沉淀试验-双向免疫扩散

实验双向免疫扩散法【原理】可溶性抗原与相应抗体在琼脂介质中相互扩散，彼此相遇后形成一定类型的特异性沉淀线。

沉淀线的特征与位置不仅取决于抗原抗体的特异性及相互间比例，而且与其分子大小及扩散速度相关。

当抗原、抗体存在多个系统时，可呈现多条沉淀线乃至交叉反应。

依据沉淀线的形态、条数、清晰度及位置可了解抗原或抗体的若干性质，如浓度、特异性等。

【实验材料】0.8%琼脂糖(巴比妥缓冲液配制)巴比妥钠缓冲液(μ=0.05，pH=8.6)：巴比妥钠10.30g、巴比妥1.84g、甘氨酸1.0g、Peg6000 4g，加900ml水加温助溶，待冷，转入1000ml容量瓶内，再加水到刻度，测试pH后装瓶待用。

载玻片打孔器微量加样器及塑料吸头湿盒抗原：人IgG蛋白抗体：兔抗人IgG免疫血清【实验方法】1）将已溶化的0.8%琼脂糖管放90~95℃水浴箱中平衡温度备用；2）将载玻片置于水平桌面上，倾注已溶化琼脂约4mL，使成厚度约1.5~2mm琼脂板；（注意：倾注速度不要过快，以免琼脂溢出载玻片；倾注过程要连续以保证琼脂板均匀平滑）；3）琼脂凝固后，用打孔器打孔，根据不同需要可制成三角型、方阵型或梅花型，本次试验采用梅花型。

梅花型即七个孔构成一组，孔径3mm，孔距4mm；梅花型打孔可以依据模板。

为便于识别加样方向或区分不同的组，可在琼脂糖胶的边缘打孔或切角标记。

打孔完毕后，将载玻片在酒精灯的火焰上过几遍，可防止漏液。

4）免疫血清的稀释：取5只干净的小试管，各加入70μL的生理盐水。

取70μL免疫血清加入第一支试管，震荡30秒，使其与生理盐水混匀，即为1:2稀释血清；再从第一支试管中吸取70μL的1:2稀释血清加入第二只试管中，震荡30秒，使其与生理盐水混匀，即为1:4稀释血清；依次操作，即可得到1:8、1:16、1:32的倍比稀释血清。

4）用微量加样器加6~8µL抗原于中央孔中，周围各孔分别各加6~8µL不同稀释度的免疫血清；注意每加一样品均需更换吸头，以防止交叉污染，影响实验结果；加样时，不要使样品溢出加样孔。

