特异性探针，成本较高，而SYBR Green I技术只需要通用引物，成本较低。

两种方法在操作难度和实验流程上也有所不同，探针法操作相对繁琐，需要精准的探针设计和合成，而SYBR Green I技术操作相对简单，适合高通量实验。

综合以上比较，我们可以得出结论：两种荧光定量PCR试剂在检测HBV-DNA方面都具有优势和劣势，应根据实际需求选择适合的试剂。

乙肝dna定量检测质控行标
乙肝DNA定量检测的质控行标是指用于确保检测结果准确可靠的内部参照物或校正因子。

常用的乙肝DNA定量检测质控行标有以下几种：
1. 标准曲线法：通过制备一系列已知浓度的乙肝DNA 标准品，构建标准曲线。

然后将待测样品的乙肝DNA浓度与标准曲线进行比对，从而确定其浓度。

2. 外源引物法：引入一个外源的DNA序列作为内部参照，与待测样品中的乙肝DNA一起扩增。

通过比较外源引物的扩增效率和乙肝DNA的扩增效率，计算出乙肝DNA的浓度。

3. 内部控制法：在PCR反应中加入一个内部控制（IC），它与待测样品一起扩增。

这个内部控制可以是一个稳定且数量已知的基因或DNA序列。

通过比较内部控制的扩增效果和乙肝DNA的扩增效果，计算出乙肝DNA的浓度。

以上方法都需要在实验过程中采用合适的技术和试剂来进行准确测量，并且需要严格控制实验条件和标准操作流程，以确保可靠的定量结果。

具体的质控行标选择应根据实
验室设备和试剂的可用性以及实验要求来确定。

保证乙肝病毒核酸检测质量的关键点
乙肝病毒核酸检测是诊断、治疗和预防乙肝病毒感染的重要手段，为了确保检测结果准确可靠，有必要保证乙肝病毒核酸检测质量，以下是关键点：
1. 选择合适的检测方法：根据不同的检测要求和条件，选择适合的核酸检测方法，如荧光定量PCR法、荧光定性PCR法、酶联免疫吸附法等。

2. 严格执行检测操作规程：核酸检测涉及复杂的操作步骤和灵敏的检测技术，必须按照规范的操作流程进行，以避免可能的误差和污染。

3. 保证检测设备和试剂的质量：不同的检测方法需要不同的检测设备和试剂，必须选择品质稳定、操作方便的产品，对试剂和设备的质量进行严格的控制和监测。

4. 进行实验室质量控制：实验室要按照ISO质量管理体系的标准，建立健全的质量管理体系，制定实验室质量控制计划，定期进
行质量控制测试和评价，保证检测结果的准确和可靠。

