第3章 消毒灭菌与病原微生物实验室生物安全Disinfection, sterilization and biosafety of pathogen Lab.1.

第3章消毒灭菌与病原微生物
高压蒸汽灭菌器
第3章消毒灭菌与病原微生物
湿热灭菌效果为何优于干热灭菌？
原因： ①湿热中细菌菌体蛋白质较易凝固变性 ②湿热的穿透力比干热大 ③湿热的蒸气有潜热效应存在。
第3章消毒灭菌与病原微生物
（二）辐射杀菌法
1、紫外线 2、电离辐射：β、γ射线等 3、微波
第3章消毒灭菌与病原微生物
低温可使细菌的新陈代谢减慢，故常用作保存 细菌菌种。
为避免解冻时对细菌的损伤，可在低温状态 下真空抽去水分，此方法称为冷冻真空干燥法。 该法是目前保存菌种的最好方法。
第3章消毒灭菌与病原微生物
二、 化学消毒灭菌法
许多化学药物能影响细菌的化学组成、物理 结构和生理活动，从而发挥防腐、消毒甚至杀菌 作用。这些化学药物称为化学消毒剂。一般对人 体组织有害，只能外用或用于环境的消毒。
除去尘埃和一切污秽以减少微生物数 量的过程。
第3章消毒灭菌与病原微生物
无 菌 (asepsis)
不存在任何活菌、多是灭菌的结果。
**无菌操作 (antisepsis technique)
防止细菌进入人体或其他物品的操 作技术。
第3章消毒灭菌与病原微生物
Sec.2 消毒灭菌的方法
物理消毒灭菌法 化学消毒灭菌法
紫外线杀菌试验
37℃ 24h
紫外灯下50cm处照射30min
照射后培养结果观察
第3章消毒灭菌与病原微生物
紫外线
波 长 240~300nm的紫外线具有杀菌作用，其 中以265~266nm最强。 ***杀菌机制 主要作用于DNA，形成二聚体，干 扰DNA的复制与转录，导致细菌的变异或死亡。 特 点 紫外线穿透力较弱，一般只用于手术室等 的空气消毒，或用于不耐热物品的表面消毒。 紫外线对人体皮肤、眼睛有损伤作用。

三）、Filtration 过滤 ）、
• sterilize solutions that may be damaged or denatured by high temperatures or chemical agents
四）、干燥与低温抑菌法
二、 化学消毒灭菌法 （Chemical method for sterilization） ）
第3章 消毒灭菌与病原微生物实验室生物安全 章
第一节 消毒灭菌的常用术语
Basic terms
• • • • • sterilization灭菌 disinfection消毒 Antisepsis 防腐 Bacteriostasis抑菌 Asepsis 无菌
1、消毒(disinfection) ： 杀死物体上病原微生物的方法,称为消 毒。(不一定能杀死含芽胞的细菌和非病原微生物) Disinfection (消毒):
(一)干热灭菌法(dry heat sterilization) 干热灭菌法(dry 1. 原 理 : 脱 水 干 燥 和 大 分 子 变 性 。 mechanism: The cells get dried through dehydration(脱水）. 脱水） 脱水 2.方法: 方法: ⑴焚烧（burn ）; 焚烧（ 用于微生物实验的接种环和试管口的灭菌; ⑵烧灼（cautery ）:用于微生物实验的接种环和试管口的灭菌; 烧灼（ 烤箱灭菌;160℃--170 170℃ 小时;适用于高温下不 ⑶干烤（bake ）:烤箱灭菌;160℃--170℃,2小时;适用于高温下不 干烤（ 变质、不损坏、不蒸发的物品,例玻璃器皿、瓷器、 变质、 不损坏、 不蒸发的物品, 例玻璃器皿 、瓷器 、 玻璃注射器等 的灭菌。 的灭菌。 ⑷ 红外线（ infrared):是一种 0.77-1000µm 波长的电磁波， 其中1红外线 （ 是一种0 77-1000 m 波长的电磁波 ， 其中 1 是一种 10µm波长的热效应最强，但只能加热物体表面，温度与时间同干烤。 10 m波长的热效应最强，但只能加热物体表面，温度与时间同干烤。