一、实验目的1. 掌握双向琼脂扩散试验的原理。

2. 熟悉双向琼脂扩散试验的操作方法。

3. 学会分析双向琼脂扩散试验的结果。

二、实验原理双向琼脂扩散试验（Double immunodiffusion test）是一种经典的免疫学实验方法，用于检测抗原与抗体之间的特异性结合。

该实验基于抗原与抗体在琼脂凝胶中相互扩散的原理。

当抗原和抗体在琼脂凝胶中相遇时，如果两者浓度比例合适，就会在两者相遇处形成白色沉淀线，称为沉淀反应。

三、实验材料1. 抗原：待检测的样品。

2. 抗体：已知抗体。

3. 琼脂粉：精制琼脂粉。

4. 生理盐水。

5. 载玻片。

6. 打孔器（直径3mm）。

7. 湿盒。

8. 吸管。

四、实验方法1. 制备琼脂板：用生理盐水配制1.0～1.5%琼脂，隔水煮沸使溶化，用吸管吸取3.5ml趁热浇于载玻片上，制成琼脂板。

2. 打孔：待琼脂凝固后，按图所示用打孔器打孔，并用针头挑去孔中琼脂（孔距为5mm）。

3. 加样：在孔中加抗体，在孔的周围加抗原。

加样时勿使样品外溢或在边缘残存小气泡，以免影响扩散结果。

4. 扩散：将加好样品的琼脂板置于湿盒内，于37℃温箱中放置24小时后观察结果。

五、实验结果1. 观察孔间沉淀线的数目与特征。

2. 分析沉淀线的形状、大小、位置等特征，判断抗原与抗体之间的特异性结合。

六、结果分析1. 若凝胶中抗原抗体是特异性的，则形成抗原—抗体复合物，在两孔之间出现一清晰致密白色的沉淀线，为阳性反应。

2. 若在72小时仍未出现沉淀线，则为阴性反应。

3. 结果分析时，需考虑抗原特异性、抗原浓度、沉淀线形状等因素。

七、讨论双向琼脂扩散试验是一种简单、灵敏、特异的方法，可用于检测抗原与抗体之间的特异性结合。

该实验在临床医学、生物学等领域有广泛的应用，如病原体检测、药物过敏检测、肿瘤标志物检测等。

在本实验中，我们成功进行了双向琼脂扩散试验，并观察到了清晰的沉淀线。

这表明抗原与抗体之间存在特异性结合，验证了实验结果的准确性。

一、实验目的1. 理解并掌握双向双扩散实验的原理。

2. 学习操作双向双扩散实验的方法和技巧。

3. 观察和分析实验结果，提高对免疫学实验技术的认识。

二、实验原理双向双扩散实验是一种定性试验，利用可溶性抗原与相应抗体在琼脂凝胶中各自向四周扩散的特性。

当抗原和抗体在凝胶中相遇时，若二者比例为适当，则在二者比例适当处形成白色沉淀线；若抗原和抗体无关，则不会出现沉淀线。

该实验可用于检测抗原或抗体的纯度、滴定抗体的效价，以及用已知抗原（抗体）检测和分析未知抗体（抗原）。

三、实验材料1. 琼脂凝胶：生理盐水、1%琼脂粉。

2. 试剂：已知抗原、待检血清、生理盐水、稀释液等。

3. 仪器：打孔器、微量加样器、枪头、酒精灯、搪瓷盒、显微镜等。

四、实验步骤1. 制备琼脂凝胶：称取1g琼脂粉，加入100ml生理盐水，煮沸使之溶解。

待溶解的琼脂温度降至60℃左右时倒入平皿中，厚度为2-3mm。

注意勿产生气泡。

2. 打孔：待琼脂凝固好后，用打孔器打孔，孔径和孔距依不同疫病检疫规程而定，一般孔径3-5mm，孔间距4-7mm。

孔型多为7孔，中央1孔，周围6孔（如梅花孔）。

用针头挑出孔内琼脂。

3. 封底：将琼脂板无凝胶面在酒精灯火焰上轻轻灼烧，用手背感受微烫即可。

4. 抗体效价测定：用微量加样器于中央孔加入已知抗原，于周围孔加倍比稀释的血清，每个稀释度加1孔。

5. 加样：加样时不要使样品外溢或在边缘残存小气泡，以免影响扩散结果。

6. 扩散：将琼脂板收入湿盒内置37℃温箱中扩散24-48小时。

7. 观察结果：若凝胶中抗原抗体是特异性的，则形成抗原-抗体复合物，在两孔之间出现一清晰致密白色的沉淀线，为阳性反应。

若在72小时仍未出现沉淀线则为阴性反应。

五、实验结果与分析1. 观察到的沉淀线：在实验中，观察到中央孔周围的孔中出现了白色沉淀线，表明已知抗原与待检血清中的抗体发生了特异性结合。

2. 结果分析：通过观察沉淀线的位置、数量和形态，可以判断抗原和抗体的纯度、效价以及是否存在交叉反应。

双向免疫扩散试验操作流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。

文档下载后可定制随意修改，请根据实际需要进行相应的调整和使用，谢谢!并且，本店铺为大家提供各种各样类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，如想了解不同资料格式和写法，敬请关注!Download tips: This document is carefully compiled by theeditor. I hope that after you download them,they can help yousolve practical problems. The document can be customized andmodified after downloading,please adjust and use it according toactual needs, thank you!In addition, our shop provides you with various types ofpractical materials,such as educational essays, diaryappreciation,sentence excerpts,ancient poems,classic articles,topic composition,work summary,word parsing,copy excerpts,other materials and so on,want to know different data formats andwriting methods,please pay attention!双向免疫扩散试验是一种常用的免疫学检测方法，用于检测抗原和抗体的特异性结合反应。