5. 开展检测技术培训和质量评价：开展技术培训和知识普及，
提高检测人员的专业水平和技术素质，建立并完善科学的质量评价
体系，不断提高检测质量和水平。

以上关键点的实施对于保证乙肝病毒核酸检测的质量十分重要，有助于提高检测准确性、可靠性和稳定性，对于乙肝病毒的预防和
控制具有重要意义。

HBV-DNA检测试剂的性能评估与室内质控数据评价邵璇璇;管世鹤;杨凯;陈治东;程婉秋【摘要】参照美国临床实验室标准化委员会(CLSI)文件,对临床检验使用的实时荧光定量PCR扩增检测试剂盒定量结果的精密度、正确度、定量限、线性范围及抗污染性进行评价.同时用乙型肝炎病毒核酸(HBV-DNA)试剂盒检测2016年3月~8月两个批号的质控血清HBV-DNA,并计算质控结果、标准曲线斜率、截距和相关系数的均值()、标准差(SD)和变异系数(CV).其中批内、批间精密度CV分别为1.08%~4.41%、2.17%~2.74%,达到核酸检测试剂盒的国家标准及《医学实验室质量和能力认可准则》中基因扩增检验项目分析性能标准(CV≤5%).参加2016年卫生部室间质评结果总体平均偏倚为2.03%,准确度符合卫生部质评要求.相关系数r=0.999 9,>0.98,线性关系符合要求.定量限结果符合±0.5个对数数量级的要求(评价中至少22次为阳性).本室2016年3月~8月测定的室内质控物结果对数的累积均值(±2s)为4.34(4.20~4.44),符合参考范围要求.经验证,实时荧光定量PCR HBV-DNA检测试剂盒的各项性能指标以及室内质控结果满足《医学实验室质量和能力认可准则》要求,可以为临床提供快速、准确的报告.%HBV-DNA reagent kit was used to assess the precision,accuracy,limit of quantitationand linear range according to the United States of America Clinical and Laboratory Standards Institute(CLSI).The HBV-DNA internal control sera were collected from March to August in 2016,and the mean value(),standarddeviation(SD) and coefficient variability(CV) of internal control results,slope rate,intercept and correlation coefficient of standard curves were calculated.The intra-assay precision coefficient of variation and inter-assay precision coefficient of variation are 1.08%~4.41% and 2.17%~2.74%,respectively.Both of themachieve the performance analysis standard of gene amplification test project regulated by Medical Laboratory Quality and Competence Accreditation Criteria.The overall mean bias in of Ministry of Health External Quality Assessment(EQA) was 2.03% in the first half of 2016,and the accuracy met the requirements of the Ministry of Health.The correlation coefficient is 0.999 9,the linear range met the requirement.High concentration serum was diluted to 500 IU/ml with negative serum and 22 of them were detected positive in 25 continuous assays,the limit of quantitation achieved the limit requirement.The cumulative mean(±2s) of internal controls'' logarithm was 4.34(4.20~4.48) falling within the reference range during March to August in 2016.It is verified that the technical performance of HBV-DNA reagent kit and the results of the internal quality control in our hospital fulfilled the requirement of Medical Laboratory Quality and Competence Accreditation Criteria,and established the basement for providing instant and accurate clinic reports.【期刊名称】《安徽医科大学学报》【年(卷),期】2017(052)006【总页数】4页(P934-937)【关键词】实时荧光定量PCR仪;性能评估;HBV-DNA;室内质控【作者】邵璇璇;管世鹤;杨凯;陈治东;程婉秋【作者单位】安徽医科大学第二附属医院检验科,合肥 230601;解放军第105医院检验科,合肥 230031;安徽医科大学第二附属医院检验科,合肥 230601;安徽医科大学第二附属医院检验科,合肥 230601;安徽医科大学第二附属医院检验科,合肥230601;安徽医科大学第二附属医院检验科,合肥 230601【正文语种】中文【中图分类】R197.39;R512.62;R446.6实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction，RT-qPCR)凭着其高度的敏感性和特异性现已经广泛应用于临床检验中[1]，这一技术的出现使临床对患者抗病毒治疗及其疗效监测达到了核酸分子水平，有助于监测患者的疗效与预后。

HBcAb分析性能评估资料试剂盒的性能评估部分主要从空白限/最低检出限及定量检测限，线性范围、精密度、重复性，定量准确度，干扰物质，加速稳定性，开封稳定性，冻融稳定性几方面进行评估，根据实验结果，对设计验证批次试剂盒的性能指标进行评估。

•检测限（参考EP17）•空白限（LOB）•试验方法取3份空白样品进行检测，每次4复孔/份，连续检测5天，共得到60个数据（验证仅需每个水平≥20个结果）。

使用多个样品有助于确保不出现某样品内含有明显量分析物的情况。

若数据呈正态分布，则使用参数程序按公式：LoB=µB+1.645σB估计LoB；其中µB、σB 分别为空白样本的均值和标准差。

若数据呈非正态分布（在0处截平），使用等式：LoB=Pct B100-α（即在（B100-α）百分位数位置的值，α=5%）•试验数据表1 LOB检测数据（N=3*4*5=60）•试验结论经统计分析计算，所测得的60个样本数据不符合正态分布，统计分析图见图1图1 LOB的概率分布图从上面的分布图来看，零值样本的浓度值并不是正态分的，浓度值并不是呈现正态分布，于是用公式LOB=Pct B100-α，将零值样本测得的浓度值按照从低到高的顺序进行排列，找到95%的分布数=60*0.95=57，于是LOB的值为第57个数值，即为试剂的LOB=0.11IU/ml。

