细菌的接种和注意事项终极版

注意：由于实验内容较多，所以我们只要把蓝色字体部分写在实验报告上即可，黑体字部分自己看一下。

由于11-13周为教学质量检查周，督导随时可能来查，所以预习报告还是要写。

细菌、酵母菌、放线菌和真菌接种方法和形态观察一、微生物的接种技术1 目的1.1学习掌握微生物的几种接种技术1.2 建立无菌操作的概念，掌握无菌操作的基本环节2 基本原理将微生物培养物或含有微生物的样品在无菌条件下移植到培养基上的操作技术称为接种。

接种的关键是严格进行无菌操作。

常用的接种方法有斜面接种、液体接种、穿刺接种、平板接种和固体接种等。

3 实验材料3.1 菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、啤酒酵母、玫瑰暗黄链球菌、曲霉、荨麻青霉的斜面培养物3.2 培养基：营养琼脂培养基、马铃薯葡萄糖琼脂培养基及高氏1号培养基的斜面和平板3.3 试剂：5ml无菌生理盐水试管3.4 仪器与其他用品酒精灯、记号笔、试管、橡胶塞、试管架、接种环、培养皿、超净台等。

4 操作步骤4.1 斜面接种法斜面接种法主要用于传代活化、纯化培养、鉴定或保存菌种。

通常先从平板培养基上挑取分离的单个菌落，或挑取斜面，液体培养基中的纯培养物接种到斜面培养基上。

操作应在无菌室、接种柜或超净工作台上进行。

4.1.1准备工作将菌种斜面培养基(简称菌种管)与待接种的新鲜斜面培养基(简称接种管)持在左手拇指、食指、中指及无名指之间，菌种管在外侧，接种管在内侧，斜面向上管口对齐，并能清楚地看到两个试管的斜面，注意不要持成水平，以免管底凝集水浸湿培养基表面。

