日本囊对虾apo-14基因的全克隆及序列分析

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日本对虾Rab基因的克隆、结构分析与重组表达

ｍｏｏｏ）凡纳对虾（ｅａｕａｎｍｅ）中国对虾（ｅａｕｈｎｎｉ）和日本对虾（ｅａｕｎｄｎ、Ｐｎｅｓｖｎａｉ、ＰｎｅｓｃｉｅｓｓＰｎｅｓ
ｊｐｎｃｓ等．对虾养殖业发展快速，由此造成了养殖环境恶化、质资源破坏和种质退化、ａｏｉｕ）但种非传染性疾病和传染性疾病滋生等一系列问题，严重地制约着对虾养殖业的进一步发展．别是对虾病毒病，特已
世界对虾养殖业兴起于２Ｏ世纪７Ｏ年代，并在８Ｏ年代得到飞速发展．在对虾养殖业已成为一个重现要产业，成为我国沿海农民主要的收人来源．前我国的对虾养殖品种主要有斑节对虾（ｅａｕ当Ｐｎｅｓ
一
种新的Ｒｂ白，是首次在海洋无脊椎动物体内克隆到该基因．该基因进行了原核表达，得到了有活ａ蛋这对并
性的表达产物．
关键词：虾Ｉａ；构；达对Ｒｂ结表中图分类号：７．２Ｑ５５１文献标识码：Ａ文章编号：０９２４２０）２１２Ｏ１０ —８２（０７０一ＯＯ一６
中在抗菌方面，而有关抗病毒作用的研究较少，于对虾免疫信号转导的机制研究尚未见报道．ａ至Ｐｎ等（０５在对虾抗病毒的研究中发现，２０）一个预测的Ｒｂ基因片段在抗病日本对虾中表达量有所上升，ａ暗示Ｒｂ蛋白可能参与了对虾的免疫过程Ｌ．ａ３ｊＲａｂ蛋白是小分子ＧＴＰ结合蛋白家族（ＲｓＲｏＲｃＣｃ２Ｒａ、ａ／ｆＲｂ等亚家族组成）由ａ、ｈ／ａ／ｄ４、ｎＳｒＡｒ、ａ中最大的亚家族．早由Ｎｏｉ最ｖｃｋ等［在芽殖酵母（ａｃａｏｃｓｃｒｖｓｅ４Ｓｃｈｒｍｙｅｅｅｉｉ）中发现．ａａＲｂ蛋白是一种单体形式的ＧＴＰ结合蛋白，２０个左右的氨基酸组成．ｂ蛋白家族成员的氨基酸序列的相似性在由０Ｒａ

不同形态变异类型日本囊对虾的遗传多样性及形态差异分析的开题报告

不同形态变异类型日本囊对虾的遗传多样性及形态差异分析的开题报告题目：不同形态变异类型日本囊对虾的遗传多样性及形态差异分析摘要：日本囊对虾（Metapenaeus joyneri）是中国近海重要渔业资源之一，其不同形态变异类型的遗传多样性及形态差异需要深入研究。

本研究旨在利用分子标记和形态学分析方法，探究日本囊对虾不同形态变异类型的遗传多样性及形态差异，并为日本囊对虾资源保护和合理利用提供科学依据。

研究内容：本研究将采用PCR-RFLP和微卫星标记技术，对不同形态变异类型的日本囊对虾群体进行遗传多样性分析，探究其种群遗传结构和遗传多样性水平。

同时，利用形态学测量方法，对不同形态变异类型的日本囊对虾进行形态差异分析，探究其形态多样性及其与遗传多样性之间的关系。

研究意义：日本囊对虾是中国海洋渔业的重要资源之一，其种群遗传结构和遗传多样性水平的分析可以为其资源保护和合理利用提供科学依据。

同时，对不同形态变异类型的日本囊对虾进行形态差异分析，可以深入了解其形态多样性及其与遗传多样性之间的关系，为其分类和演化研究提供重要数据支持。

研究方法：本研究将采集不同形态变异类型的日本囊对虾样本，利用PCR-RFLP和微卫星标记技术对其进行遗传多样性分析，计算遗传多样性参数，如遗传多样性指数、遗传分化指数等，并进行群体遗传结构分析。