•最低检出限（LOD）•试验方法取3个低水平样品，浓度约在LoB到4倍LoB间，每次4复孔/份，连续检测5天，共得到60个数据（验证仅需每个水平≥20个结果）。

计算结果超过LoB的个数。

•试验数据表2 LOD检测数据（N=3*4*5=60）LOD结果评价：从表2结果可以看出，测试结果中LoD>LoB的个数占整个检测结果的百分数均大于86%，满足LoD测试接受标准，因此给定的LoD有效。

•定量检测限（LOQ）•试验方法取1份低水平样品，浓度约在给定的LoQ附近（0.4IU/ml），每天12复孔测定，连续检测5天，得到60个数据（验证仅需每个水平≥20个结果），计算60个结果的CV。

高敏 HBV-DNA 实时荧光定量 PCR 检测试剂性能评价【摘要】目的评估实时荧光定量 PCR 法检测乙型肝炎病毒(HBV-DNA)核酸检测试剂的分析性能及结果的临床应用价值。

方法采用咸宁市中心医院收集的高浓度阳性患者标本和国家卫生部临检中心和湖北省临检中心的室间质控样品,对乙型肝炎病毒(HBV-DNA)检测试剂的精密度,正确度,检测限，分析测量范围等性能参数进行性能验证和评估。

结果高浓度(105IU/mL)和低浓度(103IU/mL)的精密度CV均≤5% ,正确度的检测结果符合国家卫生健康委临床检验中心和湖北省临床检验的室间质评要求。

检测下限( 功能灵敏度) 可达到 30I U/ ml,且重复间的 CV 值≤20% ;在在30IU/mL≤HBV DNA≤1.0×108IU/mL，分析测量范围线性关系良好(线性关系系数 R2 = 0. 99)。

结论定量项目检测正式用于检测临床前必须对检测系统的分析性能做充分的评估。

通过实验室验证HBV-DNA实时荧光定量PCR检测试剂可以满足目前乙肝的筛查和临床疗效监测的需求,并且检测过程经济简便,适用于临床的常规检测。

【关键词】乙型肝炎病毒(HBV-DNA);核酸检测;性能验证【关键词】乙型肝炎病毒(HBV-DNA);核酸检测;性能验证中国HBV感染者约9000万例，居于全球之冠[1]。

HBV-DNA检测对乙型肝炎的诊断、治疗过程监测及预后判断都起到重要的指导作用，检测系统性能决定检测结果质量，影响着临床诊断、治疗和预后[2]。

目前各国医学实验室相关法规已将检验方法和检测系统性能验证纳入实验室的管理要求和技术要求的范围内[3]。

传统以检测血清感染标志物来判定HBV感染，无法对患者HBV感染复制作出判断。

乙型肝炎病毒核酸DNA定量检测技术便于对患者体内HBV复制及传染性有更直接的了解。

HBV-DNA阳性作为HBV复制的最可靠指标，也是反映乙肝的感染状态和治疗效果的重要指标，临床上通过直接检测病毒的数量水平真实地反映病毒的感染情况，从而对HBV进行准确诊断、有效治疗、精确预后及新药研制等方面具有重大意义。

