基因治疗导入载体的研究进展
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Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ ｃａｎ ｃｕｒｅ ｍａｌｉｇｎａｎｔｅｓ ａｎｄ ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ ｄｉｓｅａｓｅｓ．Ｔｈｅ ｋｅｙ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆ ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ ｉｓ ｔｏ ｃｈｏｏｓｅ ａ ｓｕｉｔａｂｌｅ ａｎｄ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｃａｒｒｉｅｒ ｔｏ ｐｕｔ ｔｈｅ ｆｏｒｅｉｇｎ ｇｅｎｅｓ ｉｎｔｏ ｔａｒｇｅｔ ｃｅｌｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒ．Ｔｈｅ ｖｉｒａｌ ａｎｄ ｎｏｎ—ｖｉｒａｌ ｖｅｃｔｏｒｓ ｗｅｒｅ ｒｅｖｉｅｗｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｐａｐｅｒ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｃａｒｒｉｅｒ Ｖｉｒａｌ ｖｅｃｔｏｒ Ｎｏｎ－ｖｉｒａｌ ｖｅｃｔｏｒ
基因治疗是指通过基因转移技术将外源正常 基因直接导入患者病变部位的靶细胞，通过控制 目的基因的表达，抑制、校正、替代或补偿缺陷或 异常基因，探索治疗基因缺陷所致的遗传病、免疫 缺陷或抑癌基因的失活所致的肿瘤等疾病的一种 新型医疗方法¨１。在基因治疗中，外源基因的导入 效率直接影响基因在体内的表达水平。目前，基因 治疗载体主要分为病毒载体和非病毒载体。病毒载 体转染效率高，靶向性强，但其包装能力小，易引起 免疫反应。非病毒载体毒性低，具有低免疫原性，但 转染效率低【２１。 １ 病毒载体 １．１ 腺病毒栽体（ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ ｖｅｃｔｏｒｓ）
·综述与专论·
生物技术通报
Ｂ１０ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ ＢＵＬＬＥＴＩＮ
２０１０年第２期
基因治疗导入载体的研究进展
王巍杰 杨永强 徐长波
（河北理工大学化工与生物技术学院，唐山０６３００９）
摘 要： 基因治疗在恶性肿瘤、癌症、遗传性疾病和心脑血管等疾病的治疗中开始应用。临床治疗效果明显。基因治疗 中的关键技术是选用合适的栽体将外源基因高效导入受体靶细胞，综述了基因治疗中病毒和非病毒栽体的研究进展。
收稿日期：２００９．１０．２０ 作者简介：王巍杰，女，副教授，硕士生导师，主要研究方向为药物分析和蛋白分离纯化；Ｅ－ｍａｉｌ：ｗｅｉｊｉｅｗａｎｇ＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ
万方数据
２０１０年第２期
王巍杰等：基因治疗导人载体的研究进展
３９
的ＥＰＣ大量增殖，且大部分分化为肝细胞，反映出 腺病毒载体较高的导入效率。 １．２ 重组腺病毒载体（ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ａｄｅｎｏｖｉｒａｌ ｖｅＣ．
优选不同复合物可以构建出新型非病毒载体。 Ｔａ等。２纠用壳聚糖水凝胶介导抗癌基因到骨肉瘤的 靶向位点。同时，结合化学治疗，结果显示肿瘤细胞 的生长被抑制，且未发现明显副作用，这种生物可降 解的水凝胶技术能应用于抗癌基因非病毒载体的构 建。临床试验表明，经ＳＢ转座子改造后的Ｔ细胞 可用于Ｂ细胞淋巴瘤的治疗，但非病毒载体介导的 低转染效率限制了该研究的发展。Ｖａｎｄｅｎｄｒｉｅｓｓｃｈｅ 等【２¨将非病毒载体与最新一代的“睡美人（ＳＢ）”转 座系统和ＰｉｇｇｙＢａｃ（ＰＢ）转座子联合作为导人工具， 克服了非病毒载体在宿主细胞转染效率不高的缺 点。在老鼠模型中检测到大量且稳定的遗传标记， 并证明该复合载体可诱导多功能干细胞（ｉＰＳ ｃｅｌｌｓ） 的生成，恢复正常造血功能，暗示载体的转染效率有 所提高。
阳离子壳聚糖纳米微粒具有低毒性、较强生物 适应性和生物降解能力，是极具潜力的基因、抗体或 药物导人载体。Ｍａｌｈｏｔｒａ等心川将三聚磷酸钠作为 交联剂，用离子凝胶法得到直径为２０ ｎｍ的壳聚糖 纳米微粒，用作小干扰ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）的导入载体。 用壳聚糖的重量比率评定外源基因的装载效率，检 测到纳米复合物在小鼠脑神经瘤细胞（Ｎｅｕｒ０２ａ）有
腺病毒作为基因表达载体的研究起源于２０ 世纪６０年代初，当时病毒学家观察到腺病毒基因 组可与猴类病毒４０基因组杂交，实质上是腺病毒 基因组可以承载异源性基因。腺病毒是一种双股 ＤＮＡ病毒，病毒颗粒直径约６０一９０ ａｍ，呈２０面 体立体对称。腺病毒的转录可分为早期和晚期两 个阶段，早期基因转录之后，产生４个早期基因的
研究显示，骨髓间质干细胞（ＭＳＣ）可以迁移到 受伤组织，因其免疫性可使靶基因持久特异地植入 到靶向组织，慢病毒载体也可作为干细胞的导人载 体。Ｘｉａｎｇ等Ｈ引静脉注射ＭＳＣ到带有辐射诱发纤 维素肉瘤（Ｒｉｆ－１ｆｉｂｒｏｓａｒｃｏｍａ）的老鼠体内，ＭＳＣ被携 带有荧光素酶报告基因的慢病毒载体感染。用体内 成像系统（ＩＶＩＳ ２００）和免疫印迹法（Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ）检 测外源基因在老鼠体内的分布，检测到ＭＳＣ有选择 性地转移到肿瘤部位，外源基因在皮下的纤维素肉 瘤移植体迅速表达，在肝脏、脾脏、结肠和肾脏等正 常器官中没有ＭＳＣ的分布。进一步研究发现，ＦＧＦ２／ ＦＧＦＲ传递路径在ＭＳＣ定向转移到纤维肉瘤组织中 扮演着关键角色，通过体外联合培养和体内的肿瘤 细胞生长分析显示，在慢病毒载体介导的外源基因 表达中，ＭＳＣ能诱导一氧化氮合酶的转移，进而抑 制Ｒｉｆ－１ｆｉｂｒｏｓａｒｃｏｍａ细胞的生长，证明慢病毒载体可 与ＭＳＣ联合用于纤维素肉瘤或其他肿瘤疾病的 治疗。