不留气泡。
Immunology
4. 小心打孔，勿使琼脂层脱离玻片，或底 层开裂；打孔要一次打到底，挑胶时要 细心，最好一次性挑出。
5. 加样加满即可，勿使液体溢出。 6. 为使沉淀线保持清晰度，可将已形成的
沉淀线琼脂板放在4℃冰箱。
Immunology
21
双向免疫扩散--人IgG检测
结果描述与分析
该法常用于分析血清蛋白种类。
Immunology
(immunoelectrophoresis)
3.
Immunology
免疫比浊(immunonephelometry)
一定量抗体中分别加入递增量的抗原， 经一定时间形成免疫复合物，液体混 浊。用浊度计测量反应体系的浊度， 可绘制标准曲线并依据浊度推算样品 中抗原含量。
几分钟至十几分钟 凝集块
沉淀反应 可溶性抗原 数小时至数天
沉淀物
Immunology
原理：
凝胶内沉淀试验
将可溶性抗原与相应分别放入凝胶（如琼脂、 琼脂糖等）内进行扩散，形成浓度梯度，在抗 原抗体浓度比例恰当的位置，形成肉眼可见的 免疫沉淀线、沉淀环。
分类：
①单向琼脂扩散试验(single gel diffusion test) ②双向琼脂扩散试验(double gel diffusion test）
将抗原和抗体分别加入琼脂板相对应的小孔 中，二者相互扩散、相遇，在比例合适处形成可 见的沉淀线。
Immunology
(double immunodiffusion)
Immunology
对流免疫电泳
当抗原和抗体在琼脂介质中电泳时 ， 由于抗体的 PI 比较高，在适当的 pH 值下， 抗体带正电荷而抗原带负电荷，故在电场中 抗体向阴极方向移动而抗原向阳极运动，直 至相遇后形成沉淀线

双相免疫扩散试验
实验原理：抗原和抗体在含有电解质的琼脂凝胶板的对应孔中，各自向四周凝胶中扩散，当二者发生特异性反应时，在浓度比例合适处形成可见的白色沉淀线。

本实验用于检测免疫成功与否及所产生的抗体的效价，抗体效价以出现明显沉淀线时的抗体的最高稀释度为判定终点。

一般来说，当效价≥1:16时（可在1:64以上），即可放血收集血清。

试剂和器材：
1.待测血清（抗体）
2.0.4%BSA（抗原）
3.琼脂粉、生理盐水
4.载玻片、吸管、滴管、打孔器、湿盒等
步骤和方法：
1.制备琼脂凝胶：生理盐水配制浓度为12g/L的琼脂，完全溶化至澄清
2.浇板：将载玻片置于水平台上，吸取琼脂加在玻片上，盖满、平整、无气泡
3.打孔：待琼脂凝固后，按下图打孔
4.加样：中心孔加入抗原，1-6孔所加血清的稀释度分别为：
1:8,1:16,1:32,1:64,1:128,1:256,每孔加样10μl
5.扩散：将加好样的琼脂板放入湿盒中，室温放置1-3d观察结果
结果判定：肉眼观察是否产生乳白色沉淀线
注意事项：
1. 加样时不要溢出空外
2. 反应时间要适宜，时间过长，沉淀线可解离而导致假阴性，时间过短，则沉
淀线不出现或不清楚。

注意事项
加样时，吸取每份标本均应更换塑料吸头； 实际检测过程中，标准曲线必须与样品测定同时制备； 孵育时间应控制在24~48h，时间太短可能产生不了沉淀线，时间太长会造成沉
淀线的扩散。
双向免疫琼脂扩散
实验原理
可溶性抗原与相应抗体在琼脂介质中相互扩散，彼此相遇后形成一定类型的特异 性沉淀线。
实验结果
用尺子测量并记录沉淀环直径，然后以沉淀环直径为纵座标，以标准参考蛋白量 （单位/ml）为横座标，绘制成标准曲线。
实验结果
注意事项
制备抗体琼脂板时，琼脂温度必须严格控制，温度太低琼脂会凝固，太高则会影 响抗体的活性；
加样孔内的琼脂应挑干净，切不可损坏孔的边缘，确保每孔的液面基本一致； 加样量一定要精确，并且不能逸出孔外，否则结果不好观察；
实验方法
加样：于中央孔加入牛IgG，周围1-5孔加入倍比稀释不同浓度的标准兔抗牛IgG 血清抗体，6孔加入生理盐水作对照。每孔各加10μl。
将琼脂板平放于湿盒内，置37℃温箱中，分别于24小时观察结果。
实验结果
观察孔间沉淀线的数目及特征。本试验1至5孔与中央孔之间是否可出现清晰的乳 白色沉淀线。
实验原理
沉淀线的特征与位置不仅取决于抗原抗体的特异性及相互间比例，而且与其分子 大小及扩散速度相关。
当抗原抗体存在多个系统时，可呈现多条沉淀线乃至交叉反应。 依据沉淀线的形态、清晰度及位置可以了解抗原或者抗体的性质。
双向琼脂扩散试验的应用
检测未知抗原或抗体 抗原性质分析 抗体效价滴定 抗原或抗体纯度鉴定
周围6个孔放不同稀释度的相应Ab。 以出现沉淀线的血清最高稀释倍数为该抗体的效价。 可进行任意稀释。
抗原抗体纯度鉴定
“1” 为单一抗原抗体系统。 “n” 为多个抗原抗体系统。 *可以用混合抗原鉴定抗体纯度。 *可以用混合抗体鉴定抗原纯度。