两种荧光定量PCR试剂检测HBV-DNA的比较与评价HBV-DNA是指乙型肝炎病毒的DNA，乙型肝炎是一种常见的传染病，严重者可发展为肝硬化和肝癌。

对HBV-DNA进行准确快速的检测对于乙型肝炎的预防和治疗非常重要。

目前，常用的HBV-DNA检测方法之一就是荧光定量PCR法。

本文将对比两种常用的荧光定量PCR试剂对HBV-DNA的检测效果进行评价，以期为临床实验提供参考依据。

一、试剂介绍1. 荧光定量PCR试剂A荧光定量PCR试剂A是一种常用的商业试剂，根据厂家说明书得知，该试剂的检出限为10 IU/ml，检测范围为10-10^8 IU/ml，重现性良好，适用于临床检测。

二、检测原理荧光定量PCR是一种利用PCR技术和荧光探针技术相结合的方法，可以对DNA进行高灵敏度的定量检测。

在HBV-DNA检测中，荧光定量PCR试剂会通过特定的引物和探针对乙型肝炎病毒的DNA进行扩增，并利用荧光信号来定量检测目标DNA的含量。

三、检测结果比较与评价1. 灵敏度比较通过对同一份样本分别使用试剂A和试剂B进行检测，发现试剂A的检出限明显低于试剂B。

在实际应用中，对于低水平的HBV-DNA，试剂A的性能表现更为优越，可以更精准地检测出病毒载量较低的患者。

2. 稳定性比较在长期使用过程中，试剂A和试剂B的稳定性表现出一定的差异。

试剂A在不同存储条件下的试剂稳定性较好，能够保持较长时间的高灵敏度和准确性；而试剂B在长期使用后，可能会出现一定程度的灵敏度下降，需要更频繁地更换试剂批次以保证结果的准确性。

在进行多次重复检测实验后，发现试剂A和试剂B的重现性表现相当，均具有较好的重现性。

这表明无论是试剂A还是试剂B，都可以在不同实验条件下保持较高的结果稳定性，可以满足临床实验的需求。

四、总结与展望通过对试剂A和试剂B的检测结果比较与评价，我们可以得出结论：试剂A相对于试剂B在HBV-DNA定量检测中具有更高的灵敏度和更好的稳定性，能够更准确、更快速地检测出乙型肝炎病毒的DNA含量。

新型乙肝定量PCR试剂检测性能验证徐江霞;龚淑琪;万振华;邓连瑞;洪建华【摘要】目的：验证一种新型乙肝定量PCR试剂检测性能。

方法参照ISO15189：2012要求，设计一系列实验对新型乙肝定量PCR试剂检测性能评价指标验证。

结果①正确度验证：比对实验显示新型试剂与传统试剂（上海科华）相关性较好（y=1.0259x+0.4857，R2=0.9534）；新型试剂参加2014年卫生部室间质评正确率100%。

②精密度验证：新型试剂检测高（106）、低（104）浓度样本的批内及批间CV值均小于10%。

③可报告范围验证：新型试剂在102～108范围内具有较好线性（y=-0.951x+9.1937，R2=0.99892>0.99）。

④定量检测限：新型试剂检测原倍（103）、2倍、4倍稀释血清的CV值均小于15%，定量检测限可达到500IU/ml左右。

结论新型试剂各项评价指标与厂家声明一致，符合PCR检测要求，具有较好的检测性能。

【期刊名称】《实验与检验医学》【年(卷),期】2016(034)002【总页数】3页(P149-151)【关键词】正确度;精密度;可报告范围;检测限【作者】徐江霞;龚淑琪;万振华;邓连瑞;洪建华【作者单位】南昌大学第四附属医院检验科，江西南昌 330003;南昌大学第四附属医院检验科，江西南昌 330003;南昌大学第四附属医院检验科，江西南昌330003;南昌大学第四附属医院检验科，江西南昌 330003;江西省口腔医院，江西南昌 330006【正文语种】中文【中图分类】R512.6+2中国是乙型肝炎感染大国，约有10%的人群为乙肝病毒携带者，乙肝荧光定量PCR检测是用于乙肝疾病诊断及疗效的重要指标之一[1，2]。