4.1.2接种环灭菌右手持接种环柄，将接种环垂直放在火焰上灼烧。

镍铬丝部分（环和丝）必须烧红，以达到灭菌目的，然后将除手柄部分的金属杆全用火焰灼烧一遍。

4.1.3拔管塞和烧烤试管口用右手的小指和手掌之间及无名指和小指之间拨出试管棉塞，将试管口在火焰上通过，以杀灭可能沾污的微生物。

4.1.4接种环冷却和取菌将灼烧灭菌的接种环插入菌种管内，先接触无菌苔生长的培养基上，待冷却后再从斜面上刮取少许菌苔取出。

香菇菌棒开放式接种技术要点！
一、接种场地选择
1.选择避风、清洁、干燥、密封性好、附近50米内无杂菌污染源的房间为开放式接种场所。

2.接种室须在菌棒搬入前一天打扫干净并消毒。

二、菌棒处理
1.常压灭菌，在100℃温度下保持14小时以后，将无机械破损的菌棒移至接种室，并盖上薄膜，以防灰尘及杂菌孢子降落。

2.菌棒堆放在接种室中间，堆高不宜超过1.2米。

3.待菌棒冷却至25℃以下，采用气雾消毒剂消毒2小时后，方可接种。

三、接种程序
1.将菌种、接种工具等用75%酒精消毒后备用。

2.用消菌剂或多菌灵配制的药剂涂擦接种部位。

3.在涂擦处打孔，每段菌棒打3-4个孔，孔深4-5厘米，不能打穿。

4.将生产种掰成块塞入孔内，接种块和菌棒要结合紧实，但不能挤压，防止杂菌从空隙侵入。

5.温度升至25℃时，揭开薄膜进行通风、换气，及时翻堆，防止高温烧菌。

四、注意事项
1.接种须选择在低温、晴朗、干燥的天气进行。

温度高于20℃，下雨多雾、刮风时接种，对成活率有一定影响。

2.接种场地必须清洁、干净、卫生。

3.菌种人员的手及打孔机械须用75%的酒精消毒。

细菌接种培养方法
细菌接种的技术过程主要包括消毒准备、转接细菌、接种培养基、观察结果和清理工作。

具体内容如下：
- 消毒准备：在进行细菌接种前，要确保实验台面、操作者双手、接种环、接种针等工具的清洁、无菌。

- 转接细菌：将携带细菌的接种环或接种针在新的无菌培养基上接种，可以采用直线涂布、环形涂布、刻线等方法。

- 接种培养基：将接种好的培养基放入恒温培养箱培养。

通常需要培养18-24小时，以观察细菌的生长情况。

观察时应记录菌落数量、形态、颜色等特征。

- 清理工作：实验结束后，需要对实验台面和使用的器具进行清洁、消毒。

将已使用的培养基放入高压灭菌锅进行灭菌，待完全冷却后再处理。

在操作过程中要保持良好的实验习惯，避免污染和交叉感染。

（一）平板划线接种法（又称分离培养法）平板划线接种法为最常用的分离培养细菌的方法，通过平板划线后，可使细菌分散生长，形成单个菌落，有利于从含有多种细菌的标本中分离出目的菌。

平板分离划线的方法较多，其中以分区划线法与曲线划线法较为常用。

其目的都要使细菌呈现单个菌落生长，便于同杂菌菌落鉴别。

现只介绍分区划线法。

1、右手持接种环，经火焰灭菌，待凉后，挑取大肠杆菌（或葡萄球菌）培养物少许。

2、左手斜持琼脂平板，皿盖留在桌上，于火焰近处将菌涂于琼脂平板上端，来回划线，涂成薄膜（约占平板总表面积的1/10），划线时接种环与平板表面成30~40º角，轻轻接触，以腕力在平板表面行轻快地滑移动作，接种环不应划破培养基表面。

3、烧灼接种环，杀灭环上残留细菌，待冷（是否冷却，可先在培养基边缘处试触，若琼脂溶化，表示未凉，稍等再试），从薄膜处取菌作连续平行划线，约占平板表面1/5左右，再次烧灼接种环，等三次平行划线……以同样方法作第四次，第五次划线，将平板表面划完。

4、划线完毕，盖上平皿盖，底面向上，用标签或腊笔注明菌名检验号码，接种者信息等，置37℃孵育培养24小时后观察结果。

（二）纯培养细菌接种法（斜面培养基接种法：用于培养，保存菌种及其它实验用）1、取一支斜面培养基及一支纯菌种管，并排倾斜放在左手四指中拇指压住并以手掌支住两试管底部。