同时，采用形态学测量方法对样本进行测量，如体长、体重、鳃弓长度等，探究不同形态变异类型之间的形态差异情况，并进行多元统计分析。

预期结果：本研究可望为不同形态变异类型的日本囊对虾提供遗传多样性和形态差异的详细分析结果，填补了该领域的研究空白。

预计能够为日本囊对虾资源保护和合理利用提供科学依据，为其分类和演化研究提供重要数据支持。

利用引物退火控制技术克隆日本囊对虾性腺差异表达基因

引物退火控制技术克隆到了共８个精巢、巢的差异表达基因．中４个为已知基因，别为凝血卵其分酶敏感蛋白基因、质棒蛋白基因、殖细胞核抗原基因和泛素缀合酶基因；为未知基因，别皮增４个分
命名为ＭＡＰ．、ｉＣ４ＴＭＡＰ５Ｔ和ＭＡＰｊＣ３ＭＡＰ．、ｊＣＩ一ＴｊＣ４Ｏ基因．用实时定量ＰＲ方法分析了４个采Ｃ未知基因在性腺发育过程的表达谱，结果表明：ＡＰ一、ＡＰ一ＭｊＣ３ＴｊＣ４Ｔ和ｊＣ１一因在日本囊ＡＰ５Ｔ基
示技术（ＤＴＰＲ）ＤＲ —Ｃ的基础上发展起来的一种克隆差异表达基因的新技术．技术可较好地消除初始该
收稿日期：００Ｉ－５２１一Ｊｌ
基础上，本研究选择２０对改良的ＡＣＰ随机引物分
别对日本囊对虾（ａｓｅａｕｊｏｉｓ精巢和卵Ｍｒｐｎｅｓａｎｕ）ｕｐｃ
贾锡伟，沈冰玲，张子平，艺磊，谢芳靖王
（美大学水产学院、美大学福建省高校水产科学技术与食品安全重点实验室，福建厦门３１２）集集６０１
摘要：了解日本囊对虾（ｒｐｎｅｓａｏｉｓ性腺发育及分化的分子机制，为Ｍａｓｅａｕｊｐｎｃ）ｕｕ本研究采用改良的
基金项目：幽家ｆ然科学金资助口（０７５ห้องสมุดไป่ตู้７；１３００９）集荚大学创新闭队金资助项Ｆ（０８０１ｊ２０Ａ０）