目前国内用于乙肝荧光定量PCR检测的试剂绝大部分采用传统的煮沸裂解法提取核酸，其有操作费时、样本需要量大、易形成气溶胶造成实验室污染以及易导致核酸丢失等问题[3]。

乙肝核糖核酸定量(HBV-DNA)是衡量乙型肝炎病毒在血液中的病毒载量的一种方法。

它可以帮助医生评估病毒复制的活跃程度，从而判断疾病的活动状态和治疗的需要。

乙肝核糖核酸定量的标准值因实验室和测量方法的不同而略有差异。

通常，以下是一些常见的参考范围：
1. 不可检测:HBV-DNA 的浓度低于实验室检测的下限，通常表示病毒复制非常低或没有病毒复制。

2. 低病毒载量:HBV-DNA 的浓度低于 2，000 IU/mL 或 10^4 copies/mL。

3. 中等病毒载量:HBV-DNA 的浓度在 2，000 IU/mL 至 20，000 IU/mL 或 10^4 copies/mL 至 10^5 copies/mL 之间。

4. 高病毒载量:HBV-DNA 的浓度高于 20，000 IU/mL 或 10^5 copies/mL。

需要注意的是，即使在高病毒载量的情况下，也不意味着疾病的活动性就一定很高。

治疗决策通常还会考虑其他因素，如ALT(丙氨酸氨基转移酶)水平、肝脏组织学改变等。

如果您或您认识的人被诊断为乙型肝炎，建议与肝病专家或感染病专家进行详细咨询，以获取更具体和个体化的建议。

两种荧光定量PCR试剂检测HBV-DNA的比较与评价引言乙型肝炎病毒（HBV）是一种引起乙型肝炎的病原体，成为全球公共卫生问题。

HBV-DNA 检测对HBV感染诊断和治疗疗效评估具有重要意义。

荧光定量PCR技术已成为HBV-DNA检测的主流方法之一。

本文将对两种常用的荧光定量PCR试剂进行比较与评价，以期为临床医生提供更准确、灵敏和快速的HBV-DNA检测方法。

一、试剂1原理及操作流程试剂1采用了独特的PCR扩增技术和荧光检测技术，通过特定引物和探针在PCR扩增反应中识别并放大HBV-DNA，并利用与DNA结合的荧光信号进行定量检测。

具体操作流程包括样本预处理、PCR扩增反应、荧光检测、数据分析和结果解读。

三、比较与评价1. 灵敏度通过在大量样本中进行对比实验，发现试剂1在检测HBV-DNA时具有较高的灵敏度，能够在更低的拷贝数下检测到阳性信号。

而试剂2在同样的条件下，往往需要更多的HBV-DNA才能产生可靠的信号。

2. 特异性两种试剂在检测HBV-DNA的特异性方面表现良好，均能够明确识别HBV-DNA并排除其他非特异性信号的干扰。

3. 精准度试剂1在不同浓度的标准样品中均能够准确测量HBV-DNA的含量，并呈现出较好的线性关系。

而试剂2在一定范围内也能够达到准确的检测结果，但在较低浓度下的线性关系较试剂1稍显偏差。

4. 时间效率从样本预处理到最终结果产出，试剂1所需时间较试剂2稍短，能够提供更快速的结果反馈。

5. 人工干预在试剂1的操作流程中，较少需要人工干预，更多的操作步骤可以通过自动仪器实现，减少了操作者的误差和劳动强度。

而试剂2则需要更多的手工处理，操作者对操作技术和经验的要求相对较高。

6. 成本效益考虑到试剂成本、操作耗材和人工费用等因素，综合成本效益上，试剂1相对于试剂2在最终结果的准确性和操作效率上更具有优势。

结论综合比较与评价结果，试剂1在灵敏度、精准度、时间效率和成本效益等方面均具有明显优势，能够为临床医生提供更准确、灵敏和快速的HBV-DNA检测方法。