一、实验目的1. 掌握双向琼脂扩散试验的原理和操作方法。

2. 学习利用双向琼脂扩散试验检测抗原和抗体的特异性结合。

3. 熟悉实验结果的观察和判定。

二、实验原理双向琼脂扩散试验是一种常用的免疫学实验方法，主要用于检测抗原和抗体的特异性结合。

该实验原理如下：将抗原和抗体分别加入琼脂凝胶板上的相邻小孔中，抗原和抗体在琼脂凝胶中各自向四周扩散。

当抗原和抗体浓度比例适宜时，二者相遇并在最适当的位置结合，形成白色沉淀线。

沉淀线的形成说明抗原和抗体之间存在特异性结合。

三、实验材料1. 抗原和抗体：如蛋白质、多糖等。

2. 琼脂凝胶：精制琼脂粉、生理盐水、磷酸盐缓冲液（PBS）等。

3. 载玻片、打孔器、微量进样器、湿盒、37℃恒温箱等。

四、实验步骤1. 配制琼脂凝胶：按照说明书比例称取琼脂粉，加入适量的生理盐水和磷酸盐缓冲液，隔水煮沸使溶化。

2. 倒制琼脂板：将熔化的琼脂凝胶趁热倒入载玻片上，厚度约为2-3mm。

3. 打孔：待琼脂凝固后，用直径3mm的打孔器在琼脂板上打孔，孔间距为5mm。

4. 加样：用微量进样器将抗原和抗体分别加入相邻的孔中，注意加样时勿使样品外溢或形成气泡。

5. 扩散：将加好样品的琼脂板置于湿盒内，放入37℃恒温箱中扩散24-48小时。

6. 观察结果：观察琼脂凝胶中是否出现白色沉淀线，并记录沉淀线的特征。

五、实验结果1. 正常情况下，琼脂凝胶中会出现一条清晰的白色沉淀线，说明抗原和抗体之间存在特异性结合。

2. 若抗原和抗体浓度比例不适宜，可能不会出现沉淀线。

3. 若琼脂凝胶中存在其他抗原抗体系统，可能形成多条沉淀线。

六、实验讨论1. 双向琼脂扩散试验是一种简单、灵敏、特异的免疫学实验方法，广泛应用于抗原和抗体的检测。

2. 实验过程中，加样、扩散等操作需注意细节，以确保实验结果的准确性。

3. 通过观察沉淀线的特征，可以初步判断抗原和抗体的特异性结合情况。

七、实验总结本次实验通过双向琼脂扩散试验，成功检测了抗原和抗体的特异性结合。

第1篇一、实验目的1. 了解双向扩散试验的原理和操作步骤。

2. 掌握双向扩散试验在抗原抗体检测中的应用。

3. 学会通过观察沉淀线判断抗原与抗体之间的反应关系。

二、实验原理双向扩散试验是一种经典的血清学检测方法，主要用于抗原与抗体的定性检测。

该实验原理基于抗原与抗体在琼脂凝胶中的扩散和沉淀反应。

将抗原和抗体分别加入琼脂凝胶平板的小孔中，随着琼脂的凝固，抗原和抗体在琼脂凝胶中向四周扩散。

当抗原与抗体相遇并达到适当比例时，二者结合形成不溶性的复合物，从而在琼脂凝胶中形成可见的沉淀线。

三、实验材料1. 琼脂凝胶平板2. 抗原和抗体样品3. 打孔器4. 微量加样器5. 生理盐水6. 酒精灯7. 温箱8. 显微镜四、实验步骤1. 制备琼脂凝胶平板：称取1g琼脂粉，加入100ml生理盐水，煮沸使之溶解。