右手将白金环于火焰上灭菌、冷却。

并拔起两试管的棉塞。

（勿放置桌上，如棉塞太紧时应预先松动）。

2、试管口部于火焰上往返通过2~3次灭菌，将灭菌白金环伸入有菌试管中，取少量细菌（一般应从斜面底部沾取），然后小心移至准备接种的试管中。

3、接种方法是自管底向上连续平划线，若以保存菌为目的时可自管底上划一粗直线即可。

4、取出接种环，将试管上部再经火焰灭菌，塞好棉塞，接种环灭菌后放回原处。

5、若自平皿培养物中取菌时，只应沾取一个单个菌落。

6、接种菌应作好标记，标明菌种名称，日期等，置37℃温箱中培养，次日观察结果。

实验微生物接种技术讲解实验微生物接种技术讲解微生物包括：细菌、病毒、真菌以及一些小型的原生生物、显微藻类等在内的一大类生物群体，它个体微小，与人类关系密切。

以下是小编为大家整理的实验微生物接种技术讲解，仅供参考，希望能够帮助大家。

实验微生物接种技术讲解1一、目的：学习微生物工作的基本接种方法，建立纯培养技术中的“无菌”概念，掌握无菌操作技术。

二、原理：所谓接种就是将一定量的纯种微生物在无菌操作条件下转移到另一已灭菌，并适宜于该菌生长繁殖所需的培养基上的过程。

本实验要求严格进行无菌操作，一般是在无菌操作台或在实验室内火焰旁进行。

根据不同的实验目的和培养方式，可以采用不同的接种工具和接种方法。

三、实验材料：斜面培养基、液体培养基、平板培养基、记号笔、酒精灯、接种针、消毒酒精、涂布棒等。

四、操作步骤（一）无菌操作菌种分离或移接工作应在无菌环境中进行，接种室、接种箱或超净工作台是常用的接种环境。

用前先清洁好卫生，再进行消毒处理。

可用紫外线灯和甲醛熏蒸的双重作用，或用3%来苏尔及其他表面消毒进行喷雾。

操作者的手应先用肥皂洗净，再用酒精棉球消毒；整个操作过程都要靠近酒精灯火焰；接种工具在用前和用后必须在灯焰上灭菌；棉塞不得乱放，操作中只能夹在手上；不能有跑、跳等力度大的动作，以免引起空气大振动而增加染菌机会。

（二）接种方法（1）斜面接种：从已长好微生物的菌种管移接到另一斜面管的方法。

此法用于好气性微生物的接种。

左手持菌种管和斜面管，使斜面向上，并尽量放平。

用右手先将棉塞拧转松动，再拿接种环，用右手的小指、无名指和手掌拨下棉塞并夹紧，同时将管口在火焰上燃烧一圈，接种环灼烧灭菌后插入管内，冷却、挑菌，立即转入斜面管底部，沿斜面划曲线或直线。