Ｅｔｏ等”１将精氨酸八聚体（Ｒ８）、穿膜肽（Ｔａｔ）和 富脯氨酸肽（ｐｒｏｌｉｎｅ—ｒｉｃｈ ｐｅｐｔｉｄｅｓ）分别与腺病毒构 成复合载体。试验证明，腺病毒肽复合载体在无 ＣＡＲ细胞中仍有较高的转染效率，巨胞饮作用使载 体得以顺利进入宿主细胞。进一步研究发现，Ｔａｔ— Ａｄｖｓ的导入高度依赖于宿主细胞表面的硫酸类肝素 含量，而Ｒ８．Ａｄｖｓ却依赖于硫酸软骨素含量。Ｄｉｒｉｃｅ 等¨１通过注射链脲佐菌素（ＳＴＺ）构建大鼠糖尿病模 型，利用腺病毒载体介导ＴＲＡＩＬ基因进入老鼠肾 脏。试验结果表明，只有用腺病毒载体导入ＴＲＡＩＬ 基因的模型鼠能长时间维持正常的血糖浓度。Ｌａｎ 等¨。利用腺病毒载体介导ＣＴＬＡ４Ｉｇ基因进入正常 老鼠肝脏的内皮祖细胞。一个月后这种人胚胎来源
效地诱导转基因的表达。此外，Ｍｏｒｉｌｌｅ等【２４。将外源 ＤＮＡ装入直径为１０９士６ ｎｍ的油脂胶囊（ＬＮＣｓ）中， 加入聚乙二醇（ＰＥＧ）增加ＬＮＣｓ的稳定性，并将半 乳糖共价结合到ＰＥＧ链以提高肝细胞唾液酸糖蛋 白受体的靶向活性，包有半乳糖Ｆ１０８的ＤＮＡ－ＬＮＣｓ 的荧光素酶表达效率比未包Ｆ１０８的高１８倍，显示 出较高的转染效率。 ２．３其他非病毒裁体
为了提高载体的靶向性，Ｌｅｉ等¨川让有结合缺 陷的辛德毕斯病毒（Ｓｉｎｄｂｉｓ ｖｉｒｕｓ）糖蛋白发生特异 性突变，得到突变融合分子（ＦＭ）。抗．ＣＤ２０抗体 （ａｌｐｈａＣＤ２０）和ＦＭ共同结合到慢病毒载体上，导人 到ＣＤ２０表达细胞。发现特异性突变后的融合分子 靶向转移效率要比未突变的糖蛋白分子高８一１７ 倍，表明突变方法与慢病毒载体的结合可以提高靶 基因的导入效率。移植物对宿主的免疫反应一直制 约着转基因移植的发展，Ｓｃａｉｆｅ等【１驯将特异性的自 杀基因／前药系统结合到慢病毒载体上，可明显抑制 移植物抗宿主症（ＧＶＨＤ）的发生，提高转基因移植 的安全性。
表达盒，分别为Ｅ１、Ｅ２、Ｅ３和Ｅ４。后期基因由５ 组ｍＲＮＡｓ（Ｌ１一Ｌ５）组成，编码大部分的结构蛋 白，这些ｍＲＮＡｓ均有共同的３个外显子，编译２３ 个前导肽，增强结构蛋白的翻译。腺病毒在体内 具有很高的转染率，超过３００例临床试验证明了 腺病毒的基因转导效率，目前已有多个癌症试验 进入临床Ⅲ期阶段”１。
的治疗效果。 １．３ 慢病毒裁体（１ｅｎｔｉｖｉｒａｌ ｖｅｃｔｏｒｓ）
慢病毒是以ＨＩＶ—ｌ为基础发展而来的ＲＮＡ病 毒，为逆转录病毒的一个亚类，基因组中存在核定位 信号序列，能有效感染靶细胞，使外源基因稳定地表 达。由于慢病毒载体可以感染非分裂细胞和分裂细 胞，转移较大的基因片段，经过修饰的载体能诱导调 控，宿主范围广泛并降低了重组的机会，而且具有高 效整合、高效表达的特点，因此成为广为关注的真核 生物基因转移载体¨…。
ｔｏｒｓ） 重组腺病毒载体通常具有较低的免疫原性并能 产生持久的转基因表达，在近几年被广泛地应用¨－。 按生活周期不同，可分为复制缺陷型（ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ—ｄｅ— ｆｅｃｔｉｖｅ）和复制增殖型（ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ—ｃｏｍｐｅｔｅｎｔ）两类。 