香鱼Apo-14基因的克隆、序列分析及其mRNA表达与盐度适应性的关系

香鱼Apo-14基因的克隆、序列分析及其mRNA表达与盐度适应性的关系曹霄;陈炯;史雨红;陆新江【期刊名称】《应用海洋学学报》【年(卷),期】2011(030)002【摘要】14 kDa载脂蛋白(Apo-14)是鱼类一种特有的载脂蛋白,是鱼类高密度脂蛋白(HDLs)的重要成分,其生物学功能目前还不明确.本研究采用简并引物,从香鱼(Plecoglossus altivelis)肝脏cDNA文库中筛选香鱼Apo-14基因,该基因cDNA 序列全长905个核苷酸,开放阅读框编码一个有144个氨基酸,分子量约为15.9 kDa的蛋白.香鱼Apo-14基因mRNA主要在香鱼肝脏中表达,在肠、肾和鳃中也有少量表达.同源性分析揭示,香鱼Apo-14与已知鱼类中虹鳟(Oncorhynchus mykiss)Apo-14最相似,氨基酸序列同源性为70%.qRT-PCR表明,咸淡水处理组(盐度为10)的肝、肠、肾、鳃中,该基因mRNA均比淡水处理组(盐度为0)明显下调(P<0.05),揭示载脂蛋白Apo-14可能与盐度适应相关.%Apolipoproteins are important structural components of plasma lipoproteins and have been shown to participate in lipoprotein assembly, secretion, processing, and catabolism. 14 kDa apolipoprotein (Apo-14), a specific apolipoprotein in fish, is an important component of high-density lipoproteins, but its biological functions remain unclear. Apo-14 was amplified by a degenerate primer and then sequenced and analyzed using BLASTX, SignalP 3.0, NetNGlye 1.0, YinOYang 1.2, NetPho 2.0, ClustalW, and MEGA 4.1 software. Sixty specimens of healthy ayu were acclimatized to laboratory conditionsfor two weeks before experiments. The fish were then subjected to a progressive salinity change to 10 (BW) in four tanks or to zero (FW) in another four tanks over a period of 3 weeks. RT-PCR was employed to analyze the mRNA expressions in different tissues, and qRT-PCR was employed to analyze the effects of salinity change on the mRNA expression. In this study, a full-length eDNA clone of the Apo-14 gene, 905 bp in size, encoding a protein of 144 amino acids with a molecular weight of 15.9 kDa, was isolated from the fish ayu eDNA library. The ayu Apo-14 amino acid sequence includes a signal peptide of 18 amino acids, a 33-eodon block and 22 amino acid repeats, which is predicted to form amphipathic or-helical and be able to transport lipids and other hydrophobie molecules. RT-PCR analysis showed that Apo-14 was only transcribed in the liver,intestine, kidney and gill and not in the muscle, spleen, and brain. The mRNA level of ayu Apo-14 was highest in the liver. Sequence comparison and phylogenetic analysis showed that ayu Apo-14 was most similar to that of rainbow trout ( Oncorhynchus mykiss); about 70％ amino acid sequence identity, qRT-PCR analysis demonstrated that the expressions of Apo-14 mRNA were significantly decreased in ayu liver, intestine, kidney and gill tissues when the fish were transferred from fresh water to brackish water. It is suggested that apo-14 transcription might be down-regulated when subjected to salinity change and related to osmoregulation in salinity adaptation.【总页数】7页(P203-209)【作者】曹霄;陈炯;史雨红;陆新江【作者单位】宁波大学应用海洋生物技术教育部重点实验室,浙江,宁波,315211;宁波大学应用海洋生物技术教育部重点实验室,浙江,宁波,315211;宁波大学应用海洋生物技术教育部重点实验室,浙江,宁波,315211;宁波大学应用海洋生物技术教育部重点实验室,浙江,宁波,315211【正文语种】中文【中图分类】P735【相关文献】1.日本囊对虾apo-14基因的全克隆及序列分析 [J], 乔莹;王军;钟声平;刘洪涛;毛勇2.香鱼补体成分C9基因的克隆、序列分析及表达 [J], 孔铖将;黄左安;陈炯;史雨红;陆新江3.香鱼巨噬细胞炎性蛋白-2基因的克隆、序列分析及表达 [J], 王世会;史雨红;陈炯4.香鱼RBP基因的克隆、组织表达特征及其与盐度应激相关的表达分析 [J], 陈强;赵桐;史雨红;陈炯5.香鱼抗凝血酶基因(AT)cDNA的克隆、序列分析及组织表达特征 [J], 李长红;陈炯;史雨红;陆新江因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