图1.斜面接种示意图（2）液体接种：由斜面菌接种到液体培养基（如试管或三角瓶等）中的方法。

操作与上法基本一致，只是在将接种环送入液体培养基中时使环在液体与管壁接触的地方轻轻磨擦，使菌体分散，然后塞上棉塞，再轻轻摇动均匀，即可培养。

细菌的接种和注意事项终极版细菌接种是一种常见的实验操作，用于研究和培养细菌。

以下是关于细菌接种的一些步骤和注意事项的终极版指南：1.材料准备：-细菌菌株：选择适合实验目的的细菌菌株。

-培养基：根据细菌菌株的需求选择适当的培养基。

-培养皿：使用无菌培养皿，可选择琼脂平板、琼脂深培养皿等。

-培养物：如有需要，在培养基中添加辅助物质，比如抗生素或指示剂。

2.预热培养基：将培养基固化前，预热至适当温度。

通常细菌培养在37℃下进行，但有些菌株可能需要其他温度。

3.移取细菌菌株：使用无菌技术，在细菌菌株的菌落上用无菌环、无菌韦尔霉漆或无菌吸管取少量菌落。

避免直接触碰无菌环或吸管头，防止外界污染。

4.接种培养基：轻轻划过培养基表面，或者按照实验需要，在培养基中刺激性划痕或钻洞。

5.培养皿封闭：用适当的培养基盖住培养皿，或者用无菌胶带封闭培养皿。

6.培养条件：将培养皿放入恒温培养箱中，根据所需的生长条件设置温度、湿度和光照。

细菌在不同条件下生长的要求会有所差异。

7.检查培养情况：按照实验需要，可以每天或每隔一段时间检查培养皿的状态。

细菌菌落的颜色、形状和大小可以提供一些信息。

8.储存细菌：如果需要储存细菌，将培养皿存放在适当的环境中。

常见的储存方法包括冷藏、冷冻和在琼脂中保存。

接种细菌时需要注意的事项：1.无菌操作：确保操作环境和工具都是无菌的，避免细菌的外源性污染。

使用消毒剂清洁工作台面，佩戴手套，避免呼吸到培养物中。

2.预防交叉污染：每次接种前，使用酒精灯、火焰笔或紫外灯对工具进行消毒。

不同菌株间的接种不要重复使用同一工具。

3.避免快速暴露：开启培养皿盖子的时候，要快速打开并迅速接种，避免细菌的暴露时间过长。

4.温度和时间：根据细菌的生长条件和实验目的，选择合适的温度和时间进行培养。

5.安全措施：对于可能带有致病性的细菌菌株，要采取相应的安全措施，如佩戴手套、戴口罩、穿戴防护服等。

7.废物处理：将使用过的培养皿、工具和材料分类，正确处置。

⼀⽂搞定细菌的接种⽅法（值得收藏）常⽤的细菌接种⽅法有平板划线分离法、斜⾯接种法、穿刺接种法、液体和半固体接种法、涂布接种法等。

⼀、平板划线分离法平板划线分离法:是指把混杂在⼀起的微⽣物或同⼀微⽣物群体中的不同细胞⽤接种环在平板培养基表⾯，通过分区划线稀释⽽得到较多独⽴分布的单个细胞，经培养后⽣长繁殖成单菌落，通常把这种单菌落当作待分离微⽣物的纯种。

有时这种单菌落并⾮都由单个细胞繁殖⽽来的，故必须反复分离多次才可得到纯种。

其原理是将微⽣物样品在固体培养基表⾯多次作“由点到线”稀释⽽达到分离⽬的的。

为⽅便划线，⼀般培养基不宜太薄，每⽫约倾倒20ml培养基，培养基应厚薄均匀，平板表⾯光滑。

划线分离主要有分区划线法和连续划线法两种（如图1， A、B）。

图1分区划线法是将平板分四区，故⼜称四分区划线法。

划线时每次将平板转动60~70°划线，每换⼀次⾓度，应将接种环上的菌烧死后，再通过上次划线处划线；另⼀种连续划线法是从平板边缘⼀点开始，连续作波浪式划线直到平板的另⼀端为⽌，当中不需灼烧接种环上的菌。

1）连续划线法将琼脂平⽫半开盖倒置于培养箱内⾄⽆冷凝⽔，接种环于酒精灯外焰烧⾄红透，接种棒也要充分灼烧，最后再集中烧接种环⾄红。

轻轻摇匀待接种试管，左⼿⼿⼼托待接种试管底侧部，右⼿执接种环，右⼿⼩指拔下试管塞，于酒精灯附近将接种环伸进试管，稍候，再插⼊待接接种液中，蘸⼀下，取满⼀环，抽出、烧塞、盖盖、放回试管架。

或将接种环通过稍打开⽫盖的缝隙伸⼊平板，在平板边缘空⽩处接触⼀下使接种环冷却，然后以⽆菌操作接种环直接取平板上待分离纯化的菌落。

于靠近酒精灯处打开平⽫盖约30°，右⼿将环伸进平⽫，将菌种点种在平板边缘⼀处，轻轻涂布于琼脂培养基边缘（如图2），抽出接种环，盖上平⽫盖，然后将接种环上多余的培养液在⽕焰中灼烧，打开平⽫盖约30°伸⼊接种环，待接种环冷却后，再与接种液处轻轻接触，开始在平板表⾯轻巧滑动划线，接种环不要嵌⼊培养基内划破培养基，线条要平⾏密集，充分利⽤平板表⾯积，注意勿使前后两条线重叠，划线完毕，关上⽫盖。

微生物的接种技术1 目的1.1学习掌握微生物的几种接种技术1.2 建立无菌操作的概念，掌握无菌操作的基本环节2 实验说明将微生物的培养物或含有微生物的样品移植到培养基上的操作技术称之为接种。

接种是微生物实验及科学研究中的一项最基本的操作技术。

无论微生物的分离、培养、纯化或鉴定以及有关微生物的形态观察及生理研究都必须进行接种。

接种的关键是要严格的进行无菌操作，如操作不慎引起污染，则实验结果就不可靠，影响下一步工作的进行。

3 实验器材3.1 器械和用品酒精灯，玻璃铅笔，火柴，试管架、接种环、接种针、接种钩、滴管、移液管、三角型接种棒等接种工具。

3.2 菌种和培养基菌种：大肠杆菌（Escherichia coli），金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）。