待溶液冷却至60℃左右时，倒入平皿中，厚度为2-3mm。

注意避免产生气泡。

2. 打孔：待琼脂凝固后，用打孔器在平板上打孔，孔径和孔距根据实验要求确定。

3. 加样：用微量加样器将抗原和抗体样品分别加入孔中。

4. 封底：将琼脂板无凝胶面在酒精灯火焰上轻轻灼烧，用手背感受微烫即可。

5. 培养：将加好样品的琼脂板置于湿盒内，放入温箱中培养24小时。

6. 观察：取出琼脂板，用显微镜观察沉淀线形成情况。

五、实验结果通过观察琼脂凝胶平板上的沉淀线，可以判断抗原与抗体之间的反应关系：1. 若抗原与抗体对应，则形成清晰的沉淀线，表明两者之间存在特异性结合。

2. 若抗原与抗体不对应，则无沉淀线形成，表明两者之间无特异性结合。

3. 若沉淀线模糊不清，表明抗原与抗体浓度不适宜或存在其他干扰因素。

六、实验讨论1. 双向扩散试验是一种简单、快速、可靠的抗原抗体检测方法，在临床医学、疾病诊断、疫苗研究等领域具有广泛应用。

2. 实验过程中，应注意以下几点：a. 琼脂凝胶平板的制备应确保无气泡，以保证抗原和抗体在琼脂中的均匀扩散。

b. 加样时，应避免样品溢出，以免影响沉淀线的形成。

沉淀试验——双向免疫扩散试验一、目的要求1. 掌握双向免疫扩散试验的原理和用途；2. 熟悉双向免疫扩散试验的操作方法;二、实验原理可溶性抗原如细菌的外毒素、内毒素、菌体裂解液、病毒、组织浸出液等与相应的抗体结合后,在适量电解质存在下,形成肉眼可见的白色沉淀线,称为沉淀试验precipitation;在生理条件下,抗原抗体均带负电荷,使极化的水分子在其周围形成水化膜,成为亲水胶体;当抗原与抗体结合后,表面电荷减少,水化膜变薄；而且由于抗原抗体复合物形成后,与水接触的表面积减少,由亲水胶体转化为疏水胶体;在电解质作用下,各疏水胶体之间靠拢,形成可见的抗原抗体复合物;如果抗原成分不纯,免疫动物后可以产生针对不同抗原成分的多种抗体,于是就形成多条沉淀线,如图2-1所示;图2-1双向免疫扩散试验原理示意图双向免疫扩散试验double agar immunodiffusion test：将可溶性抗原和抗体分别加到琼脂板上相应的小孔内,由于抗原和抗体各自向四周扩散,故称双向琼脂扩散试验;若抗原与抗体相对应,两者相遇即发生特异性结合形成抗原抗体复合物,由于该复合物的体积大于琼脂的微小孔隙,于是不能扩散,并逐步聚集在一起形成白色沉淀线;每一对应抗原和抗体可出现一条沉淀线,出现沉淀带的抗体最大稀释倍数即为抗体效价;由于抗原抗体在琼脂内的扩散受到浓度、分子量大小与表面电荷的影响,所以沉淀线可以出现在抗原孔与抗体孔之间的不同位置;当抗体浓度过高时,沉淀线就靠近抗原孔,为前带；相反,则沉淀线靠近抗体孔,为后带;如果抗原与抗体的比例合适,则沉淀线位于两孔中间,为等价带,如图2-2所示;图2-2 抗原-抗体结合的沉淀带形成原理示意图三、实验用途：沉淀试验广泛应用于病毒抗原、细菌毒素或寄生虫抗原等的诊断图2-3,以及各种免疫血清效价和毒素、抗毒素的测定等;四、材料：1耗材：小平皿、1.5mL的离心管、吸头；2试剂：琼脂糖、8.5% 高渗盐水、待检血清、鸡卵白素ovalbumin, OVA、兔抗OVA阳性血清；3仪器：高压锅、打孔器、移液器、湿盒、恒温箱;五、实验方法：1. 琼脂板的制备：1克琼脂粉溶于100 mL 8.5% 高渗盐水,电陶炉溶解,待温度降至55℃左右时,倾注于平皿中,制成厚约3mm左右的琼脂板;2. 打孔：在琼脂板上打梅花孔如下图所示,孔径为5mm,中间空和周围孔间的距离大约为5mm;将孔内琼脂挑出;用酒精灯火焰封底;3. 加样：将待检血清作倍比稀释,即1：2、1：4、1：8、1：16,分别加至周围孔中,中间加OVA;4. 作用：将琼脂板放置湿盒中,在37℃恒温箱中作用24 h;5. 结果观察：抗原抗体在凝胶为扩散,在两孔之间比例最适合的位置出现沉淀带,出现沉淀带的抗体最大稀释倍数即抗体效价;五、结果观察若待检血清孔A～F与抗原孔Ag之间产生沉淀线,并与阳性对照所产生的沉淀线吻合成一线,则表示阳性;如无沉淀线或与阳性血清沉淀线交叉,则表示阴性;图2-3 双向免疫扩散试验用于传染病诊断六、注意事项打孔加样时,不要将琼脂划破,以免影响沉淀线的形成;孔间距要相等;加样时注意换吸头;七、思考题1. 双向琼脂扩散实验中怎样通过沉淀线来判断抗原与抗体是否对应2. 双向琼脂扩散实验中怎样判断待检血清标本中的抗原或抗体的含量3. 双向扩散试验怎样分析抗原、抗体纯度4. 什么是带现象什么是前带什么是后带其临床意义是什么。