用微卫星标记分析不同形态变异类型日本囊对虾的遗传多样性

用微卫星标记分析不同形态变异类型日本囊对虾的遗传多样性何永琴;苏永全;毛勇;王军【摘要】Marsupenaneus japonicus is one of the important species in shrimp fisheries and aquaculture in China. Two morphologically similar varieties ( I and II )with distinct color banding patterns on the carapace are recognized from the South China Sea. In the present study,9 pairs of microsatellite markers were used to detect the genetic diversities from two varieties of 6 wild stocks of M. japonicus ,i. e. Zhoushan(ZS) stock in Zhejiang province, Xiamen ( XM ) stock in Fujian province, Huilai ( HLQ and HLB ) stock in Guangdong province,Lingshui(LS) stock in Hainan province and Beihai(BH) stock in Guangxi province. The results indicated:a total of 235 alleles were obtained from 9 markers in the 6 stocks. Polymorphic information content(PIC) value per locus was more than 0. 5 indicating the 9 loci seemed highly polymorphic. Basic data statistics showed that the mean observed alleles in each stock were 13. 2 - 17. 7. The mean observed heterozygosity (Ho) ranged from 0. 729 6 to 0. 788 9 and the mean expected heterozygosity (He) ranged from 0.880 5 to 0. 925 1. Average polymorphism information content (PIC) was 0. 851 2 - 0. 903 5, which explained high level of genetic diversity in 6 wild stocks. 42. 6% of stock loci showed significant deviation from the Hardy-Weinbery balance, and there was heterozygosity deficiency in all stocks. The pair-wise genetic differentiation( Fst)in 6 M. japonicus stocks ranged from 0.011 8 to 0. 091 1 .indicating significant genetic differentiation among the 6 stocks.Analysis of molecular variance ( AMOVA) revealed that the variation within stocks was 93.06% .whereas the variation among stocks accounted for 6.94% of the total variation. The genetic distance among stocks ranged from 0. 178 5 to 0. 621 8. Cluster analysis based on DA indicated that HLB ,BH and LS stocks were clustered as one group while ZS ,XM and HLQ were gathered in another group.%选用9个多态性微卫星分子标记,分析我国近海浙江舟山(ZS)、福建厦门(XM)、广东惠来(HLQ及HLB)、海南陵水(LS)及广西北海(BH)日本囊对虾6个群体2种形态变异类型群体间的遗传变异,探讨了日本囊对虾的种质资源状况.结果显示,9个位点在6个日本囊对虾群体中均为高度多态(PIC ＞0.5),共检测出235个等位基因；6个群体平均等位基因数在13.2～17.7；PIC平均值在0.851 2～0.903 5；平均观测杂合度(Ho)在0.729 6～0.788 9,平均期望杂合度(He)在0.880 5～0.925 1；表明群体遗传多样性水平较高.Hardy-Weinberg平衡检测显示,6个群体普遍存在杂合子缺失现象.分子变异方差分析( AMOVA)结果表明,遗传变异6.94％来自群体间,93.06％来自群体内.由ZS、XM和HLQ群体组成的形态变异类型I与由HLB、LS和BH群体组成的形态变异类型Ⅱ之间的Fst 均大于0.05,发生了中等程度的遗传分化；相同形态变异类型各群体间的Fst均小于0.05,遗传分化不明显.日本囊对虾群体间的遗传距离(DA)为0.178 5～0.6218;UPGMA聚类分析表明,聚类关系符合距离隔离模式,BH群体和LS群体遗传距离最小,亲缘关系最近,它们首先聚在一起,然后与HLB群体聚为一支；XM群体和HLQ群体先聚在一起,再与ZS群体聚为另一支.【期刊名称】《水产学报》【年(卷),期】2012(036)010【总页数】9页(P1520-1528)【关键词】日本囊对虾;不同形态变异类型;微卫星标记;遗传多样性【作者】何永琴;苏永全;毛勇;王军【作者单位】厦门大学海洋与地球学院,福建厦门361005;厦门大学海洋与地球学院,福建厦门361005;厦门大学海洋与地球学院,福建厦门361005;厦门大学海洋与地球学院,福建厦门361005【正文语种】中文【中图分类】Q785;S917.4日本囊对虾(Marsupenaneus japonicus)是我国重要的经济养殖虾类。

日本沼虾卵巢表达序列标签分析及生殖相关基因的克隆与表达

日本沼虾卵巢表达序列标签分析及生殖相关基因的克隆与表达【摘要】：生殖细胞的发生是发育生物学研究的主要内容之一,卵子在卵巢中的形成更是个体发育中极其重要的时期,也是历来备受关注的生殖生物学课题。