辅助依赖型腺病毒（ＨＤＡｄ）缺乏所有腺病毒编 码序列，具有免疫原性低、安全、转移容量大等特 点一。。其介导的基因表达水平取决于载体上充当 填充者的非编码ＤＮＡ种类，携带有真核非编码ＤＮＡ 的转基因表达效率要比携带原核非编码ＤＮＡ的高数 １０倍。Ｒｏｓｓ等¨驯探究了该现象的机理，在转基因 和细菌ＤＮＡ之间加一隔离物以解除对ＨＤＡｄ重组 原核ＤＮＡ（ＨＤＡｄ．ｐｒｏｋ）载体的阻遏作用。发现非 编码真核ＤＮＡ可抑制宿主染色质向转基因蔓延， 从而提高转基因表达效率，并且ＳｐｌＯＯＢ／ＨＭＧ和 Ｄａｘｘ会影响这种抑制作用。Ｊｉａｎｇ等…ｏ构建了携 带有全长抗ＨＥＲ ２单链抗体基因序列的重组质粒 ＨＤ．ＴＡｂ，载体为辅助依赖型腺病毒。用高效的重 组酶ＦＬＰ在宿主细胞内切除辅助病毒的包装信 号，酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）和免疫印迹法 （Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ）检测到ＨＤＡｄ介导的全序列抗体基 因可长时间表达。 条件增殖腺病毒（ＣＲＡｄ）是一类仅在分裂细胞 内特异增殖的新型重组腺病毒¨“，通过对腺病毒的 基因改造使其复制后具有肿瘤特异性，可裂解肿瘤 细胞，并释放出子代病毒感染周嗣肿瘤细胞。Ｌｉｕ 等１１ ３】将其应用到靶向性较高的抗毒素治疗中，检测 不同方法对免疫毒素融合基因ｅ２３（ｓｃＦｖ）ＰＥ４０的 导入效率。在含致癌基因Ｈｅｒ２／ｎｅｕ的宿主细胞中 发现，低剂量ＣＲＡｄ载体的介导提高了靶基因的表 达水平，单独作用或结合依托泊苷药物的化学疗法 都显著提高了对肿瘤细胞的杀死作用。但因ＣＲＡｄ 仅能在某些路径中复制，其单独使用便存在肿瘤的 遗传异质性问题，Ｈａｂｉｂ等¨４。将复制缺陷型和增殖 型病毒联合使靶病毒得以顺利复制。利用其原理， Ｌｅｅ等¨纠用缺失Ｅ１区的普通复制缺陷型腺病毒与 条件增殖腺病毒△２４ＲＧＤ联合，显著提高了对肺癌
关键词：基因治疗 导入载体病毒栽体非病毒栽体
Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｏｆ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｃａｒｒｉｅｒ
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｃａｒｒｉｅｒ Ｖｉｒａｌ ｖｅｃｔｏｒ Ｎｏｎ－ｖｉｒａｌ ｖｅｃｔｏｒ
基因治疗是指通过基因转移技术将外源正常 基因直接导入患者病变部位的靶细胞，通过控制 目的基因的表达，抑制、校正、替代或补偿缺陷或 异常基因，探索治疗基因缺陷所致的遗传病、免疫 缺陷或抑癌基因的失活所致的肿瘤等疾病的一种 新型医疗方法¨１。在基因治疗中，外源基因的导入 效率直接影响基因在体内的表达水平。目前，基因 治疗载体主要分为病毒载体和非病毒载体。病毒载 体转染效率高，靶向性强，但其包装能力小，易引起 免疫反应。非病毒载体毒性低，具有低免疫原性，但 转染效率低【２１。 １ 病毒载体 １．１ 腺病毒栽体（ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ ｖｅｃｔｏｒｓ）
