蛋白质的颜色反应和沉淀反应
一、目的
（1）掌握鉴定蛋白质的原理和方法。
（2）熟悉蛋白质的沉淀反应。
（3）进一步掌握蛋白质的有关性质。
二、原理
蛋白质分子中的某种或某些基团与显色剂作用，可产生特定的颜色反应，不同蛋白质所含氨基酸不完全相同，颜色反应亦不同。颜色反应不是蛋白质的专一反应，一些非蛋白物质亦可产生相同颜色反应，因此不能仅根据颜色反应的结果决定被测物是否是蛋白质。颜色反应是一些常用的蛋白质定量测定的依据。
多数蛋白质是亲水胶体，当其稳定因素被破坏或与某些试剂结合成不溶解的盐后，即产生沉淀。
三、实验仪器
1、鸡或鸭蛋白
2、吸管1.0ml(×4）、0.50ml(×1)、2.0ml(×4)、5.0ml(×2)
3、滴管
4、试管1.5cm×15cm(×14)
5、电炉
6、漏斗
四、实验试剂
（1）卵清蛋白液 0.5%苯酚溶液米伦试剂 0.1%茚三酮溶液尿素 10%氢氧化钠溶液比重1.42的浓硝酸 1%硫酸铜溶液
（2）硫酸铵晶体 95%乙醇结晶氯化钠 1%醋酸铅 5%鞣酸溶液饱和苦味酸溶液 1%醋酸溶液
五、实验步骤
A、米伦氏反应
1、用苯酚做试验：取0.5%苯酚溶液1ml于试管中，加米伦试剂约0.5ml，小心加热，溶液即出现玫瑰红色。
2、用蛋白质溶液做实验：取2ml蛋白质溶液，加0.5ml米伦试剂，此时出现蛋白质的沉淀。小心加热，凝固的蛋白质出现红色。
B、双缩脲反应
1、取少量结晶尿素放在干燥试管中，微火加热，尿素熔化并形成双缩脲，至试管内有白色固体出现，停止加热，冷却。然后加10%氢氧化钠溶液1ml摇匀，再加两滴1%硫酸铜溶液，混匀，观察有无紫色出现。
2、另取一试管，加蛋白质溶液10滴，再加10%氢氧化钠溶液10滴及1%硫酸铜溶液2滴，混匀，观察是否出现紫玫瑰色。
C、黄色反应
1、于一试管内，置蛋白质溶液10滴及浓硝酸3~4滴，加热，冷却后再加10%氢氧化钠溶液5滴，观察颜色变化。
D、茚三酮反应
1、取1ml蛋白质溶液置于试管中，加2滴茚三酮溶液，加热至沸，即有蓝紫色出现。
E、蛋白质盐析作用
1、取蛋白质溶液2ml，加入少量硫酸铵固体，慢加，然后微微摇动试管，使溶液混和静置数分钟，球蛋白即析出。
2、将上述混合液过滤，滤液中加硫酸铵粉末，至不再溶解，析出的即为清蛋白，再加水稀释，观察沉淀是否溶解。
F、乙醇沉淀蛋白质
1、取蛋白质溶液1ml，加晶体氯化钠少许，待溶解后再加入95%乙醇2ml混匀，观察到有沉淀析出。
G、重金属盐沉淀蛋白质
1、取试管2支各加蛋白质溶液2ml，一管内滴加1%醋酸铅溶液。另一管内滴加1%硫酸铜溶液，至有沉淀生成。
H、生物碱试剂沉淀蛋白质
1、取试管2支各加2ml蛋白质溶液以及1%醋酸溶液4~5滴，向一管中加5%鞣酸溶液数滴，另一管内加饱和苦味酸溶液数滴，观察结果。
六、实验结果
A、米伦氏反应：1、溶液出现玫瑰红色 2、凝固的蛋白质出现红色
B、双缩脲反应：1、有紫色出现 2、出现紫玫瑰色
C、黄色反应：1、出现黄色
D、茚三酮反应：1、有蓝紫色出现
E、蛋白质盐析：1、沉淀溶解
F、乙醇沉淀蛋白质：1、有沉淀析出
G、重金属盐沉淀蛋白质：1、都出现沉淀
H、生物碱试剂沉淀蛋白质：1、都出现沉淀
七、实验分析
注意：1、B实验硫酸铜不能多加，否则会产生蓝色沉淀氢氧化铜。
2、D反应必须在pH5~7进行。
3、E反应应先加蛋白质溶液，然后加硫酸铵。
4、E反应固体硫酸铵若加到过饱和则有结晶析出，勿与蛋白质沉淀混淆。