与其它模式生物相比,十足类中关于生殖的分子机制方面的研究相对薄弱,淡水虾类尤其突出,迄今对淡水虾类遗传资源的了解极为有限,NCBI数据库中收录的信息量与对虾类相比颇为匮乏。

因此,大量挖掘、获取淡水虾类生殖相关的基因资源,无疑具有重要的意义和潜在的应用价值。

同时,一些功能保守基因的发现,也为遗传背景薄弱的经济物种生殖细胞的研究带来了契机。

本文以日本沼虾为研究对象,通过构建卵巢cDNA文库及表达序列标签分析,鉴别了29个与生殖、发育相关的基因;随后以日本沼虾卵巢发育过程为主线,以获得的表达序列标签为基础,结合同源克隆策略,分离获得了7个与卵母细胞形成、成熟有关的基因,并对其序列特征和时空表达进行了系统地分析。

研究主要包括如下四个部分:1、日本沼虾卵巢cDNA文库的构建及生殖相关基因的鉴别为了研究日本沼虾卵巢发育过程中储存的遗传信息,以卵巢为材料构建了cDNA文库,文库重组率为82.93%,库容量为2.9×10~6,插入片段大小为0.5-3kb。

随机挑取文库中3294个克隆进行5’-3’端测序,获得了3256条高质量的表达序列标签(ESTs),拼接后得到了1514条单基因簇,其中可推测功能的序列占47.5%。

据序列相似性分析,发现了组织蛋白酶B和L、细胞周期蛋白B、周期蛋白依赖性激酶、DEAD-box家族蛋白等29个与生殖、发育相关的基因。

此外,在构建的文库中还发现了与皮质棒形成密切相关的围食膜因子,预测在成熟卵缺少皮质棒结构的沼虾属种类中,这种基因同样存在。

通过卵巢cDNA文库的构建及ESTs分析,初步明晰了与日本沼虾卵巢发育相关的基因,为进一步研究日本沼虾乃至十足类的功能基因组提供了重要的基础资料。

日本囊对虾群体遗传多样性的线粒体序列分析

日本囊对虾群体遗传多样性的线粒体序列分析孟繁星;徐田军;王日昕【期刊名称】《浙江海洋学院学报（自然科学版）》【年(卷),期】2010(029)004【摘要】对日本囊对虾的3个养殖群体即浙江舟山群体(ZJ)、福建群体(FJ)和台湾群体(TW)的线粒体细胞色素c氧化酶亚基Ⅲ基因进行PCR扩增,得到577 bp的核苷酸分析序列,AT含量高于GC含量,发现51个变异位点,其中包括18个简约信息位点,共有31种单倍型.福建群体的核苷酸多样性最高.用MEGA软件中的NJ法构建日本囊对虾3群体与另外5种对虾的系统进化关系,日本囊对虾的3个群体首先聚在一起,再与亲缘关系较近的中国明对虾聚在一起.【总页数】5页(P331-335)【作者】孟繁星;徐田军;王日昕【作者单位】浙江海洋学院海洋科学学院,海洋生物资源与分子工程实验室,浙江舟山,316004;浙江海洋学院海洋科学学院,海洋生物资源与分子工程实验室,浙江舟山,316004;浙江海洋学院海洋科学学院,海洋生物资源与分子工程实验室,浙江舟山,316004【正文语种】中文【中图分类】Q953【相关文献】1.利用线粒体DNA控制区部分序列分析不同地理群体大泷六线鱼遗传多样性 [J], 李莹;王伟;孟凡平;李占东2.基于线粒体COⅠ基因序列分析5个\r巨群体的遗传多样性 [J], 牛宝珍;李娜;刘艳红;王兴龙;陈春丽;文天仙;周亚;杜民3.中国近海条石鲷（Oplegnathus fasciatus）群体遗传多样性线粒体DNA序列分析 [J], 肖永双; 程起群; 任桂静; 李军; 马道远; 徐世宏; 刘清华; 肖志忠; 韩志强4.中国近海条石鲷（Oplegnathus fasciatus）群体遗传多样性线粒体DNA序列分析 [J], 肖永双; 程起群; 任桂静; 李军; 马道远; 徐世宏; 刘清华; 肖志忠; 韩志强5.基于线粒体和核基因DNA序列分析的大河乌猪群体结构和遗传多样性研究 [J], Tang L;晋大鹏因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

日本囊对虾Ran基因的克隆表达与蛋白质GTP结合活性分析

具有所有的小Ｇ蛋白都具有的Ｉ一Ⅳ ４个保守的结构域，这４个结构域的共有序列从Ｉ Ⅳ分别为到
ＧＸＸＧＳＴ、ＤＸＸＸＫ（）ＸＧ、Ｎ（）ＸＴＫＤ和ＥＳＸ．但是，有关对虾乃至海洋无脊椎动物中Ｒｎ基因ＸＡａ
日本囊对虾Ｒｎ基因的克隆表达与ａ
蛋白质ＧＰ结合活性分析Ｔ
韩芳，王志勇，
（．集美大学水产学院，福建厦门３１２；２１６０１．福建省高校水产科学技术与食品安全重点实验室，福建厦门３１２）６０１
［要］在日本囊对虾抑制性差减杂交（ｕｐｅｓｎｓｂｒｔｅｈｂｉｉｔｎＳ摘ｓｐｒｓｏｕｔｃｉｙｒｚｉ，ＳＨ）研究过程中，首次ｉａｖｄａｏ
发现一段经同源比较为Ｒｎ基因的部分序列，在抗病日本囊对虾中上调表达．为了进一步探索日本囊对虾ａＲｎ基因的功能，通过ＲＣａＡＥ—ＰＲ的方法克隆得到了日本囊对虾Ｒｎ基因全长共１４Ｃａ１个碱基，其中开放４阅读框为６５４个碱基，共编码２５个氨基酸，这是首次在海洋无脊椎动物体内克隆到该基因．还将该基因１
饰）、核质转运、有丝分裂和减数分裂的开始和结束的控制、纺锤体的组装、染色体的正确分配、核膜破裂和重组，起重要的作用。．李常健等细胞吞噬活性，参与动物免疫过程．发现Ｒｎ在淡水鱼生殖细胞的发生和发育、精核解ａ
凝中发挥作用．除此以外，近年来有研究报道与Ｒｎ同家族的小Ｇ蛋白—— Ｒｂ和Ｒｏ蛋白调控血ａａｈ

日本囊对虾过氧化氢酶cDNA全长克隆及表达分析

结合１个血红素辅基和还原型辅酶 Ⅱ（ｒｅｄｕｃｅｄｆｏｒｍｏｆ
ｎｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅ－ａｄｅｎｉｎｅｄｉｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｐｈｏｓｐｈａｔｅ。ＮＡＤＰＨ）．
ｅｎｄｓ，ＲＡＣＥ）技术，在日本囊对虾（Ｍａｒｓｕｐｅｎａｅｕｓｊａｐｏｎｉｃｕｓ）肝胰腺组织克隆到过氧化氢酶（ｃａｔａｌａｓｅ，ＣＡＴ）基因ｃＤＮＡ全序列．日本囊对虾ＣＡＴ基因（ＭｊＣＡ丁）ｃＤＮＡ全长１８０２ｂｐ，开放阅读框（ｏｐｅｎｒｅａｄｉｎｇｆｒａｍｅ，ＯＲＦ）长１５６３ｂｐ，编码５２０个氨基酸，理论等电点为７．２６，分子质量为５８．９ｋｕ．同源建模分析表明，ＭｊＣＡＴ蛋白分子结构高度保守．同源性比对后发现，ＭｊＣＡＴ基因氨基酸序列与中国明对虾（Ｆｇｒ０ｐ口Ｐｓｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）相似性最高（９４．２），其次是凡纳滨对虾（Ｌｉｔｏｐｅｎａｅｕｓｖａｎｎａｍｅｉ）（９０．９）．随后的聚类分析表明，其与中国明对虾和凡纳滨对虾聚为一支．荧光定量结果显示，ＭｊＣＡＴ基因在检测的多种组织中均有表达，其中以肝胰腺中表达量最高，其次为眼柄、肠、鳃、胃、心脏和血细胞，在肌肉中的表达水平最低．白斑综合征病毒（ｗｈｉｔｅｓｐｏｔｓｙｎｄｒｏｍｅｖｉｒｕｓ，ＷＳＳＶ）感染１２ｈ后，肝胰腺ＭｊＣＡＴ基因的表达量逐渐升高，４８ｈ上调至最高的表达水平．研究表明，ＭｊＣＡＴ基因在维持机体稳态及抗氧化防御反应过程中发挥着重要的

日本囊对虾(Marsupenaeus japonicus基因组微卫星特征分析

ｓｔａ和小麦（ｉｉｍａｓｉｕ等植物基因组以ａｉ）ｖＴｒｃｕｅｔห้องสมุดไป่ตู้ｍ）ｔｖ
微卫星，又称作简单序列重复（ｉｌｒｐａｓｍｐｅｅｅｔ
ｓｑｅｃ，ＳＲ）者短串联重复（ｈｒａｄｍｅｅｕｎｅＳ或ｓｏｔｔｎｅｒ— ｐａ，ＳＲ）ｅｔＴ，一般是指以１６个核苷酸为重复单～
复单位拷贝数的变异能力分析表明，变异系数最大的前３种重复类型，均为４６核苷酸，较长重 — 复单位类型有着较强的变异能力．微卫星重复单位长度与其拷贝数的相关分析表明，二者呈负相
关（一一０４８，即随着重复单位长度的增加，其拷贝数在减少．两核苷酸重复４种类型和三核ｒ．２）
中国水产科学研究院黄海水产研究所，业部海洋渔业资源可持续利用重点开放实验室，青岛２６７农６０１
摘要
通过建立随机基因组文库和序列测序，对日本囊对虾基因组进行了较大规模的微卫星分
６．２，三核苷酸重复次之，约占１．５．两核苷酸重复中以ＡＴ重复最为丰富，约占两核苷９８２３
酸重复序列总数的２．４．微卫星在低拷贝区间（４）量相对较大，约占比例为７．１．重９４ ≤ ２数２３