培养基：普通琼脂斜面和平板,营养肉汤,普通琼脂高层(直立柱)。

4 实验流程斜面接种法→液体接种法→固体接种法→穿刺接种法。

5 操作步骤5.1 斜面接种法斜面接种法主要用于接种纯菌，使其增殖后用以鉴定或保存菌种。

通常先从平板培养基上挑取分离的单个菌落，或挑取斜面，肉汤中的纯培养物接种到斜面培养基上。

操作应在无菌室、接种柜或超净工作台上进行，先点燃酒精灯。

将菌种斜面培养基(简称菌种管)与待接种的新鲜斜面培养基(简称接种管)持在左手拇指、食指、中指及无名指之间，菌种管在前，接种管在后，斜面向上管口对齐，应斜持试管呈45～0度角，并能清楚地看到两个试管的斜面，注意不要持成水平，以免管底凝集水浸湿培养基表面。

以右手在火焰旁转动两管棉塞，使其松动，以便接种时易于取出。

右手持接种环柄，将接种环垂直放在火焰上灼烧。

镍铬丝部分（环和丝）必须烧红，以达到灭菌目的，然后将除手柄部分的金属杆全用火焰灼烧一遍，尤其是接镍铬丝的螺口部分，要彻底灼烧以免灭菌不彻底。

用右手的小指和手掌之间及无名指和小指之间拨出试管棉塞，将试管口在火焰上通过，以杀灭可能沾污的微生物。

细菌的接种与培养方法操作规程一、细菌的接种根据待检标本的来源、培养目的及所用培养基的性状，采用不同的接种方法。

l、平板画线分离法（1）、连续画线分离法此法主要用于杂菌不多的标本。

用接种环取标本少许，于平板l/5处密集涂布，然后回来作曲线连续划线接种，线与线间有一定距离，划满平板为止。

（2）、分区画线分离法此法适用于杂菌较多的标本。

先将标本均匀涂布于平板边缘一小区(约占平板1/5)，再在二、三区依次连续画线，每画线一区均将接种针灭菌一次。

每一区的划线均接触上一区的接种线1～2次。

以获得单个菌落。

2、斜面接种法该法主要用于单个菌落的纯培养。

用灭菌接种针取菌少许，从培养基斜面底部向上划一直线，然后从底部向上作连续曲线画线。

一直画到斜面顶端。

3、液体接种法多用于一些液体生化试验管的接种。

用灭菌接种环取菌少许，在试管内壁与液面交接处的管壁上轻轻研磨，使细菌混合于液体中。

4、穿刺接种法主要用于半固体培养基、明胶及双糖铁的接种。

用接种针取菌少许，从半固体培养基中央，平行于管壁垂直刺入，接近管底但不可接触管底，然后接种针原路退出。

5、倾注平板法临床上主要用于尿液等标本的细菌计数。

将标本经适当稀释后，取一定量加入已灭菌的平皿内，倾入已经溶化并冷却至45℃左右的定量培养基，混匀，待凝固后倒置、培养。

6、涂布接种法常用于纸片药物敏感性测定，也可用于被检标本的细菌计数。

加定量的被检菌液于琼脂平板表面，然后用灭菌的棉签反复涂布几次，使被检菌均匀分布在琼脂平板表面。

然后贴上药敏纸片培养，或直接培养观察结果。

二、细菌培养方法根据临床初步诊断及待检细菌的种类，可选用不同的环境进行培养。

常用的有需氧培养法、二氧化碳培养法和厌氧培养法。

1、需氧培养法本法是临床细菌室常用的培养方法，即将已经接种好的平板、斜面和液体培养基等。

置于35℃温箱中孵育18～24小时。

2、二氧化碳培养法本室用CO2孵箱将已接种好的培养基置于CO2孵箱内培养。