·综述与专论·
生物技术通报
Ｂ１０ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ ＢＵＬＬＥＴＩＮ
２０１０年第２期
基因治疗导入载体的研究进展
王巍杰 杨永强 徐长波
（河北理工大学化工与生物技术学院，唐山０６３００９）
摘 要： 基因治疗在恶性肿瘤、癌症、遗传性疾病和心脑血管等疾病的治疗中开始应用。临床治疗效果明显。基因治疗 中的关键技术是选用合适的栽体将外源基因高效导入受体靶细胞，综述了基因治疗中病毒和非病毒栽体的研究进展。
收稿日期：２００９．１０．２０ 作者简介：王巍杰，女，副教授，硕士生导师，主要研究方向为药物分析和蛋白分离纯化；Ｅ－ｍａｉｌ：ｗｅｉｊｉｅｗａｎｇ＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ
万方数据
２０１０年第２期
王巍杰等：基因治疗导人载体的研究进展
３９
的ＥＰＣ大量增殖，且大部分分化为肝细胞，反映出 腺病毒载体较高的导入效率。 １．２ 重组腺病毒载体（ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ａｄｅｎｏｖｉｒａｌ ｖｅＣ．
优选不同复合物可以构建出新型非病毒载体。 Ｔａ等。２纠用壳聚糖水凝胶介导抗癌基因到骨肉瘤的 靶向位点。同时，结合化学治疗，结果显示肿瘤细胞 的生长被抑制，且未发现明显副作用，这种生物可降 解的水凝胶技术能应用于抗癌基因非病毒载体的构 建。临床试验表明，经ＳＢ转座子改造后的Ｔ细胞 可用于Ｂ细胞淋巴瘤的治疗，但非病毒载体介导的 低转染效率限制了该研究的发展。Ｖａｎｄｅｎｄｒｉｅｓｓｃｈｅ 等【２¨将非病毒载体与最新一代的“睡美人（ＳＢ）”转 座系统和ＰｉｇｇｙＢａｃ（ＰＢ）转座子联合作为导人工具， 克服了非病毒载体在宿主细胞转染效率不高的缺 点。在老鼠模型中检测到大量且稳定的遗传标记， 并证明该复合载体可诱导多功能干细胞（ｉＰＳ ｃｅｌｌｓ） 的生成，恢复正常造血功能，暗示载体的转染效率有 所提高。
阳离子壳聚糖纳米微粒具有低毒性、较强生物 适应性和生物降解能力，是极具潜力的基因、抗体或 药物导人载体。Ｍａｌｈｏｔｒａ等心川将三聚磷酸钠作为 交联剂，用离子凝胶法得到直径为２０ ｎｍ的壳聚糖 纳米微粒，用作小干扰ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）的导入载体。 用壳聚糖的重量比率评定外源基因的装载效率，检 测到纳米复合物在小鼠脑神经瘤细胞（Ｎｅｕｒ０２ａ）有
腺病毒作为基因表达载体的研究起源于２０ 世纪６０年代初，当时病毒学家观察到腺病毒基因 组可与猴类病毒４０基因组杂交，实质上是腺病毒 基因组可以承载异源性基因。腺病毒是一种双股 ＤＮＡ病毒，病毒颗粒直径约６０一９０ ａｍ，呈２０面 体立体对称。腺病毒的转录可分为早期和晚期两 个阶段，早期基因转录之后，产生４个早期基因的