沉淀反应—双向扩散【实验原理】在一定条件下，抗原能与相应的抗体相互作用，发生免疫沉淀反应。

免疫扩散就是使抗原与抗体在琼脂糖凝胶中自由扩散而相遇，从而形成抗原抗体复合物，由于此复合物分子量增大并产生聚集，不再继续扩散而形成肉眼可见的带状或线状沉淀带。

利用琼脂糖凝胶作为扩散介质是因为一定浓度的琼脂糖凝胶，其内部为多孔网状。

而且孔径很大，可以允许大分子物质（分子量自十几万到几百万以上）自由通过。

因为大多数抗原和抗体的分子量都在20万以上，所以它们在琼脂糖凝胶中几乎可以自由扩散。

而且琼脂糖凝胶又具有良好的化学稳定性、含水量大、透明度好、来源方便、处理容易等优点，因此是免疫沉淀检测技术中最理想的扩散介质。

双向琼脂扩散试验是定性实验。

本实验测定时将加热溶化的琼脂或琼脂糖浇至玻片上，等琼脂凝固后，打多个小孔，将抗原和抗体分别加入小孔内，使抗原和抗体在琼脂板上相互扩散。

当二个扩散圈相遇，如抗原和抗体呈特异性的结合且比例适当时，将会形成抗原抗体复合物的沉淀，该沉淀可在琼脂中呈现一条不透明的白色沉淀线。

如果抗原与抗体无关，就不会出现沉淀线，因此可以通过该试验，用特异性抗体鉴定抗原。

【实验方法】❶制备琼脂玻片：将已加热溶化的1%琼脂5mL，迅速倾入洁净干燥的载玻片上，室温自然冷却凝固。

❷打孔：在凝固的琼脂糖胶上用打孔器或吸嘴按左图所示打梅花孔（孔径约3mm，孔距4mm），用针头小心挑去琼脂。

为便于识别加样方向或区分不同的组，可在琼脂糖胶边缘打上小孔或切角标记。

打孔完毕，将载玻片在酒精灯火焰上方过几遍，可防止漏液。

❸加样：在中央孔加抗体，上下孔加抗原1（Ag1），左右孔加抗原2（Ag2），每孔约10μL。

❹温育：将琼脂糖胶置于湿盒（饭盒垫上纱布，加蒸馏水润湿）中，37℃温育12-24h。

❺结果观察：观察抗原抗体产生的白色沉淀线。

免疫血清的滴度以一定抗原浓度下出现白色沉淀线的最高稀释度来表示。

【实验结果】实验结果如上图所示，红线箭头所示部分为沉淀线。

优点
分辨率强，敏感度高，操作周期短， 仅需数小时，结果易于分析。
免疫沉淀试验原理、技术和应用
应用:M 蛋白的鉴定和分型
免疫沉淀试验原理、技术和应用
（五）交叉免疫电泳 （六）自动化免疫电泳
免疫沉淀试验原理、技术和应用
第四节 免疫沉淀试验的临床应用
免疫浊度法：蛋白质的检测 如免疫球蛋白、补体、类风湿因子、 C反应蛋白等
免疫浊度测定 免疫沉淀试验原理、技术和应用
三、 免疫沉淀试验的特点
1. 阶段性 2. 特异性 3. 抗原性质：可溶性 4. 抗体的选择：2价
免疫沉淀试验原理、技术和应用
第二节 液体免疫沉淀试验
免疫沉淀试验原理、技术和应用
第二节 液体免疫沉淀试验
一、絮状免疫沉淀试验
絮状免疫沉淀试验是将抗原与相应
电泳分析 ＋ 沉淀反应
优点：
1.加快反应的速度。 2.提高了灵敏度。
3.增加了分辨率。
免疫沉淀试验原理、技术和应用
抗原抗体反应 的高度特异性
电泳技术的高 分辨率、快速、 微量
•电泳（electrophoresis） ：在外加
电场的作用下带电颗粒向着其电性相 反的电极移动，称为电泳。
免疫沉淀试验原理、技术和应用
抗体混合，在电解质存在的条件下，
抗原抗体结合形成肉眼可见的絮状
沉淀物。
免疫沉淀试验原理、技术和应用
一、絮状免疫沉淀试验
抗原稀释法：抗原最适比例 抗体稀释法：抗体最适比例 方阵滴定法：抗原抗体最适比例
免疫沉淀试验原理、技术和应用
絮 状 沉 淀 示意图
各管抗原倍比稀释
Ag
加入抗血清
1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:128

孔中的IgG 含量为纵坐标，在半对数纸上按Fahey 法绘 制出标准曲线。
结果判定： 待测标本中所含抗原量根据标本孔的沉淀环直径查
标准曲线，将查得的Ig含量乘以标本的稀释倍数，即待 检标本血清中Ig的实际含量。
实验讨论
单向免疫扩散试验方法简便、易于操作，且重复性和 线性均可信赖。但敏感度稍差，观察结果所需时间较长， 每次需做参考血清对照，不可一次做成，长期使用。应用 此方法除检测人血清IgG 含量外，还可用于健康人群或患 者血清中IgA、IgM 、补体、白蛋白、蛋白酶等蛋白质含 量的定量测定。
? 操作示意图
浇板
打孔 加样 温育
1
2
6
3
5
4
结果判断 中央孔—抗体成分
周围孔—不同稀释度的抗原 成分（第1~5孔）
第6孔—阴性对照
结果判断
以出现沉淀线的正常人血清最高稀释度为 人血清IgG 的扩散效价。
实验讨论
该方法简便易行，结果稳定可靠。根据抗原抗体相遇 后所出现沉淀线的特征，对其进行定性分析。若相邻两孔 内抗原成分完全相同，则形成完全相连的两条沉淀线；若 抗原完全不同，则形成交叉的两条沉淀线；若抗原部分相 同，则形成部分相连的两条沉淀线；当抗原存在多种成分 时，则呈现多条沉淀线以至交叉反应线，因此可根据沉淀 线的位置、形状、数目等，初步分析抗原和抗体的纯度、 浓度、扩散速度等理化性状。该方法除用于血清 IgG 的检 测以外，还曾用于诊断和分析某些疾病，如检测 AFP 、 HBsAg等，但敏感度低所需时间长。
北华大学 王雪松
实验三 对流免疫电泳
实验原理
在偏碱性的缓冲液和适当的直流电场中，抗原和抗 体的扩散具有一定的特点。在 pH8.6 以上的缓冲液中，大 部分蛋白质抗原解离带负电荷，在电场中向正极泳动； 而大部分抗体属于 IgG ，在此种 pH 条件下只带微弱的负 电荷，由于其分子量大，暴露的极性基团少，在电场中 泳动缓慢，且受电渗作用的影响，带正电荷的液体推动 抗体分子向负极泳动。由此抗原、抗体就达到了定向对 流，在两者相遇且比例合适时便形成肉眼可见的白色沉 淀线。