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பைடு நூலகம்
１材料与方法
１．１材料以鲜活的日本囊对虾肝胰脏组织为实验材料，提取总ＲＮＡ。反应中用的ｄＮＴＰ、ＰＣＲ缓冲液、
Ｔａｑ酶、限制性内切酶、ＧｅｎｅＲｕｌｅｒＤＮＡＭｉｘｔｕｒｅｌａｄｄｅｒ、Ｔｒｉｚｏｌ试剂和琼脂糖均购自ＭＢＩＦｅｒｍｅｎｔａｓ公司；反
的发育、增强应激性－７］以及幼虾的生长和蜕皮过程均有显著的影响Ｊ。因此，清楚了解对虾脂质代谢和运输过程，对于Ｅｔ本囊对虾育种、品种改良以及养殖过程中饲养成本的控制均具有重要的指导意义。
鳗鲡（Ａｎｇｕｉｌｌａｊａｐｏｎｉｃａ）中鉴定获得的。随后，在鲤（Ｃｙｐｒｉｎｕｓｃａｒｐｉｏ）、河豚（Ｔａｋｆｉｕｇｕｒｕｂｒｉｐ）、橙点石斑
鱼（Ｅｐｉｎｅｐｈｅｌｕｓｂｌｅｅｋｅｒｉ）、草鱼（Ｃｔｅｎｏｐｈａｒｙｎｇｏｄｏｎｉｄｅｌｌａ）以及黑头呆鱼（Ｐｉｍｅｐｈａｌｅｓｐｒｏｍｅｌａｓ）等１１种硬骨鱼中都有发现Ｊ。其主要作用是参与鱼类各个组织的代谢，特别是参与鱼的消化器官内脂质运输与代谢作
用，维持脂质代谢的稳态与平衡。日本囊对虾（Ｍａｒｓｕｐｅｎａｅｕｓｊａｐｏｎｉｃｕｓ）广泛分布于印度、澳大利亚、红海、坦桑尼亚、菲律宾及日本的东南沿海海域，是我国重要的经济养殖虾类。已有研究表明，富含脂类的食物对虾类的体质量增长Ｊ、性腺
目前，对于虾类养殖过程中的脂类营养代谢以及脂类运输途径的研究较少。笔者通过基因克隆，首次在
虾类体内得到了载脂蛋白ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ－１４（ａｐｏ．１４）基因的全长序列，并与其他物种的蛋白序列进行了比对分析，旨在为深入研究该基因的具体功能奠定基础。
中图分类号：Ｑ７８１文献标志码：Ａ
载脂蛋白（ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ）是动物体内脂质的主要载体，除了在血脂的运输中起重要作用外，还可以作
为某些生物酶的辅助因子、配体结合受体蛋白和脂质转运载体，以调节生物体组织内脂蛋白的代谢和吸收ｌｌ。载脂蛋白基因编码的１４ｋＤａ载脂蛋白作为高密度脂蛋白ＨＤＬ的重要组成成分，最早是在日本
日本囊对虾ａｐｏ一１４基因的全克隆及序列分析
乔莹，王军，钟声平，刘洪涛，毛勇
（厦门大学海洋与地球学院，福建厦门３６１００５）
摘要：以日本囊对虾（Ｍａｒｓｕｐｅｎａｅｕｓｊａｐｏｎｉｃｕｓ）肝胰腺组织为实验材料，提取总ＲＮＡ，通过３以及５一ＲＡＣＥ
转录试剂盒，胶回收试剂盒购自ＴａＫａＲａ公司。
１．２ＲＮＡ提取
取０．５ｇ对虾肝胰脏置于预冷的玻璃匀浆器中，加入３００Ｌ的Ｔｉｆｚｏｌ进行组织匀浆；再
加入３００ｔｘＬ的氯仿均匀混合，４℃ ３２０００ｒ・ｍｉｎ离心１５ｍｉｎ；小心吸取上清液，移人离心管中，再加入相同体积预冷的异丙醇，４℃ ３２００ｒ・ｍｉｎ离心１５ｍｉｎ；移去上清液，用１ｍＬ＝７０％的乙醇冲洗沉淀２次，加入适量经ＤＥＰＣ（焦碳酸二乙酯）处理过的蒸馏水溶解，一８０℃保存。
第４卷第１期
２０１３年３月
热带生物学报
ＪｏＵＲＮＡＬｏＦＴＲｏＰＩＣＡＬＢＩｏＬｏＧＹ
ＶｏｌＪ４Ｎｏ．１Ｍａｔ．２０１３
文章编号：１６７４— ７０５４（２０１３）０１ — ００１７— ０８
基因克隆技术，首次在日本囊对虾中克隆到载脂蛋白ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ一１４（ａｐｏ一１４）基因的全长序列，包含完整的ＯＲＦ以及３一ＵＴＲ和５ＵＴＲ。日本囊对虾ａｐｏ．１４ｅＤＮＡ序列全长为７８４ｂｐ，其中ＯＲＦ长度为４２０ｂｐ，编码１３９个氨基酸。对虾ａｐｏ一１４氨基酸序列与其他鱼类ａｐｏ一１４氨基酸序列有较高的相似性。关键词：日本囊对虾；载脂蛋白；ａｐｏ一１４；克隆；序列分析