研究显示，骨髓间质干细胞（ＭＳＣ）可以迁移到 受伤组织，因其免疫性可使靶基因持久特异地植入 到靶向组织，慢病毒载体也可作为干细胞的导人载 体。Ｘｉａｎｇ等Ｈ引静脉注射ＭＳＣ到带有辐射诱发纤 维素肉瘤（Ｒｉｆ－１ｆｉｂｒｏｓａｒｃｏｍａ）的老鼠体内，ＭＳＣ被携 带有荧光素酶报告基因的慢病毒载体感染。用体内 成像系统（ＩＶＩＳ ２００）和免疫印迹法（Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ）检 测外源基因在老鼠体内的分布，检测到ＭＳＣ有选择 性地转移到肿瘤部位，外源基因在皮下的纤维素肉 瘤移植体迅速表达，在肝脏、脾脏、结肠和肾脏等正 常器官中没有ＭＳＣ的分布。进一步研究发现，ＦＧＦ２／ ＦＧＦＲ传递路径在ＭＳＣ定向转移到纤维肉瘤组织中 扮演着关键角色，通过体外联合培养和体内的肿瘤 细胞生长分析显示，在慢病毒载体介导的外源基因 表达中，ＭＳＣ能诱导一氧化氮合酶的转移，进而抑 制Ｒｉｆ－１ｆｉｂｒｏｓａｒｃｏｍａ细胞的生长，证明慢病毒载体可 与ＭＳＣ联合用于纤维素肉瘤或其他肿瘤疾病的 治疗。
Ｅｔｏ等”１将精氨酸八聚体（Ｒ８）、穿膜肽（Ｔａｔ）和 富脯氨酸肽（ｐｒｏｌｉｎｅ—ｒｉｃｈ ｐｅｐｔｉｄｅｓ）分别与腺病毒构 成复合载体。试验证明，腺病毒肽复合载体在无 ＣＡＲ细胞中仍有较高的转染效率，巨胞饮作用使载 体得以顺利进入宿主细胞。进一步研究发现，Ｔａｔ— Ａｄｖｓ的导入高度依赖于宿主细胞表面的硫酸类肝素 含量，而Ｒ８．Ａｄｖｓ却依赖于硫酸软骨素含量。Ｄｉｒｉｃｅ 等¨１通过注射链脲佐菌素（ＳＴＺ）构建大鼠糖尿病模 型，利用腺病毒载体介导ＴＲＡＩＬ基因进入老鼠肾 脏。试验结果表明，只有用腺病毒载体导入ＴＲＡＩＬ 基因的模型鼠能长时间维持正常的血糖浓度。Ｌａｎ 等¨。利用腺病毒载体介导ＣＴＬＡ４Ｉｇ基因进入正常 老鼠肝脏的内皮祖细胞。一个月后这种人胚胎来源
效地诱导转基因的表达。此外，Ｍｏｒｉｌｌｅ等【２４。将外源 ＤＮＡ装入直径为１０９士６ ｎｍ的油脂胶囊（ＬＮＣｓ）中， 加入聚乙二醇（ＰＥＧ）增加ＬＮＣｓ的稳定性，并将半 乳糖共价结合到ＰＥＧ链以提高肝细胞唾液酸糖蛋 白受体的靶向活性，包有半乳糖Ｆ１０８的ＤＮＡ－ＬＮＣｓ 的荧光素酶表达效率比未包Ｆ１０８的高１８倍，显示 出较高的转染效率。 ２．３其他非病毒裁体
为了提高载体的靶向性，Ｌｅｉ等¨川让有结合缺 陷的辛德毕斯病毒（Ｓｉｎｄｂｉｓ ｖｉｒｕｓ）糖蛋白发生特异 性突变，得到突变融合分子（ＦＭ）。抗．ＣＤ２０抗体 （ａｌｐｈａＣＤ２０）和ＦＭ共同结合到慢病毒载体上，导人 到ＣＤ２０表达细胞。发现特异性突变后的融合分子 靶向转移效率要比未突变的糖蛋白分子高８一１７ 倍，表明突变方法与慢病毒载体的结合可以提高靶 基因的导入效率。移植物对宿主的免疫反应一直制 约着转基因移植的发展，Ｓｃａｉｆｅ等【１驯将特异性的自 杀基因／前药系统结合到慢病毒载体上，可明显抑制 移植物抗宿主症（ＧＶＨＤ）的发生，提高转基因移植 的安全性。
表达盒，分别为Ｅ１、Ｅ２、Ｅ３和Ｅ４。后期基因由５ 组ｍＲＮＡｓ（Ｌ１一Ｌ５）组成，编码大部分的结构蛋 白，这些ｍＲＮＡｓ均有共同的３个外显子，编译２３ 个前导肽，增强结构蛋白的翻译。腺病毒在体内 具有很高的转染率，超过３００例临床试验证明了 腺病毒的基因转导效率，目前已有多个癌症试验 进入临床Ⅲ期阶段”１。
的治疗效果。 １．３ 慢病毒裁体（１ｅｎｔｉｖｉｒａｌ ｖｅｃｔｏｒｓ）