第五节 病原微生物实验室生物安全
生物安全（biosafety）是生物技术安全（safety of biotechnology）的简称。
狭义:指现代生物技术的研究、开发、应用及转基因 生物可能对生物多样性、生态环境和人类健康产生潜 在的危害。
广义:指与生物有关的各种因素对社会、经济、人类 健康及生态环境所产生的危害或潜在风险。
一、二级实验室不得从事高致病性病原微生物(第 一、二类)实验活动。三级、四级实验室从事高致病性 病原微生物实验活动(第一、二类病原微生物)。
从事高致病性病原微生物相关实验活动应当有２名 以上的工作人员共同进行。在同一个实验室的同一个 独立安全区域内，只能同时从事一种高致病性病原微 生物的相关实验活动。应有健全安全保卫制度。
第二级是指能够引起人类或者动物严重疾病，比较 容易直接或者间接在人与人、动物与人、动物与动物间 传播的微生物,如hantaan virus,vibrio cholerae,etc。
。 第三级是指能够引起人或动物疾病，但一般情
况下对人、动物或环境不构成严重危害，传播风险 有限，实验室感染后很少引起严重疾病，并且具备 有效治疗和预防措施的微生物,如influenza virus, Salmonella typhi,etc。
第二节 消毒灭菌的方法
物理学方法 Physical
干热灭菌法
热力灭菌法 湿热灭菌法
辐射杀菌法 滤过除菌法 超声波杀菌法 干燥和低温抑菌法等
化学方法 Chemical
生物方法 Biological
在同一温度下,湿热比干热灭菌 1、细菌蛋白质在有水的情况下易于凝固变性 2、湿热穿透力强 3、湿热蒸气有潜热存在，
一、病原微生物的分级
根据传染性、感染后对个体或者群体的危害程度， 病原微生物分为四级：

化学消毒剂的种类
（一）高效消毒剂 次氯酸钠、漂白粉） 1.含氯消毒剂 （次氯酸钠、漂白粉） 过氧化氢、过氧乙酸） 2.过氧化物消毒剂 （过氧化氢、过氧乙酸） 戊二醛、甲醛） 3.醛类消毒剂 （戊二醛、甲醛） 4.环氧乙烷 （二）中效消毒剂 1.含碘消毒剂 2.醇类消毒剂 （三）低效消毒剂 苯扎溴铵） 1.季铵盐类消毒剂 （苯扎溴铵） 季铵盐类消毒剂 2.氯已定 3.高锰酸钾 （碘酊、碘伏） 碘酊、碘伏） （乙醇、异丙醇） 乙醇、异丙醇）
层流室
无菌手术室
（四） 干燥与低温抑菌法
干燥：细菌在干燥的环境中失去大量水分， 干燥：细菌在干燥的环境中失去大量水分，新陈代谢便会发生障
碍，甚至引起菌体蛋白质变性和由于盐类浓度的增高而逐渐导致死亡。 甚至引起菌体蛋白质变性和由于盐类浓度的增高而逐渐导致死亡。
低温：低温下，细菌代谢活动降低到最低水平，生长繁殖停止， 低温：低温下，细菌代谢活动降低到最低水平，生长繁殖停止，
但仍可长时间保持活力。 但仍可长时间保持活力。 常用作保存细菌菌种，冷冻真空干燥法可避免解冻时对细菌的损 常用作保存细菌菌种，冷冻真空干燥法可避免解冻时对细菌的损 是目前保存菌种的最好方法。 伤，是目前保存菌种的最好方法。
菌种保存管
（五）化学消毒灭菌法 化学消毒灭菌法
杀菌机制 促进菌体蛋白质变性或凝固。 促进菌体蛋白质变性或凝固。 干扰细菌的酶系统和代谢。 干扰细菌的酶系统和代谢。 损伤细菌的细胞膜，使细胞膜通透性增加，胞外液内渗， 损伤细菌的细胞膜，使细胞膜通透性增加，胞外液内渗， 细菌裂解。 细菌裂解。
（三）滤过除菌法
滤菌器(filter)----液体除菌 液体除菌 滤菌器
① ② ③ ④
薄膜滤菌器 玻璃滤菌器 石棉滤菌器 素陶瓷滤菌器