慢病毒是以ＨＩＶ—ｌ为基础发展而来的ＲＮＡ病 毒，为逆转录病毒的一个亚类，基因组中存在核定位 信号序列，能有效感染靶细胞，使外源基因稳定地表 达。由于慢病毒载体可以感染非分裂细胞和分裂细 胞，转移较大的基因片段，经过修饰的载体能诱导调 控，宿主范围广泛并降低了重组的机会，而且具有高 效整合、高效表达的特点，因此成为广为关注的真核 生物基因转移载体¨…。
ｔｏｒｓ） 重组腺病毒载体通常具有较低的免疫原性并能 产生持久的转基因表达，在近几年被广泛地应用¨－。 按生活周期不同，可分为复制缺陷型（ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ—ｄｅ— ｆｅｃｔｉｖｅ）和复制增殖型（ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ—ｃｏｍｐｅｔｅｎｔ）两类。 辅助依赖型腺病毒（ＨＤＡｄ）缺乏所有腺病毒编 码序列，具有免疫原性低、安全、转移容量大等特 点一。。其介导的基因表达水平取决于载体上充当 填充者的非编码ＤＮＡ种类，携带有真核非编码ＤＮＡ 的转基因表达效率要比携带原核非编码ＤＮＡ的高数 １０倍。Ｒｏｓｓ等¨驯探究了该现象的机理，在转基因 和细菌ＤＮＡ之间加一隔离物以解除对ＨＤＡｄ重组 原核ＤＮＡ（ＨＤＡｄ．ｐｒｏｋ）载体的阻遏作用。发现非 编码真核ＤＮＡ可抑制宿主染色质向转基因蔓延， 从而提高转基因表达效率，并且ＳｐｌＯＯＢ／ＨＭＧ和 Ｄａｘｘ会影响这种抑制作用。Ｊｉａｎｇ等…ｏ构建了携 带有全长抗ＨＥＲ ２单链抗体基因序列的重组质粒 ＨＤ．ＴＡｂ，载体为辅助依赖型腺病毒。用高效的重 组酶ＦＬＰ在宿主细胞内切除辅助病毒的包装信 号，酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）和免疫印迹法 （Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ）检测到ＨＤＡｄ介导的全序列抗体基 因可长时间表达。 条件增殖腺病毒（ＣＲＡｄ）是一类仅在分裂细胞 内特异增殖的新型重组腺病毒¨“，通过对腺病毒的 基因改造使其复制后具有肿瘤特异性，可裂解肿瘤 细胞，并释放出子代病毒感染周嗣肿瘤细胞。Ｌｉｕ 等１１ ３】将其应用到靶向性较高的抗毒素治疗中，检测 不同方法对免疫毒素融合基因ｅ２３（ｓｃＦｖ）ＰＥ４０的 导入效率。在含致癌基因Ｈｅｒ２／ｎｅｕ的宿主细胞中 发现，低剂量ＣＲＡｄ载体的介导提高了靶基因的表 达水平，单独作用或结合依托泊苷药物的化学疗法 都显著提高了对肿瘤细胞的杀死作用。但因ＣＲＡｄ 仅能在某些路径中复制，其单独使用便存在肿瘤的 遗传异质性问题，Ｈａｂｉｂ等¨４。将复制缺陷型和增殖 型病毒联合使靶病毒得以顺利复制。利用其原理， Ｌｅｅ等¨纠用缺失Ｅ１区的普通复制缺陷型腺病毒与 条件增殖腺病毒△２４ＲＧＤ联合，显著提高了对肺癌
关键词：基因治疗 导入载体病毒栽体非病毒栽体
Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｏｆ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｃａｒｒｉｅｒ
